NUMERATION FORMULE SANGUINE NORMALE ET PATHOLOGIQUE

NUMERATION FORMULE SANGUINE NORMALE ET PATHOLOGIQUE Dr Nicolas Lechevalier, Dr Olivier Mansier, Pr Vincent Praloran Laboratoire d Hématologie CHU Bordeaux et Université de Bordeaux 1

Introduction Numération Formule Sanguine - Compte des cellules - Détermination de : paramètres (taille, dispersion etc ) concentrations (cellules, Hb) Formule leucocytaire = distinction et compte des différentes sous-populations de globules blancs Cellules sanguines - Globules Rouges - Globules Blancs - Plaquettes En suspension dans le Plasma 2

Numération : quoi? Globules blancs : Plaquettes : - nombre (concentration, G/L) - nombre (concentration, G/L) - composition (= formule) - volume (fl) Globules rouges : - nombre (concentration, T/L) - volume (fl) - volume et nombre : hématocrite - concentration en Hb (g/l) 3

Numération : quoi? Globules blancs : Plaquettes : - nombre (concentration, G/L) - nombre (concentration, G/L) - composition (= formule) - volume (fl) Globules rouges : - nombre (concentration, T/L) - volume (fl) - volume et nombre : hématocrite - concentration en Hb (g/l) Tube de sang après centrifugation ou décantation 4 : 3 couches distinctes apparaissent

Numération : comment? Nécessité de : Détecter / identifier / compter des types cellulaires différents GR ou hématies GB ou leucocytes : polynucléaires neutrophiles, éosinophiles et basophiles; lymphocytes; monocytes Plaquettes 5

Numération : comment? Nécessité de : Détecter / identifier / compter des types cellulaires différents Analyse cellulaire : 2 grands principes principe Coulter (impédance volumétrique) : par variation d impédance principe optique : par diffraction lumineuse 6

Numération : principe Coulter Passage d une cellule par l orifice variation d impédance électrique proportionnelle au volume de la cellule Electrode interne Vide régulé Notion de nombre (concentration) Notion de volume des cellules Electrode externe Discrimination GB/GR/Plaq Information sur VGM (et VMP) GB et Plaquettes sont comptées après lyse des GR Flux de diluant VMP : Volume Moyen Plaquettaire 7

Numération : principe de détection optique Passage des cellules les unes après les autres devant un faisceau laser Diffraction de la lumière émise en fonction de la taille des cellules et de leur contenu Notion de nombre (concentration) Notion de volume (lumière diffractée) Cellule photoélectrique Laser Discrimination GB, GR Plaq Information sur VGM (et VMP) Diluant Echantillon Diluant 8

Numération : comment? Nécessité de : 1. Détecter / identifier/compter des types cellulaires différents 2. Mesurer la concentration en hémoglobine 9

Numération : comment? Nécessité de : 1. Détecter / identifier/compter des types cellulaires différents 2. Mesurer la concentration en hémoglobine Technique colorimétrique après lyse des GR 1. Lyse des GR par un agent de lyse 2. Libération de l Hb contenue dasn les GR 3. Formation d un complexe coloré entre l hémoglobine et l agent de lyse 4. Le faisceau optique traverse la cuve de mesure et passe à travers un filtre de 525 nm 10

Numération : paramètres des GR VGM (fl) : Volume Globulaire Moyen Hte x 10 /Nb GR Nb GR 80 100 Volume (fl) 11

Numération : paramètres des GR VGM (fl) : Volume Globulaire Moyen Hte x 10 /Nb GR Nb GR 80 100 Volume (fl) microcytose 12

Numération : paramètres des GR VGM (fl) : Volume Globulaire Moyen Hte x 10 /Nb GR Nb GR 80 100 Volume (fl) microcytose macrocytose 13

