virologie EVALUATION DE LA PERFORMANCE DE TROIS TESTS DE DIAGNOSTIC DE L INFECTION A VIH A LOME (TOGO) RESUME

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1 Revue Bio-Africa - n , pp EdUCI 2010 virologie EVALUATION DE LA PERFORMANCE DE TROIS TESTS DE DIAGNOSTIC DE L INFECTION A VIH A LOME (TOGO) M. SALOU 1,2, A.Y. DAGNRA 1,2, K.D. MLAGA 2, A. EHLAN 1,2, K. ALI-EDJE 2, OURO-MEDELI 2, M. PRINCE-DAVID 1,2 RESUME Introduction : Les évaluations des tests de diagnostic Rapides/Simples (TDR) du VIH sont nécessaires pour la détermination d algorithmes de tests simples et rapides, utilisables au point de service pour le conseil et dépistage volontaire, la surveillance épidémiologique, la sécurité transfusionnelle et dans les services de consultations prénatales. Objectif : Evaluer la performance de trois (3) tests de diagnostic sérologique de l infection à VIH dont un (1) test ELISA (EQUIPAR HIV 1/2 recombinant) et deux (2) tests rapides/simples (HEXAGON HIV et FIRSTRESPONSE). Méthodes : L évaluation de la performance de trois tests pour le diagnostic de l infection à VIH à Lomé (Togo) a été réalisée au centre national de référence pour les tests VIH/SIDA/IST sis au CHU de Lomé TOKOIN. Les tests évalués ont été EQUIPAR HIV ½ recombinant, HEXAGON HIV et FIRST RESPONSE Sang total HIV Les sérums ont été collectés de Janvier à Juillet 2008 des malades hospitalisés au CHU Tokoin de Lomé ou non, présentant ou non des signes cliniques et ou biologiques faisant suspecter une infection à VIH/SIDA. Les tests de référence adoptés sur la base de l algorithme national en vigueur au Togo ont été un premier test sensible VIRONOSTIKA et un deuxième test sensible spécifique TRI-DOT. L IMMUNOCOMB II HIV1&2 Combfirm a été utilisé comme test n 3 pour valider les résultats. Le logiciel EPI Info version 6.04b (Epitable) a été utilisé pour l analyse statistique. Résultats : Le test EQUIPAR HIV1/2 a présenté une sensibilité de ; une spécificité de 82.8%. HEXAGON HIV a donné une sensibilité de, une spécificité de 90.1%. FIRST RESPONSE HIV CARD TEST avec une sensibilité de 99% et une spécificité de 98.1% peut être proposé comme test de diagnostic rapide (TDR) du VIH de première intention ou de deuxième intention. Conclusion : Les tests HEXAGON HIV et EQUIPAR HIV1/2 avec une bonne sensibilité () peuvent être retenus comme test n 1 dans la stratégie nationale du Togo. mo t s-c l é s : d i a g n o s t i c d u v i h- t e s t s r a p i d e s- e v a l u a t i o n de performance ABSTRACT Introduction : The centre national de reference pour le VIH et les IST au Togo (CNR-VIH/IST) is the head laboratory which qualify any test of serological diagnosis of HIV infection in Togo. This study was undertook in order to assess some new tests for the HIV national program of Togo. Objective : Assess the performance of three serological diagnosis tests for HIV/AIDS infection in Togo Methods : The evaluation of the performance of three diagnostic tests for HIV/AIDS infection was conducted at the National Reference Center for HIV/AIDS/STD in Lomé, Togo. The tests evaluated were EQUIPAR HIV ½ recombinant, HEXAGON HIV and FIRST RESPONSE whole blood HIV A total of 386 serum specimens from patients were collected from January to July Reference tests used by following the national algorithm in Togo were in first step VIRONOSTIKA, secondly TRI- DOT. IMMUNOCOMB II HIV1&2 Combfirm was used to confirm a diagnosis of HIV infection. 1- Laboratoire BIOLIM Université de Lomé /Togo bp CNR VIH / Laboratoire de Microbiologie CHU Tokoin/Lomé-Togo Correspondance : Mounerou SALOU

2 Revue Bio-Africa - n , pp Results : EQUIPAR HIV1/2 and HEXAGON HIV showed a sensitivity of but a specificity ranged 82, 8% to 90,1%. FIRST RESPONSE provided a sensitivity of 99 % and specificity of 98, 1%. Conclusion : EQUIPAR HIV1/2 and HEXAGON HIV tests can be use in first line in a diagnosis of HIV infection strategy. FIRST RESPONSE can be used in first or second line in a national algorithm for HIV infection diagnosis in Togo. Ke y w o r d s: d i a g n o s i s o f h i v- r a p i d t e s t s-pe r f o r- mance testing Introduction Les évaluations des tests de diagnostic Rapides/Simples (TDR) du VIH sont nécessaires pour la détermination d algorithmes de