Version : ACR 01 Date de validation : 21/01/2013 Type de texte : Mode opératoire Date de mis en application : 21/01/2013 Intervenants Dates Visas Auteur DENOYERS Hervé 19/10/2012 Vérification SOUCHET Jean Louis 23/10/2012 Approbation BENDAHAN Michel 10/01/2013 Historique des versions NOMVERSION COMMENTAIRE VALIDE DATE Prélèvements A Oui 09/08/2007 Bactériologiques mode opératoire Prélèvements bactériologiques et mycologiques ACR 01 Oui 21/01/2013 Référentiels NORME CHAPITRE SOUSCHAPITRE PARAGRAPHE BIOQUALITE Pré Analytique Prélèvement Norme Iso 9001 7 Réalisation du produit 7.5 Production et préparation du service Norme GBEA III. - Exécution des analyses Règles générales 2.1. Prélèvement des échantillons biologiques : Norme Iso 17025 Norme NF EN ISO 15189 - Déc 2012 5.0 Prescriptions techniques 5.7 Échantillonnage 5. Exigences techniques 5.4 Processus préanalytiques - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 1 / 13
1. Objet et domaine d application Ce mode opératoire décrit comment réaliser les prélèvements bactériologiques et mycologiques suivants: Prélèvement vaginal Prélèvement urétral Prélèvement peau et phanères (= ongles, cheveux) Prélèvement de plaie, escarre, pus, Prélèvement ORL (nez, gorge, oreille), prélèvement OCULAIRE Scotch-test Recueil des urines pour ECBU par sondage urinaire. 2. Documents associés REMIC 2010 disponible laboratoire bactériologie C2PR 01 «Prélèvements» 3. Responsabilités Les prélèvements sont réalisés par le personnel autorisé (cf : Procédure C2PR01 «Prélèvements») sous la responsabilité des biologistes. Ces consignes de prélèvements sont également mises à la disposition des préleveurs externes. Lorsque le reccueil est effectué par le patient (ECBU, Coproculture, ), la personne présente à l accueil a la responsabilité de donner le matériel nécessaire et la fiche de recommandation /renseignements cliniques. 4. Déroulement de l activité 4.1. Le matériel utilisé Gants Pot stérile. Spéculum stérile en plastique à usage unique. Ecouvillons avec milieu de transport, écouvillons secs Boîte de Petri. Pinces. Ciseaux. Lames de scalpel Matériel transmis par le laboratoire Biomnis (analyses non effectuées au laboratoire) - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 2 / 13
4.2. Déroulement du prélèvement IDENTITOVIGILANCE : le préleveur, muni de l ensemble des documents nécessaires (ordonnance, planche d étiquettes, feuille Scanbac, ) vérifie l identité du patient en lui demandant son Nom Prénom Date De Naissance. Le préleveur vérifie que l identité du patient correspond à celle des documents. Il rassure le patient et l informe sur les conditions de prélèvement. Avant de procéder au prélèvement, le préleveur se lave soigneusement les mains (savon, ) et se les sèche (essuie-mains à usage unique), puis met des gants. - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 3 / 13
Prélèvement VAGINAL ou CERVICO-VAGINAL Se conformer à la prescription médicale pour le moment et les conditions de prélèvement. Pour rappel : éviter toute toilette intime, tout traitement local (crème, gels, savons ), tout rapport sexuel dans les 24 heures précédant l examen. Réaliser le prélèvement à distance des règles, avant ou à distance de tout traitement antibiotique (> 15 jours pour C. trachomatis, > 5 jours pour les germes banals). Le préleveur doit s assurer au préalable des conditions physiologiques de la patiente : Demander à la patiente si elle a déjà eu 1 frottis ou 1 prélèvement vaginal. Si non, demander à la patiente si elle a déjà eu des rapports sexuels. Si non, adresser la patiente à un gynécologue pour le prélèvement. Après mise en place d un spéculum à usage unique, prélever selon la prescription médicale en fonction du tableau suivant : PRESCRIPTION PV STANDARD (toute lésion visible doit être prélevée) Mycoplasmes génitaux Chla. Trachomatis Herpès T.pallidum SITE de prélèvement Cul-de-sac vaginal postérieur Endocol (gonocoque) Cul-de-sac vaginal postérieur Endocol Vulvovaginal (plancher des vésicules) Ulcération -2 écouvillons avec milieu de transport COMMENTAIRES -Recherche vaginose, vaginite (Trichomonas vaginalis, ), mycose -Après nettoyage de la glaire cervicale -1 écouvillon avec milieu de transport -Bien gratter la muqueuse avec 1 écouvillon sans milieu de transport, écouvillon à épuiser immédiatement dans le milieu de transport Mycoplasmes (UMMt) -Conserver le milieu de transport UMMt au réfrigérateur si l acheminement est différé Matériel et recommandations de prélèvement : se reporter aux indications du laboratoire BIOMNIS -Etaler 1 lame à partir de la sérosité recueillie au