INDICATIONS DU DIAGNOSTIC PRÉNATAL CHROMOSOMIQUE



Documents pareils
Fécondation in vitro avec don d ovocytes

AVIS N 75. Questions éthiques soulevées par le développement de l'icsi

Le syndrome de Noonan

Lundis de la Santé - Brest 12 Décembre Tabac et Grossesse M. COLLET

La maladie de Stargardt

la grossesse de la grossesse Ce qui a précédé Les débuts Les conditions de «mise en route» de la grossesse

des banques pour la recherche

AVIS N 112. Une réflexion éthique sur la recherche sur les cellules d origine embryonnaire humaine, et la recherche sur l embryon humain in vitro

F us u ses c ouc u he h s s po p nt n a t né n es J. L J. an sac CHU H T ou

Eléments d'information. sur le Téléthon

Manuel Bioéthique. des Jeunes NOUVELLE ÉDITION ACTUALISÉE ET AUGMENTÉE

Assistance médicale à la procréation. Informations pour les couples donneurs. Le don. d embryons

Neurofibromatose 1 Maladie de Von Recklinghausen

La dystrophie myotonique de Steinert

Nouvelles techniques moléculaires de dépistage prénatal de l aneuploïdie chromosomique

Maladie hémolytique du nouveau né. Dr Emmanuel RIGAL Unité d hématologie transfusionelle GENEVE Présentation du 13 janvier 2012.

Les lois de bioéthique : cinq ans après

Le programme complémentaire santé le plus complet: Meuhedet See

compaction ventriculaire gauche sur la fonction ventriculaire chez l adulte

L agénésie isolée du corps calleux

Infection VIH et Grossesse Rédigée par : Laurichesse Hélène, C Jacomet

Les tests génétiques à des fins médicales

Fondation PremUp. Mieux naître pour mieux vivre

La Dysplasie Ventriculaire Droite Arythmogène

Projet de grossesse : informations, messages de prévention, examens à proposer

Les avantages du programme complémentaire santé Meuhedet Adif

ECHOGRAPHIE EN GYNECOLOGIE ET EN OBSTETRIQUE

Suivi de la grossesse et orientation des femmes enceintes en fonction des situations à risque identifiées


Biométrie foetale. Comité éditorial pédagogique de l'uvmaf. Date de création du document 01/ Support de Cours (Version PDF) -

Échographie obstétricale

La transplantation rénale avec donneur vivant Aspects particuliers dans le cadre des maladies rénales transmises génétiquement

La rétinite pigmentaire Rod-cone dystrophie Retinitis pigmentosa

Chapitre 2 - Complexité des relations entre génotype et phénotype

Nous avons tous un don qui peut sauver une vie. D e v e n i r. donneur de moelle. osseuse

Leucémies de l enfant et de l adolescent

Les différentes maladies du coeur

Maternité et activités sportives

L Udaf de l Isère. se positionne sur. les lois de. bioéthique. Dossier de presse. janvier 2011

Dépistage drépanocytose. Édition 2009

Brochure d information

LES DOCUMENTS DE TRAVAIL DU SÉNAT

Introduction générale

Soins palliatifs en salle de naissance. Pierre Bétrémieux CHU de Rennes 9 octobre 2009 Chantilly

INFORMATION À DESTINATION DES PROFESSIONNELS DE SANTÉ LE DON DU VIVANT

Biomarqueurs en Cancérologie

médecins Loi de bioéthique : les enjeux de la révision Bulletin d information de l Ordre national des médecins NUMÉRO SPÉCIAL NOV.-DÉC.

Indications de la césarienne programmée à terme

Don de moelle osseuse. pour. la vie. Agence relevant du ministère de la santé. Agence relevant du ministère de la santé

La planification familiale

ASPECT ECHOGRAPHIQUE NORMAL DE LA CAVITE UTERINE APRES IVG. Dr D. Tasias Département de gynécologie, d'obstétrique et de stérilité

La bêta-thalassémie. La maladie. l Qu est-ce que la bêta-thalassémie? l Qui peut en être atteint? Est-elle présente partout dans le monde?

Conférence de Presse 11/09/2013. «Système de Surveillance de la Santé Périnatale au Luxembourg»

Le test de dépistage qui a été pratiqué à la

Le don de moelle osseuse

Qu est-ce qu un test génétique?

