2012>2020. Un continuum du lycée à l université Présentation des projets de recherche. Vendredi 24 mai 2013

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1 2012>2020 Un continuum du lycée à l université Présentation des projets de recherche Vendredi 24 mai 2013

2 2 Laboratoire ICOA Doctorants : Laure GUILLOTIN - Geoffrey DUMONTEIL Lycée : Voltaire

3 GLYCOPEPS : SYNTHESE CHIMIO- ENZYMATIQUE DE GLYCOPROTEINES 1 er COLLOQUE EDIFICE Anne Canovi ; Clément Deschamps ; Guillaume Pelissier ; Théo Verger; Laure Guillotin Encadrants : Prof. Richard Daniellou; Dr. Pierre Lafite; Mme Alonso

4 4 Textile Délavage des jeans, Détergence Lessive, Alimentaire Fromagerie, biscuiterie, vinification, LES ENZYMES Catalyseurs de réactions (bio)chimiques, présents chez tous les organismes vivants Biologie médicale Aide au diagnostic Cosmétique shampoing Chimie Oxydases, estérases, glycosidases, Découverte et études d outils biotechnologiques

5 5 OBJECTIF EDIFICE ANNEE 1 Etude d une enzyme polyvalente : le lysozyme Qu est-ce que c est? Une protéine globulaire comportant 129 acides aminés Quel est son rôle? Détruire les parois bactériennes en cassant les liaisons entre les sucres présents à leur surface Où peut-on en trouver? Liquides biologiques (blanc d œuf), mucus nasal, les larmes, Utilisations? Industrie agroalimentaire (E1105), œnologie, industrie pharmaceutique, Expérience retenue : Extraire et purifier le lysozyme du blanc d œuf de poule

6 1 ERE ETAPE : EXTRACTION DU LYSOZYME

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14 Culot Surnageant

15 2 EME ETAPE : ANALYSE DU BLANC D OEUF

16 Problématique : Quelle est la composition du blanc d œuf de poule? Technique employée : Gel d électrophorèse SDS-PAGE PRINCIPE Séparation des protéines d un mélange en fonction de leur taille sous l action d un champ électrique protéine dénaturée - + protéine Sens de migration

17 PRÉPARATION MIGRATION - +

18 REVELATION DU GEL 118 kda 90 kda 50 kda 34 kda Mélange référence contenant des protéines de tailles connues 26 kda 19 kda Lysozyme ( Da) Observations : Le blanc d œuf est composé de 3 protéines majoritaires dont le lysozyme Conclusion : Le lysozyme n est pas pur après extraction, une étape de purification est nécessaire

19 3 EME ETAPE : PURIFICATION DU LYSOZYME

20 Dans le blanc d œuf : seul le lysozyme reste chargé à ph basique (ph =10) + Matériel utilisé : Résine échangeuse de cations PRINCIPE Solution de blanc d œuf de ph =10 L + P - L + L + - P P - P - L + P - P - P - L + P- Cl - Na + Cations échangeables P - - P - L + L + L + L + - P Na + Cl - Na + Na + Cl - Na Cl - + P - L + L +

21 Gel d électrophorèse SDS-PAGE des fractions recueillies : lysozyme Observation : seule la fraction E2 contient du lysozyme pur Dosage de la fraction E2 (5ml) : concentration protéines = 0,50 mg/ml Conclusion : 2,5 mg de lysozyme pur ont pu être obtenus après purification sur résine échangeuse de cations

22 CONCLUSION Découverte et prise en main de diverses techniques de laboratoire 2,5 mg de lysozyme ont été obtenus après extraction et purification Perspectives : Tests d activité et cristallisation du lysozyme Micrococcus lysodeikticus Cristaux de lysozyme Bilan global : 1 ère expérience très positive pour le laboratoire et les lycéens

23 Théo Anne Clément Guillaume Merci de votre attention

24 24 Laboratoire ICOA Doctorants : Laure GUILLOTIN - Geoffrey DUMONTEIL Lycée : Voltaire

25 Synthèse et modifications de composés naturels extraits de plantes

26 26 Le sujet de thèse Sirop d érable Molécule d intérêt Diabète type II

27 27 Le sujet de thèse Molécule d intérêt Modifications de structure Tests biologiques Activité biologique

28 28 Projet EDIFICE Extraction Modification Vanilline

29 29 Projet EDIFICE

30 30 Projet EDIFICE Extraction de l eugénol par hydrodistillation. Broyage du clou de girofle pour augmenter la surface de contact entre l eau et celui-ci. Récupération du mélange contenant l huile essentielle et l eau. Extraction liquide - liquide. Eugénol.

31 31 Projet EDIFICE Isoeugénol Modifications de structure Vanilline

32 32 Projet EDIFICE Techniques d analyses utilisées : Chromatographie Purification de composés. InfraRouge diffraction des rayons IR par la molécule RMN informations structurales (~IRM pour molécule). MS Mesure de la masse de la molécule.

33 33 Projet EDIFICE Conclusion: Découvrir le milieu de la recherche Apprentissage de nouvelles bases et de nouvelles techniques d analyse Conforter l orientation des études futures Envie de poursuivre

34 Merci pour votre attention