Kit de Groupage sanguin

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1 Présentation Kit de Groupage sanguin NOTICE Retrouvez l ensemble de nos gammes sur : ÉQUIPEMENT PÉDAGOGIQUE SCIENTIFIQUE DIDACTIK CS SARREGUEMINES Cedex France Tél. : Fax : education-france@pierron.fr 1

2 Composition du Kit : NB : la recharge ne contient que les élement diagnostiques. À stocker à température ambiante. Échantillons contrôle de sang (simulé) (A, B, et O) ** Échantillons inconnus de sang de quatre patients (P1, P2, P3 et P4) Sérum Anti-A et anti-b Pipettes de transfert Plaques de microtitration Microtubes pour test. ** NOTE : Tous les groupes sanguins seront préparés par l instructeur juste avant l utilisation. Environnement Optionnel : Micropipette automatique (5-50 µl) et cônes. Cette expérience est conçue pour 10 groupes d étudiants. Ni sang ni produits sanguins réels ne sont utilisés dans cette expérience. Renseignements généraux Les réactions de précipitation entre des antigènes solubles et des anticorps peuvent être des réactions visibles si les deux éléments sont en équivalence. Sous cette condition, ni l antigène, ni l anticorps n est en excès et les complexes antigène/anticorps forment des réseaux de grande taille qui précipitent hors de la solution comme schématisé ci-dessous. Antigène en excés Équivalence Anticorps en excés Antigène soluble Antigène soluble

3 Lorsque l antigène est fixé à un globule rouge, la réaction est appelée agglutination et le treillis de l antigène et de l anticorps qui est visible à l équivalence est appelé agglutinat. La réaction d agglutination est une procédure sérologique de routine très rentable, la procédure est simple et très facilement détectable. Le groupage sanguin est un exemple d un test clinique qui nous est familier. Étant donné que les antigènes spécifiques du sang sont sur la surface des globules rouges (hématies) elles sont appelées réactions d hémagglutination. Le groupage sanguin a diverses applications médicales importantes. L utilisation la plus importante est d assurer la sécurité transfusionnelle. Dans le test d hémagglutination, les types de sang de donneurs et receveurs sont testés. Après le groupage sanguin, le receveur est adapté à un donneur dont il être en mesure de recevoir le sang en toute sécurité. Les déterminants antigéniques à la surface des globules rouges (hématies) sont les A, B, et les O, qui sont appelés par commodité antigènes A, B, et O. Deux antigènes pour quatre types possibles de sang ; de type A (seul l antigène A est présent sur la surface des globules rouges), de type B (antigène seul B est présent) ; de type AB (A et B présents sur chaque cellule) ; et O (aucun des antigènes A et B n est présent). Sur cette base, il existe quatre types de sang possibles dans le système de groupes ABO Groupe Sanguin A B AB O Antigène su GR A B A et B ni A ni B 3

4 Informations Complémentaires Le sang des antigènes A et B sont communs dans la population humaine, ainsi que dans la nature, y compris les bactéries à laquelle nous sommes exposés. Lorsqu ils sont exposés à des bactéries avec le même Ag de groupe sanguin, le système immunitaire de l individu reconnaît comme antigène du «Soi» et aucune réponse immunitaire n est déclanchée. En revanche, lorsqu il est exposé à bactéries avec différents antigènes de groupes sanguins, le système immunitaire déclenchera une production d anticorps spécifiques à cet antigène. Ces anticorps sériques peuvent alors agglutiner les globules rouges provenant d individus avec un type de sang différent. Par exemple, des anticorps anti-a à partir de sérum d un individu seront agglutinés par les globules rouges d une autre personne ayant l antigène A sur leur surface. Les anticorps anti-b agglutineront les globules rouges qui ont l antigène B sur leur surface comme illustré ci-dessous dans le tableau B. Groupe sanguin Ag présents sur hématies Ac du sérum A A Anti-B B B Anti-A AB A et B Ni anti-a, ni anti-a O Ni A, ni B Anti-A et anti-b Le groupe sanguin O est souvent désigné en tant que donneur universel, et le sang de type AB est généralement désigné comme receveur universel. Cette information n est pas exacte, un sang de type O est couramment dit être le donneur universel car les globules rouges de type O n ont pas d antigène A ou B sur leur surface et ainsi supposé à tort être sans danger pour la transfusion de personnes ayant de type A, B ou AB sang. Cette hypothèse est erronée et peut avoir des conséquences médicales graves où les anticorps anti-a du donneur réagiraient avec les globules rouges du receveur. Par conséquent, le sang du type O est un donneur universel que si les globules rouges (et pas de sérum) sont transfusées. Par conséquent, en réalité, seul le sang du même type doit être transfusé à un patient