Numération : paramètres des GR VGM (fl) : Volume Globulaire Moyen Hte x 10 /Nb GR Nb GR TCMH (pg) : Teneur Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine Hb / Nb GR Normo- ou Hypo- CHROMIE > ou < 27 pg 80 100 Volume (fl) microcytose macrocytose 14

Numération : paramètres des GR VGM (fl) : Volume Globulaire Moyen Hte x 10 /Nb GR Nb GR 80 100 Volume (fl) TCMH (pg) : Teneur Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine Hb / Nb GR Normo- ou Hypo- CHROMIE > ou < 27 pg CCMH (g/dl) : Concentration Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine microcytose macrocytose Validation analytique ++ 32-36 g/dl Hypochromie si < 32 15

Numération : et au final? Dans une numération, il existe 2 types de paramètres : 1. Paramètres mesurés : unités habituellement utilisées (unité SI) Erythrocytes...T/L (10 12 /L) Leucocytes.G/L (10 9 /L) Plaquettes..G/L (10 9 /L) VGM....fL (µ 3 ) Hémoglobine..g/dL (g/l) 16

Numération : et au final? Dans une numération, il existe 2 types de paramètres : 1. Paramètres mesurés : unités habituellement utilisées (unité SI) Erythrocytes...T/L (10 12 /L) Leucocytes.G/L (10 9 /L) Plaquettes..G/L (10 9 /L) VGM....fL (µ 3 ) Hémoglobine..g/dL (g/l) 2. Paramètres calculés Hématocrite = [GR (T/L) x VGM (fl)] / 10..% TCMH CCMH = Hb (g/l) / GR (T/L)...pg = Hb/Hte g/dl 17

Automates Beckman Coulter DxH 800 en service au CHU de Bordeaux 18

Un premier test Le(s)quel(s) de ces paramètres définit le volume des hématies? 1. CCMH 2. TCMH 3. VGM 4. VMP 5. Hte 19

La bonne réponse Le(s)quel(s) de ces paramètres définit le volume des hématies? 1. CCMH 2. TCMH 3. VGM 4. VMP 5. Hte 20

Formule leucocytaire Pour quoi faire? 1. Déterminer les proportions de chacune des sous-populations leucocytaires déséquilibre d une ou plusieurs lignée(s)? but quantitatif Détection de cellules normalement absentes du sang 21

Formule leucocytaire Pour quoi faire? 1. Déterminer les proportions de chacune des sous-populations leucocytaires déséquilibre d une ou plusieurs lignée(s)? but quantitatif Détection de cellules normalement absentes du sang Physiologiquement, 5 populations de GB sanguins : Polynucléaires Lymphocytes Monocytes Neutrophiles Eosinophiles Basophiles 22

Formule leucocytaire Pour quoi faire? 1. Déterminer les proportions de chacune des sous-populations leucocytaires déséquilibre d une ou plusieurs lignée(s)? but quantitatif Détection de cellules normalement absentes du sang 2. Repérer la présence de cellules anormales but qualitatif Type cellulaire normalement présent dans le sang mais ayant des critères d atypies (ex : lymphocytes atypiques) Cellules normalement absentes du sang (ex : blastes) 23

Polynucléaires neutrophiles (PNN) Principale population des GB (env. 50-70%) 1 seul noyau mais polylobé Fonction principale : lutte anti-bactérienne immunité innée 24

Polynucléaires neutrophiles (PNN) Principale population des GB (env. 50-70%) 1 seul noyau mais polylobé Fonction principale : lutte anti-bactérienne immunité innée 1. Migration vers le lieu de l infection chimiotactisme adhésion des PNN à l endothélium (sélectines, intégrines) diapédèse (passage entre les cellules endothéliales) migration tissulaire 25

Polynucléaires neutrophiles (PNN) Principale population des GB (env. 50-70%) 1 seul noyau mais polylobé Fonction principale : lutte anti-bactérienne immunité innée 1. Migration vers le lieu de l infection chimiotactisme adhésion des PNN à l endothélium (sélectines, intégrines) diapédèse (passage entre les cellules endothéliales) migration tissulaire 2. Activité bactéricide : Système indépendant de l O2 (lysozyme, lactoferrine ) Système dépendant de l O2 : Burst oxydatif (NOX, MPO) génère DRO, H 2 O 2 Phagocytose 26

