L OUTIL IDEAL POUR TOUTES LES DETECTIONS IMMUNOCHIMIQUES pour toutes les techniques immunodosages (EIA/ELISA) dot/ westernblot immunohistochimie immunocytochimie cytométrie en flux quel que soit le système de révélation chemiluminescence immunoenzymologie immunofluorescence immunoprécipitation immunoséparation FAITES VOTRE CHOIX DANS UNE LARGE GAMME D ANTICORPS des spécificités variées de nombreux marquages des qualités adaptées anti Ig humaines ou animales anti IgA, IgG, IgM ou IgGAM anti fragments Fc ou Fab fluorescents enzymatiques globulines anticorps immuno-purifiés fragments Fab et F(ab )2 SCHEMA DE PRODUCTION Les anticorps secondaires Abliance sont des anticorps polyclonaux, obtenus après hyperimmunisation d animaux (, ou ) contre des immunoglobulines humaines ou animales. Les immunsérums récoltés contiennent, en plus des anticorps recherchés, d autres anticorps non spécifiques et toutes sortes de molécules sériques. Globulines Après une succession de purifications non spécifiques (délipidation, précipitation au sulfate d ammonium et clarification), on obtient un produit dit fraction globuline, pouvant être directement conditionné pour une utilisation en immunodiffusion. Les anticorps sont ensuite purifiés par chromatographie d affinité, ce qui garantit une excellente spécificité. De plus, les anti de souris et de sont systématiquement adsorbés sur un gel de chromatographie greffé avec des IgA, G et M humaines et ne croisent donc pas avec les IgGAM humaines. Fragments Pour certaines applications (immunohisto/cytologie, cytométrie en flux) Abliance propose des fragments F(ab )2 et Fab obtenus par digestion enzymatique. Ces fragments privés de leur partie Fc, ne peuvent plus être fixés de manière non spécifique par certains récepteurs cellulaires. Plus petits que les anticorps entiers, les fragments pénètrent également mieux dans les cellules et les tissus. Conjugués Bien entendu, Abliance propose toutes sortes de conjugués : fractions globulines, anticorps et fragment Fab ou F(ab )2 peuvent être couplés à des fluorochromes (fluorescéine, rhodamine), à des enzymes (per,,, ) ou encore couplés à la. 1
fragments F(ab )2 fragments Fab anticorps purifiés fractions globulines Un anticorps bien adapté, c est un bon compromis entre : la spécificité (antigène reconnu) la (purifié, fragment ) le marquage les réactions croisées*** Non marqués Les anticorps s sont le plus souvent utilisés pour sensibiliser les plaques en ELISA (coating) ou lors de dosages par compétition. Ils peuvent être employés en immunoprécipitation ; il est alors préférable d utiliser des anticorps non purifiés (fractions globulines). Le couplage à la fluorescéine est optimisé afin d obtenir un bon signal tout en minimisant le bruit de fond. Le rapport molaire F/P (fluorochrome/protéine) est ajusté entre 3 et 7. La a l avantage d être facilement détectable à l œil en microscopie. Elle peut être utilisée pour la réalisation de doubles marquages en histochimie et cytochimie. La est sensible à l extinction. Maximum d absorption : 495nm Maximum d