Dossier technique Unicel DXH 800 Ver 2.0

Dossier technique Unicel DXH 800 Ver 2.0

Table des matières 1 INTRODUCTION... 5 1.1 Les modules analytiques... 5 1.2 Le module DxH 800... 8 1.3 Extensions vers d autres systèmes... 10 2 DESCRIPTION DE L ANALYSEUR COULTER DXH 800...11 2.1 Type de matériel... 11 2.2 Les modes analytiques sont les suivants :... 11 2.3 Configurations... 11 2.4 Paramètres Numération/Formule... 14 2.5 Paramètres réticulocytes... 16 2.6 Paramètres Erythroblastes... 17 2.7 Quantification des granulocytes immatures... 17 2.8 Autres paramètres... 18 2.9 Cadence... 19 2.10 Support de chargement... 19 2.11 Traitement de l urgence... 19 2.12 Echantillon... 20 2.13 Volumes prélevés... 20 2.14 Identification... 20 2.15 Editions de résultats... 20 2.16 Exportation des fichiers... 20 2.17 Calibrage... 21 2.18 Contrôles... 21 2.19 Procédures quotidiennes... 22 2.20 Auto-diagnostic... 22 2.21 Informatique... 23 2.22 Fonctions principales du logiciel... 24 Marketing / Rev.D / Mai 2012 2/69

2.23 Alarmes et messages... 24 3 LES REACTIFS...26 3.1 Les réactifs Numération/Formule/Erythroblastes... 26 3.2 Les réactifs Réticulocytes... 26 3.3 L agent de nettoyage... 27 4 LES CONTROLES ET CONSOMMABLES...28 4.1 Contrôle de la numération et de la formule et des érythroblastes... 28 4.2 Contrôle des mesures physiques... 28 4.3 Contrôle des paramètres réticulocytaires... 29 4.4 Contrôle de la linéarité... 29 4.5 Contrôle des liquides biologiques... 29 4.6 Calibrant... 29 4.7 Consommables... 29 5 FONCTIONS DU LOGICIEL...30 5.1 Paramétrage... 30 5.2 Résultats et base de données... 35 5.3 Registres de traçablité... 37 5.4 Assurance qualité... 37 5.5 Configuration générale... 37 5.6 Aide en ligne... 38 5.7 Télétransmission... 38 6 ECHANTILLONNAGE...40 6.1 Transport des échantillons... 40 6.2 Module d aspiration de l échantillon MAE... 41 7 TECHNOLOGIES...42 7.1 Introduction... 42 7.2 L ACCUCOUNT... 42 Marketing / Rev.D / Mai 2012 3/69

7.3 Numérations et histogrammes des érythrocytes... 43 7.4 Numérations et histogrammes des plaquettes... 43 7.5 Numérations et histogrammes des leucocytes... 45 7.6 Méthode de numération des GB optiques... 46 7.7 Hémoglobine... 47 7.8 Formule : Analyse des sous populations leucocytaires... 47 7.9 Quantification des granulocytes immatures... 52 7.10 Numérations des Erythroblastes... 53 7.11 Réticulocytes... 54 8 SPECIFICATIONS DU DXH 800...57 8.1 Caractéristiques générales... 57 8.2 Réactifs et contrôles... 59 8.3 Codes à barres... 59 9 SPECIFICATIONS ANALYTIQUES...60 9.1 Répétabilité... 60 9.2 Exactitude... 61 9.3 Limites de linéarité... 64 9.4 Valeurs résiduelles... 64 9.5 Contamination... 64 9.6 Limites détection / Quantification... 65 9.7 Plages analytiques... 66 9.8 Performances quantification des granulocytes immatures... 67 9.9 Performances numération GB optiques... 68 9.10 Comparaison mode à mode... 69 10 PLATES-FORMES UNICEL DXH...69 10.1 Dimensions et poids... 69 Marketing / Rev.D / Mai 2012 4/69

1 INTRODUCTION Beckman Coulter, propose une gamme dédiée à l Analyse Cellulaire : La plateforme UniCel DxH 800. Son approche originale, autorise une organisation adaptée à chaque situation. En effet, elle offre une large capacité de connexion d analyseurs d hématologie ainsi que des extensions vers d autres modules analytiques, conçus selon le même principe architectural. 1.1 Les modules analytiques Selon les besoins et les modules, elle offre : - Une prise en compte au plus près de la charge de travail du laboratoire par une une capacité analytique appropriée. - Un étalement et une coloration des frottis pour la réalisation reflexe d une formule de contrôle microscope. - Le concept Hematoflow avec une gestion automatisée d une formule étendue par immunophénotypage. Exemple : gestion d une paillasse avec un automate 1200 ( tri pré et post analytique ) 3 modules, avec 1 étaleur/colorateur Exemple d ilot sang total : gestion d une paillasse avec 2X DXH un automate 1200 de tri des tubes et l Hematoflow avec la formule étendue 16 populations Marketing / Rev.D / Mai 2012 5/69

VS Archivage Formule étendue HematoFlow Automate 1200 Accepte les cassettes de DxH Hb1C Coagulation tri Archivage Marketing / Rev.D / Mai 2012 6/69

1.1.1 Le Module Etaleur/Colorateur : DxH SMS Voir Dossier Technique du DxH SMS. Ce module est conçu pour être installé à la suite d un ou plusieurs DxH 800 ou bien être complètement autonome par rapport à la plate-forme analytique. Cadence de travail : 150 Lames colorées à l heure Marketing / Rev.D / Mai 2012 7/69

1.2 Le module DxH 800 1.2.1 Descriptif Le module Numération Formule à la base de cet agencement, répond à un cahier des charges exigeant : - Temps d immobilisation divisé par 4 - Diminution du nombre de revues - Résultats des formules délivrés mêmes en situation interférentielle. - Nouveaux paramètres GR, GB, RET et Formule. - Prise en compte de fluides biologiques autre que le sang Marketing / Rev.D / Mai 2012 8/69

1.2.2 Technologies Prélèvement : Echantillonnage sécurisé. - Détection de fibrine - Système anti-bouchage - Mesures en triple et test de cohérence du bilan Formule : FCDM cyto-morphologie digitalisée. - 7 mesures différentes sur chaque cellule - Analyse jusqu à 50 000 éléments - Formules leucopéniques < 0,5 G/L - GB optiques Quantification des granulocytes immatures - Disponibles simultanément à l établissement de la formule - Aucun réactif supplémentaire - Gradient de maturation (Promyélocytes, myélocytes, métamyélocytes) Canal EPICS : Erythroblastes, Macro-plaquettes, Agrégats Plt, Interférences cellulaires. - Eryb par cytométrie en ligne - Macroplaquettes - Détection des agrégats - GB exacts en présence de ces éléments Numérations : Technologie Accucount - Pas de re-dilution (linéarités étendues) - Thrombocytopénies à partir de 5,0 G/L - Hb, VGM et constantes exactes même en présence d hyperleucocytoses - Liquides biologiques autres que le sang Numérations des GB optiques : - Méthode complémentaire à la méthode de référence Accucount - Paramètres supplémentaires obtenus à partir des canaux DIFF, ERB, RETIC Réticulocytes : - Profil complet incluant les indices de maturité. - Quantification des hématies non transparisées - Analyse sur 32 000 éléments Utilisation quotidienne Chargement des réactifs sans arrêt du système - Réservoirs tampon - Diluant 10 L : 2 ou 4 packs en ligne - Saisie par CB des lots/dates de péremption Prélèvement, volume mort ajustable - Prélèvement des tubes à la verticale - Gestion de la descente de la sonde - Possibilité de dédicacer des cassettes aux tubes pédiatriques Marketing / Rev.D / Mai 2012 9/69

Passage des CQ uniquement sur l un des deux modes - Deux postes de prélèvements : Routine et Urgence/Micro-tubes. Mais grâce a un unique circuit de prélèvement, un passage de CQ sur l un des deux modes suffit à la vérification analytique. Mises en route et au repos programmables - La programmation pour ces deux cycles s effectue en fonction de l heure et du jour de la semaine. 1.3 Extensions vers d autres systèmes Formule étendue et tests spécialisés La ligne DxH peut être complétée par un module de cytométrie qui apporte un complément diagnostique grâce aux tests spécialisés qu ils proposent, à savoir : - La formule étendue 16 populations. Le panel d anticorps monoclonaux CytoDiff marque sélectivement les sous populations leucocytaires. Cette fonctionnalité permet de réaliser en automatique une formule de contrôle à la suite de l automate d hématologie. - Les tests spécialisés : Le module de cytométrie permet aussi la réalisation d autres tests par immunophénotypage comme par exemple : les cellules souches, Hb F, HbA1c, T4/T8 etc Marketing / Rev.D / Mai 2012 10/69

2 Description de l analyseur Coulter DXH 800 2.1 Type de matériel Le Coulter DXH 800 est un automate d hématologie avec passeur d'échantillons intégré. Il délivre 37 paramètres concernant : La numération La formule Les réticulocytes Les érythroblastes 2.2 Les modes analytiques sont les suivants : Numération, formule, réticulocytes Numération, formule Numération Réticulocytes Numération, réticulocytes Plaquettes Globules blancs Globules blancs/ne# Globules blancs/hémoglobine/plaquettes Prédilué Ces profils de paramètres sont gérés patient par patient, selon un processus : «Mode Aléatoire», à partir de requêtes en provenance de l informatique centrale ou par sélection dans la liste de travail. Quand un test complémentaire est réalisé, les résultats sont automatiquement affectés au dossier patient par l intermédiaire de l identification. Le Coulter DXH 800 est une plate-forme d hématologie qui automatise : L hémogramme complet L analyse des réticulocytes La détermination des érythroblastes L étalement des frottis La coloration des lames 2.3 Configurations Le Coulter DXH 800 existe en plusieurs modules et se décline en plusieurs plates-formes : 2.3.1 Le Module Compact Il comprend l analyseur, sa station de gestion, une alimentation pneumatique et une imprimante laser. Marketing / Rev.D / Mai 2012 11/69

2.3.2 Le Module Alliance Il comprend une embase réactifs d encombrement minimum Marketing / Rev.D / Mai 2012 12/69

2.3.3 Les plates-formes UniCel DxH Marketing / Rev.D / Mai 2012 13/69

2.4 Paramètres Numération/Formule 2.4.1 Paramètres mesurés Erythrocytes Hémoglobine Volume moyen cellulaire Leucocytes (impédance) Leucocytes (optique) Leucocytes (optique) Leucocytes (optique) Lymphocytes % Monocytes % Neutrophiles % Eosinophiles % Basophiles % Plaquettes Volume moyen plaquettaire Granulocytes immatures % GR HB VMC GB/UWBC @WDOP (canal DIFF) @WNOP (canal ERB) @WROP (canal RETIC) LY MO NE EO BA PLT VMP @EGC% 2.4.2 Paramètres calculés Hématocrite HT Taux cellulaire moyen en hémoglobine TCMH Concentration cellulaire moyenne en hémoglobine CCMH Indice de distribution cellulaire IDC CV Variation de l indice de distribution cellulaire IDC SD Lymphocytes (nombre) LY# Monocytes (nombre) MO# Neutrophiles (nombre) NE# Eosinophiles (nombre) EO# Basophiles (nombre) BA# Thrombocrite @TCT Indice de distribution plaquettaire @IDP Facteur volumétrique des GR @Rsf Facteur dépistage des anémies microcytaires @Maf Hémoglobine de faible densité @LHD% Granulocytes immatures (nombre) @EGC 2.4.3 Données Positionnelles de Cytométrie Elles correspondent à un panel de paramètres supplémentaires par type cellulaire pour la formule, les réticulocytes, les érythroblastes. Marketing / Rev.D / Mai 2012 14/69