tests simples et rapides, utilisables au point de service pour le conseil et dépistage volontaire, la surveillance épidémiologique, la sécurité transfusionnelle, dans les services de consultations prénatales 1,2,3. La fiabilité d un diagnostic sérologique est fonction des paramètres de performance des tests utilisés pour sa réalisation. Ces tests rapides de dépistage doivent être de mise en œuvre facile pour tout prestataire de soins, avoir un coût de revient moindre et être utilisable sur du sang total. Le centre national de référence pour le VIH et les IST est la structure au Togo, qui donne l homologation pour tout test de diagnostic sérologique du VIH en vue d une autorisation de mise sur le marché Togolais. C est ainsi que le CNR évalue la performance de nouveaux tests pour le programme national de lutte contre le SIDA du Togo. L objectif de ce travail a été d évaluer la performance de trois (3) tests de diagnostic sérologique de l infection à VIH dont un (1) test ELISA (EQUIPAR HIV 1/2 recombinant) et deux (2) tests rapides/simples (HEXAGON HIV et FIRSTRESPONSE). MATERIEL ET METHODE Il s est agit d une étude d évaluation de Tests de Diagnostic Rapides (TDR) pour le diagnostic du VIH réalisée d octobre 2007 à juillet 2008 au Centre National de référence pour les tests VIH/IST (CNR/VIH/IST) situé au laboratoire de Microbiologie du CHU TOKOIN. L étude a porté sur un total de 386 sérums congélés à -20 C dont 180 sérums collectés entre janvier et février 2008 puis 206 collectés entre juin et juillet Les prélèvements ont été collecté chez des malades hospitalisés ou non au CHU Tokoin de Lomé présentant ou non des signes cliniques et/ou biologiques faisant suspecter une infection à VIH/SIDA. Caractéristiques des différents tests (voir tableau I) Tests de références Le CNR-VIH/IST ne disposant pas d un standard d or, la sérologie de référence a été déterminée à partir de l algorithme national. Cet algorithme a utilisé un premier test sensible VIRONOSTIKA et un deuxième test spécifique TRI-DOT. Lorsqu il ya une discordance entre les résultats obtenus de ces deux test, un troisième test, IMMUNOCOMB II HIV1&2 Combfirm a été utilisé comme test de confirmation. Principes des tests VIRONOSTIKA HIV Uni-form II Plus O Les cupules microelisa sont recouvertes spécifiquement d un mélange d antigène de VIH : p24 de VIH1, gp160 de VIH1, peptide ANT70 de VIH1 et peptide env. de VIH2 (acide aminés ). HIV TRI-DOT Les antigènes du VIH sont immobilisés sur une membrane poreuse d immuno filtration. IMMUNOCOMB II HIV1&2 Combfirm ImmunoComb II HIV 1&2 Combfirm est un test immuno-enzymatique indirect en phase solide (EIA). La phase solide est un M. SALOU, AY. DAGNRA, KD. MLAGA et al 8

3 Revue Bio-Africa - n , pp peigne de 12 dents constituées en paire, chaque paire de dents contient 6 spots, à raison de 3 spots par dent. EQUIPAR HIV 1/2 recombinant C est un test immuno enzymatique (ELISA) basé sur le principe Sandwich en une seule étape. La microplaque est sensibilisée par un mélange de protéines spécifiques (HIV 1-env [gp120, gp41], gag-1[p24, p17] et HIV 2-env-2[gp36]. Ce test ne distingue pas le VIH-1 du VIH-2. FIRST RESPONSE Sang complet HIV 1-2-O C est un test Immuno chromatographique (Rapide) pour la détection qualitative des anticorps de tous les isotypes (IgG, IgM, IgA) spécifiques au VIH1 incluant le sous type O et les anticorps de VIH2 séparément, dans le sérum, le plasma et le sang complet humain. C est un test discrimant pour HIV1 et HIV2 HEXAGON HIV C est un test de troisième génération basé sur une méthode immuno chromatographique. Le test utilise des protéines recombinantes qui représentent des régions immuno dominantes des protéines d enveloppe des virus VIH1 et VIH2. C est un test discrimant pour HIV1 et HIV2 Déroulement de l analyse L évaluation a été réalisée en deux temps. D une part, 180 échantillons de sérums congelés ont été utilisés pour évaluer les tests HEXAGON HIV, et EQUIPAR (HIV 1/2 recombinant) et d autre part, 206 échantillons de sérums congelés ont servi à évaluer le test FIRST RESPONSE HIV CARD TEST 1-2-O. Tous les échantillons ont été testés simultanément selon l algorithme national. Le résultat de la sérologie de chaque échantillon testé a été interprété selon