émission : 520nm Couleur : jaune vert Le couplage à la rhodamine est optimisé afin d obtenir un rapport F/P (fluorochrome/protéine) donnant un bon signal tout en minimisant le bruit de fond. La rhodamine a l avantage d être moins sensible à l extinction que la fluorescéine mais elle génère également des bruits de fond plus importants. Maximum d absorption : 543nm Maximum d émission : 570nm Couleur : rouge Les fractions globulines correspondent au premier niveau de purification des immunsérums. Elles sont obtenues après précipitation au sulfate d ammonium et dialyse. Les globulines ont l avantage de présenter une très grande avidité pour l antigène. L élimination d une grande part des protéines sériques confère aux globulines une bonne stabilité et permet la réduction du bruit de fond dans les techniques d immunoprécipitation en gel. L utilisation de fractions globulines n est pas recommandée dans des techniques plus sensibles telles que les détections immunoenzymatiques. Mancini : 1/40 à 1/200 Ouchterlöny : 1/5 à 1/10 IFI : 1/100 à 1/400 Les anticorps purifiés sont très spécifiques, donc indiqués pour une utilisation dans les techniques sensibles (ELISA, IHC, ICC, IB). Leurs qualités sont garanties par le respect d un protocole de purification très exigeant où se succèdent purifications non spécifiques et spécifiques (chromatographie d affinité). Le contrôle des réactions croisées entre espèces cibles est systématique. Ce phénomène est partiellement évité par une sélection rigoureuse des immunsérums. Le cas échéant l élimination totale des réactions croisées peut nécessiter un «épuisement» par chromatographie d affinité contre l antigène dont la reconnaissance n est pas souhaitée. coating : 10 à 50 mg/l IFI : 1/100 à 1/400 IHC : 1/10 à 1/100 C pour longue conservation * IFI : 1/100 à 1/400 Les Fab et F(ab )2 sont des fragments d immunoglobulines respectivement mono et bivalents, c est à dire comprenant un ou deux sites de fixation de l antigène. Ils sont préparés par digestion enzymatique (papaïne ou pepsine). Comme les autres anticorps Abliance, ils sont purifiés par chromatographie d affinité et sont donc particulièrement spécifiques. Les fragments Fab et F(ab )2 présentent certains avantages vis à vis des anticorps entiers pour les essais en IHC, ICC et en cytométrie de flux. D une part leur spécificité est accrue puisque qu ils ne peuvent plus être fixés de manière non spécifique, comme le sont les Ig entières, par leur partie Fc. D autre part leur utilisation accroît également la sensibilité des techniques. En effet leur petite taille améliore leur pénétration dans les tissus et les cellules et leur disponibilité pour les antigènes (ceci est particulièrement vrai pour les Fab). Enfin les Fab conjugués ont un rapport marqueur/site antigénique double par rapport aux anticorps (à l exception des conjugués fluorescents). IFI : 1/50 à 1/200 ICC/IHC : 1/10 à 1/100 Condit. : PBS, BSA 0,3%, NaN3 0,1% C. Aliquoter avant congélation. Produit adapté à la cytométrie de flux (sans glycérol) IFI : 1/50 à 1/200 ICC/IHC : 1/10 à 1/100 CMF : 1/10 à 1/100 dilutions d utilisation conseillées IFI : immunofluorescence indirecte ICC : immunocytochimie IHC : immunohistochimie CMF : cytométrie en flux IB : immunoblot 2
