Comment déterminer le bon moment de l accouplement Suivi de chaleurs : quoi de neuf CRECS Philippe MIMOUNI Xavier LEVY Centre de Reproduction des Carnivores du Sud- Ouest www.vetreproduction.com Chienne Rottweiler de 3 ans Amenée à la saillie en Allemagne au 12 éme jour de chaleurs Saillie correctement Restée vide Pourquoi est ce compliqué? 50 à 80 % des cas d infertilité sont liés à une mauvaise détermination du moment de la saillie ou de l IA Nécessité du suivi de chaleurs. 1
Pourquoi est- ce compliqué? Signal hormonal= pic d hormone LH Ovulation 48 heures après Les ovocytes ovulés sont immatures et doivent mûrir environ 48 heures Les ovocytes dégénèrent plus ou moins vite 2 jours de fertilité optimale sur l ensemble des chaleurs LES CHIENNES SONT FECONDEES: 2 à 4 JOURS APRES L OVULATION Durée de Gestation Regina, chienne Berger Allemand de 4 ans Durée apparente (accouplement- mise bas): >57 à 70 jours Durée réelle (ovulation- mise bas): > 62 à 64 jours (63 en moyenne) A produit 2 chiots, nés le 28 octobre Une seule saillie, le 23 août Question: a- t- elle été saillie au bon moment? DG= 64 j intervalle fécondation - mise bas: 59 à 61jours >(60 en moyenne) Tania, chienne Staffordshire Bull Terrier de 2 ans A produit 1 chiot, né le 15 décembre Deux saillies, les 18 et 19 octobre Question:a- t- elle été saillie au bon moment? DG=58 j Thalie, chienne Berger Allemand de 2 ans A produit 2 chiots, nés le 13 février Deux inséminations, les 14 et 15 décembre Question: a- t- elle été saillie au bon moment? DG=60-61j 2
ATTENTION AUX IDEES FAUSSES Une chienne n est pas forcement «prête» entre le 10 ème et 15 ème jour de ses chaleurs L acceptation du mâle n est pas un bon critère Critères subjectifs Nombre de jour de chaleurs Variations de 5 à 30 jours Acceptation du mâle par la chienne 2 jours avant ovulation ( pic LH) Acceptation de la chienne par le mâle Taille de la vulve Aspect des écoulements Critères objectifs Frottis vaginaux Mesure de la résistivité vaginale Aspect endoscopique du vagin Bandelettes réactives Dosage de progestérone Dosage de LH Échographie ovarienne 3
Frottis vaginaux Modifications des cellules vaginales sous l influence des hormones Kératinisation des cellules ( coloration de Harris Shorr) Nécessité de faire un suivi Frottis atypiques 4
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Evolution du Frottis vaginal Les frottis vaginaux? Dosage de la LH chez la chienne Les frottis vaginaux ne permettent pas de détecter l ovulation permettent de savoir période dépassée Kit semi quantitatif de détermination du pic LH ( 48 heures avant ovulation) test Witness LH Péremption très courte Intérêt: chienne stérilisée??? Hormone peptidique peu stable ( dosage dans les 48 heures ) 7
Mesure de la résistivité du mucus vaginal LH peak Ovulation Aussi fiable que frottis vaginal Nécessite rigueur et répétition Dosage de Progesterone ne permet pas de déterminer le jour exact de l ovulation CRECS Progestéronémie chez la chienne Dosage de Progestérone Indications Détermination de la date d ovulation Kystes lutéaux ou tumeurs gonadiques Détermination du part Aucun intérêt dans le diagnostic de gestation Suivi de gestation (insuffisance lutéale) Détermination du stade du cycle ( basal en anoestrus) Période préovulatoire Ovulation vers 7-10 ng/ml ( 4-8 selon labos) Période post ovulatoire Les différentes méthodes Évolution de la progestéronémie Impossible de dire qu une chienne est fécondée à un taux précis de P 8
Interprétation du dosage 1ng/ml=3,18 nmol/l Prélèvements Anoestrus < 1ng/ml Proestrus augmentation dans les derniers jours Œstrus : Metoestrus : 15 à 80 ng/ ml Mise bas imminente < 2 ng/ml Pic LH 2-3 ng/ml Ovulation : 5 à 10 ng/ml Tube sec ou hépariné Volume min 200 µl plasma ou sérum Conservation 8 jours 4 C 2 semaines - 20 C 1 an semi- quantitatif / Quantitatif? Techniques de Dosage Laboratoires ( RIA, Chimiluminescence, Immuno enzymologie) à étalonner Kits de dosages semi quantitatifs Discordances de 10 à 47% des cas!! Pb de péremption et réalisation technique Une coloration par tranche ( inf à 3 ng/ml, entre 3 et 8 ou sup à 8) Ovucheck Premate, ovulation test ( BVT) ATTENTION AUX UNITES Progestéronémie: 2 étapes 1 ng/ml 3 nmol/l 9
