RÉSUMÉ These de doctorat intitulee Recherches concernant la dynamique de principal processus métabolique a chienne dans la période de lactation

Transcription

1 RÉSUMÉ These de doctorat intitulee Recherches concernant la dynamique de principal processus métabolique a chienne dans la période de lactation MOTS CLE : métabolisme, lactation, chienne Le but de cet etude a ete de trouver les particularites de la dynamique des principaux processus metaboliques durant la lactation de chienne, aussi bien que de faire une recherché dans les relations intraspecifiques de ces processus metaboliques en function de la taille ou afin de Concretement, nous avons eu l intention de mesurer les suivantes variables: les constantes erythrocytaires directes et derivees, la serie leucocytaire, le nombre des plaquettes, les principaux constituants du profil concernant les proteins, les lipides et les mineraux, l activite de la phosphatase alcaline et de determiner l expression du gene de recepteurs concernant la prolactine. Pour remplir l objectif deja etabli concernant la these du doctorat, on a etabli les suivantes objectifs: - les études concernant la dynamique des constituants principaux du profil métabolique par recherches morpho hématologie et biochimiques sanguines durant la période de l action de chienne. - l identification et la quantification des récepteurs de la prolactine par qrt-pcr - les conclusions concernant le profil métabolique par l intégration dans un ensemble d informations et la comparaison des valeurs de référence d espèce ; aussi les conclusions de l analyse des modifications d expression du gene de receptors concernant la prolactine. La première partie (Etude bibliographique) est composée de deux chapitres qui traitent l état actuel de connaissances concernant la morpho physiologie de la glande mammaire de chienne et de particularités métaboliques de chienne durant la Le premier chapitre, intitule Particularités concernant la morpho physiologie de la glande mammaire de chienne est compose de cinq sous-chapitres. Dans le premier souschapitre, il y a une analyse de la glande mammaire de chienne. Dans le deuxième chapitre, il y a les caractéristiques principales présentées en détail concernant la physiologie de la glande mammaire : lactogenese et interruption de sécrétion du lait. Le troisième chapitre présente le métabolisme des constituants du lait (lactose, lipides, protéines, minéraux et vitamines), aussi bien que la dynamique de modifications métaboliques des constituants de lait durant la Le deuxième chapitre, intitule Etat actuel de connaissances concernant les particularités de processus métabolique de chienne durant la lactation est compose de quatre sous-chapitres qui traitent les particularités concernant le métabolisme des hydrates de carbone, des lipides, des protéines ou des minéraux de chient durant la

2 Le deuxième partie (Des recherches propres) est composée de 6 chapitres ou on trouve : le lieu et la période d études et de recherches propres, les animaux, les matériaux et les méthodes utilisées, les résultats, les discussions et les conclusions partielles et générales. Dans le troisième chapitre on trouve le lieu et la période de recherches présentes en détail. Le lieu est représente par la Clinique de Maladies Internes de la Faculté de Médecine Vétérinaire Bucarest, aussi bien que le département de Biologie Moléculaire et Biochimie, et d Hématologie de l Institut de Diagnostic et Sante Animale (IDSA) de Bucarest. La période dans laquelle les études se sont passes a été durant les années Dans le quatrième chapitre, qui est structure en huit sous-chapitres, on présent les animaux, les matériaux et les méthodes utilisées dans la recherche. Dans les chapitres V, VI et VII, on présent les résultats des recherches propres, leur discussion et les conclusions préliminaires. Le cinquième chapitre est intitule Evolution du profil morphologique et biochimique du sang de chienne durant la dernière période de gestation et durant la période de lactation. Les recherches décrites dans ce chapitre ont été réalisées sur des chiennes durant la période de lactation, qui appartient à la race de Berger Allemand, avec des états de 1 an à 8 ans. La recherche a eu lieu entre la 42-eme journée de gestation jusqu'à la 57-eme journée de Les analyses effectuées durant l examen morpho hématologique ont été: analyser les constantes erythrocytaires directes (le nombre d erytrhocytes, hematocrite, hemoglobine), les constants erythrocytaires derivees (VEM, HEM, CHEM) et la numeration leucocytaire. L evolution de constantes morphologiques du sang a implique la diminution au commencement de lactation du nombre des erythrocytes, de l hemoglobine et d hematocrite jusqu a une valeur proche de minimum, l augmentation pendant les suivantes deux semaines et le maintien d un niveau relativement constant jusqu a la fin de lactation, les modifications enregistrees influences de la dynamique du volume sanguin. Le nombre des leucocytes a depasse la limite maximale de la plage de reference dans preque toutes les semaines de la periode de recherché, relationee avec une augmentation du stress caracteristique a periode puerperale. Apres cinq semaines de lactation, la numeration leucocytaire revient aux niveaux comparables avec celles de la periode de repos de reproduction. Les analyses d examen biochimique sanguin sont composes du dosage des constituants principaux du profil proteique: la protein totale, l albumine,la globuline, le rapport albumineglobuline; les constituants principaux du profil des lipides; cholesterol, lipides, tryglicerides; les constituants principaux du profil mineraux:ca, P, Mg; l activite de phosphatase alcaline. Les modifications biochimiques sanguine ont montre des diminutions signifiantes des concentrations des proteines seriques et des albumines, notamment a la fin de la gestation et au commence de lactation et des augmentations des fractions de globuline. Il y aussi une diminution de l anabolisme proteique dans la premiere semaine après la parturition, suivie d une augmentation maximale dans les semaines 4-5 de Le fait a ete associe a une tendence d augmentation de l anabolisme proteique (hepatique).