Polynucléaires Eosinophiles et Basophiles (PNE et PNB) Eosinophiles Peu présents dans le sang, surtout dans les tissus Grosses granulations orangées contenant : - MBP (Major Basic Protein) - Enzymes et protéines cytolytiques (collagénase, protéine cationique éosinophile, peroxydase éosinophile) DRO - Interleukines (IL4, IL5, IL6 ) 27

Polynucléaires Eosinophiles et Basophiles (PNE et PNB) Eosinophiles Peu présents dans le sang, surtout dans les tissus Grosses granulations orangées contenant : - MBP (Major Basic Protein) - Enzymes et protéines cytolytiques (collagénase, protéine cationique éosinophile, peroxydase éosinophile) DRO - Interleukines (IL4, IL5, IL6 ) Basophiles Grosses granulations très foncées contenant : - histamine - chondroïtine sulfate - Rc IgE (FceRI) - 28

Polynucléaires Eosinophiles et Basophiles (PNE et PNB) Eosinophiles Allergie Anti-parasitaire Régulation immunitaire Peu présents dans le sang, surtout dans les tissus Grosses granulations orangées contenant : - MBP (Major Basic Protein) - Enzymes et protéines cytolytiques (collagénase, protéine cationique éosinophile, peroxydase éosinophile) DRO - Interleukines (IL4, IL5, IL6 ) Basophiles Grosses granulations très foncées contenant : - histamine - chondroïtine sulfate - Rc IgE (FceRI) - 29

Monocytes Lignée myéloïde (CFU-GM -> CFU-M) Aspect variable, noyau souvent contourné, vacuoles fréquentes Migrent vers les tissus, s y fixent et se transforment en macrophages 30

Monocytes Lignée myéloïde (CFU-GM -> CFU-M) Aspect variable, noyau souvent contourné, vacuoles fréquentes Migrent vers les tissus, s y fixent et se transforment en macrophages Rôle immunité innée : lutte anti-bactérienne Système oxydatif (MPO, NADPHOx) Protéines anti-bactériennes (lysozyme ) Phagocytose Sécrétion de cytokines ++ (chimioattractantes ) 31

Monocytes Lignée myéloïde (CFU-GM -> CFU-M) Aspect variable, noyau souvent contourné, vacuoles fréquentes Migrent vers les tissus, s y fixent et se transforment en macrophages Rôle immunité innée : lutte anti-bactérienne Système oxydatif (MPO, NADPHOx) Protéines anti-bactériennes (lysozyme ) Phagocytose Sécrétion de cytokines ++ (chimioattractantes ) Rôles différents selon les tissus : métabolisme Fer dans MO, présentation Ag, catabolisme cellulaire 32

Lymphocytes Lignée lymphoïde Petite taille (10-12µm), rond, régulier, avec ou sans grains 3 types de lymphocytes : B, T, NK mais non distinguables à l œil! 33

Lymphocytes Lignée lymphoïde Petite taille (10-12µm), rond, régulier, avec ou sans grains 3 types de lymphocytes : B, T, NK mais non distinguables à l œil! Les Ly T sont majoritaires dans le sang Migrent vers les tissus Rôles : immunité innée : Ly NK Immunité acquise : Ly B : transformation en plasmocytes ( synthèse d Ac) ou en Ly mémoires Ly T : reconnaissance des Ag, synthèse de cytokines stimulant les Ly B et la phagocytose, réponse 34 cytotoxique

L immunité innée : vous est-elle acquise? Quelles sont les cellules de l immunité innée? 1. Les polynucléaires neutrophiles 2. Les polynucléaires basophiles 3. Les monocytes 4. Les lymphocytes T 5. Les lymphocytes B 35