5 Composition du Kit : OBJECTIF DE L EXPERIENCE : L objectif de cette expérience est d apprendre la notion de groupage sanguin et de se familiariser avec les différents types de cellules présentes dans le sang et brièvement donnent un aperçu de leurs fonctions. SÉCURITÉ DE LABORATOIRE : Aucun matériel d origine humaine ou animale n est utilisé dans cette expérience. Gants et des lunettes de sécurité doivent être portés comme préconisé dans les bonnes pratiques de laboratoire. Procédures expérimentales Réaction d Hémagglutination : Test de transfusion : 1. Placer une plaque de microtitration comme indiqué ci-dessous. Dans la partie supérieure de la plaque, marquer les 8 puits A, B, AB, O, P1, P2, P3 et P4 respectivement, en utilisant un marqueur laboratoire. Nommez les deux rangées anti- A et anti -B, respectivement. La plaque devrait ressembler à celle illustrée ci-dessous. 2. À l aide d une pipette différente ou d un embout de pipette différent pour chaque échantillon, déposer 3 gouttes de chaque type de sang de contrôle et échantillon de patient dans chacun des deux puits correspondants. Par exemple : déposer 3 gouttes du sang control de type A dans les deux emplacements situés sous l indice A. Chaque puits nécessite bien 3 gouttes ou 50 µl. 5

6 3. Utiliser une nouvelle pipette pour ajouter une goutte ou 20 µl de sérum anti-a dans chacun des puits dans la ligne Anti A 4. Utiliser une nouvelle pipette pour ajouter une goutte ou 20 µl de sérum anti-b dans chacun des puits de la la ligne Anti B 5. Laisser la plaque de microtitration au repose sans manipulation durant 5-10 min. 6. Observer les puits pour détecter la présence ou non d agglutination. L agglutination s est produite si le mélange est granulaire plutôt que lisse. Résultats expérimentaux 1. Notez vos résultats dans le schéma ci-dessous. 2. Quels sont les types des quatre patients sanguins ABO 3. Quel type de sang pourrait être transfusé en toute sécurité dans le patient n 1?

7 Préparatifs avant-manipulations 1. Chaque groupe aura besoin des documents suivants : Un morceau de plaque de microtitrage (2 rangées de 8 puits). 2. Dans un petit tube, mélanger 700 µl de sang A et 700 µl de sang B, reboucher, mélanger et étiqueter le tube «AB». 3. Étiqueter les tubes «P1», «P2», «P3». «P4», «A», «B», «AB», et «O» et déposer 100µL de chaque échantillon dans son tube respectif. Utiliser une pipette neuve pour chaque type de sang. 4. Étiqueter les tubes «anti-a» et «anti-b» et déposer 180 µl de chaque anti sérum dans son tube respectif. 5. Les élèves auront également besoin de micropipettes avec 10 cônes propres ou 10 pipettes de transfert pour la distribution des échantillons. Résultats Attendus. 7

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11 Notes ÉQUIPEMENT PÉDAGOGIQUE SCIENTIFIQUE DIDACTIK CS SARREGUEMINES Cedex France Tél. : Fax : education-france@pierron.fr