1. Objet et domaine d application Ce mode opératoire décrit comment sont effectués les prélèvements bactériologiques au sein du laboratoire. Il s applique à l ensemble des prélèvements bactériologiques (autres que les prélèvements urinaires traités dans un mode opératoire spécifique) réalisés par le laboratoire. 2. Références Guide fournisseur "CML" sur les conditions de transports des échantillons. Rémic : référentiel en microbiologie médicale (bactériologie et mycologie) édition 2007 3. Terminologie 4. Responsabilités Les prélèvements sont réalisés sous la responsabilité du biologiste et sont pratiqués par le personnel autorisé (Cf : «Prélèvements»). Lorsque le prélèvement est effectué par le patient, la personne présente à l accueil a la responsabilité de donner les préconisations aux patients (cf. fiche d'instruction) et d identifier les échantillons. 5. Méthodologie 5.1. Le matériel utilisé Boîte de pétri stérile. Spéculum stérile en plastique à usage unique. Spéculum stérile en métal décontaminé suivant procédure. Ecouvillons stériles (conservation des bactéries 2 heures). Ecouvillons stériles avec milieu de transport (conservation des bactéries 24 heures). Ecouvillons fins stériles (conservation des bactéries 2 heures). Ecouvillon spécifique du kit Servibio pour la recherche de streptocoque A. Ecouvillon fourni par Cerba pour recherche de Chlamydia trachomatis. Solution «Chlamydiae médium transport kit»(fournie par le laboratoire LCL avec les écouvillons). Milieu «thin prep Pap test (20 ml)» utilisé pour les frottis couche mince cervico-vaginaux. Bactopick (labo-moderne) pour recherche du mycoplasme. Curette de Brocq. Pinces. Pince à épiler. Brosse cervex fournie par le laboratoire LCL (frottis couche mince). Scalpel à usage unique. Pots stériles. Flacon pour spermogramme stérile. Version : 04 Page 1 sur 6
5.2. Déroulement du prélèvement Prélèvement vaginal ou cervico-vaginal La patiente devra éviter toute toilette intime, tout traitement local (crème, gels, savons ) ainsi que tout rapport sexuel dans les 24 heures précédant l examen. Il est conseillé d'éviter le prélèvement pendant la période menstruelle car la flore est modifiée (sauf avis contraire du prescripteur). Le prélèvement doit être réalisé avant ou à distance de tout traitement antibiotique (> 15 jours pour les chlamydiae, > 5 jours pour les germes banals). En préambule au prélèvement, le biologiste préleveur doit s assurer des conditions physiologiques du sujet. Les prélèvements cervicaux vaginaux se font sous spéculum à usage unique avec un éclairage adapté. Prendre soin de «nettoyer» (au mieux compresse) le col pour les prélèvements endocervicaux Prélèvement cervicaux vaginaux à visée bactériologique Bactériologie classique : Prélever 1 à 2 écouvillons stériles à acheminer dans les 2 heures en technique à température ambiante et un écouvillon sur milieu de transport à acheminer dans les 24 heures à température ambiante. Recherche de chlamydiae par PCR : prélever avec un écouvillon fourni par le laboratoire Cerba au niveau de l endocol par un frottement léger. Décharger ensuite immédiatement cet écouvillon dans la solution «Chlamydiae medium transport kit»(fournie par le laboratoire Cerba avec les écouvillons). Recherche d herpes : prélever au niveau d une ulcération ou mieux une vésicule avec un écouvillon fourni par le laboratoire Cerba par un frottement léger. Décharger ensuite immédiatement cet écouvillon dans la solution «Chlamydiae medium transport kit»(fournie par le laboratoire Cerba avec les écouvillons). Recherche de papillomavirus : prélever avec un écouvillon fourni par le laboratoire LCL au niveau de l endocol par un frottement léger. Décharger ensuite immédiatement cet écouvillon dans la solution «Chlamydiae medium transport kit»(fournie par le laboratoire LCL avec les écouvillons) ou mieux dans le milieu «thin prep Pap test (20 ml)» utilisé pour les frottis couche mince cervico-vaginaux. Recherche de mycoplasmes : prélever avec un bactopick au niveau de l endocol par un frottement léger, casser le tête du bactopick dans la solution (flacon mycoplasme) pour la recherche de mycoplasme. Prélèvements cervicaux à visée anatomopathologique («frottis cervicaux») Utilisation de la technique dite en couche mince. Obtenir un spécimen adéquat du col de l utérus avec une brosse cervex fournie par le laboratoire Cerba.. Tourner la brosse 5 fois dans le sens des aiguilles d une montre. Bien rincer ensuite la brosse dans le flacon de solution de conservation en pressant les poils de Version : 04 Page 2 sur 6
la brosse contre le fond du flacon puis jeter la brosse et bien refermer le flacon. Prélèvement urétral Le patient ne doit pas uriner dans les deux heures précédant le prélèvement. Prélever avec 2 écouvillons fins préalablement humidifiés dans un flacon de 5 ml d eau stérile (Biomérieux) au niveau du méat (un pour la mise en culture, un pour l étalement de lames). S il n y a pas ou peu d écoulement, recueillir le 1 er jet d urines. Pour la recherche de chlamydiae: introduire un écouvillon fin dans l urètre de 2 à 3 mm en effectuant 3 ou 4 rotations pour recueillir le maximum de cellules. Et le décharger dans un flacon pour recherche de Chlamydiae par PCR (Cerba). Pour la recherche de Mycoplasme, introduire un Bactopick dans l urètre de 2 à 5 mm délicatement. Version : 04 Page 3 sur 6
