Formation au microscope DMLM. et au logiciel Pixelinx Capture SE. LNN Université de Sherbrooke

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1 Formation au microscope DMLM et au logiciel Pixelinx Capture SE LNN Université de Sherbrooke

2 Description Description générale Le microscope DMLM est un microscope optique à 5 objectifs (2.5X, 5X, 10X, 20X et 40X). Mis à part l objectif 40X qui provient d un autre appareil, la qualité des images obtenue est relativement bonne, comparativement au microscope Nikon Eclipse ME600L qui cible une gamme plus élevée de grossissements (5X, 10X, 20X 50X et 100X) et donne généralement de meilleurs résultats. Le DMLM peut dont être un bon choix pour des vues d ensembles, pour valider des gravures ou pour des observations générales hors salle jaune, et particulièrement lorsque l autre microscope est utilisé! Fig.1 Vue d ensemble du microscope DMLM Une source lumineuse en lumière blanche est utilisée pour l éclairage, mais des filtres peuvent être insérés dans le chemin optique. Une caméra et un logiciel permettent entre autres la visualisation, la capture d image, la prise de mesures et l ajout d informations aux images capturées. Focalisation motorisée Le microscope DMLM est un microscope optique à focalisation motorisée commandée par un bouton rotatif ou molette. Tout le système optique peut être rapproché ou éloigné de la platine sur lequel est déposé l échantillon afin de faire la mise au foyer. Ce mouvement est très critique lors de la descente : il faut absolument éviter de fracasser l objectif sur l échantillon pour éviter de les endommager. Ceci implique une surveillance visuelle constante. Basculer l interrupteur situé sur le dessus du microscope en position «1» (fig.2). Un bip sonore devrait se faire entendre.

3 Fig.2 Système motorisé et interrupteur Fig.3 Molette de contrôle et boutons Tourner la molette dans le sens horaire pour faire remonter le système (fig.3). Si rien ne bouge et que le bip ne s est pas fait entendre, basculer de nouveau l interrupteur en position «O» puis en «1» pour le réactiver. Deux vitesses sont disponibles. On passe d une vitesse à l autre (rapide ou lente) en appuyant sur le petit bouton noir situé sur le dessus de l unité du bouton rotatif (fig.3). Noter que le petit bouton rouge situé derrière le noir est sans effet dans la configuration actuelle. La rotation de la molette dans le sens horaire fera remonter le système optique donc l éloigner de la platine. La rotation antihoraire fera rapprocher l objectif. Rappelons qu il faut toujours s assurer de stopper la descente avant qu il y ait contact! Dans la section suivante, on présente une méthode pour éviter de tels problèmes.

4 Manipulations Mise en place de l échantillon Déplacer la platine vers l avant en tournant la roulette appropriée de la tige de positionnement de la platine. Fig.4 Platine et tige de positionnement X-Y Fig.5 Tourelle à 4 objectifs Le chargement/déchargement de l échantillon doit se faire avec l objectif le plus court (2.5X) ce qui permet un meilleur dégagement pour la manipulation et permet d avoir un point de départ plus aisé pour la focalisation en étant à une bonne distance de l échantillon. S il n est pas en position, pivoter la tourelle pour passer à un objectif de plus faible grossissement jusqu à celui de 2.5X en manipulant la tourelle par la bague et non par les objectifs. Déposer l échantillon directement au centre de la platine ou par l intermédiaire d un papier de salles blanches uniforme et sans déformation pour faciliter l ajustement de la rotation. Déplacer la platine à l aide des roulettes de la tige de positionnement pour centrer la zone à observer de l échantillon sous l objectif. Ajustement du microscope Ajuster la distance interoculaire en écartant ou rapprochant les tubes des oculaires. S assurer que la tige de sélection du mode de visualisation est enfoncé (fig.6) pour obtenir une visualisation dans les oculaires. Autrement, l image est dirigée vers la caméra uniquement.