centre de la lésion avec 1 écouvillon sec. Ne pas fixer. -Transmettre la lame pour analyse au laboratoire BIOMNIS H. ducreyi Ulcération -Analyse effectuée au laboratoire -Etaler 1 lame à partir d un prélèvement effectué sur le pus en bordure de la lésion avec 1 écouvillon sec NB : cas ou le médecin demande de manière explicite sur l ordonnance la recherche du portage de Streptococcus agalactiae chez la femme enceinte entre la 34 et la 38 semaine d aménorrhée, exclusivement et à l exclusion de tout autre résultat concernant le PV : -Code BACA à l enregistrement (au lieu de PV) -L emploi d un spéculum n est pas recommandé -Prélever 2 écouvillons avec milieu de transport au niveau du 1/3 vaginal inférieur B I O M N I S - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 4 / 13
Prélèvement URETRAL Se conformer à la prescription médicale pour le moment et les conditions de prélèvement. Pour rappel : si possible au moins 1 heure après la dernière miction, et toujours avant le 1 jet d urine en recueillant le pus ou l écoulement au méat urétral. PRESCRIPTION P.U. Standard Mycoplasmes génitaux Chlamydia trachomatis Herpès T.pallidum SITE de prélèvement Ecoulement ou prélèvement endo-urétral Endo-urétral COMMENTAIRES -2 écouvillons fins avec milieu de transport -Récupérer le pus éventuel au niveau du méat urétral -En cas de prélèvement endo-urétral : introduire l écouvillon dans l urètre sur 2 à 4 cm. Tourner doucement l écouvillon dans le sens horaire pendant 2-3 secondes. Retirer avec précaution l écouvillon -Effectuer un prélèvement endo-urétral comme indiqué ci-dessus -Utiliser 1 écouvillon fin sans milieu de transport, à épuiser immédiatement dans le milieu de transport Mycoplasmes (UMMt) -Conserver le milieu de transport UMMt au réfrigérateur si l acheminement est différé Endo-urétral Matériel et recommandations de prélèvement : Vésicules (plancher des vésicules) Ulcération (gland, sillon balanopréputial, verge) se reporter aux indications du laboratoire BIOMNIS -Etaler 1 lame à partir de la sérosité recueillie au centre de la lésion avec 1 écouvillon sec. Ne pas fixer. -Transmettre la lame pour analyse au laboratoire BIOMNIS B I O M N I S H. ducreyi Ulcération (gland, sillon balanopréputial, verge) -Analyse effectuée au laboratoire -Etaler 1 lame à partir d un prélèvement effectué sur le pus en bordure de la lésion avec 1 écouvillon sec - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 5 / 13
PEAU et PHANERES (= ongles, cheveux) Se conformer à la prescription médicale pour le moment et les conditions de prélèvement. Pour rappel : -Prélèvement mycologique: réalisé avant traitement antifongique local ou général (si c est le cas, arrêter le traitement et attendre au moins 1 semaine avant d effectuer un prélèvement cutané et 3-4 semaines pour un prélèvement d ongles). -Prélèvement bactériologique : réalisé avant antibiothérapie. PEAU et PHANERES : Prélèvement MYCOLOGIQUE (recherche dermatophytes, levures, ) PEAU : -Lésion sèche : gratter les squames à la périphérie des lésions (à l aide d une lame de scalpel, curette, ) et les recueillir dans 1 boite de Petri stérile. -Lesion macérée et suintante : 2 écouvillons avec milieu de transport (écouvillonner les sérosités et gratter le plancher de la lésion). ONGLES : -Bien essuyer l ongle au préalable pour éliminer toute souillure, éliminer le cas échéant les portions d ongle les plus externes pouvant être souillées par des champignons contaminants. -Principe : il faut prélever là ou le champignon est vivant, à la jonction partie saine-partie malade. -Prélever des poussières d ongle en raclant la tablette interne de l ongle jusqu à la limite de l ongle sain et les recueillir dans 1 boite de Pétri stérile (il est aussi possible de couper toute la partie de l ongle atteint à l aide de ciseaux). -en cas de Ilots blanchâtres à la surface de l ongle (leuconychies) : racler la surface de l ongle. Périonyxis : prélever le pus de périonyxis en pressant la lésion (2 écouvillons avec milieu de transport). CHEVEUX et CUIR CHEVELU : -Teigne : arracher les cheveux susceptibles d être atteints à la pince à épiler + prélever squames et croûtes éventuelles en raclant avec une lame de scalpel, curette, Récolter les divers prélèvements dans 1 boite de Petri stérile. -Lésions inflammatoires suppurées : prélever les suppurations (2 écouvillons avec milieu de transport). PYTIRIASIS VERSICOLOR (dû à une levure : Malassezia furfur) : -Réaliser 1 «Scotch-test» sur les lésions (cf. ci-après) avec du Scotch transparent. -Non réalisable sur les régions pileuses, ni sur les lésions inflammatoires ou suintantes ( prélever alors des squames avec une lame de scalpel, curette, ). - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 6 / 13