les recommandations du fabricant. Les échantillons dont les résultats ont été indéterminés aux tests de référence ont été exclus de l analyse statistique. Méthode de calcul des paramètres de performance Spécificité (Sp) = Vrais négatifs *100/ vrais négatifs+faux positifs Sensibilité (Se) = vrais positifs *100/vrais positifs+faux négatifs Valeur prédictive positive (VPP)= vrais positifs/vrais positifs+faux positifs Valeur prédictive négative (VPN) = vrais négatifs/vrais négatifs+faux négatifs La spécificité est bonne si elle est supérieure ou égale à 98% La sensibilité est bonne si elle est supérieure ou égale à 99% Vrai positif : individu ayant la maladie Vrai négatif : individu n ayant pas la maladie Faux positif : un échantillon testé est déclaré «faux positif» à partir d un test évalué, si selon l algorithme, cet échantillon donne un résultat négatif Faux négatif : un échantillon testé est déclaré «faux négatif» à partir d un test évalué, si selon l algorithme, cet échantillon donne un résultat positif Test statistique Les intervalles de confiance des calculs de pourcentage ont été calculés au risque α = 0,05 de la loi binômiale : RESULTATS Les résultats des tests évalués EQUIPAR HIV1/2 recombinant, HEXAGON HIV et FIRST RESPONSE HIV CARD TEST 1-2-O sont présentés dans (le tableau II). Le test HEXAGON HIV n a pas donné de faux négatifs. Le seul cas positif au VIH2 aux tests de référence s est également révélé positif au VIH2 par HEXAGON HIV et FIRST RESPONSEHIV CARD TEST 1-2-O. Les différents indicateurs de performances des différents tests évalués sont consignés dans le (tableau III) (IC à 0.95 pour intervalle de confiance) : Le test EQUIPAR HIV1/2 recombinant a donné une sensibilité (Se) de et une spécificité (Sp) de 82.8% ; la valeur prédictive evaluation de la performance de trois tests de diagnostic de l infection à vih à Lomé (Togo) 9

4 Revue Bio-Africa - n , pp positive (VPP) a été de 75.9% et la valeur prédictive négative(vpn) a été de. Le test HEXAGON HIV a présenté une sensibilité de et une spécificité de 90.1% ; la valeur prédictive positive calculée a été de 82,05% et la valeur prédictive négative a été de. Le test FIRST RESPONSE HIV CARD TEST 1-2-O a présenté une sensibilité de 99% et une spécificité de 98.1% ; la valeur prédictive positive calculée a été de 98.1% et la valeur prédictive négative a été de 98.54%. Tableau I : Caractéristiques des tests évalués et des tests de Référence Tests Ag ou Ac utilisé supports Principe Durée des tests EQUIPAR HIV1/2 recombinant VIH1 :env.[gp120, gp41], gag [p24, p17] VIH2 : env. [gp36] Microplaque sandwich 2heures 30 min HEXAGON HIV Vironostika HIV Unit-Form II Plus O HIV TRI-DOT ImmunoComb II HIV 1&2 Combfirm FIRST RESPONSE WB VIH1-2-0 VIH1 :gp41, p24 VIH2 :gp36 VIH1 :P24, gp160, ANT70 VIH2 :Env. (aa ) Ag du grpe O VIH1 :gp41, gp120 VIH2 : gp36 Vih1 : gp120, gp41, p24, p31 VIH2 : gp36 VIH1: gp41, p24 VIH2: gp36 Ag du grpe O Bandes de cellulose Immunochromatographique 20 minutes Microplaques sandwich 2 heures Membranes poreuses Immuno chromatographique 10 minutes peigne Immuno enzymatique 1 heure 10 min Bandes de cellulose Immuno chromatographique 15 minutes Env.= enveloppe, gag = group antigen (antigène du groupe), gp = glycoprotéine, p = protéine, aa = acide aminé, Ag = antigène Tableau II : Résultats des tests évalués VP FP VN FN EQUIPAR HIV1/2 recombinant FIRST RESPONSE HIV HEXAGON HIV VP : vrai positif, FP : faux positif, VN : vrai négatif, FN : faux négatif Tableau III : les indicateurs de performance des différents tests évalués Paramètres de performance Test sensibilité spécificité VPP VPN EQUIPAR HIV1/2 recombinant [92,8-100] 82,8% [74,4-88,9] 75,9% [65,1-84,3] [95,2-100] HEXAGON HIV [90,6-100] 90,1% [82,1-94,6] 82,5% [69,6-98,8] [95-100] FIRST RESPONSEHIV CARD TEST 1-2-O 99% [93,9-99,9] 98,1% [92,5-99,7] 98,1% [92,5-99,7] 99% [93,9-99,9] M. SALOU, AY. DAGNRA, KD. MLAGA et al 10