5 Fig. 6 Tige de sélection du mode de visualisation (en bas à droite) S assurer que pour les premiers ajustements, le mode de visualisation est à champs clair, c est-àdire que la roulette de mode d observation est sur le mode numéro 1. > Tourelle en mode #1 : mode régulier en champ clair > Tourelle en mode #2 : mode à contraste interférentiel avec plaque D en position enfoncée, et vis d ajustement de l angle du polariseur Note : Les filtres colorés (jaune, vert et bleu) ne sont généralement pas requis, mais le 3 e filtre (bleu) peut être utilisé pour un éclairage donnant une image moins jaunâtre. Mise en route Mettre sous tension le contrôle motorisé du système de focalisation si cela n a pas déjà été fait. Mettre sous tension la source d alimentation de la lampe du microscope (interrupteur rouge). Ajuster le potentiomètre de la source pour que la tension affichée soit aux environs de 5 ou 6V. Noter qu une tension trop élevée réduira la vie utile de l ampoule. Si l intensité semble trop faible, avant d augmenter la tension, il faut vérifier d abord si des filtres, polariseurs ou diaphragmes sont utilisés et les retirer ou les ouvrir si non-requis. Mise au foyer initiale Tout en regardant la base de l objectif et l échantillon, rapprocher progressivement le système optique mobile en tournant la molette dans le sens antihoraire. Avant d être trop près, il faudra passer en vitesse lente pour descendre jusqu à un gap de 2mm environ entre l échantillon et le bas de l objectif. Maintenant, tout en regardant dans les oculaires, remonter le système en tournant dans le sens horaire. Continuer dans le même sens jusqu à ce que l image, qui devient de moins en moins floue, se précise et soit au foyer. On peut aider à la focalisation en fermant partiellement l iris ou diaphragme de champ F, puis en focalisant le spot lumineux obtenu sur la surface de l échantillon. On peut ensuite ouvrir le

6 diaphragme de champ quand la surface est bien focalisée. Ceci est particulièrement utile pour des échantillons dépourvus de topologie ou de zones contrastées. Changement d objectif Lorsque la mise au foyer est faite, il est maintenant possible de passer à un oculaire de grossissement plus élevée. Pour cela, il faut: Pour augmenter le grossissement : 1- Déplacer au besoin la zone d intérêt au centre de l image 2- Pivoter la tourelle des objectifs avec la bague pour ne pas désajuster les objectifs, en tournant la tourelle dans le sens horaire pour augmenter le grossissement 3- Faire la mise au foyer en tournant légèrement dans un sens ou l autre le bouton de contrôle pour trouver le plan de focalisation de ce nouvel objectif 4- Si nécessaire, ajuster l éclairage (curseur d «Aperture» et de «Field», filtres, bouton d intensité de la lampe, etc.) 5- Inspecter, déplacer la platine, mettre au foyer si nécessaire 6- Si on veut augmenter le grossissement, bien remettre au foyer et revenir à l étape 1, sinon passer à l étape suivante. ATTENTION : pour passer de l objectif 20X à 40X, voir plus bas la procédure spéciale. Pour réduire le grossissement : 1- Tourner la tourelle dans le sens antihoraire pour revenir vers un grossissement plus faible. 2- Si on veut observer, faire la mise au foyer et les ajustements sinon passer à l étape suivante. 3- Répéter la séquence à l étape 1 jusqu à l objectif le plus court soit le 2.5X. ATTENTION : ne pas passer directement de l objectif 2.5X à 40X pour éviter de fracasser l objectif! Procédure de passage de l objectif 20X à 40X : Pour passer de l objectif 20X vers celui de 40X (d un modèle différent), cela est plus compliqué. Il est très important de bien faire la focalisation, d avoir bien centré la structure à observer au centre de l image et surtout d être en vitesse lente avant de passer à l objectif 40X. Ensuite, tout en regardant dans les oculaires, et, rappelons-le, en étant en vitesse lente, rapprocher l objectif en tournant lentement dans le sens antihoraire, pour 6 tours complets, voire 6 et demi, pas plus, pour ne pas fracasser l objectif. Si rien n est visible, effectuer de très courts déplacements latéraux de l échantillon pour tenter de voir un contraste et faire la mise au foyer. Sinon revenir à l objectif 20x refaire la mise au foyer en centrant l image sur une zone d intérêt puis reprendre la procédure de descente de 6 tours de molette en vitesse lente. Noter que la profondeur de champ est très faible, il faut être très près du foyer pour commencer à distinguer une image à ce grossissement. Rappelons qu il faut revenir vers un objectif de plus faible grossissement donc en tournant la tourelle dans le sens antihoraire.