3 L augmentation des valeurs de tryglicerides qui depassent les valeurs du temoin a la fin de gestation et dans la derniere moitie de la periode de lactation et la reduction de ces valeurs au commence de lactation determinent l intensification de la mobilisation des lipides et l intensification de la synthese de novo qui ont lieu après la parturition. La lipidemie et la cholesterolemie se caracterise par l existence des valeurs augmentees au commence de la lactation et la reduction constant de ces valeurs durant le premieres semaines de la lactation, ce qui montre un anabolism lipidique augmente, probablement grace a la galactopoiese. Le sixieme chapitre intitule Particularites du profil morphologique et biochimique sanguine de chienne durant la periode de lactation, en function de l ordre de lactation et la taille de la race contient deux sous-chapitres ou on analyse les influences de la parite et de la taille de race concernant le profil metabolique de chiennes dans la periode de Pour etudier l influence de la parites concernant les parameters hematologiques, 14 chiennes qui appartient a la race Berger Allemand, sains du point de vue Clinique, ont ete divisees en deux groupes: des chiennes primipares et des chiennes multipares. Les resultats de l examen morphohematologique ont montre l augmentation de nombre des erythrocytes, dans le meme temps avec la reduction de la concentration d hemoglobine grace a la parite. Ce fait a evidentie dans ce mode une correlation des valeurs de ce parameter avec l ordre de parite des chiennes dans la periode de Cette correlation s applique aussi dans le cas des constantes erythrocytaires indirectes. On peut remarquer l augmentation des valeurs VEM et la reduction des valeurs HEM et CHEM. Les examens quantitifs et qualitatifs de la ligne blanche sanguine sont influencees de l etat physiologique et de l ordre de la parite. Ainsi, on constate que les leucocytes totales et les lymphocytes presentent des valeurs augmentees aux deux groupes de chiennes (primipares et multipares) en comparaison avec la valeur maximale de la plage de refference. On peut remarquer l augmentation des valeurs mentionnees ci-dessous dans une maniere inverse proportionnelle a l ordre de parite. Les valeurs moyennes de la proteinemie totale aux groupes des chiennes primipares et multipares sont situees sous la limite inferieure de la plage de refference, la reduction de la proteinemie etant inverse proportionnelle avec la parite et la reduction d albumine etant proportionnelle avec la parite. Les globulines ont valeurs qui depassent la limite superieure de la plage de refference pour ce parametre aux chiennes multipares. Le dosage de la lipemie a evidentie l augmentation des valeurs de lipides proportionnelle a l ordre de Du point de vue de cholesterolemie on peut constater des augmentations legeres des valeurs moyennes presentes a chiennes primipares, en comparaison avec les valeurs du groupe de chiennes multipares. Les tryglicerides seriques presentent une augmentation legere, proportionneles a la parite, mais considerant le cas de tryglicerides et aussi le cas de cholesterol, les valeurs enregistrees a chiennes primipares et multipares sont presque pareils. Dans l etude d elements du profil minerau avec signification et importance en lactation, on peut constater une augmentation des valeurs de calcemie et de phosphoremie proportionnelle a la parite. En ce qui concerne le magnesium, les valeurs de ce parametre se diminuent a