Les petis signes de T21 : comment ça marche et à quoi ça sert? Christophe Vayssière (Toulouse) DIU d echographie 2011

DÉTECTION DES ANEUPLOÏDIES DES CHROMOSOMES 13, 18, 21, X ET Y PAR QF-PCR (RÉFÉRENCE ) Avis d évaluation

Comment se déroule le prélèvement? Il existe 2 modes de prélèvements des cellules souches de la moelle osseuse:

L alpha-thalassémie. La maladie. l Qu est-ce que l alpha-thalassémie? l Qui peut en être atteint? Est-elle présente partout dans le monde?

ÉVALUATION DE L INTÉRÊT DU DÉPISTAGE DE L INFECTION À CYTOMÉGALOVIRUS CHEZ LA FEMME ENCEINTE EN FRANCE

ASSOCIATION HENRI CAPITANT JOURNEES SUISSES LE STATUT JURIDIQUE DU CORPS HUMAIN RAPPORT LUXEMBOURGEOIS. Rapporteur : Florence TURK, Avocat à la Cour

Bases de données des mutations

Le don de moelle osseuse :

SERVICE DE GYNECOLOGIE OBSTETRIQUE - CLINIQUE DE FERTILITE

Le déficit en MCAD. La maladie. Déficit en acyl-coa déshydrogénase des acides gras à chaîne moyenne MCADD. Qu est-ce que le déficit en MCAD?

1 les caractères des êtres humains.

Tout ce qu il faut savoir sur le don de moelle osseuse

Contrat d insémination 2015

Le cavernome cérébral

GUIDE D INFORMATION À L INTENTION DES RÉCIPIENDAIRES DE DON D OVULES DES RÉPONSES À VOS QUESTIONS

À compter de 2010 les codes du chapitre XVI ne doivent plus être employés au-delà de 2 ans. Créé le 1 er Mars 2011

«DIRE» UNE ECHOGRAPHIE A 12 SEMAINES D AMENORRHEE. Laurence Hamou Interne CHU ROUEN

Ethique, don d organe et Agence de la Biomédecine

Le Transfert sélectif d un seul embryon à la suite de la fécondation

Plan national maladies rares. Axes, Mesures, Actions. Qualité de la prise en charge, Recherche, Europe : une ambition renouvelée

Le nouvel eugénisme : trier l humanité dans l œuf

Séquence 1. Reproduction conforme de la cellule et réplication de l ADN Variabilité génétique et mutation de l ADN

Parcours médical des nouveau-nés dans leur premier mois de vie :

LA BIOÉTHIQUE EST- ELLE UN FREIN À LA SCIENCE?

Vous avez eu ou élevé des enfants Vos droits

L assistance médicale à la procréation en France en Dossier de presse

La surveillance biologique des salariés Surveiller pour prévenir

Maladies neuromusculaires

Génétique et génomique Pierre Martin

I - CLASSIFICATION DU DIABETE SUCRE

DÉFICITS IMMUNITAIRE COMMUN VARIABLE

DROITS A L ASSURANCE MATERNITE

Une sage-femme vous accompagne...

SAUVEZ UNE VIE... EN DONNANT LA VIE!

Apport de la biologie moléculaire au diagnostic des parasitoses

INFORMATION GÉNÉTIQUE et REPRODUCTION SEXUÉE

phase de destruction et d'élimination de débris

Exploration et Prise en charge d un couple infertile

Extrait des Mises à jour en Gynécologie et Obstétrique

Avis relatif aux recherches et utilisation des embryons humains in vitro à des fins médicales et scientifiques. Rapport.

DU PRELEVEMENT A LA GREFFE : REFLEXIONS LEGALES ET ETHIQUES

Mais pourquoi je ne suis pas enceinte?

L assurance maternité des femmes chefs d entreprises et des conjointes collaboratrices. Édition 2013

Transcription:

INDICATIONS DU DIAGNOSTIC PRÉNATAL CHROMOSOMIQUE

Diagnostic prénatal Permettre un DPN Éviter la naissance d un enfant porteur d une maladie sévère dans une famille connue Recours à l IMG Non obligatoire Bonne information de la famille Demande familiale

Le diagnostic prénatal DPN Risque 1/4 en général (1/2 pour dominant) Échographie précoce 8-9 SA pour dater grossesse (jumeaux?) Trophoblaste à 12 SA Etude génétique Caryotype Résultats en 3 à 10 jours (3 semaines X fra) Proposition IMG 1/4

La sécurité sociale rembourse le DAN dans < les indications suivantes: Age maternel supérieur ou égal à 38 ans à la date du prélèvement. Anomalie chromosomique parentale. Antécédent pour le couple, de grossesse(s) avec caryotype anormal. Diagnostic de sexe pour les maladies liées au sexe.