2.4.4 Graphiques Courbes de distribution volumétrique des érythrocytes. Courbes de distribution volumétrique des plaquettes. Courbes de distribution volumétrique des leucocytes. Représentation graphique bi-dimensionnelle des souspopulations leucocytaires. Représentation spatiale des sous-populations leucocytaires. Représentation multidimensionnelle des sous populations leucocytaires (stéréogramme) Marketing / Rev.D / Mai 2012 15/69

2.5 Paramètres réticulocytes L analyse des réticulocytes est effectuée à partir du tube primaire. Elle est traitée de manière isolée, au coup par coup, en série ou intégrée à posteriori dans un bilan. C est le cas des réticulocytes quantifiés ultérieurement par rapport à la détermination de la NF. A partir d un identificateur primaire identique, (étiquette du tube code à barres), les résultats réticulocytes sont directement affectés au dossier patient concerné. 2.5.1 Paramètres mesurés Réticulocytes en % Réticulocytes à forte diffraction en % Volume moyen de la population réticulocytaire Volume moyen des cellules sphérisées Hématies non transparisées % RETIC RFD VMR VMCS @UGC% 2.5.2 Paramètres calculés Réticulocytes en valeur absolue RETIC# Réticulocytes à forte diffraction en valeur absolue RFD# Indice de maturation des réticulocytes IMR Déviation standard de l Indice de distribution des réticulocytes IDCR-SD Coefficient de variation de l Indice de distribution des réticulocytes IDCR-CV Hématies non transparisées (nombre) @UGC 2.5.3 Graphiques Représentation graphique de la population réticulocytaire Représentation spatiale de la population réticulocytaire Représentation surface de la population réticulocytaire 2.5.4 Données Positionnelles de Cytométrie Panel de paramètres supplémentaires sur la population réticulocytaire et non réticulocytaire. Marketing / Rev.D / Mai 2012 16/69

2.6 Paramètres Erythroblastes La numération des érythroblastes est effectuée en même temps que la numération formule. Elle est réalisée en même temps que l hémogramme et ne nécessite aucun repassage ou réactif supplémentaire. 2.6.1 Paramètres mesurés Erythroblastes en % 2.6.2 Paramètres calculés Erythroblastes en valeur absolue ERB ERB# 2.6.3 Graphiques Représentation graphique de la population érythroblastes. Représentation spatiale de la population érythroblastes. Représentation surface de la population érythroblastes. 2.7 Quantification des granulocytes immatures Les Granulocytes immatures sont quantifiés à l établissement de la formule. Ils sont consultables dans l'écran recherche avec le paramètre EGC%. EGC% identifie le continuum de maturation : les promyélocytes, myélocytes et métamyélocytes 2.7.1 Paramètres mesurés Granulocytes % @EGC % 2.7.2 Paramètres calculés Granulocytes (nombre) @EGC (nombre) Marketing / Rev.D / Mai 2012 17/69

2.7.3 Graphiques (non affichés) Normal Méta % = 11 Myélo % = 10.25 Promyélo % = 3 2.8 Autres paramètres 2.8.1 Globules Blancs Correction des globules blancs en présence de populations non leucocytaires : agrégats plaquettaire, macro-plaquettes, Erythroblastes, etc. Affichage de la numération leucocytaire corrigée et non corrigée. Le résultat corrigé est automatiquement rendu. 2.8.2 VGM et HGB Les résultats Hgb vrais sont rendus en cas d interférence par une hyperleucytose >140 G/L. Le VGM vrai est rendu en cas d interférence par une hyperleucytose >140 G/L 2.8.3 Liquides Biologiques Mode spécifique dédié à l analyse des liquides biologiques de type céphalo-rachidien, séreux (pleural, péritonéal, péricardique) et synoviaux après un prétraitement par la hyalurodinase. Paramètres délivrés : Total cellules nucléées (TNC)/GB Globules rouges (GR) @BFM % et @BFM # (cellules mononuclées) @BFP % et @BFP # (Polynucléaires) Formule et courbes de distribution Marketing / Rev.D / Mai 2012 18/69

Histogramme cellules nuclées avec 47% cellules mononuclées et 53% de Polynucléaires (Liquide péritonéal ) RBC Histogramme GR Hémorragie (Liquide péritonéal ) 2.9 Cadence La cadence est mesurée suivant les concentrations cellulaires suivantes : GB=7,00 10x103/µL, GR=4,00 5x106/µL, PLT=250 400X103/µL >=100 échantillons/heure en mode numération >=100 échantillons/heure en mode numération/formule. >= 90 échantillons/heure en mode numération/formule /érythroblastes 2.10 Support de chargement Mode routine : Le compartiment de chargement contient 20 cassettes standards de 5 positions. L autonomie est de 100 tubes. Ce mode est dédié au traitement automatique des numérations, formules, érythroblastes et réticulocytes. Les cassettes acceptent tout type de tubes à bouchons perçables, ainsi que les tubes pédiatriques Mode Urgence/Micro-tubes : Ce mode est dédié aux analyses urgentes et au passage de micro-tubes. La sonde d aspiration est rincée intérieurement et extérieurement. Mode Pré-dilué : Les échantillons dilués sont pris en compte par le système qui corrige les résultats en fonction du rapport de dilution déclaré. 2.11 Traitement de l urgence Le traitement de l'urgence est possible à tout moment en mode automatique ou urgence en tube fermé ou ouvert. L utilisateur est averti par une notification si le tube urgent n est pas traité dans le temps imparti Marketing / Rev.D / Mai 2012 19/69

2.12 Echantillon Nature : Sang entier. Anticoagulant : EDTA Tri-potassique. Type de tubes à prélèvement (mode routine) : Tubes fermés à bouchons perçables. 2.13 Volumes prélevés Mode routine et urgence : 165 µl maximum. Mode prédilué : 50 µl 2.14 Identification Mode automatique : L identification positive est réalisée avant et pendant l aspiration : Lecture de l étiquette code à barres du tube Lecture de l étiquette de la cassette (numéro de cassette et position) Mode urgence : L identification positive est réalisée avant par lecture de l étiquette code à barres du tube. L identification de l échantillon peut aussi être entrée manuellement dans le gestionnaire de données. 2.15 Editions de résultats L édition numérique et graphique est gérée pour tout type d imprimantes compatibles Windows XP PRO, noir et blanc ou couleur (jet d encre, laser, etc.) L opérateur dispose de plusieurs format d impression préconfigurés ou totalement libres. Chaque format d impression offre une sélection de paramètres, de graphiques et de messages à imprimer. Le format d impression de chaque échantillon peut être piloté par le SIL. 2.16 Exportation des fichiers Les fichiers de contrôle qualité, les registres de traçabilité de suivi des réactifs, événements analyseurs, contrôle journalier sont exportables, les résultats des patients peuvent être sauvegardés sur support externe type clé USB, CD Rom. Lors de l exportation de ces données, l utilisateur est averti sur l état du transfert (Accumulation, en cours, terminé) Marketing / Rev.D / Mai 2012 20/69

2.17 Calibrage Aucun calibrage systématique n est requis. Le programme de calibrage est totalement automatique. Le produit de calibrage Coulter S-Cal est fourni avec un code barres bi-dimensionnel qui possède les informations suivantes : numéro de lot, valeurs cibles et date de péremption. Il suffit de lire le code barres avec la douchette pour entrer toutes ces valeurs. 2.18 Contrôles 2.18.1 Coulter 6C : Le kit de contrôle Numération/Formule/Erythroblastes est constitué de trois niveaux. Les informations suivantes : numéro de lot, valeurs cibles, limites de tolérances et date de péremption sont directement paramétrés dans le système par simple lecture du code barres deux dimensions. 2.18.2 Coulter Rétic-X : Le produit de contrôle Réticulocytes est constitué de trois niveaux. Les informations suivantes : numéro de lot, valeurs cibles, limites de tolérances et date de péremption sont directement paramétrés dans le système par simple lecture du code barres deux dimensions 2.18.3 Coulter Latron CP-X: Ce produit permet de contrôler les mesures physiques impliquées dans la reconnaissance cellulaire, et ceci à l'aide d'une suspension de particules calibrées. Les informations suivantes sur les valeurs cibles, le numéro de lot, limites de tolérances des signaux mesurés et date de péremption sont directement paramétrés dans le système par simple lecture du code barres deux dimensions 2.18.4 Coulter Lin X : Ce produit permet de contrôler la plage de linéarité de l équipement. Les informations sont paramétrées dans le système par simple lecture du code barres 2D Marketing / Rev.D / Mai 2012 21/69

2.19 Procédures quotidiennes 2.19.1 Mise en route Elle est entièrement automatique et programmable par l opérateur à l avance sur calendrier et réalise le rinçage de tous les composants fluidiques pour éliminer l agent de nettoyage. Ce cycle de démarrage inclut des tests électroniques, pneumatiques et les comptages résiduels. Les résultats de ce cycle sont mémorisés dans la station de gestion. Le registre correspondant conserve une trace de ces données pendant une période minimum de 30 jours. Ce fichier peut s exporter sur support externe. L opérateur paramètre le système pour arrêter automatiquement le cycle de mise en route si les réactifs ont dépassé la date de péremption. Le délai de mise en route est 2,4 minutes. 2.19.2 Mise au repos Elle est entièrement automatisée et programmable. Ce cycle met les circuits fluidiques sous agent de nettoyage. Afin de garantir l intégrité des circuits fluidiques, le temps minimum de présence de l agent de nettoyage est de 30 mn par jour. Le système est sécurisé de façon à ce que l opérateur ne puisse pas effectuer une analyse alors que l équipement est sous agent de nettoyage. Le logiciel initialise automatiquement un cycle de mise en route sur demande. 2.19.3 Maintenance Il n y a aucune maintenance opérateur de routine. 2.20 Auto-diagnostic 2.20.1 Contrôle instantané de la Qualité (IQM) Les processus électroniques sont constamment contrôlés par le programme, les anomalies sont détectées et corrigées en temps réel de façon à ce que l automate soit immobilisé le moins de temps possible. Des messages en clair apparaissent en cas d'anomalie et sont mémorisés dans des fichiers spécifiques, constituant ainsi un registre de maintenance. Marketing / Rev.D / Mai 2012 22/69

Il existe plusieurs niveaux de sévérité d un message - Message d information - Message d alerte : indicateur fond couleur jaune - Message d anomalie technique : indicateur couleur rouge 2.21 Informatique 2.21.1 Matériel : Le matériel est constitué d un micro ordinateur tour multi média Pentium CoreTM 2 Duo 2 GHz,2 GB RAM Disques dur : interne 250 GigaB Externe extractible 250 GigaB Ecran plat tactile, LCD 19 pouces Lecteur/Graveur CD / DVD +/- R/RW Lecteur de disquette : Sony Douchette et souris optique 2.21.2 Logiciels BIOS-AMIOBIOS Version 7.00 Système d exploitation : Microsoft Windows X PRO Aide en ligne Multimédia : hypertexte, son, vidéo 2.21.3 Capacité mémoire Procédure automatique de sauvegarde de la Base de Données des patients 40 000 dossiers patients numériques et graphiques 12000 données brutes d acquisition Num, Diff, Rétics, Erythroblastes 30 Fichiers contrôle qualité de 150 passages Fichiers pour l analyse l'analyse XB ou XM (analyse XB sur l ensemble des paramètres) Fichier des cycles de mise en route pour un minimum de trente jours Fichier du test de contamination Fichier du test de répétabilité Fichier du calibrage Fichiers de configuration Journaux de bord (registres d événements) exportables 2.21.4 Connexions La connexion avec le SIL est monodirectionnelle ou bidirectionnelle avec Host Query interrogation des profils à réaliser pour les patients Le transfert des données est contrôlé par handshake. La totalité des informations produites par le DXH 800 est transmise vers le SIL (données numériques, codes et alarmes, commentaires manuels ou automatisés ) Les graphiques sont transmis en fonction d un paramétrage opérateur. Les résultats des passages des contrôles sont transmis en fonction d un paramétrage opérateur. La connexion modem assure les fonctions de télétransmission. Marketing / Rev.D / Mai 2012 23/69