Un acquis du cours! Quelles sont les cellules de l immunité innée? 1. Les polynucléaires neutrophiles 2. Les polynucléaires basophiles 3. Les monocytes 4. Les lymphocytes T 5. Les lymphocytes B 36

Formule leucocytaire : comment? 1. Formule microscopique (manuelle!) : elle reste la technique de référence Avantages : détecte les anomalies fines, regard expert Inconvénients : erreurs d identification des cellules (manque d expérience ) erreur statistique : compte sur seulement 100 cellules 2. Formule automatisée 37

Formule leucocytaire : comment? 1. Formule microscopique : technique de référence Avantages : détecte les anomalies fines, regard expert Inconvénients : erreurs d identification des cellules (manque d expérience) erreur statistique : compte sur seulement 100 cellules 38

Formule leucocytaire : comment? 1. Formule microscopique : technique de référence Avantages : détecte les anomalies fines, regard expert Inconvénients : erreurs d identification des cellules (manque d expérience) erreur statistique : compte sur seulement 100 cellules 2. Formule automatisée automates réalisant les numérations en routine Avantages : rapidité efficace pour la grande majorité des NFS compte sur 10 000 cellules en moyenne (précision +++) Inconvénients : impossibilité de déterminer la nature des cellules anormales avec précision système d alarmes FROTTIS Sanguin 39

Formule leucocytaire : comment? 1. Formule microscopique : technique de référence Avantages : détecte les anomalies fines, regard expert Inconvénients : erreurs d identification des cellules (manque d expérience) erreur statistique : compte sur seulement 100 cellules 2. Formule automatisée automates réalisant les numérations en routine Avantages : rapidité efficace pour la grande majorité des NFS compte sur 10 000 cellules en moyenne (précision +++) Inconvénients : impossibilité de déterminer la nature des cellules anormales avec précision système d alarmes FROTTIS Sanguin cytométrie en flux : technique de pointe Av : excellente précision et distinction des populations Inc : coût 40

Formule leucocytaire : comment? Cytomètre en flux Beckman Coulter FC500 cytométrie en flux : technique de pointe Av : excellente précision et distinction des populations Inc : coût 41

Formule manuelle : microscopique 1. Réalisation d un frottis sanguin 42

Formule manuelle : microscopique 1. Réalisation d un frottis sanguin 2. Coloration au MGG (May-Grünwald-Giemsa) 47

Formule manuelle : microscopique 1. Réalisation d un frottis sanguin 2. Coloration au MGG (May-Grünwald-Giemsa) - fixe les cellules (méthanol) - coloration des cellules et de leur contenu selon leur affinité pour les colorants acides et basiques 48

Formule manuelle : microscopique 1. Réalisation d un frottis sanguin 2. Coloration au MGG (May-Grünwald-Giemsa) - fixe les cellules (méthanol) - coloration des cellules et de leur contenu selon leur affinité pour les colorants acides et basiques 3. Lecture du frottis au microscope - compte sur 100 GB généralement - détermination du % de chacune des sous-populations leucocytaires Domaine de la cytologie 49

Et voici ce qu on observe! - Des différences de coloration du cytoplasme et des grains Basophile Acidophile Eosinophile - Des différences de coloration de la chromatine du noyau : Chromatine mottée Chromatine «lâche» 50

Relatif (%) et absolu Deux hommes de 60 ans ont une formule sanguine avec 20% de PNN, 5% de monos, 3% d éosinos, 1% de basos et 71% de lympho. La leucocytose de Mr X est à 20 G/l La leucocytose de Mr Y est à 5 G/L Calculez, comparez, concluez 51

Bilan : Mr X Mr Y (GB = 20 G/L) (GB : 5 G/L) PNN 4 1 PNE 0.6 0.15 PNB 0.2 0.05 Mono 1 0.25 Ly 14.2 3.55 52