(per) bêta- Les marquages à la per ont l avantage d être sensibles et permanents. Ses substrats sont nombreux et variés : précipitants pour immunohistochimie ou IB (DAB, AEC, 4CN, TMB), solubles pour ELISA (TMB, OPD, ABTS), chimiluminescents (luminol). Les marquages à la per ont certains inconvénients : - La per est inactivée par l oxygène, l acide hypochlorique et l azide de sodium. Il est donc conseillé d utiliser une eau très pure. - La présence de per endogène dans certains tissus (macrophages, globules rouges, cellules de la moelle osseuse, plantes) peut augmenter le bruit de fond. La présente plusieurs avantages. Elle offre une très bonne sensibilité, n est pas inactivée par certains inhibiteurs comme l est la per et dispose également de substrats variés : précipitants (BCIP/NBT, NADP/NF), solubles (pnpp) ou luminescents (dioxetane). L activité endogène de cette enzyme est particulièrement forte dans la placenta et l intestin. La bêta- est un marqueur de bonne sensibilité et ne présente pas d activité endogène dans les cellules de mammifères. Ce marqueur est adapté à l ELISA et ne génère pas ou très peu de bruit de fond. Il est plus difficile à mettre en œuvre en immunohistochimie où il ne se justifie que lorsque l activité endogène des autres marqueurs disponibles pose un problème important. La est essentiellement destinée à des essais en immunohistochimie. Cette enzyme n a pas d activité endogène dans les tissus animaux mais sa sensibilité est moyenne. Différents substrats précipitants sont disponibles (Glucose/NTB, TNTB, INT). Les substrats pour produits solubles sont compliqués à mettre en œuvre car ils nécessitent une seconde enzyme. Le système avidine/ est un système d amplification du signal permettant de détecter des quantités d antigènes trop faibles pour être décelées par les systèmes directs enzymatiques ou fluorescents. Les anticorps biotinylés facilitent les changements de marqueur et permettent la mise en œuvre de marquages multiples. Les anticorps biotinylés ont une longue durée de conservation. De plus, par sa faible taille la affecte peu l activité biologique des protéines. Toutefois, la présence de endogène peut augmenter le bruit de fond. Condit. : TBS Glycérol 50% C pour longue conservation*, ** ICC/IHC : 1/20 à 1/100 Condit. : TBS, Glycérol 50%, BSA 1%, NaN3 0,1% ICC/IHC : 1/25 à 1/100 ELISA : 1/100 à 1/1000 ELISA : 1/100 à 1/1000 ICC/IHC : 1/10 à 1/100 IB : 1/400 ELISA : 1/1000 à 1/10000 ICC/IHC : 1/50 à 1/200 IB : 1/200 à 1/2000 Condit. : TBS Glycérol 50% C pour longue conservation*, ** ICC/IHC : 1/20 à 1/100 Condit. : TBS, Glycérol 50%, BSA 1%, NaN3 0,1% ICC/IHC : 1/25 à 1/100 ELISA : 1/1000 à 1/10000 ICC/IHC : 1/50 à 1/200 IB : 1/200 à 1/2000 Condit. : TBS Glycérol 50% C pour longue conservation*, ** ICC/IHC : 1/20 à 1/100 Condit. : TBS, Glycérol 50%, BSA 1%, NaN3 0,1% ICC/IHC : 1/25 à 