2.22 Fonctions principales du logiciel Gestion de la liste de travail (pré et post-assignation) Champs de démographie Systèmes de valeurs normales multiples (âge, sexe) Définition de valeurs de bornage (âge, sexe, service) Paramétrage d'impression Gestion de la base de données Auto-validation paramétrable Validation partielle des résultats Gestion de l historique Comparaison avec les antériorités (Delta check) Repasses et Reflexes automatiques Création de règles de décision et validation. Génération des messages d'interprétation Gestion des contrôles de qualité et règles Rilibaek associées Gestion des lots et des niveaux de réactifs Tenue automatique des journaux de bord Gestion de la connexion informatique. Gestion de l archivage des données sur support externe Données Programme Assurance Qualité Interlaboratoire directement exportables via internet Aide contextuelle et hypertexte Visualisation de toute la documentation : guide d utilisation, manuel technique etc, avec schémas, images et vidéos. Gestion de la télétransmission Logiciel d aide au Diagnostic technique Pilotage inter-module et connectivité 2.23 Alarmes et messages Différents types d alarmes et de messages sont générés par le Coulter DXH 800. 2.23.1 Les alarmes codées Elles sont visualisées sous forme de codes (texte et couleur) associés ou édités à la place des résultats. Elles regroupent : Les codes paramétrables. Ils avertissent si un résultat se situe : Hors des limites de référence (l opérateur définit les références en fonction du sexe, de l âge et du service). Le résultat hors bornes du paramètre est alors affecté des codes H ou L. Hors des limites dites d action (l opérateur définit ces limites en fonction de sa stratégie de revue, elles tiennent compte du sexe, de l âge et du service). Le résultat du paramètre est affiché sur fond jaune et affecté des codes ah ou al. Hors des limites dites critiques (l opérateur définit ces limites en fonction de sa stratégie de revue, elles tiennent compte du sexe, de l âge et du service). Le résultat du paramètre est affiché sur fond rouge et affecté des codes ch ou cl. Les codes non paramétrables Marketing / Rev.D / Mai 2012 24/69

Résultat modifié manuellement Résultat hors Delta check Aspiration partielle Echantillon non sanguin Résultat non calculé Résultat hors limite Résultat rejeté Autres codes En fonction des actions effectuées par l opérateur, des codes spécifiques sont affectés aux résultats : Résultat imprimé Résultat transmis au SIL Résultat modifié manuellement. Résultat auto-validé, validé manuellement, non validé 2.23.2 Les messages d interprétation Les messages d'interprétation signalent à l'opérateur la présence d'anomalies. Affichés et imprimés en clair, ils incluent : Les messages d'anomalies quantitatives Ils sont générés en fonction de bornages programmés par l'opérateur (ex : Neutropénie, lymphocytose). Les messages d anomalies qualitatives ou de suspicion Ils sont automatiquement induits grâce à des algorithmes de programme, ils signifient à l'opérateur une suspicion d'anomalie morphologique (ex : Lymphocytes atypiques). Les messages système Ils signalent des anomalies analytiques. 2.23.3 Les messages personnalisés Les messages personnalisés sont automatiquement affectés au champ commentaire du résultat. L opérateur crée les règles qui permettent de les générer, ainsi que leurs contenus. 2.23.4 Les alarmes techniques L analyseur assure un contrôle permanent de toutes les fonctions analytiques. En cas d anomalie de fonctionnement, des messages en clair sont affichés. Ceux-ci sont automatiquement mémorisés dans un journal de bord (registre de maintenance) pouvant être consulté à tout moment. 2.23.5 Les messages d utilisation Toutes les opérations effectuées par les opérateurs sont mémorisées dans des journaux de bord spécialisés par thème (mise en route, mise au repos, changement de réactifs etc.). Ils peuvent être consultés à tout moment. Marketing / Rev.D / Mai 2012 25/69

3 Les réactifs 3.1 Les réactifs Numération/Formule/Erythroblastes 3.1.1 Descriptif et rôle des réactifs Les réactifs utilisés sont des réactifs «éco compatibles». La formulation du système de réactifs décrits ci-dessous ne présente aucun risque chimique par rapport à l environnement. Le COULTER DxH Diluent Le COULTER DxH Diluent est une solution tampon isotonique, sans azide de sodium. Il permet de réaliser les dilutions pour les comptages et la numération des érythroblastes. Il sert également de liquide de gaine pour le cytomètre. Le COULTER DxH Cell Lyse La Cell Lyse DxH ne contient aucun ions cyanure ou ferricyanure. Elle est utilisée pour la numération des globules blancs et provoque la lyse des érythrocytes. L hémoglobine est convertie en un hémochromogène stable mesuré à 525 nm. Cette réaction est la méthode HemoChrom-S (HC-S). La DxH Cell Lyse est aussi l agent cytochimique qui est utilisé dans le canal EPICS. COULTER DxH Diff Pack - La lyse érythrocytaire La lyse érythrocytaire dépourvue d ions cyanure est employée dans la détermination des cinq sous populations leucocytaires de la formule. Elle détruit rapidement les érythrocytes sans altérer les leucocytes. - L agent leucostat L agent leucostat neutralise l'action de la lyse érythrocytaire et conserve les leucocytes dans un état proche de l'état physiologique. 3.1.2 Conditionnements COULTER DxH Diluent : 2 x Cubitainers de 10 L. COULTER DxH Cell Lyse : Flacon de 5 L. COULTER DxH Diff Pak : contient la lyse et l agent bloquant. 3.2 Les réactifs Réticulocytes 3.2.1 Descriptif et rôle des réactifs COULTER DxH Retic Pack Deux réactifs sont utilisés pour l analyse des réticulocytes en mode automatique : - Un premier réactif supra-vital colore et précipite l'arn des polyribosomes. - Un deuxième réactif transparise l'hémoglobine des érythrocytes, la rendant optiquement neutre. 3.2.2 Conditionnement Le DxH ReticPak contient le colorant et le transparisant. Marketing / Rev.D / Mai 2012 26/69

3.3 L agent de nettoyage 3.3.1 Descriptif et rôle COULTER DxH Cleaner Automatiquement utilisé lors de la mise au repos, il a pour fonction le maintien de l'intégrité des circuits fluidiques. 3.3.2 Conditionnement COULTER DxH Cleaner : Cubitainer de 10 L. Marketing / Rev.D / Mai 2012 27/69

4 Les Contrôles et consommables 4.1 Contrôle de la numération et de la formule et des érythroblastes 4.1.1 COULTER 6C Cell Control Le COULTER 6C Cell est un système de contrôle interne trois niveaux pour mesurer les performances de la numération, de la formule ainsi que des érythroblastes. Simultanément, le COULTER 6C vérifie en un seul passage les deux modes de travail, automatique et urgence. Le contrôle de la précision et de l'exactitude des paramètres hématologiques est réalisé grâce à un kit offrant trois niveaux de valeurs de sangs de contrôle : le COULTER 6C Cell Control. Selon son conditionnement 9 ou 12 tubes, le coffret est constitué de : - Trois ou quatre flacons de 6C Normal. - Trois ou quatre flacons de 6C Anormal I. - Trois ou quatre de 6C Anormal II. La stabilité, flacons fermés du contrôle 6C est de 30 jours. Le numéro de lot, les valeurs cibles, les limites de tolérance et date de péremption sont saisis directement par lecture du code barres deux dimensions. Aucune saisie manuelle n est nécessaire. Chaque tube de 6C est muni d'une étiquette code à barres. Les résultats de l'analyse sont directement affectés, sans intervention de l opérateur, au fichier de contrôle correspondant. Si la valeur observée est hors limites, l'opérateur en est immédiatement informé. L utilisateur peut suivre au plus près les performances analytiques de son automate avec l option Contrôle Qualité Etendu et analyser l imprécision, le biais ou l erreur totale. 4.2 Contrôle des mesures physiques 4.2.1 COULTER LATRON CP-X Control Le Coulter Latron CP-X est une suspension de particules calibrées, dédiée à la vérification simultanée de toutes les mesures physiques, à la base de la détermination de la formule, la quantification des érythroblastes et des réticulocytes. Le LATRON CP-X vérifie l alignement du laser, la cellule de mesure, le cytomètre de flux et tous les angles de diffusion lumineuse avec leurs détecteurs. L ensemble des données est géré par la station de gestion. Chaque tube Latron CP-X est muni d'une étiquette code à barres. Les résultats de l'analyse sont directement affectés, sans intervention de l opérateur, au fichier de contrôle correspondant. Marketing / Rev.D / Mai 2012 28/69

4.3 Contrôle des paramètres réticulocytaires 4.3.1 COULTER Retic-X Cell Control La vérification des paramètres réticulocytaires est réalisée en utilisant un sang de contrôle, le Coulter Rétic-X Cell. Le coffret est composé de : - Quatre flacons de contrôle Rétic-X Cell normal - Quatre flacons de contrôle Rétic-X Cell anormal bas - Quatre flacons de contrôle Rétic-X Cell anormal haut Le numéro de lot, les valeurs cibles, les limites de tolérance et date de péremption sont saisis directement par lecture du code barres deux dimensions. Aucune saisie manuelle n est nécessaire. Chaque tube de Retics-X Cell est muni d'une étiquette codes à barres. Les résultats de l'analyse sont ainsi directement affectés, sans que l opérateur intervienne, au fichier de contrôle correspondant. Si la valeur observée est hors limites, l'opérateur en est immédiatement informé. L ensemble des données est géré par la station de gestion. 4.4 Contrôle de la linéarité 4.4.1 COULTER Lin-X Linearity Control Le COULTER Lin-X Linearity est recommandé pour la vérification des plages analytiques et la linéarité des paramètres GB, GR, HGB, PLT. 4.5 Contrôle des liquides biologiques 4.5.1 COULTER Body Fluid Control Le COULTER Body Fluid est recommandé pour le suivi des performances du module liquide biologique des paramères GR et Nombre Total cellules Nucléées. Le COULTER Body Fluid peut être utilisé pour vérifier les plages analytiques et la linéarité du panel de paramètres GR et NTN. 4.6 Calibrant 4.6.1 COULTER S-CAL Calibrator Le COULTER S-Cal calibrant est recommandé pour déterminer les facteurs d ajustement qui vont assurer l exactitude des paramètres mesurés. 4.7 Consommables Aucun consommable n est nécessaire si ce n est le papier imprimante et les cartouches d encre. Marketing / Rev.D / Mai 2012 29/69