Bilan : Mr X Mr Y (GB = 20 G/L) (GB : 5 G/L) PNN 4 1 PNE 0.6 0.15 PNB 0.2 0.05 Mono 1 0.25 Ly 14.2 3.55 En regardant les % : vous venez de passer à côté d une leucémie lymphoïde chronique! 53

Volume ou taille cellulaire Formule leucocytaire automatisée Conductivité Diffraction lumineuse Cytochimie Cytolyse Marquage 54

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) 55

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) Conductivité Structure de la cellule par un courant haute fréquence 56

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) Conductivité Structure de la cellule par un courant haute fréquence Diffraction lumineuse Diffraction de la lumière en fonction du contenu cellulaire (grains ), de la taille et de la forme du noyau 57

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) Conductivité Structure de la cellule par un courant haute fréquence Diffraction lumineuse Diffraction de la lumière en fonction du contenu cellulaire (grains ), de la taille et de la forme du noyau Cytochimie Coloration de la cellule 58

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) Conductivité Structure de la cellule par un courant haute fréquence Diffraction lumineuse Diffraction de la lumière en fonction du contenu cellulaire (grains ), de la taille et de la forme du noyau Cytochimie Coloration de la cellule Cytolyse Lyse différentielle des cellules 59

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) Conductivité Structure de la cellule par un courant haute fréquence Diffraction lumineuse Diffraction de la lumière en fonction du contenu cellulaire (grains ), de la taille et de la forme du noyau Cytochimie Coloration de la cellule Cytolyse Lyse différentielle des cellules Marquage Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux couplés à des fluorochromes Puis passage de ces cellules les unes après les autres devant un laser cytométrie en flux 60

Formule leucocytaire automatisée Volume ou taille cellulaire Principe Coulter (volume) ou mesure optique (taille) Conductivité Structure de la cellule par un courant haute fréquence Diffraction lumineuse Diffraction de la lumière en fonction du contenu cellulaire (grains ), de la taille et de la forme du noyau Cytochimie Coloration de la cellule Cytolyse Lyse différentielle des cellules Marquage Chaque société combine une ou plusieurs technologies Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux couplés à des fluorochromes Puis passage de ces cellules les unes après les autres devant un laser cytométrie en flux 61

Formule leucocytaire automatisée Exemple de formule automatisée 62

Formule leucocytaire automatisée PNN Exemple de formule automatisée 63

Formule leucocytaire automatisée PNE PNN Exemple de formule automatisée 64

Formule leucocytaire automatisée PNE PNN Lymphos Exemple de formule automatisée 65

Formule leucocytaire automatisée Monos PNE PNN Lymphos Exemple de formule automatisée 66

Qu avez vous retenu? Quel(s) est(sont) l (les) intérêt(s) de réaliser une formule sanguine manuelle au microscope (frottis sanguin)? 1. Compte statistiquement meilleur 2. Recherche de cellules anormales circulantes 3. Rapidité 4. Identification d anomalies fines sur l ensemble des lignées sanguines 5. Technique de référence 67

Les trois atouts de la formule microscopique Quel(s) est(sont) l (les) intérêt(s) de réaliser une formule sanguine manuelle au microscope (frottis sanguin)? 1. Compte statistiquement meilleur 2. Recherche de cellules anormales circulantes 3. Rapidité 4. Identification d anomalies fines sur l ensemble des lignées sanguines 5. Technique de référence 68

Et pour finir Quelle(s) est(sont) la(les) réponse(s) juste(s)? 1. La formule automatisée est rapide 2. La coloration de référence pour un frottis sanguin est la coloration au MGG 3. La formule automatisée permet de déterminer la nature exacte des cellules anormales circulantes 4. La formule microscopique est obsolète et dépassée par la formule automatisée 69

Et pour finir Quelle(s) est(sont) la(les) réponse(s) juste(s)? 1. La formule automatisée est rapide 2. La coloration de référence pour un frottis sanguin est la coloration au MGG 3. La formule automatisée permet de déterminer la nature exacte des cellules anormales circulantes 4. La formule microscopique est obsolète et dépassée par la formule automatisée 70