1/100 ELISA : 1/1000 à 1/10000 ICC/IHC : 1/50 à 1/200 IB : 1/200 à 1/2000 * Les produits conditionnés en glycérol à 50% ne congèlent pas à 20 C, il n est pas nécessaire de les répartir en aliquotes. ** Ne pas répartir les conjugués per en flacons plastique (ex : eppendorf) pour éviter une perte d activité. *** Les réactions croisées peuvent être diminuées en diluant l anticorps primaire dans un tampon contenant du sérum normal de l espèce productrice de l anticorps secondaire. 3
IgA (alpha) IgG (Fab) IgG (gamma) IgGAM IgM (mu) Albumine BI 2016A BI 2016 (10mg/2ml) BI 1016 BI 4016 (2mg/1ml) BI 3016 (2mg/1ml) BI 2024A BI 2024 (10mg/2ml) BI 1024 BI 4024 (2mg/1ml) BI 3024 (2mg/1ml) BI 2018A BI 2018 (10mg/2ml) BI 1018 BI 4018 (2mg/1ml) BI 3018 (2mg/1ml) BI 2015A BI 2015 (10mg/2ml) BI 1015 BI 4015 (2mg/1ml) BI 3015 (2mg/1ml) BI 2014A BI 2014 (10mg/2ml) BI 1014 BI 4014 (2mg/1ml) BI 3014 (2mg/1ml) BI 2019A BI 2019 (10mg/2ml) BI 1019 BI 4019 (2mg/1ml) BI 3019 (2mg/1ml) BI 2025A BI 2025 (10mg/2ml) BI 1025 BI 4025 (2mg/1ml) BI 3025 (2mg/1ml) BI 2116 (2mg/2ml) BI 1116 BI 4116 BI 3116 BI 2124 (2mg/2ml) BI 1124 BI 4124 BI 3124 BI 2118 (2mg/2ml) BI 1118 BI 4118 BI 3118 BI 2115 BI 1115 BI 4115 BI 3115 BI 2114 BI 1114 BI 4114 BI 3114 BI 2119 (2mg/2ml) BI 1119 BI 4119 BI 3119 BI 2216 (2mg/2ml) BI 2224 (2mg/2ml) BI 2218 (2mg/2ml) BI 2215 BI 2214 BI 2219 (2mg/2ml) (per) BI 2416 (1ml) BI 4416 (1ml) BI 3416 (1ml) BI 2424 (1ml) BI 4424 (1ml) BI 3424 (1ml) BI 2418 (1ml) BI 4418 (1ml) BI 3418 (1ml) BI 2415 (1ml) BI 4415(1ml) BI 3415 (1ml) BI 2414 (1ml) BI 4414 (1ml) BI 3414 (1ml) BI 2419 (1ml) BI 4419 (1ml) BI 3419 (1ml) BI 2425 (1ml) BI 4425 (1ml) BI 3425 (1ml) BI 2516 (1ml) BI 4516 (1ml) BI 3516 (1ml) BI 2524 (1ml) BI 4524 (1ml) BI 3524 (1ml) BI 2518 (1ml) BI 4518 (1ml) BI 3518 (1ml) BI 2515 (1ml) BI 4515 (1ml) BI 3515 (1ml) BI 2514 (1ml) BI 4514 (1ml) BI 3514 (1ml) BI 2519 (1ml) BI 4519 (1ml) BI 3519 (1ml) BI 2525 (1ml) BI 4525 (1ml) BI 3525 (1ml) BI 2616 (1ml) BI 2624 (1ml) BI 2618 (1ml) BI 2615 (1ml) BI 2614 (1ml) BI 2619 (1ml) BI 2625 (1ml) BI 2716 (1ml) BI 2724 (1ml) BI 2718 (1ml) BI 2715 (1ml) BI 2714 (1ml) BI 2719 (1ml) BI 2725 (1ml) BI 2816 (1ml) BI 4816 (1ml) BI 3816 (1ml) BI 2824 (1ml) BI 4824 (1ml) BI 3824 (1ml) BI 2818 (1ml) BI 4818 (1ml) BI 3818 (1ml) BI 2815 (1ml) BI 4815 (1ml) BI 3815 (1ml) BI 2814 (1ml) BI 4814 (1ml) BI 3814 (1ml) BI 2819 (1ml) BI 4819 (1ml) BI 3819 (1ml) BI 2825 (1ml) BI 4825 (1ml) BI 3825 (1ml) anti humain 4
IgG (Fab) IgM (mu) BI 2028A BI 2013CA BI 2013C (10mg/2ml) BI 2013LA BI 2013L (10mg/2ml) BI 2013MA BI 2013M (10mg/2ml) BI 1013C BI 1013L BI 1013M BI 4013C (2mg/1ml) BI 4013L (2mg/1ml) BI 4013M (2mg/1ml) BI 3013C (2mg/1ml) BI 3013L (2mg/1ml) BI 3013M (2mg/1ml) BI 2029A BI 2007A BI 2007 (10mg/2ml) BI 1007 BI 4007 (2mg/1ml) BI 3007 (2mg/1ml) BI 2113C BI 2113L BI 2113M BI 1113C BI 1113L BI 1113M BI 4113C BI 4113L BI 4113M BI 3113C BI 3113L BI 3113M BI 2107 BI 1107 BI 4107 BI 3107 BI 2213C BI 2207 (per) BI 2413C (1ml) BI 2413L (1ml) BI 2413M (1ml) BI 4413C (1ml) BI 4413L (1ml) BI 4413M (1ml) BI 3413C (1ml) BI 3413L (1ml) BI 3413M (1ml) BI 2429 (1ml) BI 2407 (1ml) BI 4407 (1ml) BI 3407 (1ml) BI 2513C (1ml) BI 2513L (1ml) BI 2513M (1ml) BI 4513C (1ml) BI 4513L (1ml) BI 4513M (1ml) BI 3513C (1ml) BI 3513L (1ml) BI 3513M (1ml) BI 2507 (1ml) BI 4507 (1ml) BI 3507 (1ml) BI 2613C (1ml) BI 2613M (1ml) BI 2607 (1ml) Les anticorps anti IgG(H+L) de souris produits chez la et le et les anti IgG(H+L) de sont systématiquement adsorbés sur un gel de chromatographie greffé avec des immunoglobulines G, A et M humaines. Ils ne croisent donc pas avec les IgG, A et M humaines. BI 2713C (1ml) BI 2707 (1ml) BI 2813C (1ml) BI 2813L (1ml) BI 2813M (1ml) BI 4813C (1ml) BI 4813L (1ml) BI 4813M (1ml) BI 3813C (1ml) BI 3813L (1ml) BI 3813M (1ml) BI 2807 (1ml) BI 4807 (1ml) BI 3807 (1ml) anti souris anti 5
BI 2001A BI 2001 (10mg/2ml) BI 1001 BI 4001 (2mg/1ml) BI 3001 (2mg/1ml) BI 2002A BI 2002 (10mg/2ml) BI 1002 BI 4002 (2mg/1ml) BI 3002 (2mg/1ml) BI 2003A BI 2003 (10mg/2ml) BI 1003 BI 4003 (2mg/1ml) BI 3003 (2mg/1ml) BI 2004A BI 2004 (10mg/2ml) BI 1004 BI 4004 (2mg/1ml) BI 3004 (2mg/1ml) BI 2005A BI 2005 (10mg/2ml) BI 1005 BI 4005 (2mg/1ml) BI 3005 (2mg/1ml) BI 2008A BI 2008 (10mg/2ml) BI 1008 BI 4008 (2mg/1ml) BI 3008 (2mg/1ml) BI 2101 BI 1101 BI 4101 BI 3101 BI 2102 BI 1102 BI 4102 BI 3102 BI 2103 BI 1103 BI 4103 BI 3103 BI 2104 BI 1104 BI 4104 BI 3104 BI 2105 BI 1105 BI 4105 BI 3105 BI 2108 BI 1108 BI 4108 BI 3108 BI 2201 BI 2202 BI 2203 BI 2204 BI 2205 BI 2208 (per) BI 2401 (1ml) BI 4401 (1ml) BI 3401 (1ml) BI 2402 (1ml) BI 4402 (1ml) BI 3402 (1ml) BI 2403 (1ml) BI 4403 (1ml) BI 3403 (1ml) BI 2404 (1ml) BI 4404 (1ml) BI 3404 (1ml) BI 2405 (1ml) BI 4405 (1ml) BI 3405 (1ml) BI 2408 (1ml) BI 4408 (1ml) BI 3408 (1ml) BI 2501 (1ml) BI 4501 (1ml) BI 3501 (1ml) BI 2502 (1ml) BI 4502 (1ml) BI 3502 (1ml) BI 2503 (1ml) BI 4503 (1ml) BI 3503 (1ml) BI 2504 (1ml) BI 4504 (1ml) BI 3504 (1ml) BI 2505 (1ml) BI 4505 (1ml) BI 3505 (1ml) BI 2508 (1ml) BI 4508 (1ml) BI 3508 (1ml) BI 2601 (1ml) BI 2602 (1ml) BI 2603 (1ml) BI 2604 (1ml) BI 2605 (1ml) BI 2608 (1ml) BI 2701 (1ml) BI 2702 (1ml) BI 2703 (1ml) BI 2704 (1ml) BI 2705 (1ml) BI 2708 (1ml) BI 2801 (1ml) BI 4801 (1ml) BI 3801 (1ml) BI 2802 (1ml) BI 4802 (1ml) BI 3802 (1ml) BI 2803 (1ml) BI 4803 (1ml) BI 3803 (1ml) BI 2804 (1ml) BI 4804 (1ml) BI 3804 (1ml) BI 2805 (1ml) BI 4805 (1ml) BI 3805 (1ml) BI 2808 (1ml) BI 4808 (1ml) BI 3808 (1ml) anti boeuf anti cheval anti anti chien anti cobaye anti 6
BI 2009A BI 2009 (10mg/2ml) BI 1009 BI 4009 (2mg/1ml) BI 3009 (2mg/1ml) BI 2011A BI 2011 (10mg/2ml) BI 1011 BI 4011 (2mg/1ml) BI 3011 (2mg/1ml) BI 1006 BI 1012 BI 2109 BI 1109 BI 4109 BI 3109 BI 2111 BI 1111 BI 4111 BI 3111 BI 1106 BI 1112 BI 2209 BI 2211 (per) BI 2409 (1ml) BI 4409 (1ml) BI 3409 (1ml) BI 2411 (1ml) BI 4411 (1ml) BI 3411 (1ml) BI 2509 (1ml) BI 4509 (1ml) BI 3509 (1ml) BI 2511 (1ml) BI 4511 (1ml) BI 3511 (1ml) BI 2609 (1ml) BI 2611 (1ml) BI 2709 (1ml) BI 2711 (1ml) BI 2809 (1ml) BI 4809 (1ml) BI 3809 (1ml) BI 2811 (1ml) BI 4811 (1ml) BI 3811 (1ml) anti porc anti rat anti hamster anti singe 7