Signes d appel échographiques suivants : - Anomalies morphologiques fœtales démontrées internes ou externes, - Retard de croissance intra-utérin avéré, - Anomalies de la quantité de liquide amniotique. - Marqueurs sériques > 1/250.

LES AUTRES INDICATIONS CONVENANCE PERSONNELLE DÉCÈS IN UTÉRO INEXPLIQUÉ AMNIOCENTÈSE POUR AUTRE INDICATION

Evolution du diagnostic chromosomique prénatal en France Depuis 1970 1973 mise en place du DAN en France 1974 existence de 5 centres agréés 1980 convention nationale fixe âge maternel à 38 ans (2759 prélèvements) 1983 existence de 23 centres agréés 1990 (24428 prélèvements) 1999 (84609 prélèvements) 2000 (78849 prélèvements) 72 Laboratoires agréés

ASPECTS LÉGISLATIFS CONSENTEMENT DE LA FEMME ENCEINTE À LA RÉALISATION EN VUE DE DIAGNOSTIC PRÉNATAL IN UTERO D UNE ANALYSE ÉNUMÉRÉE À L ARTICLE R. 162-16-1 DU CODE DE LA SANTÉ PUBLIQUE. ARRÊTÉ DU 30 SEPTEMBRE 1997. LE LABORATOIRE DOIT ÊTRE AGRÉÉ PAR LE MINISTÈRE DE LA SANTÉ

QUEL TYPE DE PRÉLÈVEMENT? LIQUIDE AMNIOTIQUE (93%) VILLOSITÉS CHORIALES (6%) SANG FŒTAL (1%) À QUEL TERME? 14-15 SA (LA) 10-11 SA (VC) > 18 SA (PSF)

Prélèvements prénataux Précoce 11-12 SA Trophoblaste Trans-abdominal Risque de FCS de 1/100

PONCTION DE VILLOSITES CHORIALES

Ponction de villosités choriales Depuis 1983 Diagnostic prénatal chromosomique dès le 1 er trimestre de grossesse Diagnostic rapide et précoce En cas d anomalie : IMG à un terme plus précoce

Prélèvement de villosités choriales (1) : transcervical

Prélèvement de villosités choriales (2): transabdominal

Rappel embryologique Implantation de l œuf dans la cavité utérine 6 jours après la fécondation Au moment de la nidation Masse cellulaire centrale : bouton embryonnaire Couronne périphérique : trophoblaste (5ème jour)

Masse cellulaire interne = bouton embryonnaire Trophoblaste

Risques Fausses couches (1%) Anomalies de membre Prélèvement précoce (< 8-9 SA) Infections (rare) Douleurs abdominales (1-2%) Immunisation Rhésus (Ig spécifiques antid)

Amniocentèse Plus tardif Amniocentèse 17SA Risque de FCS de 1/200

L AMNIOCENTÈSE EST UN GESTE STÉRILE

Prélèvement de liquide amniotique

CULTURE CELLULAIRE POUR LA RÉALISATION D UN CARYOTYPE

CULTURE CELLULAIRE POUR LA RÉALISATION D UN CARYOTYPE

Cordocentèse (PSF)

Comparaison des méthodes de DPN Prélèvement Choriocentèse Amniocentèse Cordocentèse Nature Villosités trophoblastiques Liquide amniotique Sang foetal Terme 10-13 SA 15-32 SA ou + 20-40 SA Matériel ADN fœtal ADN fœtal ADN fœtal Caryo placentaire Caryo fœtal Caryo fœtal Liq amnio (bioch.) Sérum foetal Délais examen cyto Direct: 1 j Culture: 10 j-3 sem Culture : 3 j Culture : 1-2sem Risque fœtal 2-5% 0,5% 2%

RÉSULTATS DE 64 LABORATOIRES SUR 72 AGRÉÉS EN FRANCE POUR L ANNÉE 2OOO

78849 caryotypes 2766 anomalies (3,5%) 0,4 % D échecs de culture (315) TRISOMIE 21 47,82% TRISOMIE 18 14,56% TRISOMIE 13 5,61% SYNDROMES TURNÉRIENS 10,31% AUTRES AN. GONOSOMES 8,95% TRIPLOÏDIE 2,92% > 90% SONT DES ANOMALIES DE NOMBRE