Numération normale N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) GB Plaq. 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 200-400 150-400 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 VGM (fl) 106 95 70-86 73-89 77-91 80-100 CCMH 33 36 33 35 33 35 33 35 33 35 32-36 TCMH (pg) 34 24-34 24-30 24-30 24-30 > 27 71

Formule normale N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 PNE < 0.5 PNB < 0.2 Ly 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1-4 Mo 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 76

Formule normale Attention : toujours utiliser les valeurs absolues! Jamais les pourcentages!!! N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 PNE < 0.5 PNB < 0.2 Ly 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1-4 Mo 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 77

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 PNE PNB Ly Mo < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 80

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 = Hyperleucocytose / = Leucopénie N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 PNE PNB Ly Mo < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 81

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 = Hyperleucocytose / = Leucopénie N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN PNE PNB Ly Mo 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 Polynucléose Neutropénie/ agranulocytose 82

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 = Hyperleucocytose / = Leucopénie N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN PNE PNB Ly Mo 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 Polynucléose Neutropénie/ agranulocytose Hyperéosinophilie 83

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 = Hyperleucocytose / = Leucopénie N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN PNE PNB Ly Mo 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 Polynucléose Neutropénie/ agranulocytose Hyperéosinophilie Hyperbasophilie 84

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 = Hyperleucocytose / = Leucopénie N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN PNE PNB Ly Mo 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 Polynucléose Neutropénie/ agranulocytose Hyperéosinophilie Hyperbasophilie Hyperlymphocytose Lymphopénie 85

Numération pathologique : les GB GB 10-26 6-18 6-15 5-15 4.5 13.5 4-10 = Hyperleucocytose / = Leucopénie N. Né 1 an 4 ans 10 ans adulte PNN PNE PNB Ly Mo 6-26 1.5-8.5 1.5-8.5 1.8-8 1.7-7.5 < 0.5 < 0.2 2-11 4-10.5 2-8 1.5-6.5 1 4 0.4-3.1 0.05-1.1 0-0.8 0-0.8 0.2-1 Polynucléose Neutropénie/ agranulocytose Hyperéosinophilie Hyperbasophilie Hyperlymphocytose Lymphopénie Hypermonocytose Monocytopénie 86

Numération pathologique : les GR N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 Hb = paramètre de base capital, indispensable et le plus important pour analyser la lignée rouge en particulier pour définir une anémie 87

Numération pathologique : les GR N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 = Polyglobulie / = Anémie 88

Numération pathologique : les GR N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 = Polyglobulie / = Anémie VGM (fl) 106 95 70-86 73-89 77-91 80-100 89

Numération pathologique : les GR N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 = Polyglobulie / = Anémie VGM (fl) 106 95 70-86 73-89 77-91 80-100 = Macrocytose / = Microcytose 90

Numération pathologique : les GR N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 = Polyglobulie / = Anémie VGM (fl) 106 95 70-86 73-89 77-91 80-100 = Macrocytose / = Microcytose CCMH 33 36 33 35 33 35 33 35 33 35 32-36 TCMH (pg) 34 24-34 24-30 24-30 24-30 > 27 91

Numération pathologique : les GR N. Né 3 mois 1 an 3-6 ans 10-12 ans Adulte M F GR (T/L) 4-6 3.2 4.8 3.6 5.2 4.1 5.5 4.1 5.5 4.5 6.5 3.8 5.8 Hb (g/dl) 13.5 19.5 8-14 10.5 13.5 12-14 11.5 14.5 13-17 12-16 Hte (%) 0.44 0.64 0.32 0.44 36-44 36-44 37-45 40-54 38-47 = Polyglobulie / = Anémie VGM (fl) 106 95 70-86 73-89 77-91 80-100 = Macrocytose / = Microcytose CCMH 33 36 33 35 33 35 33 35 33 35 32-36 TCMH (pg) 34 24-34 24-30 24-30 24-30 > 27 = Hypochromie 92