5 Fonctions du logiciel 5.1 Paramétrage La fonction de paramétrage donne accès à différents modules qui permettent de configurer la station de gestion en fonction des souhaits du laboratoire. L ensemble des données saisies pour le paramétrage peut être sauvegardé sur un support externe. 5.1.1 Assurance Qualité La fonction Assurance Qualité, qui donne accès aux paramétrages indiqués ci-dessous, a été conçue pour offrir une traçabilité complète de la gestion des différents réactifs et produits de contrôle. Suivi des réactifs. Lorsqu un réactif est épuisé, l opérateur en est averti pour qu il effectue son remplacement. Le lecteur codes barres manuel permet de mettre à jour automatiquement les informations concernant les numéros de lots, les dates de péremption. Il suffit simplement de scanner le code barres du cubitainer Ceci permet une traçabilité complète de la gestion des réactifs de l automate. La saisie des valeurs de référence des échantillons de contrôle. Le processus est totalement automatisé grâce à la douchette lecteur codes barres 2D qui permet d une simple lecture du code barre bi dimensionnel de la fiche technique du lot d entrer le numéro de lot, la date de péremption toutes les valeurs cibles et limites de tolérance. - COULTER 6C Cell Control - COULTER LATRON CP-X Control - COULTER Retic-X Cell Control - COULTER Body Fluid Control La saisie des valeurs de référence et le paramétrage des séries des analyses XB/XM. Le XM est une moyenne mobile, pondérée exponentiellement. Elle est mise à jour à chaque acquisition de nouveaux échantillons en lui incorporant une pondération des dernières valeurs mesurées. La participation des points les plus anciens s éteint peu à peu remplacée par les plus récents. Le logiciel offre la possibilité d adapter la taille de la série (2 à 1000 passages) ainsi que les limites de tolérance. Marketing / Rev.D / Mai 2012 30/69

Menu Répétabilité Le DxH 800 met à la disposition des opérateurs un outil conçu pour gérer automatiquement un test de répétabilité complet. Les analyses statistiques sont traitées sans aucune intervention. Contamination Le DxH 800 met à la disposition des opérateurs un outil conçu pour gérer automatiquement un test de contamination complet. Les analyses statistiques sont traitées sans aucune intervention. Calibration NUM Le DxH 800 met à la disposition des opérateurs un outil conçu pour gérer automatiquement un test de calibration. Le calcul et l intégration des facteurs de calibration sont réalisés sans aucune intervention. 5.1.2 Les actions de paramétrage du système Sauvegarde et/ou Restauration automatique de la base de données sur support externe Purge automatique de la Base de Données Configuration imprimante Configuration Date et Heure Configuration lecteur codes barres Configuration alarme sonore Mode Etudes, ce mode analyse les échantillons sans demandes pré-assignées avec la possibilité de repasser plusieurs fois la même identification Impression /Sauvegarde de la configuration du système Définition de l identificateur primaire (CB tube ou position tube) Activer ou désactiver des tests. Ce menu désactive de façon temporaire ou permanente certaines analyses (DIFF, ERB, RETIC) Paramétrage du numéro de série automate (Set Instrument Name) Désactivation d un instrument Configuration du transport Ce menu est activé par défaut pour le transport automatique des tubes avec les cassettes et l utilisation du mode Urgence. Il est possible de désactiver soit le mode routine, soit le mode urgence Réitérer aspiration Ce menu permet en cas d aspiration partielle ou d instabilité lors de l aspiration de reprélever une seconde fois dans le tube 5.1.3 Télétransmission (Remote Management) Principe Une connexion est établie entre la station de gestion distante (laboratoire) et le serveur (siège) via une ligne téléphonique standard. L'interface et le logiciel (PC Anywhere) sont fournis en standard avec toutes les stations pour permettre la prise de contrôle de la station distante (RCS : Remote Control System). Ainsi, en temps réel, l'opérateur effectue toutes les opérations qu'il souhaite, comme s'il se trouvait dans le site distant. Il est possible de transmettre des messages en clair dans une fenêtre dédiée pour dialoguer avec l'opérateur du site distant. Protocole Marketing / Rev.D / Mai 2012 31/69

Un contact téléphonique s'effectue entre l'opérateur serveur et l'opérateur laboratoire pour que ce dernier autorise la connexion L'opérateur laboratoire autorise la connexion en cliquant sur l'icône de validation du processus RCS. L'opérateur serveur se connecte via le logiciel à la station distante et peut alors la piloter. A l'issue des diverses actions, l'opérateur serveur se déconnecte. L'opérateur laboratoire ferme la connexion et réinitialise l'informatique (shut down and restart). 5.1.4 Mot de passe et niveau d accés Pour chaque utilisateur, il est possible de définir un mot de passe et un niveau d'accès : - Niveau responsable du laboratoire. - Niveau utilisateur confirmé. - Niveau utilisateur. Ces niveaux d'accès permettent de définir quelles sont les fonctions utilisables pour un opérateur donné. Le niveau responsable de laboratoire donne accès à toutes les fonctions du logiciel. Le niveau utilisateur ne donne accès qu'au passage des échantillons et à l'exploitation de l'assurance qualité. Ceci présente les avantages suivants : - Traçabilité concernant l utilisation de l automate et du logiciel grâce aux mots de passe. - Protection de la configuration qui ne peut être définie ou modifiée que par les opérateurs de niveau responsable du laboratoire. - Simplicité d'utilisation pour des opérateurs occasionnels qui n ont pas accès à toutes les fonctions. De plus, ceci évite tout risque de modification de la configuration. - On peut activer une déconnexion automatique de la session lorsque ce code opérateur n est pas utilisé au-delà d une certaine durée. 5.1.5 Personnalisation Ce module permet de définir les éléments de configuration en rapport avec les résultats et de paramétrer tous les critères d aide à la validation. Il n est accessible qu à des opérateurs autorisés. Choix des paramètres affichés L opérateur définit les paramètres qui sont affichés à l écran en routine ainsi que les données positionnelles des populations cellulaires CPD. Choix des unités L opérateur sélectionne le format des unités qui est utilisé pour l affichage et l impression des résultats. Bornages numériques multi critères Afin d offrir toute la flexibilité nécessaire, le système de bornage est organisé en groupes, et ceci sans aucune limitation. Marketing / Rev.D / Mai 2012 32/69

Chaque groupe est défini par : - Un intitulé, - Une tranche d âge, - Un service ou un médecin prescripteur. Pour chaque groupe sont définis cinq tableaux de paramétrages : Les limites de référence pour le sexe masculin. Un code spécifique est affecté au résultat hors des limites ; il est affiché, imprimé et transmis au SIL, Les limites de référence pour le sexe féminin. Un code spécifique est affecté au résultat hors des limites ; il est affiché, imprimé et transmis au SIL, Les limites dites d action en rapport avec la stratégie de validation du laboratoire. Un code spécifique est affecté au résultat hors des limites ; il est affiché, imprimé et transmis au SIL, Les limites dites critiques pour souligner une anormalité très importante. Un code spécifique est affecté au résultat hors des limites ; il est affiché, imprimé et transmis au SIL, La sélection des messages en clair (définitifs) à afficher et imprimer et transmettre au SIL. Au niveau de chacun des tableaux, il est possible d orienter le résultat vers une liste de revue si celui-ci est en dehors des limites et/ou affecté des messages en clair sélectionnés. Création de règles de décision L opérateur peut créer ses propres règles qui permettent d effectuer des comparaisons (>, <, =) et d utiliser des opérateurs logiques (et, ou) ainsi que des conditions négatives (n est pas égal à). Ces fonctions sont actives tant sur les résultats numériques que sur le système d alarmes et permettent de standardiser la validation de manière spécifique pour chaque laboratoire. Ces règles sont utilisées : - Pour générer des messages ou des actions prédéfinis par l opérateur dans une bibliothèque. Les messages sont affichés, imprimés et transmis au SIL. - Pour générer des cycles type «Repassage», «Test Reflex» ou «Frottis» - Pour envoyer le résultat dans une liste de revue ou une liste réflexe manager (dans un contexte d autovalidation). Les règles de décision portent sur les critères suivants : Résultat Test Panels de tests Codes et alarmes Delta Check Messages de suspicion Messages Système Messages Définitifs Alertes d Exceptions Information Patient ( Patient ID ) Age Patient Sexe Type de populations Stabilité échantillon Prescripteur Service Diagnostic Priorité Marketing / Rev.D / Mai 2012 33/69

ID échantillon Des règles de décision pré définies et basées sur les données cytométriques des populations (CPD) constituent des critères d orientation pré diagnostique (EX : NE hypogranularité et suspicion de SMD basé sur le paramètre Diffraction moyen NE) Configuration du Delta Check Le Delta Check peut être configuré pour chaque paramètre pour la durée qui sépare les deux analyses et la valeur de l écart en % et/ou valeur absolue. Le résultat hors des limites définies, affecté d un message spécifique, peut être envoyé dans une liste de revue ou une liste delta check. Choix des données à imprimer Outre la sélection des paramètres à imprimer, l opérateur définit également les champs qui doivent être présents sur le compte-rendu (démographie, prescripteur, service, graphiques etc.). Certains comptes-rendus préconfigurés peuvent être mémorisés ; d autres sont prédéfinis et trois sont totalement libres. Règles d acceptation L opérateur peut sélectionner en fonction de l organisation de sa routine et de la validation de ces résultats de : - Bloquer tous les résultats en liste de revue de façon à les revoir individuellement et manuellement - Accepter tous les résultats de façon à ce qu ils soient tous transmis au SIL automatiquement - Bloquer les résultats en liste de revue suivant les règles de décision (Autovalidation : les résultats anormaux sont bloqués en liste de revue et les normaux sont filtrés en liste d acceptation). 5.1.6 Diagnostic Le menu d aide au Diagnostic permet en cas d anomalie technique de vérifier et réaliser certains cycles techniques sur le module de transport, le module d analyse, le module tension et température les modules Num et Cyto morphologie digitalisée. 5.1.7 Services et prescripteurs L opérateur crée les listes correspondant aux différents services et prescripteurs. Elles peuvent être aisément enrichies, modifiées et éditées. La mise à jour est également totalement automatisée à partir des requêtes provenant du SIL. 5.1.8 En-tête du laboratoire Plusieurs champs peuvent être documentés pour créer un en-tête personnalisé au laboratoire. Celui-ci est édité sur le compte-rendu. 5.1.9 Choix des paramètres Une fenêtre liste les paramètres délivrés, la coche dans la case correspondante active le paramètre. Marketing / Rev.D / Mai 2012 34/69

5.2 Résultats et base de données 5.2.1 Résultats patients Chaque résultat se compose des informations suivantes : Un ensemble de champs correspondant à la démographie et à l identification. Les résultats numériques regroupés par lignées. Toute valeur hors d un des systèmes de limites définis par l opérateur est clairement indiquée. Les éventuels messages correspondant à des alarmes qualitatives et quantitatives. Les graphiques de toutes les lignées cellulaires analysées. Le résultat antérieur (delta check) ou repassé Les actions et commentaires générés automatiquement par les règles ou ajoutés manuellement. L opérateur a possibilité d accepter, de rejeter le résultat ou de consulter les détails de l analyse. L onglet RUO permet la consultation de paramètres supplémentaires de recherche (@) : les granulocytes immatures (@EGC%) ou les GB optiques (@WNOP) Afin de favoriser une revue rapide et fiable, permettant d'un coup d œil de savoir si le résultat est normal ou non, le fond du champ sur lequel s'affiche le paramètre change de couleur, et les messages en clair sont regroupés dans une zone dédiée. Les messages importants de suspicion sont visualisés en rouge. Les indicateurs sont gris, jaune ou rouge. La couleur est liée au fait que l'équipement est opérationnel ou requiert une intervention opérateur. Cette dernière est précisée en clair. Dans le menu «Etat du système», des voyants traduisent l état des communications entre l analyseur et la station de gestion d une part, la station de gestion et le SIL d autre part. Des icônes sont présentes dans les bandeaux. Chacune d'elles donne accès à des fonctions spécifiques symbolisées par un dessin. Ce type de représentation permet une utilisation simple et conviviale du logiciel. 5.2.2 Liste de travail (Worklist) et base de données La liste de travail/base de données est structurée de façon à permettre une exploitation facile et rapide des informations en mémoire. Marketing / Rev.D / Mai 2012 35/69