Répartition des prélèvements selon les indications 6,4% ANOMALIE PARENTALE 1% ANOMALIE ECHO 18% 16,76% ATCD FRATRIE 2% SEXE AUTRES 9% 0% MSM 36% 40% AGE MATERNEL 34% 34,12% MSM AGE MATERNEL ANOMALIE ECHOGRAPHIQUE ANOMALIE PARENTALE SEXE ATCD FRATRIE AUTRES

Répartition des anomalies déséquilibrées 2,92% 9,82% triploïdie 3% Divers 10% Anom. Gonosomes 11% 8,95% trisomie 21 47% 47,82% 45,X 8% 0,31% trisomie 18 14% 14,56% trisomie 13 7% 5,61% trisomie 21 trisomie 13 trisomie 18 45,X Anom. Gonosomes triploïdie Divers

Fréquences des anomalies sur Signes d Appel Echographiques Clarté nuque SAE autres Nb caryo 3169 6929 Déséquilib res 322 10,16 770 11,11 Tri 21 186 57,76 5,87 220 28,57 3,18 Tri 13 20 6,21 0,63 66 8,57 0,95 Tri 18 52 16,15 1,64 203 26,36 2,93 45,X 40 12,42 1,26 131 17,01 1,89 Anom.Gono somes 7 2,17 0,22 26 3,38 0,38 Triploïdie 7 2,17 0,22 40 5,19 0,58 Divers 10 3,11 0,32 84 10,91 1,21 Anom. Equilib. 17 0,54 23 0,33

FRÉQUENCE DES ANOMALIES EN FONCTION DES INDICATIONS TRISOMIE 21 LA + FRÉQUENTE DANS TOUS LES GROUPES SAUF DANS «ANOMALIES PARENTALES» TRISOMIE 18 AUGMENTE RÉGULIÈREMENT MAIS DÉPISTAGE PRÉCOCE SYNDROMES TURNÉRIENS DÉPISTÉS SURTOUT DANS LES S.A. ÉCHOGRAPHIQUES

DEVENIR DES GROSSESSES APRÈS LE DAN Turner (235 cas) Klinefelter (72 cas) 47,XXX 47,XYY Mosaïques gonosomes 77,4% IMG 41,7% IMG 18,5% IMG 6,5% IMG 2/11 IMG 78% 24% 10% 15% 3/12 Anomalies du caryotype équilibrées 0,10% de novo 29,78% héritées

Exemple d anomalie du caryotype - Anomalie de nombre Trisomie 18

Trisomie 18 Dysmorphie moins spécifique Plus rare; 1/6000 Plus malformatif Repérage plus fréquent par l échographie RCIU Oligoamnios ou hydramnios Malformations majeures (+ MAINS ++)

Trisomie 18, prénatal Association Crâne «rond» (occiput plat, étroitesse bifrontale) Ouverture large de la métopique Plexus choroïdes dilatés Dilatation ventriculaire fréquente Oreilles inhabituelles, basses et orientées en arrière Micro-rétrognathisme et petite bouche

Évolution postnatale Pathologie neurologique sévère Retard psychomoteur sévère 5 à 10% des enfants survivent à la première année Malformations ++ Malformations multiples Cardiopathies, anomalies digestives, faciales, etc... Mains crispées +++

Trisomie 21 ou syndrome de Down En 1866, décrit par Down En 1959, est corrélée au chromosome 21 excédentaire 92% sont homogènes libres 5% par translocation robertsonienne 3% sont en mosaïque - 1/700 naissances, tout âge confondu, la fréquence augmente avec l âge maternel (par anomalies de disjonction) - Hypotonie à la naissance, hypertélorisme, oreilles bas implantées, macroglossie - 50% ont une malformation cardiaque

ANOMALIE DE NOMBRE AUTOSOMIQUE

Trisomie 13 Des anomalies du système nerveux Holoproencéphalie est la malformation la plus fréquente (50%) Dilatation du carrefour ventriculaire Élargissement de la fosse postérieure

Anomalie du visage Trisomie 13 Diminution de la distance inter-orbitaire (hypotélorisme) pouvant aller jusqu à la présence d un seul œil réalisant l aspect en cyclope Division labio-palatine

