Département des Sciences Cliniques Obstétrique et Troubles de la Reproduction des Petits Animaux (OPA) Dr Stefan Deleuze, DMV, MSc, PhD, Diplomate ECAR Dr France Beaufays, DMV, MSc Obstétrique des Animaux de Compagnie : Clinique 3è doctorat en médecine vétérinaire RAPPEL CYCLE DE LA CHIENNE 1. Introduction La chienne est une mono-estrienne saisonnière. Ce qualificatif de «saisonnière» n est pas approprié car les chaleurs de la plupart des chiennes ne sont pas influencées par la saison et surviennent n importe quand. Ce n est vrai que pour les Basenji et Dingo (chiennes sauvages) qui viennent en chaleur en automne et 1 fois par an. L intervalle interoestrus moyen est de 7 mois. Il est : Variable suivant les races : Berger allemand, Rottweiler : 4 mois (race à cycle court); Basenji : 12 mois (race à cycle long) Variable au sein de la même race (Tous les Bergers allemands ne viennent pas en chaleur forcément tous les 4 mois) Variable pour le même individu d un cycle à l autre (ex : Une chienne peut revenir en chaleur après 6 mois et la fois d après, après 8 mois) Puberté 9 mois en moyenne <> variations raciales (petites versus grandes races) et individuelles. Cycle composé de 3 grandes phases suivant une classification hormonale, 5 phases suivant le frottis. 2. Classification hormonale des phases du cycle La phase ostrogénique = «les chaleurs» Elle comprend 2 phases sur base du frottis : le pro-oestrus et l oestrus. Pro-œstrus : dure en moyenne 8-10 jours, mais peut être aussi court que 3 jours ou aussi long que 3 semaines. Œstrus : dure en moyenne 8-10 jours, mais peut être aussi court que 3 jours ou aussi long que 3 semaines. => idem PO 1
Durée des chaleurs : en moyenne 15 jours - 3 semaines, avec des extrêmes allant de 6 jours à 6 semaines. La phase progestéronique = pratiquement la même que la chienne soit gestante ou non Elle comprend 2 phases sur base du frottis le metoestrus et le dioestrus Metœstrus : quelques jours Diœstrus Durée de l ensemble de la phase progestéronique: environ 2 mois (60 jours) La phase de «repos» hormonal (activité hormonale présente mais discrète) Anœstrus : durée variable (3 à 10 mois), classiquement environ 4 mois 3. Signes Cliniques des phases du cycle Pro-oestrus : Gonflement vulvaire : vulve gonflée, molle, souple. Pertes sanguines vulvaires ayant l utérus pour origine. (sous l effet des E2 congestion et saignements), ces pertes sont variables en quantité, certaines chiennes ont un écoulement abondant, d autres très faible. Attire le mâle et refuse la saillie. NB : au niveau comportemental, le premier jour du PO (donc des chaleurs) correspond au premier jour de pertes sanguines. Oestrus : Vulve toujours gonflée, mais plus ferme, dure, tonique. Réduction (le plus souvent) ou disparition des saignements, les pertes deviennent plus séreuses, moins sanguinolentes. La chienne attire le mâle et accepte la saillie, présente des signes d acceptation lors de la stimulation de la région périnéale (contraction des muscles du périnée, port latéral de la queue, ) NB : au niveau comportemental, le premier jour de l œstrus correspond à la première acceptation du mâle. Metoestrus - Dioestrus : Vulve se décongestionne progressivement en metœstrus pour redevenir de taille normale en diœstrus. Pertes absentes (mucus dans le vagin, mais pas d écoulements). Refuse le mâle, ne l attire pas (Peut encore l attirer un peu en metœstrus). NB : au niveau comportemental, le premier jour du metœstrus (donc fin des chaleurs) correspond au premier refus du mâle. Anoestrus : N attire pas le mâle repos 2