Listes La liste de travail comporte cinq onglets principaux pour consulter les résultats : Attendus (Pending) Ensemble des analyses à réaliser, en totalité ou par bilan. Ces listes de travail sont générées automatiquement par l informatique du laboratoire ou saisies au clavier. Non analysés (Not Processed) Ensemble des analyses rejetées pour des identifications code barres non lues, des aspirations partielles. A revoir (Review) Ensemble des résultats à revoir (liste de revue). Les critères de revue sont définis par l'opérateur et tiennent compte tant des données qualitatives que quantitatives ou du Delta check. Ensemble des résultats répondant aux règles définies par l'opérateur (liste réflexe manager. Acceptés (Released) Ensemble des résultats acceptés par l opérateur qui sont directement transmissibles à l informatique centrale. Personnalisée (Custom) Ensemble de tous les résultats en totalité, regroupés par bilans, revus ou acceptés L opérateur peut effectuer des tris multiples et des requêtes suivant de nombreux critères (résultat tests, messages, qualitatifs ou quantitatifs, ID patient, date et heure analyse etc ) Actions sur les résultats Les résultats présents dans la base peuvent être : - Triés en fonction de critères opérateurs - Imprimés (un code spécifique assure la traçabilité) - Modifiés (un code spécifique assure la traçabilité) - Transmis à l informatique du laboratoire (un code spécifique assure la traçabilité) - Transmis par Fax (un code spécifique assure la traçabilité) - Archivés sur un support externe (un code spécifique assure la traçabilité) - Affectés de commentaires définis par l opérateur - Effacés - Protégés de tout effacement automatique quand le nombre maximal d échantillons mémorisables est atteint Ces actions portent sur un échantillon donné ou un groupe d échantillons sélectionnés. Historique Si le laboratoire utilise un système d identification patient constant, l ensemble des différents résultats sont affichés par date sous forme d un tableau. Repasse Si le laboratoire utilise la fonction de repasse automatique ou manuelle, les résultats des deux passages (Run 1 ou Run 2) sont affichés. Représentation dans l espace - Une fonction spécifique permet de représenter dans l espace tridimensionnel les sous populations leucocytaires, les réticulocytes et les érythroblastes. - L opérateur visualise cette représentation spatiale sur 360, soit par rotation automatique, soit à l aide d une commande ponctuelle. - Il peut aussi afficher les stéréogrammes ce qui donne une information supplémentaire sur la densité cellulaire et la séparation des populations normales ou anormales. Marketing / Rev.D / Mai 2012 36/69

- L opérateur a aussi accès à toutes les données d acquisition des signaux, nombres d événements comptés, débit de comptage. 5.3 Registres de traçablité Ces journaux assurent une traçabilité complète des événements (fonctionnement de l automate, réactifs, contrôles et actions opérateur) qui se déroulent au niveau de l utilisation de l automate. Chaque journal est spécialisé sur un thème : les réactifs, les contrôles, les mises en route, etc. Ils peuvent être imprimés ou archivés sur un support informatique externe. L opérateur peut imprimer en fin de mois le compte rendu historique (sous forme détaillée ou résumée) des vérifications quotidiennes sous format tableau. Un journal est constitué d une liste d événements comprenant les informations suivantes : La date et l heure de l événement. Le message en clair qui décrit l événement. Le code opérateur. Pour chaque événement, l opérateur peut ajouter un commentaire. Ce dernier sera automatiquement affecté de la date et heure de saisie ainsi que du code opérateur. 5.4 Assurance qualité Ce module permet d'accéder aux informations suivantes : Les résultats des mises en route quotidiennes et des auto-tests. Les résultats des passages des produits de contrôles. Ils sont fournis sous forme de tableaux et accompagnés des statistiques nécessaires. Des représentations graphiques visualisent les résultats cumulés pour chaque paramètre. Les règles étendues (de type Rili-bak) qui permettent d alerter l opérateur sur d éventuelles erreurs aléatoires (imprécison) erreurs sytématiques (Biais) et erreurs totales (inexactitude). Les résultats XB et XM sous forme de tableaux et de représentations graphiques. Les résultats des calibrages, de tests de répétabilité, de contamination. Le Programme d Assurance Qualité Interlaboratoire (IQAP) Les résultats des contrôles qualités sont directement exportables via Internet dans le site Beckman Coulter pour une gestion plus rapide des données 5.5 Configuration générale La configuration générale permet à l opérateur de définir certaines modalités de fonctionnement : 5.5.1 Mode d impression L impression se définit selon les critères suivants : Impression de tous les résultats Aucune impression Impression des résultats sans alarmes Impression des résultats affectés d une alarme Impression des résultats affectés d une alarme spécifique Impression des résultats non affectés d une alarme spécifique Marketing / Rev.D / Mai 2012 37/69

5.5.2 Mode de transmission au système informatique du laboratoire. Toutes les informations inhérentes à un résultat sont transmises au SIL (données numérique, alarmes et massages, commentaires, etc.) Les choix de transfert sont similaires à ceux définis ci-dessus pour l impression. Les transmissions peuvent être effectuées en temps réel ou en temps différés (pour un résultat, tous les résultats ou un groupe de résultats triés selon des critères opérateurs). Les résultats des produits de contrôle peuvent être transmis à l informatique. Les graphiques peuvent être transmis à l informatique. 5.5.3 Assurance qualité. Afin de toujours garantir la qualité des résultats, le système peut être configuré pour s arrêter automatiquement si : - les résultats d un produit de contrôle sont hors des tolérances. - les résultats de l analyse XB/XM sont hors des tolérances. 5.6 Aide en ligne Le système d aide est particulièrement développé pour assister efficacement l opérateur : Aide contextuelle. Aide en ligne. Hypertexte. Multimédia. A ces différentes fonctions s ajoute un module de formation à l utilisation du DXH 800. Le transfert de connaissances au sein du laboratoire est ainsi extrêmement facilité. 5.7 Télétransmission 5.7.1 Sécurité confidentialité Le site distant doit autoriser la connexion par un acte volontaire sur la station de gestion. Les données concernant la démographie ne sont pas visibles. 5.7.2 Aspect pratique Ce potentiel particulièrement puissant est offert en version standard à tous les utilisateurs. Le coût de communication est nul pour le laboratoire. Le laboratoire doit mettre à disposition une prise téléphonique standard (analogique) pendant le temps de connexion. 5.7.3 Applications liées à la télétransmission Deux applications découlent du processus de télétransmission : la téléassistance et la télémaintenance. 5.7.4 Téléassistance Cette application permet en temps réel de fournir les aides suivantes : Aide à l interprétation des données et des graphes, Aide à l utilisation, Aide au paramétrage, à la configuration. La téléassistance assure un confort optimum des opérateurs et offre ainsi un gain de temps en améliorant le qualitatif du laboratoire. Marketing / Rev.D / Mai 2012 38/69

5.7.5 Télémaintenance Cette application permet en temps réel d effectuer un suivi rigoureux des équipements. L opérateur du siège peut : Accéder aux données techniques brutes Accéder à toutes les données (XB, contrôles, résultats...) Accéder aux registres d'événements Accéder aux configurations La télémaintenance permet d établir des diagnostics précis et d optimiser les interventions Marketing / Rev.D / Mai 2012 39/69

6 Echantillonnage 6.1 Transport des échantillons 6.1.1 Module de transport des échantillons (MTE) Les modules de transport de plusieurs unités DXH 800 peuvent s interconnecter les uns aux autres à l intérieur d une Plate-forme d automation. Les échantillons sont transportés d un analyseur à un autre ou à l intérieur d une seule unité sans aucune intervention de l opérateur. Le MTE utilise un système breveté innovant de transport des cassettes par déplacement magnétique. Zone de chargement Le mode routine du DXH 800 analyse les échantillons en totale autonomie grâce à son passeur intégré. Les tubes standards 7/5 ml et les tubes pédiatriques sont pris en compte. La capacité de stockage de la zone d entrée est de 20 cassettes. Mode routine L utilisateur positionne les tubes échantillons dans les cassettes normalisées, 5 positions. Il suffit de les déposer dans le compartiment de chargement du Module de Transport des Echantillons. L automate démarre sans autre intervention. Les cassettes sont transportées par déplacement magnétique. Les cassettes acceptent tous les types de tube. Certaines d entre elles peuvent être dédicacées aux échantillons pédiatriques. Agitation et lecture CAB Les échantillons sont homogénéisés par 11 basculements. Les tubes sont ré-agités par 4 basculements entre les aspirations. Lors du prélèvement de l aliquote, le lecteur 2D lit l étiquette du tube et celle de la cassette. Ainsi, chaque résultat est affecté, en plus de son numéro d identification, du numéro de la cassette et de sa position dans celle-ci. Zone de déchargement Les cassettes sont transférées après analyse dans le compartiment de sortie d une autonomie de 20 cassettes Mode Urgence/Micro-tube L activation du mode urgence est réalisée par simple clic sur l icône de la station de travail ; la navette recevant le tube est alors avancée. L identification du tube est réalisée soit par la lecture de l identification code à barres, soit par la saisie du numéro au clavier. L opérateur introduit le tube dans la navette. Cette dernière se rétracte pour réaliser l aspiration de l échantillon. A la suite de ce cycle, elle est à nouveau avancée pour que l opérateur retire le tube analysé. La navette possède deux positions et accepte une variété importante de tubes. La position de gauche accepte des tubes fermés de 12 à 16 mm de diamètre. La position de droite des tubes ouverts de 7 à 16 mm de diamètre. Marketing / Rev.D / Mai 2012 40/69

6.2 Module d aspiration de l échantillon MAE Le prélèvement de l échantillon de sang total ou de liquide biologique est réalisé par une seule et même sonde pour les tubes en routine ou en urgence. Ce circuit unique d échantillonnage ne nécessite aucune calibration supplémentaire ou corrélation de mode à mode. L identification et la vérification de l intégrité du volume aspiré sont assurées avant le transfert et la distribution dans le module d analyse. La partie aliquote est aspirée à travers un circuit qui intègre une vanne à segmentation (nouveau brevet) et plusieurs détecteurs de sang. L échantillon est segmenté puis distribué dans les différentes chambres de mélange pour réaliser la formule, les érythroblastes, les réticulocytes. 6.2.1 Sonde de prélèvement Elle est conçue pour percer les bouchons, aspirer et distribuer les échantillons puis dispenser les aliquotes dans les cuves de mélange et de coloration. 6.2.2 Seringue d aspiration Le contrôle du volume aspiré est commandé par des moteurs pas à pas. 6.2.3 Détecteurs de sang et de caillot Ceux-ci, en amont près de la sonde d aspiration et en aval de la zone d échantillonnage, assurent un contrôle parfait du processus : Détection d un volume insuffisant Détection du passage de toute microbulle Détection de toute obstruction Marketing / Rev.D / Mai 2012 41/69