Trisomie 13 Anomalie des reins Hydronéphrose Augmentation du volume des reins Anomalies du cœur Communication inter-ventriculaire Dysplasie valvulaires Tétralogie de Fallot Anomalies des membres : Polydactylie Pied-bot Anomalie de l abdomen Omphalocèle Extrophie vésicale

Anomalie gonosomique (GTG) 47, XXY

DOUBLE ANOMALIE DE NOMBRE

DÉPISTAGE RAPIDE DES PRINCIPALES ANOMALIES CHROMOSOMIQUES NUMÉRIQUES

PRINCIPE DE LA FISH FISH FLUORESCENCE IN-SITU HYBRIDIZATION MÉTHODE D IDENTIFICATION MOLÉCULAIRE BASÉE SUR LA VISUALISATION D UN CHROMOSOME OU D UNE PORTION DE CHROMOSOME PAR DES SONDES FLUORESCENTES, SPÉCIFIQUES DE TOUT OU PARTIE DE CHROMOSOME (FISH INTERPHASIQUE OU MÉTAPHASIQUE)

PRINCIPE DE LA FISH

TRISOMIE 21 SUR AMNIOCYTE 21 18

TRISOMIE 18 SUR AMNIOCYTES 18 18 X Y 18

FISH D UN CENTROMÈRE

PEINTURE SPÉCIFIQUE D UN CHROMOSOME

PEINTURE SPÉCIFIQUE D UN CHROMOSOME

1 Indication : MSM CONCLUSION Pratique du DPN stable depuis 1997 Poursuite de la grossesse si diag. De Tri 21 est rare <1/1000 Nécessité d un consensus des cytogénéticiens dans les différents centres multidisciplinaires sur les conduites à tenir en fonction de l anomalie Retrouvée 700 000 Naissances en 2000 =11% de Dg Prénataux

Centre de DPI (Clamart) Fécondation In Vitro Proposée si troubles de fertilité associés Si ATCD 3 IMG après DPN Maladies dominantes Steinert Délai d attente Mise au point de la technique Réussite FIV 10 à 20%

Le diagnostic pré implantatoire et ses problèmes.. Marc Le Lorc h Service Histo Embryo Cytogénétique Pr Vekemans Hôpital Necker-Enfants Malades Pr Tachdjian BDR Béclère

Le Diagnostic pré-implantatoire Fécondation in vitro + Techniques de biologie moléculaire PCR FISH

DPI Couple à risque Fécondation in vitro Biopsie 3 jour Analyse PCR ou FISH

Historique 1978 : Louisa Brown naît en Angleterre (F.I.V.) 1981 : Amandine 1991 : 1er DPI pour mucoviscidose (GB) 1992 : première naissance par DPI (GB) 2000 : Valentin

D.P.I. - Pourquoi? 1) Patients fertiles porteurs d une maladie génétique grave et incurable. 2) Patients de la PMA porteurs d une anomalie génétique 3) Patientes d âge avancé, échecs répétés de FIV ou fausses couches spontanées récurrentes. 70% 30% (50%)

La législation française Loi : L94-654 (29 juillet 1994) article L162-17 Le diagnostic biologique effectué à partir de cellules prélevées sur l embryon in vitro : - Autorisé qu à titre exceptionnel -Indication attestée par un médecin d un centre de DPN pluridisciplinaire - Forte probabilité de donner naissance à un enfant atteint d une maladie génétique d une particulière gravité reconnue comme incurable au moment du diagnostic

La législation française Article L162-17 - Anomalie(s) responsable(s) doivent être préalablement identifiées - Consentement écrit du couple - Recherche uniquement de cette anomalie - Etablissement spécifiquement autorisé auprès de l Agence de la Biomédecine.