PEAU et PHANERES : Prélèvement BACTERIOLOGIQUE PEAU : 2 écouvillons avec milieu de transport, à passer sur toute la surface de la lésion. ONGLES : Pour la recherche de bactéries sur des ongles, procéder comme pour un prélèvement mycologique d ongles (cf. tableau ci-dessus) ; il faut prélever de l ongle et non pas réaliser le prélèvement à l écouvillon. - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 7 / 13
PLAIE, ESCARRE, PUS, Se conformer à la prescription médicale pour le moment et les conditions de prélèvement. Pour rappel : à réaliser avant antibiothérapie (noter sur l ordonnance, la planche d étiquettes, la prise éventuelle d antibiotiques). Mettre des gants à usage unique. Prélever 2 écouvillons avec milieu de transport, à passer sur toute leur surface au niveau de la zone prélevée (gratter en appuyant fermement). Cas particulier du pus profond (abcès fermé) : prélèvement à la seringue. - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 8 / 13
Prélèvement ORL (nez, gorge, oreille) - Prélèvement OCULAIRE Se conformer à la prescription médicale pour le moment et les conditions de prélèvement. Pour rappel : réalisé avant toute antibiothérapie locale ou générale (noter sur l ordonnance, la planche d étiquettes, la prise éventuelle d antibiotiques). Prélever 2 écouvillons stériles avec milieu de transport NEZ : -Recherche de SARM : écouvillonnage des deux narines (tiers inférieur) avec le même écouvillon (avec milieu de transport). -Diagnostic coqueluche par PCR : pour le matériel et les recommandations de prélèvement, se reporter aux indications du laboratoire BIOMNIS. GORGE : -Demander au patient d émettre le son «Â». -Abaisser la langue éventuellement pour dégager le pharynx et éviter tout contact salivaire. -Ecouvillonner les zones inflammatoires ou nécrotiques (amygdales ou, en leur absence, piliers du voile du palais et paroi postérieure du pharynx). -Cas particuliers: ulcération ou exsudat : prélever à ce niveau. suspicion diphtérie : prélever à la périphérie ou sous les fausses membranes. Recherche de Candida : prélever au niveau de la langue, du palais, de la face interne des joues. OREILLE : seuls des prélèvements au niveau du conduit auditif externe sont effectués par le laboratoire. OEIL : prélèvement conjonctival -Tapoter avec l écouvillon la conjonctive inférieure en bloquant les paupières supérieures et inférieures (ne pas souiller avec les cils, ne pas frotter). -Prélever les éventuelles secrétions et /ou pus conjonctival dans l angle interne de l œil. -Cas particuliers: Recherche Chlamydia trachomatis : pour le matériel et les recommandations de prélèvement, se reporter aux indications du laboratoire BIOMNIS. Recherche Demodex folliculorum (acarien responsable de blépharite = inflammation localisée au bord ciliaire des paupières): arracher 8 à 10 cils par côté à la pince à épiler, les déposer dans une boite de Pétri stérile. - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 9 / 13
SCOTCH TEST (œufs d oxyures) Intérêt : Ce test permet de mettre en évidence les œufs d Oxyures (vers intestinaux), très fréquents chez les enfants et très contagieux, entraînant des démangeaisons et troubles du sommeil. Préconisations pour le prélèvement : -Couper une bande de Scotch transparent de 5 cm environ. -Faire pencher le patient en avant. -Déplier les plis périanaux et appliquer le coté adhésif sur les plis de la marge anale, à la périphérie de l anus. Maintenir le Scotch en appuyant quelques secondes. -Retirer le Scotch et l étaler sur la lame support (bien appuyer pour que l adhérence soit parfaite et chasser le plus possible les bulles d air). -Renouveler l opération avec le second Scotch. -Identifier les 2 lames; placer les lames dans l étui. Acheminer le prélèvement au laboratoire de bactériologie dans les plus brefs délais. Remarque : le Scotch-test est également utilisé pour la recherche de Pytiriasis versicolor (dû à une levure : Malassezia furfur). - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 10 / 13