7 Technologies 7.1 Introduction Les numérations des Erythrocytes, des Leucocytes, des Plaquettes, les distributions volumétriques des trois lignées sont réalisées grâce au procédé d ACCUCOUNT (Brevet Coulter). La détermination des sous-populations leucocytaires s effectue grâce à la cytomorphologie digitalisée FCMD au niveau d'un cytomètre en flux. Il en est de même des analyses des érythroblastes et des réticulocytes. Le DxH 800 intègre des concepts électroniques et mécaniques innovants - Mesures multiples sur chaque événement analysé - Stabilité des mesures au cours du temps et maitrise des variations des paramètres - Diluteur sans aucune vanne d écrasement ni tuyau pincé 7.2 L ACCUCOUNT 7.2.1 Principe Ce principe compte les érythrocytes, les plaquettes, les leucocytes, et en effectue l analyse volumétrique. Lorsqu'une suspension de cellules est acheminée à travers un point de mesure, la séquence de passage de chacune est analysée (temps de passage et intervalle entre deux passages). L augmentation de la résistivité entre deux électrodes immergées génère une impulsion électrique. Son amplitude, proportionnelle au volume de l élément cellulaire, est analysée en fonction de la séquence de passage. Le nombre d impulsions correspond au nombre de cellules ayant franchi le point de mesure. Les impulsions sont analysées par des algorithmes de programme spécifiques à chaque lignée. Plusieurs mesures du signal sont enregistrées, entre autres : - Le temps de passage - Le volume (amplitude et largeur du pic) - le nombre d événements et débit de comptage - le temps d attente 7.2.2 Procédés complémentaires Flux de balayage Un flux de diluant balaie l'arrière des orifices du bac de comptage des érythrocytes. Il empêche les cellules de retourner dans la zone de détection et éventuellement de perturber l'analyse volumétrique des plaquettes. Pyrolyse Un courant électrique intense est appliqué entre chaque cycle au niveau des orifices. Cette action permet d'éliminer tout risque d'encrassement de ceux-ci et rend les mesures de volume parfaitement précises et stables. Marketing / Rev.D / Mai 2012 42/69

7.3 Numérations et histogrammes des érythrocytes L analyse érythrocytaire est obtenue selon le principe Accucount, à partir d une dilution au 1/6250éme. Les mesures sont enregistrées entre les seuils 24 et 360 fl dans 256 canaux. La résolution par canal est de 1,31 fl. La population érythrocytaire est étudiée entre 36 et 360 fl. La plage comprise entre 24 et 36 fl permet de détecter la présence d interférences, puis trois comptages sont effectués sur chaque dilution et comparés les uns aux autres en fonction d une tolérance statistique. Si, à la fin de la période normale de mesure, le nombre d impulsions enregistré est insuffisant, des extensions de comptage sont automatiquement effectuées pour assurer la meilleure précision. 7.4 Numérations et histogrammes des plaquettes L analyse de la population plaquettaire est effectuée à partir de la même dilution que celle des érythrocytes (1 :6250). Les mesures sont enregistrées entre 2 et 25 fl et réparties dans 256 canaux. La courbe de distribution obtenue, dont la log-normalité est vérifiée, est tout d abord lissée puis trois comptages sont effectués sur chaque dilution et comparés les uns aux autres en fonction d une tolérance statistique. Le résultat numérique édité correspond au moins à la moyenne de deux d entre eux. Si, à la fin de la période normale de mesure, le nombre d impulsions enregistré est insuffisant, des extensions de comptage sont automatiquement effectuées pour assurer la meilleure précision en cas de thrombopénie. Le DxH 800 accumule les données des PLT sur un total de 1800 événements ou pendant 20 secondes. 7.4.1 L utilisation des modèles types (Pattern) Les interférences éventuelles rencontrées sur la numération plaquettaire sont corrigées en fonction de modèles types (Pattern) Modèle type Interférence GR Interférence limite basse Modèle type PLT géantes Marketing / Rev.D / Mai 2012 43/69

7.4.2 L analyse croisée multi-canaux : Data fusion Une interrogation des canaux numération des globules blancs, numération des érythroblastes, numération des réticulocytes, numération des globules rouges et détermination de la formule apporte au système : Un contrôle total sur la présence de l interférence Une connaissance du type de population interférentielle La possibilité de quantifier les macros PLT GB PLT histogramme 7.4.3 Le canal EPICS Le canal EPICS se réfère au principe de la cytométrie en flux. Il quantifie les érytroblastes, qualifie les macro-plaquettes et détecte la présence d agrégats plaquettaires. Macro-PLT Agrégat PLT Erythroblastes Les données provenant du canal EPICS et du canal Accucount sont utilisées pour la numération des PLT et l analyse morphologique des macro-plaquettes et la détection des agrégats Marketing / Rev.D / Mai 2012 44/69

7.5 Numérations et histogrammes des leucocytes Le nombre de globules blancs est obtenu selon le principe Accucount sur une suspension où les érythrocytes ont été lysés. Le taux de dilution est de 1/250 ème. Les mesures sont enregistrées à partir du seuil de 30 fl. La population leucocytaire est comptée à partir de 35 fl. Trois comptages sont effectués sur chaque dilution et comparés les uns aux autres en fonction d une tolérance statistique. Le résultat numérique édité correspond au moins à la moyenne de deux d entre eux. En cas de cytopénie, si à la fin de la période normale de mesure, le nombre d impulsions enregistré est insuffisant, des extensions de comptage sont automatiquement effectuées pour assurer la meilleure précision en cas de leucopénie. 7.5.1 Numérations des GB : Application des modèles (Pattern) Toute interférence dans la zone 30-35 fl (érythroblastes, agrégats plaquettaires ) est détectée par l analyse de la distribution cellulaire. Le système utilise des modèles de correction. Chaque modèle type de référence intègre des caractéristiques qui représentent des interférences. Le DxH possède des milliers de modèles en mémoire. Si l analyse de l histogramme indique une interférence potentielle détectée, le DxH 800 (algorithmes) exclue l interférence identifiée. Les Globules blancs sont exacts et un message signale qu il y a eu correction Modèles interference basse Interferences sur les Ly Modèles Agrégats PLT Marketing / Rev.D / Mai 2012 45/69

7.5.2 L analyse croisée multi-canaux : Data fusion Les informations en provenance du canal EPICS, du canal formule et du canal réticulocytes sont combinées dans le cadre d une analyse croisée multi-canaux. Quand le canal EPICS est activé, les informations qu il délivre sont utilisées pour : - Générer des messages d interprétation pour les globules blancs. - Délivrer les résultats de la numération leucocytaire. Information combinée entre le canal EPICS et celui de la numération des GB 7.6 Méthode de numération des GB optiques Canal Formule GB Optique DIFF WDOP Canal ERB GB Optique ERB WNOP Canal Retic GB Optique Retic WROP 3 méthodes disponibles en complémentarité de la méthode par impédance Marketing / Rev.D / Mai 2012 46/69

7.7 Hémoglobine La mesure de l'hémoglobine est réalisée dans une chambre spécifique sur la dilution des leucocytes. L agent de lyse forme un complexe coloré HemoChrom-S (HC-S) avec l hémoglobine. Après la numération des globules blancs la solution lysée est envoyée dans la cuve de mesure Hgb. Le faisceau optique traverse la cuve de mesure et passe à travers un filtre. L Hgb est mesurée photométriquement à 525 nm. Un photo-détecteur effectue les mesures d absorbance. Entre chaque cycle, une mesure de référence est prise sur le diluant seul. 7.8 Formule : Analyse des sous populations leucocytaires L Unicel DxH800 utilise la cyto-morphologie digitalisée haute résolution et sensibilité pour la détection des anomalies cellulaires. Cette approche est employée aussi bien pour la différenciation leucocytaire que pour la quantification des érythroblastes et des réticulocytes. Le module d aspiration délivre des volumes de sang dans des chambres régulées en température pour les érythroblastes, la formule et les réticulocytes. 7.8.1 Méthode analytique La détermination des sous-populations leucocytaires se fait au niveau d'un cytomètre en flux après addition d'un agent lysant détruisant les érythrocytes, puis d un stabilisant pour en stopper l'action, de façon à maintenir les cellules de la lignée leucocytaire dans un état proche de l'état natif. La réaction (réactifs et modules) est contrôlée et régulée en température suivant l environnement. Le module Multi transducer breveté Utilise une diode Laser rouge focalisée elliptiquement pour une intensité et stabilité maximales. Focalisation hydrodynamique La dilution est focalisée au niveau de la cellule de mesure par un liquide de gainage. Chaque cellule est individuellement analysée. Chaque cellule passe au niveau d un point unique de mesure. Marketing / Rev.D / Mai 2012 47/69

Sept mesures physiques simultanées Lorsque la cellule est présente au niveau de la zone de détection sept mesures physiques sont enregistrées simultanément - Le volume - La maturité cellulaire avec les caractéristiques du noyau, de la densité de la chromatine et du rapport N/C Plus : - Cinq angles de diffraction - AL2 0 degrés Mesure de l ombre portée de l élément, de la lumière absorbée - LALS- Mesure de la lumière diffractée aux petits angles, relative à la taille cellulaire et à la structure cellulaire. - LMALS/ MALS/ UMALS : Mesure de la granularité, (présence ou absence de granulation) et de la membrane cellulaire. 8192 événements cellulaires sont analysés correspondant approximativement à 250,000 données informatives. Pour les réticulocytes évalue 32,000 événements pour approximativement 1 million d informations cellulaires de taille forme et morphologie. L analyse des érythroblastes évalue 8192 événements cellulaires pour approximativement 250,000 d informations cellulaires de taille forme et morphologie Analyse multidimensionnelle Les différentes mesures sont effectuées instantanément sur chaque cellule. Leur combinaison permet l'identification de chacune d'elle. 7.8.2 La transformation des données La transformation des données décuple les potentialités analytiques pour mieux maximiser les séparations entre les populations et identifier une population faiblement représentée Non transformée Transformée Marketing / Rev.D / Mai 2012 48/69

7.8.3 Application des modèles types et score de concordance Des milliers de modèles types sont appliqués aux données de l échantillon afin de sélectionner le plus adapté à la normalité ou à la pathologie. Cette analyse est complétée par le score de concordance. Plus de score de concordance est élevé plus la confiance dans les résultats rendus et les messages qualitatifs est élevée. 7.8.4 Le contour tridimensionnel Les zones d intérêt digitalisées sont analysées pour mieux cerner et reconnaitre les populations. Les contours d intérêt sont ainsi réajustés 7.8.5 Représentations graphiques Les résultats de la formule sont exprimés en pourcentage et en valeur absolue. Ils sont associés à des représentations graphiques. Le DxH 800 fournit plusieurs représentations graphiques mono bi et tri dimensionnelles. Ces formats affichent la meilleure visualisation des populations cellulaires en utilisant les paramètres mesurés et les données transformées. Marketing / Rev.D / Mai 2012 49/69

Représentations spatiales et individualisation des populations dans un espace cubique L opérateur peut visualiser les sous-populations leucocytaires dans un espace cubique avec rotation du cube selon divers axes. Chaque population est affectée d un code couleur spécifique. L intensité des points donne une information sur la densité cellulaire. Grâce au logiciel, il est possible de supprimer de la représentation telle ou telle population, pour une analyse plus fine. Un module d intelligence artificielle effectue un traitement multidimensionnel en temps réel des mesures physiques réalisées sur chacune des 8192 cellules analysées. Il établit des contours dynamiques autour de chaque sous-population leucocytaire afin de parfaitement les individualiser. Vue de face du cube Vue latérale droite du cube Stéréogramme Une vue en stéréogramme permet une meilleure visualisation des populations, de leur individualisation et la distinction de catégories cellulaires anormales Marketing / Rev.D / Mai 2012 50/69

Vol moy NE DS Vol NE Dossier technique Coulter Unicel DxH 800 v2.0 7.8.6 Les Données Positionnelles de Cytométrie CPD DS Diffractio n NE DS Cond NE Diffractio Cond n moy NE Le COULTER DxH 800 moyenn établit la formule leucocytaire 5 populations à l aide de la technologie cyto-morphologie digitalisée e (V, C, MALS, UMALS, LMALS, LALS, AL2). Pour chaque cellule, la NE série DxH800 détermine 7 coordonnées dont l analyse permet d extraire d autres paramètres qui complètent les résultats en % et # classiques. Ce panel de nouveaux discriminants, (CPD), est constitué par la valeur moyenne (Mean) et la dispersion de tous les paramètres mesurés sur les sous populations leucocytaires localisées dans un espace tri dimensionnel. La variation de ces paramètres positionnels révèle des perturbations de positionnement et d hétérogénéité des nuages de points dans les représentations bi- et tri-dimensionnelles. Elles signalent des anomalies morphologiques des cellules et aide au diagnostic d anomalies hématologiques myéloïdes ou lymphoïdes correspondant la plupart du temps à des pathologies spécifiques. Marketing / Rev.D / Mai 2012 51/69