4 l augmentation de l ordre de lactation et ells sont situees proche de limite superieure de la plage de refference de cet parametre. L influence de la taille concernant les modifications des parametres hematogiques qui apparaient durant la lactation a ete testee sur chiennes dans la periode de lactation, qui appartient aux races de petite, moyenne et grande taille. Les recherché morphohematologiques efectuees ont aide pour etablir l augmentation de nombre des erythrocytes, de l hemoglobine et de hematocrite proportionnelle a la taille. Les valeurs oscillent encore entre limites physiologiques. Ces modifications evidentient le necessaire metabolique augmente de la race de taille grande, etant connu le fait que la capacite de la productivite du lait est pareile a la poids corporel. Les constantes erythrocytaires derivees ne presentent pas de differences importantes entre les trois groupes des sujets diferenties en function d evolution corporelle, ayant des valeurs presque pareils aux VEM, HEM, CHEM enregistrees aux races de taille grande et moyenne. La recherche de la ligne blanche sanguine evidentie l augmentation du nombre de leucocytes en comparaison aux valeurs de refference du parametre. C est une modification qui ne peut pas etre en relation avec le poids corporel, l augmentation des lymphocytes proportionnelles a la tailles et l existence d un pourcentage de monocytes et de granulocytes qui ont des valeurs normales. Le profil serique des proteines totales et des fractions albuminiques et globuliniques evidentie des valeurs plus augmentees aux races de petite taille en comparaison aux races de grande taille. Ca signifie que la petite taille a une mobilisation/synthese plus intense des proteines et dans le meme temps une intensification du metabolisme proteique ou un determinisme genetique des differences de valeurs. En ce qui concerne les variations du profil lipidique, on peut constater l augmentation proportionnelle a la taille du niveau de triglycerides et de lipides totales aux chiennes de trois categories. On constate que les observations ci-dessous confirment les etudes concernant la reduction signifiante de la quantite de graisse du corps aux races de grande taille. On doit tenir en compte que l intensification de la mobilisation des acides gras de graisse produit des nouvelles resources pour la production du lait, fait qui est connu. La concentration serique du Ca, P et Mg a evidentie des augmentations proportionnelles a la taille des niveaux d elements des chiennes dans la periode de L augmentation de l activite de phosphatase alcaline proportionnelle a la taille des chiennes dans la periode de lactation est en relation a l intension du metabolisme du Ca. Dans le VII-eme chapitre, qui est le dernier chapitre, des recherches propres, intitule Remarques concernant l examen RT-qPCR dans l expression génique des récepteurs pour la prolactine a chienne dans la période de lactation, la modification d expression des récepteurs pour la prolactine (PRLR) dans la glande mammaire a été analyse a chienne dans la période de Le tissu mammaire a été prélève de 16 chiennes saines du point de vue clinique, qui appartiennent a race Berger Allemand, avec des âges entre 1-5 ans et la période de lactation

5 examinée a été de parturition jusqu au sevrage. ARN total a été extrait, depuis soumis a la contre-transcription, depuis il a été amplifie cadn, en utilisant la méthode real-time PCR. Trois expérimentes ont été utilises, en fonction de la période de lactation et de la disponibilité du matériau biologique soumis a l analyse. Ainsi, pour le premier expérimenta, on a selecte 16 chiennes (saines du point de vue clinique, race Berger Allemand, des âges entre 1 5 ans), en étapes différentes concernant le niveau de l expression génique postpartum (4 chiennes), la 8- eme journée postpartum (4 chiennes), la 24-eme postpartum (4 chiennes) et post sevrées (4 chiennes). Pour les autres deux expérimentes, on a prélève des échantillons de la même chienne et le niveau de l expression génique pour les récepteurs de prolactine (les journées 8-eme, 16- eme, 24-eme, 32-eme postpartum et post sevrage) a été supervise pas a pas. En ce qui concerne le premier expérimenta, on constate une augmentation d expression génique des récepteurs pour la prolactine dans la période de lactation, en comparaison aux périodes postpartum et ensuite la période de sevrage qui a une valeur maximale dans la 8-eme journée. La conclusion est que l expression PRLR dans le tissu mammaire augmente significativement que la glande mammaire évolue progressivement de repos reproductif a Concernant les autres deux experiments, on peut observer une repetabilite des tendances d augmentation/réduction de l expression génique pour les récepteurs de prolactine pareille à la repetabilite de premier experiment, mais dans ce cas elle est en rellation avec la dynamique d expression pour la même chienne. Ainsi, on constate une repetabilite de la tendance d augmentation de l expression génique commencent a la période postpartum, avec une valeur maximale dans la 8-eme journée et ensuite elle a une tendance de réduction, avec une valeur minimale dans la période de sevrage. La variation individuelle dans le cas d analyse de l expression génique peut être expliquée par le fait que l intensification d expression génique des récepteurs durant la période de lactation est due à la succion de lait de la glande mammaire. Les experiments effectués ont evidentie la possibilité de valider les déterminations d expression génique pour les récepteurs de prolactine, c'est-à-dire que la méthodologie décrite peut être bien utilisée dans le suivi hormonal comme une méthode propre, mais aussi comme une méthode complémentaire concernant les techniques déjà consacrées. Contrairement aux techniques sérologiques, on doit dire que la sensibilité de la détermination d expression génique offre la possibilité réelle de rechercher les mécanismes d augmentation/réduction de la synthèse de prolactine. Ainsi, en parlant de déterminations effectuées au niveau d ARNm, la précision de réponse a stimulus externe est plus grande en comparaison aux méthodes indirectes de dosage hormonal. Le VIIIème chapitre présente les conclusions générales de cette étude. Le IXème chapitre présente la bibliographie.