Autres prélèvements bactériologiques Nature du prélèvement Selles et parasitologie des selles Sperme (spermoculture) Sperme (spermocytogramme) Recherche de dermatophytes : Ongles, cheveux, squames Mode de prélèvement Échantillon de selles recueilli dans le flacon stérile fourni par le laboratoire. Après 2 à 5 jours d abstinence Se laver les mains Uriner Par masturbation, après une désinfection locale. Recueil de la totalité de l éjaculât Après 2 à 5 jours d'abstinence Se laver les mains Uriner Par masturbation, après une désinfection locale. Recueil de la totalité de l éjaculât Peau : Prélever de préférence à la périphérie des lésions des squames à l aide d une curette de Brocq. Réaliser un prélèvement à la cellophane adhésive transparente pour le mise en évidence rapide de Pityriasis versicolor. Lésions des plis : Selon l aspect, grattage à la périphérie à l aide d une curette de Brocq ou un écouvillon préalablement imbibé d eau physiologique stérile. Lésions unguéales : Pour les ongles, couper avec la pince à ongle toute la partie de l ongle atteinte, prélever des poussières d ongles en raclant la tablette interne de l ongle ou les îlots blanchâtres de la surface de l ongle à l aide d une curette. Lésions du cuir chevelu et des zones pileuses Arracher avec une pince à épiler les cheveux cassés à proximité du bulbe. Prélever les squames et les croûtes éventuelles en raclant à l aide d une curette. Matériels Pot à coproculture stérile, remis le plus vite possible après l émission Recueil au laboratoire dans un flacon stérile suivant fiche d instruction ou Flacon stérile apporté dans du coton au laboratoire dans un délai d une demi-heure Recueil au laboratoire dans un flacon stérile suivant fiche d instruction ou Flacon stérile apporté dans du coton au laboratoire dans un délai d une demi-heure Boîte de pétri stérile fermée après prélèvement (scotch). Matériel stérile (écouvillon, pince, curette, etc...) permettant de prélever par apposition ou par grattage présent dans la salle 7. Ecouvillon sans milieu de transport. Eau physiologique stérile. Version : 04 Page 4 sur 6
Plaie, escarre, larmes, pus profond etc Bien remplir le questionnaire en déposer les squames dans une boîte de pétri stérile fermée avec sparadrap. Prendre les précautions d asepsie pour éviter de contaminer le prélèvement par les bactéries se trouvant normalement sur la peau. Mettre des gants à usage unique Passer un écouvillon sur milieu de transport (anaérobie) et un sec (étalement sur lame) Noter la prise éventuelle d antibiotiques. Si abcès fermé : prélèvement à la seringue Si abcès ouvert : 2 écouvillons stériles à acheminer dans les 2 heures au laboratoire à température ambiante ou un écouvillon sur milieu de transport à acheminer dans les 24 heures à température ambiante. ORL : Gorge : amygdales Oreille : conduit auditif externe Nez Pharynx Recherche de streptocoque A Crachat, tubage et/ou aspiration bronchique Hémocultures Ponction de LCR Prélever avant antibiothérapie : au niveau des zones inflammatoires ou nécrotiques à la périphérie des fausses membranes, sur les amygdales Éviter de toucher la langue, la luette et la paroi postérieure du pharynx Prélever avant antibiothérapie : Dans la gorge au niveau des zones inflammatoires Faire le prélèvement avant le lever pour le crachat et dans l heure qui suit le lever pour le tubage Faire 1 seule ponction de 2 ou 3 flacons (20 à 30 ml) lors d'un pic de fièvre. Après antisepsie soigneuse de la peau avec un antiseptique alcoolique ; le prélèvement s effectue soit directement dans le flacon à l aide d un adaptateur spécifique et d une aiguille type épicrânienne (remplissage du vide jusqu à la flèche). La ponction lombaire est réalisée avec une asepsie rigoureuse. La quantité moyenne de LCR suffisante pour la majorité des examens est de 3 2 à 3 écouvillons stériles à acheminer dans les 2 heures au laboratoire à température ambiante ou un écouvillon sur milieu de transport à acheminer dans les 24 heures à température ambiante. Un écouvillon spécifique du kit (recherche rapide sur savonnette) + un écouvillon ordinaire (culture) Flacon stérile, acheminé le plus rapidement au laboratoire Sur flacon «Signal» OXOID (2 ou 3 flacons par examen) acheminé le plus rapidement au laboratoire. Adaptateur spécifique fourni par le laboratoire Ne pas prélever à partie de cathéter ou de chambre implantable. Sur 3 flacons ECBU (1 ml par flacon) sans borate. Version : 04 Page 5 sur 6
ml recueillie dans 3 flacons E.C.B.U. stériles numérotés 1, 2, 3 (afin de distinguer une piqûre vasculaire d une hémorragie méningée) servant respectivement à l examen biochimique, microbiologique et cytologique. L acheminement du LCR vers le laboratoire doit se faire sans délai et à l abri du froid en raison de la fragilité de certaines bactéries. Un minimum de renseignements cliniques (âge, présomption diagnostique, traitement antibiotique) doit être transmis au laboratoire Attention : proscrire tout flacon non stérile ou contenant des additifs (en gel, en poudre ou liquide) Fin du document. Version : 04 Page 6 sur 6