Arrêté du 20 juillet 1999 / 7 janvier 2000 Autorisation à 3 centres en France : PARIS STRASBOURG MONTPELLIER

Les étapes du DPI: un long processus! 12-18 mois Consultation multidisciplinaire 84% Bilan de fertilité Etude de faisabilité Stimulation ovarienne Ponction ovocytaire 33% annulation 10 en moyenne Fécondation par ICSI 62% Biopsie J3 97% DPI: (PCR / FISH) 86% Transfert J4 Echographie / b hcg 25% Accouchement 18%

Intervenants au cours d un DPI Obstétricien Sage-Femme Généticien Centre pluridisciplinaire Biologiste de reproduction Psychologue Assistante sociale Cytogénéticien Néonatalogiste Biologiste moléculaire

Les Techniques -La biopsieembryonnaire -La PCR -La FISH

I.C.S.I

Le clivage du zygote Lent Asynchrone (étapes à 3,5,6 cellules) Holoblastique rotationnel

A B

La biopsie embryonnaire Globule polaire: genotype ovocytaire Morula: stade 6-8 blastomères Blastocyste: 36% parviennent à ce stade

La biopsie

Les Techniques -La biopsieembryonnaire -La PCR -La FISH

Analyse de l embryon ADN Tubage et lyse cellulaire PCR

Les difficultés du DPI Les risques de contamination Cellules du manipulateur Spermatozoïde Cellules de la mère Fragment d ADN (amplification précédente)

Les difficultés du DPI La qualité des embryons Absence de noyau Embryon mosaîque Noyau en dégénérescence / mauvaise morphologie CM CM CN CN Pas de diagnostic Erreur de diagnostic

Pathologies étudiées Nb de demandes Nb de DPI Nb Grossesses Mucoviscidose (deltaf508) 18 24 5 Amyotrophie Spinale Myopathie de Duchenne Myotonie de Steinert Drépanocytose 18 20 32 6 10 12 11 3 2 Mutations rare s Déficit en OTC 1 2 1 Hémoglobinopatie 1 1 Dysplasie diatrophique 2 Maladie de Hunter 1 2 Lissencéphalie liée à l X 1 Analyse Indirecte xq28 Mucoviscidose (non df508) 17 X-fragile 13 HémophilieA 8 Incontinentia Pigmenti 2 Hydrocéphalieliéeà l X 3 1 Adrénoleucodystrophie (ALD) 1 Total: 144 63 11

Les difficultés du DPI moléculaire Trouver les conditions d amplifications Avoir une méthode de détection des mutations rapide et fiable La mise au point de chaque diagnostic est longue et délicate, on essaie de développer des tests applicables à une majorité de couples à risque de transmettre une même pathologie. (30 maladies monogéniques proposées au DPI. 5000 maladies rares associées à la mutation d un gène unique)

Les Techniques -La biopsieembryonnaire -La PCR -La FISH

L hybridation in situ avec des sondes fluorescentes le DPI chromosomique

Critères d éligibilité du DPI chromosomique Une anomalie chromosomique 1- Age maternel (réserve ovarienne) 2- Nombre de grossesses avec déséquilibre 3- Pas d enfant normal vivant

D.P.I. cytogénétique : technique X Y Fluorescent In situ Hybridisation ou FISH

DPI cytogénétique 1 étapes techniques : -Etalement des blastomères -Fixation du blastomère - Eliminer les débris cytoplasmiques (pepsine) -Hybridation (16 heures) FISH interphasique 2 3

DPI des anomalies chromosomiques FISH interphasique («en aveugle») Détecter les déséquilibres génomiques post méïotique de translocations équilibrées parentales

Méthode: FISH interphasique ETAPES TECHNIQUES : - ETALEMENT DES BLASTOMERES - ELIMINER LES DEBRIS CYTOPLASMIQUES (pepsine) - FIXATION DU BLASTOMERE - HYBRIDATION (16 heures) L LE PROBLEME DES SONDES

Mauvaise La stratégie «NECKER» Sondes «maison» validées Test sur lymphocytes témoins Test sur le couple (vérification de la translocation, détection de polymorphismes) Double lecture hybridation Faux négatifs Transfert d embryons atteints Faux positifs Moins d embryons pour le transfert

Utilisation de la FISH dans le DPI Maladies récessives liées à l X (tri des embryons) Translocations Recherche d aneuploïdies (déséquilibres dans le nombre de chromosomes)

Détermination du sexe des embryons Féminin Masculin

Translocation robertsonienne Les ségrégations méiotiques: diagramme du pachytène 14 13