Numération pathologique : les plaquettes enfant Adulte Plaq. 200-400 150-400 93

Numération pathologique : les plaquettes enfant Adulte Plaq. 200-400 150-400 = Thrombocytose / = Thrombopénie 94

Numération pathologique : les plaquettes enfant Adulte Plaq. 200-400 150-400 = Thrombocytose / = Thrombopénie Réactionnelle Hémopathie Centrale/ Périphérique Isolée ou Autres troubles hémostase Autres cytopénies 95

Numération pathologique : les plaquettes enfant Adulte Plaq. 200-400 150-400 = Thrombocytose / = Thrombopénie Réactionnelle Hémopathie Centrale/ Périphérique Isolée ou Autres troubles hémostase Autres cytopénies Attention à la fausse thrombopénie à l EDTA (agrégats plaquettaires contrôle sur tube citraté) 96

Agrégats plaquettaires sur tube EDTA : fausse thrombopénie Vraie thrombopénie 97

Bicytopénie, Pancytopénie Définition : anomalie de nombre portant sur 2 (bicytopénie) ou toutes (pancytopénie) les lignées MYELOIDES 98

Bicytopénie, Pancytopénie Définition : anomalie de nombre portant sur 2 (bicytopénie) ou toutes (pancytopénie) les lignées MYELOIDES Donc : - Bicytopénie = anémie + neutropénie ou anémie + thrombopénie ou neutropénie + thrombopénie 99

Bicytopénie, Pancytopénie Définition : anomalie de nombre portant sur 2 (bicytopénie) ou toutes (pancytopénie) les lignées MYELOIDES Donc : - Bicytopénie = anémie + neutropénie ou anémie + thrombopénie ou neutropénie + thrombopénie - Pancytopénie = anémie + neutropénie + thrombopénie 100

Bicytopénie, Pancytopénie Définition : anomalie de nombre portant sur 2 (bicytopénie) ou toutes (pancytopénie) les lignées MYELOIDES Donc : - Bicytopénie = anémie + neutropénie ou anémie + thrombopénie ou neutropénie + thrombopénie - Pancytopénie = anémie + neutropénie + thrombopénie Etiologies : Centrales vs Périphériques 101

Bicytopénie, Pancytopénie Définition : anomalie de nombre portant sur 2 (bicytopénie) ou toutes (pancytopénie) les lignées MYELOIDES Donc : - Bicytopénie = anémie + neutropénie ou anémie + thrombopénie ou neutropénie + thrombopénie - Pancytopénie = anémie + neutropénie + thrombopénie Etiologies : Centrales vs Périphériques RETICULOCYTES (= précurseur immédiat des GR) 102

Réticulocytes Réticulocyte = stade précédant immédiatement le globule rouge dans sa maturation Taux de réticulocytes : exprimé en % par rapport aux GR et surtout en G/L (valeur absolue) Les valeurs normales: 60 à 120 G/L pour une Hb normale Reflète l activité de l érythropoïèse en cas de régénération intense de la moelle (ex : après une hémorragie aigue) Plus l anémie est importante, plus l érythropoïèse doit être stimulée, plus la réticulocytose devrait augmenter. À la condition que l érythopoïèse soit efficace. 103

Hématie Reticulocytes Réticulocytes Contiennent des restes d ARN ribosomal, ce qui permet de les différencier des hématies par une coloration spécifique : le bleu de crésyl brillant Ici, très nombreux réticulocytes A. régénérative 104

Réticulocytes Très schématiquement, devant une anémie : Retic < 60 G/L : anémie arégénérative cause centrale Retic > 120 G/L : anémie régénérative cause périphérique Mais attention l interprétation du taux de réticulocytes doit se faire au regard du degré de l anémie! Quand cette confrontation Hb/retic est bien conduite, elle permet de déterminer le mécanisme central ou périphérique de l anémie. 105

