Anticorps anti-nucléaire: anti nucléaire: Lecture automatisée avec le NOVA View Séminaire de formation continue IAL Lausanne 14 Lausanne, 14.11.2013 11 2013 Dr V. Aubert Service d immunologie Service d immunologie et allergie et allergie
Introduction ti Situation actuelle et recommandations dans le cadre du dépistage des ANA Automatisation et analyse digitalisée des images Evaluation CHUV Conclusions
Situationti La prévalence des maladies auto-immunes est en augmentation (vieillissement) De nouvelles méthodes sur phase solide (ELISA, Dot Assay, Beads multiplex, Microarray) sont actuellement disponibles Application de nouvelles technologies : davantages d analyses à meilleur prix Déplacement des analyses d auto-immunité des laboratoires spécialisés vers des plateformes générales Défaut de standardisation, résultats parfois inexacts
ANA by IFA and solid phase assay Ann Rheum, Dis. 2010;69(8):1420 22
Recommandations de l American College of Rheumatology (ACR) Antinuclear Antibody (ANA) Task Force
Avons-nous nous besoins d automatiser le dépistage des ANA par IFI? L utilisation de tests automatisés (ELISA ou autres) est de plus en plus fréquente pour des raisons d économies. L automatisation des tests IFI doit améliorer l efficience du dépistage des ANA.
Augmentation du nombre d analyses en autoimmunité 12000 10000 Total IFA 8000 6000 4000 2000 10.3% 28.4% 58.5% 0 2008 2009 2010 2011 2012 Anti nuclear nuclear (Hep2) ANCA total MSK Anti LKM1 Anti GBM anti DNA (crithidia)
The new «Laboratory Toy»
NOVA View analyse et archive les images digitalisées des lames Hep-2 DAPI 455nm FITC 490nm NOVA View recherche les populations cellulaires optimales Une fois les cellules choisies, NOVA View analyse les aspects avec FITC.
Image holographique 3D Compte 5 champs/puit et exprime l intensité lintensité de la fluorescence en LIU (light intensity unit) Reconnaissance des différents aspects par l analyses de la distribution des pics et vallées.
L algorithme mesure directement les pics et vallées
Etude comparative au CHUV Etude prospective avec la consultation ti d immunologie clinique De mai 2012 à novembre 2012 Etude «double blind» réalisée sur l ensemble des dépistages des ANA demandés par les médecins du service d immunologie et allergie N = 122 Merci à Isabelle Graf-Pisler et Nathalie Félix
Distribution ib ti des résultats t (n=122) 69 39 14 Negatifs Divergents Positifs 32% 11.5% 56.5%
Details des résultats divergents LID NOVAVIEW Routine Informations médicales Remarques 12 0705 1748 HOM /cyto 80 NEG OK ( Hepatite autoimmune) Ne change rien 12 0507 3023 NEG HOM MOU 80 OK si résultat négatif 12 0628 2684 NEG HOM 80 Lupic Syndrome 12 0530 3621 NEG NUC 80 OK si résultat négatif 12 0817 1971 NEG MOU 80 OK si résultat négatif 12 0629 1688 NEG HOM MOU 80 OK si résultat négatif 12 0511 2568 NEG NUC 80 OK si résultat négatif 12 0921 1701 NEG HOM 80 OK si résultatnégatif 12 1011 1558 NEG MOU 80 OK si résultat négatif 12 0628 2269 NEG HOM 160 Non active lupus RNP 51(49) 12 0709 3447 NEG HOM 160 No Lupus argument,crohn? 12 1010 3375 NEG NUC 160 Immunodeficiency (IgM) 12 0622 1664 NEG HOM 160 clinical context suggests lupus 12 0718 2474 NEG MOU 160 undifferentiated overlap syndrom /severe arthritis RNP 35(37)
Distribution avec résultats à 1:80 consideré comme negatif Technician reading NovaView reading Pos neg Pos 69 0 69 neg 5 48 53 74 48 122 Kappa coefficient : 0.915 Proportion of agreement : 0.95
Analyse des différences quantitatives (n=69) 15 3 17 Identique 1 titre 24,5% 49,5% 34 2 titres 22% 3 titres 4% 4/15 (25%) 1:320 (TAB) to 1:80 (NovaView)
Cas positifs divergents Echantillons avec 2 titres de différences rendus 1:80 par le Nova View LID NOVAVIEW Routine (TAB) MEDICAL Advice 12 0621 1623 HOM SPECK 80 HOM SPECK 320 Urticaria vasculitis 12 0718 2260 HOM 80 HOM 320 Polychondrite, cutanuous lupus 12 0822 2865 NUC 80 NUC 320 Ok if 1/80 12 0913 2100 NUC 80 NUC 320 Ok if 1/80; no arguments for LES
Différence quantitative 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120 >1/5120 Total 11 21 10 10 11 7 5 7 8 5 NEG 0 0 0 0 0 0 (80%) (24%) 1/80 3 9 4 0 0 0 0 0 1/160 0 7 5 2 2 0 0 0 1/320 0 0 1 7 1 1 0 0 1/640 0 0 0 1 6 3 0 0 1/1280 0 0 0 0 2 3 2 0 12560 0 0 0 0 0 0 3 3 1/5120 0 0 0 0 0 0 0 1 >1/5120 0 0 0 0 0 0 0 3
Inova CHUV Concordance positive : 97% 93.2% Concordance négative : 88% 100% Concordance totale : 92% 95.9% Buchner,C.E et al. 10th Dresden Symposium on autoantibodies, tib 22-25th 25th september 2011
Conclusions (1) Lecture et interprétation correctes des aspects d immunofluorescence (homogène, moucheté, nucléolaire, dot nucléaire, centromère et cytoplasmique) Excellente corrélation (k) entre les résultats de routine (lecture TAB) et ceux obtenus par le NovaView 3 cas discordants (2.4%), probablement faussement ( ), p négatifs par le NovaView
Conclusions (2) Légère diminution i de la sensibilité lors de la lecture par le NovaView (Un titre plus bas dans 50% des cas) Pas de conséquences de la sensibilité plus faible du NovaView sur l évaluation clinique
Quel avenir pour l analyse automatisée en autoimmunité? Corrélation entre LIU et titration? Lectures automatisées appliquées à d autres anticorps: ANCA, tissus?