Segregation meïotique chez les porteurs de translocation robertsonienne

D.P.I. -Translocation robertsonienne +

D.P.I - translocation robertsonienne Embryons non transférés

D.P.I - Translocation réciproque t(11;22)(q23;q11) 11 der 11 der 22 22

t(11;22)(q23;q11) Résultats de FISH théoriques Alterne 3:1 segregation Normal Equilibré +der(11) (-11)(-22)+der(22) Adjacent 1 +der(22) (-11)(-22)+der(11) der(11) (-11) der(22) (-22) (-22)+der(11)+der(22) (-11) Adjacent 2 (-11)+der(22) (-22)+der(11) (-11)+der(11)+der(22) (-22)

t(11;22)(q23;q11) Blastomère équilibré Blastomère adjacent 1 ( tri 22q et mono 11q)

trivalent ségrégation méiotique alterne B normal équilibré déséquilibré déséquilibré adjacente A déséquilibré déséquilibré C

A quadrivalent B C ségrégation méiotique normal équilibré déséquilibré déséquilibré déséquilibré déséquilibré alterne adjacente I adjacente II

Allèle muté F508del Allèle sauvage A B C

Les Problèmes: Pour le biologiste Pour le couple Pour la société: l éthique et la loi.

Pour le biologiste: les difficultés techniques Une cellule par lame Signal ou bruit de fond? (erreurs diagnostiques: PCR 3%;FISH 1%) Analyse en moins de 24 heures Mosaïques embryonnaires (Mise au point longue et lourde pour chaque test: entre 3 et 6 mois)

Le problème des mosaïques Iwarsson et al. Mol Hum Reprod 1999, 104:376-382 X, Y, 15, 16, 17, 18 Embryon normal homogène (27%) Embryon mosaïque normal/anormal (45%) Embryon anormal (12,5%) Embryon chaotique avec cellules normales ou non (15%)

Notre expérience FAMA Necker-Béclère (résultats préliminaires) Étude des embryons non transférés: 8 robertsoniennes 8 réciproques 24 embryons 24 embryons 4 embryons mosaïques (17%) 7 mosaïques (29%) La littérature: De 20 à 45% des embryons sont mosaïques (Wilton, 2002) J3 FISH

Quelques chiffres De 20 à 45% des embryons sont mosaïques (Wilton, 2002) J3 FISH 1 à 2% à 10-12SA sur villosités choriales (Kalousek et Veckemans,1996) Caryotype 0,1 à 0,4% à 16-18SA sur amniocentèse (Hsu et Perlis, 1990) Caryotype A la naissance?

Les mosaïques-conclusion Taux de mosaïcisme important. Biopsie de deux blastomères. Information aux couples lors de la consultation. Diagnostic prénatal.

Les difficultés pour le couple - La nécessité de passer par la FIV -Les faibles taux de grossesse -Les risques de grossesse gemellaire 27% - Le nombre restreint de diagnostics disponibles - Les délais d attente - Délais techniques incompatibles avec les délais biologiques.

RAPPORT D ACTIVITES DPI 2004-2005 FAMA Hôpitaux Necker-Enfants Malades /Antoine Béclère

Consultation (2004) Histoire et antécédents Moléculaire 73 couples Cytogénétique 89 couples Enfants atteints 29 8 Enfants décédés 11 4 Enfants sains 21 16 Nombre d I.M.G. 73 16 Nombre de F.C.S. 158 Génétique et Infertilité 9,5 % (7/73) 41 % (37/89)

REMANIEMENTS CHROMOSOMIQUES COUPLES PRIS EN CHARGE ET TENTATIVES 2005 Robertsonienne Réciproque Diag de sexe COUPLES 17 21 3 PONCTIONS 18 17 2 % embryons 60% 25% 50% équilibrés

ESHRE PGD Consortium Créé en 1997 Données 1999-2004 : Centres enregistrés : 5O Nombre de cycles FISH: 6400 Nombre de cycles PCR: 1500 Nombre de grossesses : 1500 Nombre de naissances : 1000 Nombre de faux diagnostics: >3? Human Reproduction Vol 22;n 2 pp323-326, 2007

Quelques chiffres En France en 2005: 774 600 naissances 100 centres agréés F.I.V. 39 000 FIV par an dont 10 000 I.C.S.I. 10 000 naissances par P.M.A 3 centres agréés D.P.I. 575 D.P.I. 65 naissances (2000-déc 2005)

L embryon est une personne Chez les grecs anciens»l animation du fœtus intervient au 40 ème jour pour les embryons mâles et au 83 ème jour pour les embryons féminins Notion de pré embryon (14 jours) GB et Espagne

La situation en Europe DPI autorisé avec loi spécifique: Danemark, Espagne, France, Norvège, suède. DPI autorisé sans loi spécifique: Belgique, Finlande Grèce, Italie, pays-bas, Royaume-Uni. DPI interdit: Allemagne, Autriche, Irlande, Suisse. Des divergences profondes. Notion de tourisme médical.