SOP-S Dossier technique Coulter Unicel DxH 800 v2.0 7.9 Quantification des granulocytes immatures La séquence de maturation des neutrophiles s effectue suivant un gradient de maturation. Les éléments cytologiques classifiés par le système sont les promyélocytes, les myélocytes et les métamyélocytes Les paramètres @EGC % et EGC n (nombre) sont affichés à l écran de consultation des résultats en cliquant sur l onglet RUO Myéloblaste Promyélocyte Myélocyte Métamyélocyte Ne hyposegmenté Neutrophile Normal Méta % = 5 Myélo % = 9.5 LALS-V Promyélo % = 2.5. Méta % = 11 Myélo % = 10.25 Promyélo % = 3 Parmi les 7 mesures utilisées pour déterminer les sous populations leucocytaires, le signal LALS (diffusion lumineuse aux petits angles) est sensible à la granularité, la lobularité et/ou aux caractéristiques de surface La maturité cellulaire (Opacité) reflète des modifications de structure interne Marketing / Rev.D / Mai 2012 52/69

SOP-S Dossier technique Coulter Unicel DxH 800 v2.0 L augmentation de la sensibilité et de la spécificité est la résultante de la combinaison multi paramétrique des mesures LALS, maturité cellulaire, volume et MALS (diffusion aux angles moyens) Le DxH combine les mesures de base pour obtenir de nouveaux paramètres : - En Y SOP_S = Nouveau paramètre dérivé des mesures Opacité_Scatter (MALS) - En X LALS_V = Nouveau paramètre dérivé des mesures LALS_Volume Meta % = 11 Myelo % = 10.25 LALS-V Promyelo % = 3 7.10 Numérations des Erythroblastes L Unicel DxH800 effectue la numération des érythroblastes. Cette détermination est rendue possible grâce à un canal spécifique. Un aliquote de sang dilué est traité avec un agent de lyse de façon à détruire les érythrocytes et éléments non nuclées. L échantillon, constitué de noyaux résiduels, est ensuite focalisé au niveau de la cellule de mesure. Sept paramètres de mesure (Volume, complexité et cinq angles de diffraction laser) sont réalisés simultanément pour chaque événement passant dans la cellule de mesure par le module multiple transducer Les mesures RLALS versus AL2 et RUMALS versus AL2 offrent la meilleure discrimination entre les ERB et globules blancs et la meilleure détection des plaquettes géantes ou agrégats plaquettaires. Marketing / Rev.D / Mai 2012 53/69

7.11 Réticulocytes 7.11.1 Méthode analytique L Unicel DxH 800 utilise une méthode en Cytométrie de Flux pour réaliser le profil réticulocytaire Ret%, Ret#, IMR, VMR. L analyse des réticulocytes est effectuée sur sang total. La coloration utilisée est une coloration supravitale ce qui élimine toute toxicité pour l opérateur et tout encrassement de l instrument. La première phase de l identification des réticulocytes consiste à ajouter le colorant supravital (qui colore et précipite l'arn des polyribosomes) à l aliquote de sang. Puis le transparisant est ajouté pour rendre l hémoglobine optiquement neutre. Afin d optimiser et de standardiser les réactions : - La température de la chambre de coloration est régulée - La température du réactif de transparisation est régulée par un ef fet Peltier - La suspension ainsi préparée est analysée par la cytométrie en flux multidimensionnelle 7.11.2 Analyse La solution réactionnelle est injectée et focalisée dans la cellule du cytomètre de flux où 32.000 érythrocytes sont individuellement analysés et identifiés selon sept mesures préalablement définies (volume, complexité, et cinq angles laser : AL2 LALS LMALS UMALS MALS). 7.11.3 Représentation graphique Plus la quantité d'arn cellulaire est importante, plus la diffraction est élevée. L'étirement du nuage vers la droite est en relation directe avec le degré de maturation des réticulocytes. Ret T GR PLT T Cette représentation correspond à une projection des populations dans le plan Volume/Diffraction RLS. Marketing / Rev.D / Mai 2012 54/69

7.11.4 Représentation tridimensionnelle S ajoutant à la mesure des réticulocytes en % et en #, le Coulter DXH 800 produit des indices complémentaires qui illustrent l efficacité médullaire. De plus, le réactif de transparisation rend les hématies sphériques. Cela permet de définir le volume moyen des cellules sphérisées (MSCV). 7.11.5 Stéréogramme 7.11.6 Hématies non tranparisées Les inclusions présentes dans les globules rouges sont aussi colorées par le colorant supra vital New methylene blue. Sous certaines conditions pathologiques, les globules rouges ne sont pas totalement transparisés et l hémoglobine est conservée : elles révèlent la présence d inclusions érythrocytaires de type corps de Pappenheimer, corps de Howell-Jolly et corps de Heinz ). Ces cellules sont difficiles à des hémoglobiniser et sont appelés hématies fantômes et sont quantifiées : %UGC Normal Cellules cibles Marketing / Rev.D / Mai 2012 55/69

Drépanocytes polychromasie 7.11.7 Données positionnelles de cytométrie CPD Un panel de 14 paramètres supplémentaires comportant le volume moyen et la dispersion des populations réticulocytaires et non réticulocytaires. Marketing / Rev.D / Mai 2012 56/69

8 Spécifications du DXH 800 8.1 Caractéristiques générales 8.1.1 Dimensions et poids Hauteur cm Largeur cm Profondeur cm Poids kg Analyseur MPE 96,5 76,2 78,7 117,5 Base support réactifs 83,8 76,2 78,7 125,6 Informatique 42,0 19,5 46,8 12,3 Ecran 44,8 42,0 10 2 Imprimante 23,0 39,8 42,2 13,5 Clavier 5,8 43,0 18,2 2,8 8.1.2 Alimentation électrique Alimentation générale : 90-264 VAC 48-62 Hz Terminal de gestion : 180-265 VAC 47-63 Hz 8.1.3 Consommation 550 W (1876 BTU/heure) Catégorie II selon IEC 1010-1 8.1.4 Environnement Température : 15,5 C à 32 C Humidité : < 85% Bruit : < 60dB 8.1.5 Prélèvement Anticoagulant préconisé : K3EDTA Liquides synoviaux : K3EDTA Liquide céphalorachidien (cérébrospinal) Liquide synovial : K3EDTA ou Héparine (traitement hyaluronidase) Liquide sérique : K3EDTA 8.1.6 Stabilité Numération formule : 24 h pour une conservation de l échantillon à température ambiante. 48 h pour une conservation de l échantillon entre 2 C et 8 C. Réticulocytes : 72 h pour une conservation de l échantillon entre 2 C et 8 C. Marketing / Rev.D / Mai 2012 57/69

Hémogramme Paramètre Plage de stabilité Stabilité ambiante Stabilité 2 C et 8 C GB x103/μl 0.50 24 heures 48 heures GR x106/ μl 0.10 24 heures 48 heures HGB g/dl 0.2 24 heures 48 heures MCV fl 3.0 24 heures 48 heures RDW (%) 1.00 24 heures 48 heures RDW-SD 5.0 24 heures 48 heures PLT x103/μl 30.0 24 heures 48 heures MPV fl 1.0 24 heures 48 heures NE (%) 5.0 24 heures 48 heures LY (%) 4.0 24 heures 48 heures MO (%) 3.0 24 heures 48 heures EO (%) 1.5 24 heures 48 heures BA (%) 1.5 24 heures 48 heures NRBC (%) 0.5 24 heures 24 heures RET (%) 0.3 24 heures 72 heures MRV fl 4.0 24 heures 72 heures IRF ratio 0.3 24 heures 72 heures Liquides biologiques Liquides Paramètres Plage de stabilité Stabilité ambiante Stabilité 2 C et 8 C LCR NTN x10 3 /μl 0.050 4 heures 24 heures LCR GR x10 6 /μl 0.0010 4 heures 24 heures Sérique NTN x10 3 /μl 0.050 4 heures 24 heures Sérique GR x10 6 /μl 0.0010 4 heures 24 heures Synovial NTN x10 3 /μl 0.050 4 heures 24 heures Synovial GR x10 6 /μl 0.0010 4 heures 24 heures Prédilué Les résultats des échantillons prédilués, analysés 5 minutes et 1 heure après la préparation sont comparés aux mêmes échantillons sur sang total et doivent être dans les limites suivantes : Paramètres limites GB x10 3 /μl 0,4 ou 10% GR x10 6 / μl 0,1 ou 4% HGB g/dl 0,4 ou 6% PLT x10 3 /μl 10,0 ou 15% Volumes échantillons : Tubes fermés/ouverts : 165µL maximum Tubes acceptés : Diamètre : 10-16 mm Longueur : 47-77 mm Volume : 2-7 ml Marketing / Rev.D / Mai 2012 58/69

8.2 Réactifs et contrôles 8.2.1 Réactifs Coulter DxH Diluent Coulter DxH Cell Lyse Coulter DxH Diff PAK Coulter DxH Retic Pack Coulter DxH Cleaner 8.2.2 Contrôles Coulter 6C cell Coulter Retic-X Cell Coulter Lin-X Coulter Body Fluid Coulter Latron CP-X Coulter S-Cal 8.3 Codes à barres Lecteur code barres digitalisé 2D (caméra) Deux lectures avant et pendant l aspiration échantillon Codabar Code 39 Code 128 Entrelacé 2/5 NW7 Marketing / Rev.D / Mai 2012 59/69

9 Spécifications analytiques 9.1 Répétabilité N précise le nombre de passages réalisés sur le même échantillon. Param. N = Niveau Limites GB 10 0,5 à 2 x 10 3 /µl 5 à 10 x 10 3 /µl 5,0% CV 3,0% CV GR 10 4,5 à 5,5 x 10 6 /µl 1,5% CV Hb 10 14 à 16 g/dl 1,5% CV VMC 10 80 à 90 fl 1,0% CV IDC 10 12 à 14 % 2,5% CV IDC -SD 10 33 à 48 Fl 2,5% CV Plt 10 200 à 400 x 103/µL 3,5% CV Plt 10 10 à 15 x 103 /µl 12,0% CV VMP 10 8 à 10 fl 2,5% CV Ne% 10 50 à 60 % 3,5% CV Ly% 10 25 à 35 % 5,0% CV Mo% 10 5 à 10 % 10,0% CV Eo% 10 2 à 5 % 2ET 0,5 ou 13,5% CV Ba% 10 0,5 à 1,5 % 2ET 0,5 ErB 10 1.00 à 2.00 >2.00 à 15.00 SD. 0.3 20% CV 15% CV >15.00 pour 100 GB Rét% 10 0.000 to 1.500% SD 0.25 Rét% 10 >1,5 à 4,0 % SD 0,70 Rét% 10 >4,01 à 15 % 7% CV IMR 10 GR 3.0 x 106 μl RETIC 1.0 4.0% IRF 0.2 20%CV VMR 10 100.0 à 120.0 fl 5% CV Marketing / Rev.D / Mai 2012 60/69