5 Revue Bio-Africa - n , pp DISCUSSION L une des limites de notre travail est la non disponibilité d un standard d or. Toutefois un algorithme de trois tests combinés a été utilisé à savoir : VIRONOSTIKA comme test n 1 qui selon une étude réalisée au Togo en 2002 par DAGNRA et al 4 a présenté une sensibilité et une spécificité de et ce test a été recommandé en première intention pour le dépistage ou le diagnostic de l infection à VIH. Il en est de même que TRIDOT classé test n 2 et ImmunoComb II HIV1et 2 Combifirm utilisé comme test n 3. Ce troisième test présente une caractéristique particulière de révéler individuellement la présence ou non des anticorps dirigés contre les antigènes gp120, gp41, p24, p31 du VIH1 et gp36 du VIH2. Il est utilisé pour élucider les discordances entre VIRONOSTIKA et TRIDOT. La taille des échantillons utilisée a varié d un test à un autre. Cette taille dépend du nombre de test disponibles ; elle est de 108 pour EQUIPAR HIV1/2 recombinant, 148 pour HEXAGON HIV et 206 pour FIRST RESPONSEHIV CARD TEST 1-2-O. Les différences obtenues à l évaluation de ces tests peuvent être due soit à la taille des échantillons soumis à l épreuve, soit au type de population dont proviennent les échantillons ou encore aux différentes étapes de l infection que présente cette population. Les populations africaines sont exposées à de nombreux agents infectieux dont la production d anticorps peut être à la l origine des fausses positivités. L OMS recommande une sensibilité 99% et une spécificité 95%. A l analyse, ce test ELISA est d exécution simple et présente une sensibilité au dessus de celle recommandée () donc peut être utilisé comme un premier test (Test1) de la stratégie nationale, et pour la sécurité transfusionnelle. Des deux tests rapides évalués, FIRST RESPONSE HIV CARD TEST 1-2-O a été le plus performant avec des paramètres supérieures aux valeurs recommandées par l OMS. La comparaison de ces paramètres à ceux rapportés par le fabricant à travers une étude, a montré une similitude. Ces auteurs ont obtenu une sensibilité de et une spécificité de 99.18% sur un total de 242 échantillons. Ce test peut être recommandé en première ou deuxième intention au Togo selon les critères de l OMS ; par rapport à HEXAGON HIV qui ne peut être utilisé qu en première intention pour sa sensibilité de. Toutefois ces tests présentent l avantage de réalisation facile et discriminatoire puis de temps d exécution plus court. Conclusion Suite à l évaluation de ces trois tests et sur la base des recommandations de l OMS, le test EQUIPAR HIV 1/2 recombinant avec une sensibilité de a pourra être retenu comme test de première intention dans l algorithme national de dépistage et pour la sécurité transfusionnelle. Il en est de même pour HEXAGON HIV qui a aussi donné une sensibilité de. Par contre, FIRST RESPONSE qui a présenté une sensibilité (99%) et une spécificité (98.1%) supérieurs au seuil fixé par l OMS est un test performant et pourra être proposé surtout dans les unités périphériques pour un diagnostic correct et efficace du VIH. evaluation de la performance de trois tests de diagnostic de l infection à vih à Lomé (Togo) 11

6 Revue Bio-Africa - n , pp REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1- CDC/WHO/APHL : Directive pour l évaluation des techniques de dépistage du VIH en Afrique, Décembre ONUSIDA/OMS : l Epidémie Mondiale du SIDA, Décembre Rouet F. [et al]: Field evaluation of Rapid HIV serial serology testing for diagnostic and differenciation of HIV type 1 (HIV1), HIV 2, and dual HIV1-HIV2 infection in west Africa pregnant. Journal of Clin Microb, Sept 2004, 42, ( 4 ): Dagnra A.Y, Prince-David M., Gaba J., Ouro-Akpo M. T., Segbene A. Y., Ali-Edjé K., Ehlan A., Bougoudogo F. : Evaluation de la performance de huit test de diagnostic de l infection a VIH à Lomé (Togo). Med Trop 2002, 65, (5) : Kannangai R., Prabu K, Vincent AA, Vijayakumar TS, Sridharan G.: Performance evaluation of four different kit available in the indian market, for the rapid detection of HIV antibody; Indian Journal of Medical Microbiology, 2003, 21, (3): Koblavi-Deme Stephania [et al]: sensivity and specificity of human immunodefisciency virus rapid serology essay and testing algorythm in a antenatal clinic in Abidjan, Ivory Coast. Journal of Clin Microb. May 2001, 39(5), : Tourette-Turgis C., Rébillon M.: Démarche volontaire de dépistage de l infection VIH : guideline de counseling, décembre Strasbourg, Comment Dire : Thomas Klinkait : Test VIH; Forum Med. Suisse 2008, 8, (15),: M. SALOU, AY. DAGNRA, KD. MLAGA et al 12