Un peu de gymnastique Hb 11g/dL retic 140 G/L Hb 11g/dL retic 50 G/L Hb 8 g/dl retic 40 G/L Hb 6 g/dl retic 300 G/L Hb 13g/dL retic 50 G/L Difficile? Oui et non La suite des cours vous le montrera 106

Numération pathologique : anomalie qualitatives Cellules morphologiquement anormales : Détectées par automate (alarmes) Mieux appréciées sur le frottis 107

Numération pathologique : anomalie qualitatives Cellules morphologiquement anormales : Détectées par automate (alarmes) Mieux appréciées sur le frottis Globules rouges : Schizocytes Dacryocytes Hématies falciformes Ponctuations basophiles Corps de Jolly Trophozoïte 108

Numération pathologique : anomalie qualitatives Cellules morphologiquement anormales : Plaquettes : Plaquette géante Agrégat plaquettaire 109

Numération pathologique : anomalie qualitatives Cellules morphologiquement anormales : Leucocytes : Anomalies des granuleux Anomalies des lymphocytes 110

Numération pathologique : anomalie qualitatives Cellules anormalement présentes dans le sang : Passage de précurseurs granuleux, érythroblastiques ou blastes dans le sang (cellules normalement contenues dans la moelle osseuse) Notion de myélémie (érythro-myélémie), blastose sanguine 111

A vous de jouer! Comment définit-on une anémie? 1. Hb < 12 g/dl chez la femme 2. Ht < 40% chez la femme 3. Hb < 13 g/dl chez l homme 4. GR < 3.8 T/L chez l homme ou la femme 5. VGM < 80 fl 112

A vous de jouer! Comment définit-on une anémie? 1. Hb < 12 g/dl chez la femme 2. Ht < 40% chez la femme 3. Hb < 13 g/dl chez l homme 4. GR < 3.8 T/L chez l homme ou la femme 5. VGM < 80 fl 113

Quelques exemples pratiques -1 Que dire de la numération de cet homme? 1. Anémie normochrome normocytaire 2. NFS normale 3. Anémie hypochrome microcytaire 4. Anémie normochrome macrocytaire GB 5.6 GR (T/L) 3.5 Hb (g/dl) 10.7 Ht (%) 37 VGM (fl) 73 TCMH (pg) 26 Plaq 225 114

Quelques exemples pratiques -1 Que dire de la numération de cet homme? 1. Anémie normochrome normocytaire 2. NFS normale 3. Anémie hypochrome microcytaire 4. Anémie normochrome macrocytaire GB 5.6 GR (T/L) 3.5 Hb (g/dl) 10.7 Ht (%) 37 VGM (fl) 73 TCMH (pg) 26 Plaq 225 115

Quelques exemples pratiques -2 Que dire de la NFS de cette femme? 1. Pancytopénie 2. Bicytopénie 3. Anémie normochrome macrocytaire et thrombopénie 4. Anémie normochrome macrocytaire et thrombopénie et lymphopénie 5. Thrombopénie isolée GB 2.6 GR (T/L) 3.2 Hb (g/dl) 10.5 Ht (%) 31 VGM (fl) 103 TCMH (pg) 28 Plaq 82 PNN 2.1 PNE 0.1 PNB 0.1 Ly 0.1 Mono 0.2 116

Synthèse 1. La réalisation d une NFS par un automate est essentiellement basée sur des mesures optiques, de conductivité et de cytochimie. 2. Bien qu imparfaite, la formule manuelle reste la technique de référence, en particulier pour l identification des cellules anormales. 3. L interprétation de la formule sanguine doit toujours tenir compte des valeurs absolues 4. Toute anémie impose le dosage des réticulocytes pour déterminer le caractère périphérique ou central 5. Les réticulocytes sont le reflet de l érythropoïèse 121