Recueil des urines pour ECBU par SONDAGE URINAIRE Recueil des urines pour ECBU chez le patient sondé à demeure : Précautions de base: -Ne jamais prélever dans le sac collecteur ou la pullulation microbienne est importante -Ne jamais rompre le caractère clos du système de drainage vésical en déconnectant la sonde du sac collecteur pour prélever les urines. Les sondes présentent un site de prélèvement sous forme d une pastille. Clamper sous le site de prélèvement. Attendre. Après désinfection du site de prélèvement, récupérer à la seringue stérile l urine fraîchement émise ; transvaser l urine dans un flacon stérile. Remarque : si l ECBU est demandé à l occasion d un changement de sonde, recueillir l urine à partir de la nouvelle sonde pour avoir un prélèvement plus représentatif des germes réellement présents dans la vessie et éviter de recueillir les germes qui ont adhéré à la paroi intérieure de la sonde. - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 11 / 13
4.3. Identification des échantillons Le préleveur identifie les échantillons (manuellement ou en apposant une étiquette) immédiatement après le prélèvement selon le mode opératoire C3MOETIQ «Etiquetage des échantillons biologiques». 5. Maîtrise des principaux risques liés à l activité Risques liés à l'activité Se tromper de patient Non respect de la conformité des conditions de prélèvement Ne plus savoir qui est habilité à réaliser tel ou tel prélèvement bactériologique Ne plus savoir quel est le matériel à utiliser, quelles sont les modalités de prélèvement pour tel ou tel prélèvement bactériologique Non conformité dans l élimination des déchets Erreur dans l identification des échantillons prélevés Mauvaise conservation des prélèvements Moyens de maîtrise Vérifier l identité du patient, y compris pour les personnes ne pouvant décliner leur identité, selon 4.1. de C2-PR01 «Prélèvements» Se conformer en premier à la prescription médicale pour le moment et les conditions de prélèvement. Sans indications, appliquer les conditions habituelles de prélèvement détaillées pour chaque prélèvement bactériologique dans le présent mode opératoire Se reporter au tableau d habilitation des différents types de prélèvements ( 2. de C2-PR01 «Prélèvements») Se référer au prélèvement bactériologique concerné dans le présent mode opératoire. Pour les analyses spécialisées, utiliser le matériel BIOMNIS et se reporter aux indications du Laboratoire BIOMNIS Respecter : les filières d élimination selon L2-PR02 «Elimination des déchets» + mesures hygiène et sécurité Identifier les échantillons immédiatement après le prélèvement selon le GBEA et C3-MOETIQ «Etiquetage des échantillons biologiques» Ecouvillons de transport systématiquement 6. Traçabilité et archivage Le préleveur est identifié sur la fiche de prélèvement et tracé le dossier du patient. Les planches d étiquettes suivent le prélèvement en technique puis sont détruites, prescriptions sont scannées sur le SIL. les 7. Maîtrise des principaux risques liés à l activité Chacun peut à la fin de la lecture évaluer sa compréhension du mode opératoire à l aide de cette grille. - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 12 / 13
ACR 01 Vérification des connaissances QCM : Vrai ou faux Ce questionnaire non exhaustif se veut avant tout pédagogique NOM : Prénom : Site : Votre compréhension de ACR 01 «PRELEVEMENTS BACTERIOLOGIQUES ET MYCOLOGIQUES Mode opératoire» VRAI FAUX 1 Pour un PV standard, il est recommandé de prélever 2 écouvillons au niveau du cul-desac vaginal postérieur + 1 écouvillon au niveau de l endocol pour rechercher le gonocoque 2 Pour la recherche des Mycoplasmes génitaux, il faut ensemencer rapidement un milieu de transport spécifique des Mycoplasmes avec l écouvillon utilisé pour le prélèvement 3 Pour une prescription «PU» chez l homme, et s il y a du pus au niveau du méat urétral, le recueil du pus suffit et il n est pas indispensable d effectuer un prélèvement ENDO-urétral 4 En cas de traitement antifongique local récent sur un ongle, il est conseillé d attendre 1 semaine avant d effectuer un prélèvement mycologique de l ongle 5 Pour un prélèvement mycologique d ongle, il est justifié de bien essuyer l ongle voire d éliminer la partie d ongle la plus externe avant d effectuer le prélèvement proprement dit 6 Une prescription «Bactério ongle» appelle un prélèvement au niveau de l ongle effectué à l écouvillon 7 En cas de suspicion de teigne, il faut prélever non seulement des cheveux mais aussi des squames et croûtes raclés sur le cuir chevelu 8 Pour une recherche de SARM par prélèvement nasal, il est justifié d utiliser 2 écouvillons avec milieu de transport 9 La recherche de Candida dans la cavité buccale s effectue par écouvillonnage au niveau : langue, face interne des joues, palais 10 11 Quatre cils prélevés à l œil gauche suffisent pour rechercher la présence de Demodex à l œil gauche Le «Scotch-test» pour recherche de Pytiriasis versicolor doit être effectué sur de la peau glabre Date : Signature : - Version ACR 01 Janvier 2013 Page 13 / 13