L'expression d'une forme active de conduit à la réinduction de la lipogenèse dans un modèle animal de déficience en LXR et SREBP-1c Audrey POUPEAU Equipe Signalisation Insuline et, Glucotoxicité Département Endocrinologie, Métabolisme et Cancer Institut Cochin, Paris Ce travail ne fait l objet d aucun conflit d interêt
La stéatose hépatique non alcoolique Accumulation de triglycérides dans le foie Souvent associée à l obésité et au diabète de type II Peut conduire à l établissement d un état inflammatoire délétère Tissu Adipeux Insuline Lipolyse Insulino Resistance AGL VLDL Insuline Lipogenèse SREBP-1c, LXRα AG -oxydation Elongation Désaturation Estérification Export STEATOSE : Carbohydrate Responsive Element Binding Protein SREBP-1c: Sterol Regulatory Element Binding Protein LXRα: Liver X Receptor
GLYCOLYSE Régulation transcriptionnelle de la lipogenèse hépatique en réponse au glucose et à l insuline Hépatocytes Glut-2 Insuline? -6 Phosphate GK? LXRα RE L-PK Pyruvate Acétyl-CoA Krebs Krebs Cycle Cycle LXRα SREBP-1c ChoRE LXRE SRE gènes de la lipogenèse: ACC,FAS, noyau
QUESTIONS ET OBJECTIFS Quelles sont les contributions respectives de LXRα et de au contrôle transcriptionnel d une enzyme de la lipogénèse, la in vitro est-il suffisant pour induire la lipogenèse et la stéatose hépatique in vivo lorsque l expression de LXRα et de SREBP-1c est déficiente?
Régulation différentielle par LXRα et d une enzyme de la lipogenèse, la 5 mm 25 mm LXRα (ARNm) 1,40 1,20 1,00 0,80 tampon collagénase Adénovirus shlxrα sh WB 0,60 0,40 0,20 0,00 G6P L-PK pyruvate FAS, ACC acides gras LXR Elovl6 shctrl shlxr shlxr sh LPK HSP90 permet l induction de la indépendamment de LXRα
QUESTIONS ET OBJECTIFS Quelles sont les contributions respectives de LXRα et de au contrôle transcriptionnel d une enzyme de la lipogénèse, la in vitro est-il suffisant pour induire la lipogenèse et la stéatose hépatique in vivo lorsque l expression de LXRα et de SREBP-1c est déficiente?
Caractéristiques des souris LXR-KO et protocole d infection de l adénovirus souris LXRα/β-KO injection dans la veine du pénis glucose insuline SREBP-1c lipogenèse désaturation ACC, FAS D après Schultz et al, 2000 Kalaany et al, 2005 ou GFP 16 souris mâles LXRα/β-KO et témoins J0 J5 J6 J7 injection adénovirus GFP ou mise à jeun des souris réalimentation des souris sacrifice et prélèvement des foies
L expression de dans le foie des souris LXR-KO permet la réinduction de l expression des enzymes de la lipogenèse ARNm * * * témoins- GFP LXR-KO GFP * LXR-KO LXRα L-PK FAS Elovl6 Western Blot psrebp-1c msrebp-1c FAS ACC GAPDH témoins LXR-KO GFP GFP - 128 kda, cytosol - 68 kda, noyaux - 95 kda - 72 kda LXR, SREBP1c G6P L-PK pyruvate FAS ACC acides gras Elovl6??
L expression de dans le foie des souris LXR-KO permet l établissement d une stéatose hépatique témoins- GFP Dosage des triglycérides, en nmol/mg de foie * LXR-KO GFP LXR-KO Coupes Dosages de du foies G6P colorées et du glycogène, à l huile rouge en (Oil Red O), grossissement x10. nmol/mg de foie G6P * glycolyse lipogenèse acides gras glycogène (nmol /mg) témoins-gfp LXRKO-GFP LXRKO- CA G6P (nmol /mg) Glycogène (nmol /mg) Dosage des proportions des différentes espèces lipidiques * * Stéarate Elovl6 18:0 18:1 cis-9 Oléate Citrate Palmitate 16:0 Palmitoléate 16:1 cis-9 Palmitate Stéarate Palmitoléate Oléate lipogenèse élongation,désaturation
Conclusion: La surexpression de permet l induction de la lipogenèse et l établissement de la stéatose hépatique en l absence de LXR et de SREBP-1c Modèles: Souris LXR / KO (in vivo) Hépatocytes shrna LXR (in vitro) L-PK Glycolyse LXRα pyruvate Lipogenèse ACC FAS Elongation Désaturation Estérification, Elovl6 STEATOSE SREBP-1c CA 1 ChoRE promoteurs et Elovl6 Perspectives: déterminer si la régulation de et Elovl6 par est directe (ChIP:Chromatin Immuno-precipitation)
Remerciements Equipe «Signalisation de l insuline et du glucose et glucotoxicité» : Catherine Postic Anne-Françoise Burnol Jean Girard Marthe Moldes Michèle Caüzac Renaud Dentin Sandra Guilmeau Sandra Hernandez Tarik Issad Bernard Desbuquois Fadila Rayah-Benhamed Gaëlle Filhoulaud Céline Dubuquoy Solène Marmier Julien Bricambert Lucie Popineau Yoann Schumacher Régine Cabrae Bénédicte Noblet Caroline Bonner-Carbonnaux Plate-forme de microchirurgie Véronique Fauveau Souris LXR-KO Jean-Marc Lobaccaro (Clermont Ferrand) Hervé Guillou (Toulouse) Adénovirus Renaud Dentin (EMC) Financements