7 Utilisation de la caméra Destination de l image Avec une image au foyer visible dans les oculaires, tirer le levier du trinoculaire vers l extérieur pour que celle-ci atteigne plutôt la caméra. Il n y a donc plus d image visible dans les oculaires. Démarrage du logiciel et description des fenêtres Cliquer sur l icône Pixelink pour démarrer le logiciel Capture SE Pixelink. La fenêtre principale affiche par défaut une barre de menu régulière avec en dessous plusieurs icônes de commandes, un panneau d ajustement pour la caméra à gauche et une zone centrale pour les fenêtres de l image «live» venant de la caméra et pour les images statiques qui ont été capturées. Il y a aussi en bas (de gauche à droite) une zone d affichage de l aide, une zone de tableau pour une base de données d images, une zone d affichage des résultats des mesures pour la fenêtre d image courante et un histogramme faisant état de l intensité et de la distribution spectrale de cette image. Sélection d un «preset» Il est recommandé de sélectionner un ensemble de paramètres d ajustement de l image de la caméra en fonction du mode d éclairage et du grossissement de l objectif utilisé. Ceci peut servir de point de départ pour retrouver une correspondance la plus fidèle entre l image perçue dans les oculaires et celle affichée venant de la caméra. Par exemple, choisir LF2_obj2p5x pour le mode de champ clair (LF) et objectif 2.5X ou encore LF2_40X pour l objectif 40X (champ clair).

8 Visionnement et capture d image Cliquer sur Video On pour faire afficher l image actuelle de la caméra dans une fenêtre intitulée Pixelink Camera Si l image est noire, s assurer que le levier du trinoculaire est tiré vers l extérieur. Cliquer sur Capture pour ouvrir une nouvelle fenêtre avec l image statique (capturée au moment du clic!). Noter que le bas de la fenêtre principale affiche une barre de statut pour l image courante avec la signification suivante x et y : position du curseur R, G et B : intensité du pixel pour les 3 couleurs de base (rouge, vert et bleu) H et S : Hue et Saturation? I et P :? nn.n X : grossissement de l objectif (magnification) W et H : Largeur (W) et hauteur (H) de l écran? ou de l image? en nombre de pixels Mesures sur images capturées Sélectionner au menu Measure -> Caliper et cliquer pour obtenir la mesure entre deux points sur l image. D autres mesures sont possibles dont une mesure d aire à l intérieur d un polygone que l on définit en cliquant. Annotations Ajouter du texte ou des traits via le menu Annotation. Cliquer d abord sur Annotation Enable pour rendre effectif Réglette Pour ajuster la taille et modifier le texte affiché, sélectionner Adjust -> Micrometer -> Burn Into Image Options Pour inscrire la réglette sur l image, sélectionner Adjust > Micrometer -> Burn into image Enregistrement d images capturées Sélectionner File-> Save As et retrouver le répertoire Usagers DMLM sous Mes Documents. Se créer un répertoire à notre nom et y enregistrer les images capturées et/ou modifiées.

9 Ce répertoire sur le disque dur local est en partage à partir du réseau des salles blanches sous l identification Ordinateur DMLM. Vous pouvez aussi enregistrer vos images directement dans le répertoire Public du réseau des salles blanches. 3iT/LNN par PLL 6 mars 2013 ************ VERSION PRÉLIMINAIRE *****************************