4. Signes endocrinologiques des phases du cycle Pro-oestrus: croissance folliculaire (stimulations avec LH et FSH) et production des œstrogènes par les follicules (taux maximum 24-48h avant le pic de LH, puis diminution) début de lutéinisation des cellules du contour des follicules (LUTEINISATION PRE- OVULATOIRE SPECIFIQUE DE LA CHIENNE!!!!) synthèse de P4, débute 24-48h avant le pic de LH Oestrus : L oestrus débute le jour du pic de LH. Ovulation : 2 jours après le pic de LH (ovocyte I expulsé) maturation de l ovocyte pendant 24-48h =>ovocyte II expulsé 48 heures après ovulation ovocytes fécondables pendant 24-36h Metoestrus : Phase de transition, établissement de l activité du corps jaune. Dioestrus : Phase d activité du CJ (phase lutéale) Anoestrus : ovaires au repos, reprise de la croissance folliculaire à la fin de cette phase 3
FSH (1) : Activité pulsatile en fin d anoestrus, stimule la croissance folliculaire et donc la synthèse d oestrogènes, redevient basale ensuite. E 2 (2) : augmentent déjà en fin d anoestrus (sous pulse de LH) maximum 1-2 j avant le pic de LH (500pg) puis diminution et taux basal (<10pg) puis une sécrétion en dioestrus (J30-J70) LH (3) : reprise d une pulsatilité en fin d anoestrus puis redevient basal en prooestrus puis pic durant 24h qui marque le premier jour de l oestrus puis une sécrétion en dioestrus (J30-J70) P 4 (4) début de synthèse 24-48h avant le pic de LH (spécificité de la chienne) JOUR Evénements Valeur de la Concentration sanguine en : Progestérone Unités : ng/ml J 0 Pic de LH 2 J 2 ovulations 5 J4-6 Période fécondable des ovocytes 10-25 J7-8 Le col est fermé 30 J8-J9 Fin de l oestrus ou début de la phase lutéale La progestérone atteint un maximum aux alentours du 20 ème jour post LH, forme un plateau jusqu au 30-35è jour puis commence à descendre progressivement et ce que la chienne soit gestante ou non. Elle atteint son taux basal vers J 70-80 si la chienne n est pas gestante. Chez la chienne gestante, une fois qu elle a atteint le taux de 2 ng/ml, elle chute à son taux basal en 24-48h et l accouchement se produit. 35+ PRL : synthétisée par l hypophyse = HORMONE LUTEOTROPE principale chez la chienne. Présente chez la chienne gestante : nécessaire au maintien du corps jaune en 2ème partie de phase lutéale (en 1ère partie, le CJ se suffit à lui-même) ET chez la chienne non gestante (en moins grande quantité). Non utilisée pour le diagnostic de gestation car aussi présente en cas de non gestation OU en cas de stress (hormone synthétisée en cas de stress). Relaxine : synthétisée par le placenta QUE chez femelle gestante : augmente dés l implantation (+/- J17) Utilisée en pratique, pour le diagnostic de gestation : dosage à partir de J30 (Il faut qu elle soit en quantité suffisante pour que le test soit sensible, si trop tôt, on risque d avoir des fauxnégatifs.) 4
5. Signes cytologiques (vagin) des phases du cycle Sous l influence des œstrogènes, l épithélium vaginal subit des changements. Ceux-ci sont mis en évidence par les frottis vaginaux et sont mis à profit dans le suivi de reproduction. (Voir ci-dessous) 5
SUIVI DE REPRODUCTION 1. Objectifs : Assurer une fertilité optimale (taux de gestation, nombre de chiots) Prévision précise du moment de la parturition Fertilité naturelle de la chienne si saillies multiples : 75% Fertilité naturelle de la chienne si 1 seule saillie : 30 40% => la chienne a une probabilité de rester vide sans assistance malgré des saillies multiples = 25% 2. Mise en pratique : En pratique, on fait la première visite du suivi de cycle 3-5 jours après le début des pertes sanguines. Si la chienne a un cycle court connu, on commence plus tôt. 3 techniques seront utilisées : Frottis vaginal Vaginoscopie Dosage de progestérone L ensemble des informations fournies par ces 3 techniques seront conjuguées à l historique reproducteur afin d établir le meilleur «plan stratégique» adapté à la chienne. 