LES LEGISLATIONS EUROPEENNES: des disparités importantes. FRANCE ITALIE ESPAGNE ALLEMAGNE GRANDE BRETAGNE IRLANDE 1991:interdiction des mères porteuses. Interdit. Lois de bioéthique:1994 Lois de bioéthique:1988 D.P.I. autorisé. D.P.I. en sursis D.P.I. autorisé. D.P.I. interdit. D.P.I. autorisé. Interdit. 1 cas de selection de Recherches sur embryon sexe pour convenances humain pour 5ans. personnelles. F.I.V. pour couples stable F.I.V. pour couples stablef.i.v. autorisée pour les F.I.V pour couple marié. F.I.V. autorisée pour les depuis 2 ans. depuis 2 ans. Femmes celibataires Les spzs doivent provenir couples homo et célibataires. du mari. Don de sperme anonyme Utilisation du sperme et gratuit. du mari décédé pendant 6 mois. 30 000embryons congelés Pas de congélation des Pas de congélation (1 800 orphelins*) embryons. des embryons Utilisation du sperme post mortem autorisé I.V.G. autorisée depuis I.V.G. < 23 semaines. Interdit. 1975.( <12 semaines de grossesse).

La législation française Article L162-17 -Anomalie(s) responsable(s) doivent être préalablement identifiées - Consentement écrit du couple - Recherche uniquement de cette anomalie - Etablissement spécifiquement autorisé auprès de l Agence de Biomedecine.

Le diagnostic des aneuploïdies aneuploidy screening But: améliorer les résultats de la F.I.V. Il s agit de dépister des anomalies touchant d autres chromosomes que ceux de la translocation du couple. ( 21, 13, 16, 18, 22..) ESHRE: la majorité des centres pratiquent ce dépistage.(14,2% à 54% des DPI) L avis du C.N.E.

DPI et éthique Maladies curables ou non sévères Klinefelter, Turner... Typage HLA: (Fanconi) La position de la France Les problèmes techniques DPI de sexe pour «convenance personnelle» (en 2003-2004: 80 cycles) Dérives eugéniques

Loi de bioéthique: art.17 Le diagnostic biologique est autorisé,à titre expérimental: Le couple a donné naissance à un enfant atteint d une maladie génétique incurable entraînant la mort dès les premières années de la vie Le pronostic vital peut être amélioré de façon décisive par une thérapeutique issue d un embryon sans atteinte à l intégrité du corps de celui-ci. Restreint à la maladie génétique

Révisions des lois de bioéthique 2005 Création de l Agence de la Biomédecine Le recherche sur embryons surnuméraires Extension des diagnostics: tri 21, tri 16 Sexage Clonage thérapeutique et reproductif crime contre l espèce humaine Dépistage global sur l ensemble du génome (interprétation des résultats ) OUI 5ans NON NON NON NON

CGH sur chromosomes CGH sur microarrays ADN de référence ADN test (du patient) ADN de référence ADN test (du patient) Marquage des ADN Hybridation Révélation gain Analyse des rapports de fluorescence Résolution perte 5 Mb 1 à 3 Mb

Conclusion «Une Science avec conscience» Évaluation constante des paramètres techniques (I.C.S.I., suivi clinique des enfants) Maladie d une «particulière gravité» Nécessité de lois encadrant ces pratiques et qui évoluent.. lentement (Société, techniques..) Réflexion européenne.

IVG Interruption médicale de grossesse Sur demande de la mère Sans restriction Jusque 14 semaines d aménorrhée IMG Sur demande de la mère Doit être autorisé par un Centre Pluridisciplinaire de DPN Jusque au terme (40 semaines d aménorrhée)

Choix parental devant un risque Prendre le risque DPN DPI Pas de DPN Pas de risque Abstention Adoption Don de gamète (sperme, ovocyte) Don d embryon

Cytogénétique M. Le Lorc h S.P Romana M. Vekemans Moléculaire P. Burlet N. Gigarel A. Munnich Necker-Enfants Malades BDR et FIV N. Frydman G. Tachdjian R. Frydman Antoine Béclère