9.1.1 Mode Prédilué Param. N = Niveau Limites GB 10 5 à 10 x 103 /µl 6,0% CV GR 10 4,5 à 5,5 x 106 /µl 3,0% CV Hb 10 14 à 16 g/dl 3,0% CV PLT 10 200 à 400 x 103/µL 7,0% CV 9.1.2 Liquide LCR, sérique, synovial Param. N = Niveau Limites GR 10 10,000 à 15,000 cell/µl 6,0% CV NTN 10 50,000 à 2000,000 cell/µl 15,0% CV 9.2 Exactitude 9.2.1 Paramètres de la numération Le tableau ci-dessous correspond aux paramètres de la numération. Les résultats obtenus correspondent à 150 échantillons normaux analysés par l automate par rapport à une formule manuelle effectuée selon la norme NCCLS H20-A (400 cellules analysées). Température des spécifications (21,1 C à 26,7 C ) L exactitude pour les paramètres de la numération est déterminée par comparaison des résultats du DxH 800 avec une méthode prise comme référence. L estimation du biais est déterminée selon la méthode décrite dans la norme CLSI EP09-A2 Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Les échantillons dans la gamme de mesure décrite ci-dessous ne présentant aucun message système sont analysés avec le DxH et un autre automate d hématologie. Le DxH 800 remplit les critères de spécification si les résultats sont dans les limites définies dans la table suivante : Paramètres Plages de valeurs Différence moyenne (la plus grande des deux) GB 0.0 2.0 x103/μl ±0.1 ou 10% GB >2.0 100.0 x103/μl ±0.2 ou 3% GB >100.0 400.0 x103/μl N/A ou 5% GR 0.0 8.5 x106/μl 0,05 ou 2,0 % Hb 0 25.5 g/dl 0,2 ou 3,0 % VMC 50.0 150.0 fl N/A ou 2,0 % IDC 10.0 40.0 % 0,5 ou 5,0 % IDC-SD 15.0 220.0 fl ±3.0 ou 10.0% Plt 0.0 3000.0 x103 /μl 10 ou 7,0 % VMP 5.0-25.0 fl N/A ou 70 % Marketing / Rev.D / Mai 2012 61/69

9.2.2 Paramètres de la formule Le tableau ci-dessous correspond aux paramètres de la numération. Les résultats obtenus correspondent à 150 échantillons normaux analysés par l automate par rapport à une formule manuelle effectuée selon la norme NCCLS H20-A (400 cellules analysées). L exactitude pour les paramètres de la formule est déterminée par comparaison des résultats du DxH 800 et une autre méthode prise comme référence. Les résultats sont comparés soit avec un autre automate d hématologie soit avec une formule manuelle effectuée sur 400 éléments suivant la norme CLSI H20-A2 Reference Leukocyte (WBC) Differential Count (Proportional) and Evaluation of Instrumental Methods (H20). L estimation du biais est déterminée selon la méthode décrite dans la norme CLSI EP09-A2 Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Le DxH 800 remplit les critères de spécification si les résultats comparés avec une formule sur 400 éléments sont dans les limites de biais définies dans la table suivante : DxH vs formule manuelle 400 éléments Paramètres Gamme de mesure Différence moyenne % (la plus grande des deux) Ne% 0,0 à 100 % 2,0 10% Ly% 0,0 à 100 % 3,0 10% Mo% 0,0 à 100 % 3,0 10% Eo% 0,0 à 100 % 1,0 10% Ba% 0,0 à 100 % 1,0 10% DxH vs automate Paramètres Gamme de mesure Différence moyenne % (la plus grande des deux) Ne% 0,0 à 100 % 2,0 10% Ly% 0,0 à 100 % 1,5 10% Mo% 0,0 à 100 % 1,0 10% Eo% 0,0 à 100 % 0,5 10% Ba% 0,0 à 100 % 0,5 10% 9.2.3 Paramètres réticulocytes L exactitude est mesurée par rapport à la méthode manuelle définie selon les normes NCCLS H16-P et par rapport à une méthode en cytofluorométrie en accord avec les normes NCCLS H44-P.L exactitude pour les paramètres de la numération est déterminée par comparaison des résultats du DxH 800 avec un autre automate. L estimation du biais est déterminée selon la méthode décrite dans la norme CLSI EP09-A2 Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Le DxH 800 remplit les critères de spécification si les résultats sont dans les limites définies dans la table suivante : Paramètres/populations Gamme de mesure Biais Rét% 0,0 à 30,0% 0,5 ou 10% IRF 0 à 1 0,2 VMR 50 à 190 fl 15 Marketing / Rev.D / Mai 2012 62/69

9.2.4 Paramètres Erythroblastes L exactitude est mesurée par rapport à la méthode manuelle définie selon la norme CLSI H20-A2 Reference Leukocyte (WBC) Differential Count (Proportional) and Evaluation of Instrumental Methods, L exactitude pour les paramètres des éryhtroblastes est déterminée par comparaison des résultats du DxH 800 et une méthode d estimation manuelle. Les échantillons couvrant la gamme de mesure ne présentant aucun message système sont analysés avec le DxH et une méthode manuelle. Le DxH 800 remplit les critères de spécification si les résultats sont dans les limites définies dans la table suivante : Paramètres/populations Gamme de mesure Coefficient corrélation ErB 0 à 600 pour 100 GB R>0,90 9.2.5 Paramètres Liquides biologiques L exactitude est mesurée par rapport à la méthode manuelle définie selon la norme CLSI H20-A2 Reference Leukocyte (WBC) Differential Count (Proportional) and Evaluation of Instrumental Methods, L exactitude pour les paramètres des liquides biologiques est déterminée par comparaison des résultats du DxH 800 et une méthode d estimation manuelle. Les échantillons couvrant la gamme de mesure ne présentant aucun message système sont analysés avec le DxH et une méthode manuelle. le DxH 800 remplit les critères de spécification si les résultats sont dans les limites définies dans la table suivante : Paramètres/populations Gamme de mesure Biais NTN 20 à 89 cell/µl 5 10% GR 10 000 à 6 200 000 500 5% Paramètres/populations Plage analytique Limites GR 0.0 10,000,000 1,000 6,200,000 Marketing / Rev.D / Mai 2012 63/69

9.3 Limites de linéarité Paramètre Intervalles de linéarité Limites (la plus grande des deux) GB 0,00 à 100,0 x 10 3 /µl 100,1 à 400,0 x 10 3 /µl 0,2 ou 3,0% 9 % GR 0,00 à 8,00 x 10 6 /µl 0,05 ou 2,0% Hb 0,0 à 25,0 g/dl 0,2 ou 3,0% Plt 0 à 3000 x 10 3 /µl 10 ou 7,0% RET % 0 à 30 % Diff moy : 1,5 RET # 0 à 0,7850 x 10 6 /µl NA 9.4 Valeurs résiduelles Les valeurs résiduelles sont déterminées à la mise en route. Les limites sont : GB 0,05 x 103/µL GR 0,005 x 106/µL Hb 0,1 g/dl Plt 3,00 x 103/µL Région Erythroblastes 10 événements Région total 60 événements Formule 100 événements Rétics 600 événements Liquides biologiques NTN 20 cell/µl - GR 1000 cell/µl 9.5 Contamination Les limites de contamination (haut vers Bas) sont les suivantes : GB 0,5% GR 0,5% Hb 1,0% Plt 1,0% ErB 75 événements (GB : 0.000 300. 000 X10 3 /µl) ErB 100 événements (GB > 300. 000 X10 3 /µl) Formule 200 événements (GB : 0.000 400.000 X10 3 /µl) Rétics 600 événements Marketing / Rev.D / Mai 2012 64/69

9.6 Limites détection / Quantification GB x10³/ul PLT x10³/ul Liquide biologique NTN cellules/mm³ Liquide biologique GR cellules/mm³ Spec Spec Spec Spec Limite du blanc (LoB) 0.02 1.5 10 500 Limite inférieure de détection (LLoD) Limite inférieure de Quantitiation (LLoQ) 0.03 2.3 15 750 0.05 3.0 20 1000 Marketing / Rev.D / Mai 2012 65/69

9.7 Plages analytiques Le tableau ci-dessous indique les plages pour lesquelles les résultats sont fournis. Les valeurs qui se situent entre les limites de linéarité et les limites analytiques sont affectées du signe +. Les valeurs hors plages analytiques sont affectées du code +++++. Paramètre. Plages analytiques Limites GB 0.0 à 999,00 x10 3 /µl 0.050 à 400,00 x 10 3 /µl UWBC 0.0 à 999,00 x10 3 /µl 0.050 à 999,00 x10 3 /µl GR 0.0 à 10,00 x 10 6 /µl 0.005 à 999,00 x10 3 /µl Hb 0.0 à 30 g/dl 0.10 à 25,0 g/dl Ht 0,0 à 70 % 0,0 à 85 % VMC 40 à 200,0 fl 50 à 150,0 fl TCMH 0,0 à 99,9 pg CCMH 0,0 à 99,9 g/dl IDC 0,0 à 99,9 % IDC SD 0,0 à 340 15 à 150 Plt 0,00 à 7000 x 10 3 /µl 3.0 à 3000 x 10 3 /µl Pct 0,0 à 9,999 % VMP 5 à 25 fl 0 à 25 IDP 0,0 à 99,9 % Ne% 0 % à 100 % 0 % à 100 % Ly% 0 % à 100 % 0 % à 100 % Mo% 0 % à 100 % 0 % à 100 % Eo% 0 % à 100 % 0 % à 100 % Ba% 0 % à 100 % 0 % à 100 % Ne# 0,00 à 600,00 x10 3 /µl 0,00 à 400,00 x 10 3 /µl Ly# 0,00 à 600,00 x10 3 /µl 0,00 à 400,00 x 10 3 /µl Mo# 0,00 à 600,00 x10 3 /µl 0,00 à 400,00 x 10 3 /µl Eo# 0,00 à 600,00 x10 3 /µl 0,00 à 400,00 x 10 3 /µl Ba# 0,00 à 600,00 x10 3 /µl 0,00 à 400,00 x 10 3 /µl Rét% 0,00 à 50% 0,00 à 30,0% Rét# 0,00 à 2,5 x 10 6 /µl 0,00 à 0,1 x 10 6 /µl IRF 0,00 à 1,0 0,00 à 1,0 VMR 0,00 à 500,0 fl 50 à 190 Marketing / Rev.D / Mai 2012 66/69

9.8 Performances quantification des granulocytes immatures 9.8.1 Méthode de référence : lecture manuelle microscope Etudes multiparamétrique incluant 7 sites pour une évaluation portant sur 1500 échantillons Méthode de référence : lecture sur 400 cellules Le coefficient de corrélation (r) a été déterminé en comparant le %EGC versus la somme promyélocytes %, myélocytes % et métamyélocytes %. Le critère de positivité choisi pour calculer l indice AUC (aire sous la courbe) est la somme promyélocytes %, myélocytes % and métamyélocytes % >= 1 %. 9.8.2 Méthode de référence : cytométrie de flux et anticorps CD 16 Evaluation portant sur 315 échantillons prélevés sur deux sites différents Méthode de référence Cytofluorométrie et utilisation d un anticorps CD 16. Site Echantillons Echantillons remplissant les critères de positivité Coeffici ent de corrélat ion (r) AUC aire sous courbe Sensibilité Spécificité Critères pour sensibilité et spécificité H 86 77 0.81 0.85 80.5 77.8 >1.37 I 229 87 0.92 0.87 85.1 80.3 >0.37 Total 315 164 0.90 0.90 82.3 80.8 >0.50 Marketing / Rev.D / Mai 2012 67/69

9.9 Performances numération GB optiques Evaluation portant sur 435 échantillons analysés en mode NUM / NUM DIFF / RETIC Méthode de référence : GB par méthode Accucount Impédance @WDOP @WROP R 2 =0.9686 R 2 =0.992 @WNOP R 2 =0.976 Marketing / Rev.D / Mai 2012 68/69