2.1. Frottis vaginal Il reflète le changement de l épithélium vaginal au cours du cycle sous l influence des œstrogènes. Facile et peu couteux. Intérêt : Il est utilisé lors du suivi de reproduction pour aider à déterminer le moment idéal de la saille ou l insémination. Il sert également à déterminer le stade du cycle auquel une chienne se trouve par exemple lorsqu une stérilisation est envisagée. Il est utile également lors de tout écoulement vulvaire ou lors des troubles du cycle (PO prolongé, etc ) Les œstrogènes agissent sur les récepteurs tissulaires et ont un effet mitotique. Il y a augmentation du nombre de couches cellulaires de l épithélium vaginal, on passe d environ 4-5 couches en anœstrus à 100-200 couches en œstrus. L épithélium vaginal n est pas vascularisé, il est nourri par imbibition, ce qui entraine une diminution d oxygénation et de nutrition au fur et à mesure que le nombre de couches cellulaires augmente et qu on s éloigne de la membrane basale. L exocytose diminue entrainant une augmentation de taille des cellules et un passage de l état basophile à un état éosinophile. Il y a dégénérescence des cellules qui vont finir par mourir, le noyau se pycnose puis se lyse, les cellules se kératinisent. 6
Ce schéma représente l évolution des types cellulaires au cours du cycle en regard des concentrations en oestrogènes circulants. Pour examiner un frottis vaginal, 2 types de coloration utilisables : Coloration Harris Schorr : met en évidence la dégénérescence des cellules Cellules éosinophiles: oranges (cellules dégénérées) Cellules basophiles: vertes Indice éosinophiliques = nombre de cellules oranges/ nombre total de cellules. Coloration Diff Quick : met en évidence la morphologie des cellules. Le tableau ci-dessous résume les différents types cellulaires présents en fonction des phases du cycle. PROESTRUS OESTRUS METOESTRUS DIOESTRUS ANOESTRUS Cellules épithéliales Cellules épithéliales Cellules épithéliales Cellules épithéliales Cellules épithéliales Début: RUSH! Parabasales C. superficielles Tout Type cellulaire Parabasales Parabasales PI C. kératinisées +Foam cell PI PI Milieu: +Metoestrum cell MI MI MI Noyaux isolés : + Noyaux isolés : +++ GI Foam cell Débris cellulaires Fin: Foam cell GI C. superficielles C. kératinisées Autres Autres Autres Autres Autres GR +++ GR: 0 ou ± PMN +++ PMN + PMN ± Bactéries + Bactéries ++ Mucus +++ Mucus + Mucus ++ PI : Petites Intermédiaires / MI : Moyennes Intermédiaires / GI : Grandes Intermédiaires 7
2.2 Vaginoscopie Permet d observer la image de la muqueuse vaginale (pas du col!!!) Phase Oestrogénique Phase Lutéale PRO-OESTRUS OESTRUS(ovulation) METOESTRUS DIOESTRUS ANOESTRUS 1ère moitié: cranulation Rosette pomme blette muqueuse lisse muqueuse roserouge plis primaires muqueuse blanche muqueuse rose et rose muqueuse rose assèchement du vagin vagin humide 2ème moitié: plis secondaires muqueuse blanchâtre 2.3. Dosage de la progestérone Obtenir des échantillons tous les 2 jours ; se dose sur tube sec Evénements Pic de LH : 2 ng/ml (Intervalle 2 à 4 ng/ml) Augmentation soudaine Ovulation : 5 ng/ml (Intervalle 4 à 6 ng/ml) Fertile : 10 à 25 ng/ml Sperme frais ou réfrigéré de bonne qualité : IA intra-vaginale : 1 IA : entre 10 et 15 ng/ml 2 IA :la 1ère à 7 ng/ml, la 2 ème entre 10 et 15 ng/ml Sperme congelé ou de mauvaise qualité : IA intra-utérine : 1 IA : à partir de 10 ng/ml 2 IA (recommandé): 2 à partir de 10 ng/ml à 24h d intervalle 8