Début d augmentation de la progestéronémie Varie peu à l ovulation >England 2002: La progestéronémie atteint 2 ng/ml: le jour du pic de LH - dans les 24 heures qui suivent le pic de LH Progesterone ng/ml 21 18 15 12 9 6 3 0 Ovulation -10-9 -8-7 -6-5 -4-3 -2-1 0 1 2 3 4 5 6 7 Varie beaucoup à la fécondation (saillie) Début d augmentation de la progestéronémie Pg 18 Progesterone ng/ml 21 18 15 12 9 6 3 0 Ovulation Progesterone plasmatique (ng/ml) 16 14 12 10 8 6 4 2 0 Délai variable 9h00 21h00 9h00 15h30 13h45 20h00 15h00 20h00 9h00 14h30 20h30 9h30 15h00 19h00 17h00 20h00 10h30 30/10 31/10 02/11 03/11 04/11 05/11 06/11 07/11 08/11 09/11 Dates et Heures des prises de sang Ovulation Pg -10-8 -6-4 -2 0 2 4 6 A retenir Inconvénient «cycle long» Valeur à l ovulation dépend du laboratoire Il n existe pas de valeur universelle! Evolution est importante Chienne berger Allemand 3 ans 13 éme jour des chaleurs: Pg = 1,8 ng/ml 15 éme jour des chaleurs : Pg = 2,3 ng/ml 16 éme jour des chaleurs : Pg = 3,2 ng/ml Progestérone à la saillie : AUCUN intérêt? 17 éme jour des chaleurs : Pg = 4,3 ng/ml 18 éme jour des chaleurs : Pg = 5,4 ng/ml 19 éme jour des chaleurs : Pg = 7,2 ng/ml 10
Principe du suivi de chaleurs En réalité! Suivi de frottis Commencer les dosages au début de la kératinisation Frottis Echographie ovarienne pendant la coloration frottis Dosage de P Premier contrôle aprés cinq ou six jours de chaleurs ( si les propriétaires n'ont pas bien détecté le début des chaleurs) Frottis vaginal Metoestrus: chienne n'est plus féconde Suivi de chaleurs Prooestrus peu avancé Fin de prooestrus Oestrus Contôle Frottis 3à4 jours plus tard Prooestrus Contrôle 2 ou 3 jours plus tard Prooestrus Fin de prooestrus Frottis deux jours plus tard Oestrus Dosage de progestérone Dosage entre Taux basal Entre 5 et 10 ng/ml 15 et 25 ng/ml inf à 1ng/ml période ovulatoire (variations selon labos) Contrôle saillie immédiate 3 jours plus tard Dosages quotidiens Saillie aprés ou 48 heures tous les deux jours Taux basal inf à 1ng/mlI Entre 1 et 5 ng/ml Entre 5 et 10 ng/ml période ovulatoire frottis dès le 5-6ème jour des chaleurs combiner les frottis vaginaux et les dosages de progestérone: si frottis + clinique évoquant un prooestrus: contrôle tous les 3 à 5 jours si frottis + clinique évoquant un oestrus: dosage de progestérone Suivi de chaleurs (suite) Détermination de la date de l ovulation Pg basale: la chienne n a pas commencé à ovuler on peut attendre 4 à 6 jours PIC LH 2 à 3 ng/ml Pg en début d augmentation (1 à 3 ng/ml): ovulation imminente contrôle 1 ou 2 jours plus tard OVULATION 5 à 10 ng/ml Moment OPTIMUM: 48/72 heures post ovulation Pg vers 5 à 10 ng/ ml: ovulation «étalonner» cliniquement son laboratoire La progestérone varie beaucoup au moment de la fécondation 11
Inséminations après ovulation L avenir Accouplement naturel ou IA en semence fraîche: si 2 saillies ou IA: 1 jours et 3 jours après ovulation est idéal Si une seule saillie ou IA : idéalement 2/3 jours après ovulation Diagnostic échographique de l ovulation Si IA en semence congelée ou réfrigérée: idéalement 2 à 3 jours après ovulation Ovulation Limites Spontanée 2 à 5 jours après le pic de LH Ovocytes primaires non fécondables Maturation de 48/72heures Période optimale = 2/3 jours après ovulation Sperme frais 5 jours Sperme réfrigéré 2 jours Sperme congelé 12 heures Ovulation chez la chienne variable? En fonction des individus ( entre 5 et 8 ng/ ml?) Sperme congelé ou de mauvaise qualité >>>> Echographie Difficultés de réalisation Bourse graisseuse Aspect d un follicule pré ovulatoire proche d un corps jaune en début d évolution Necessité suivi Les nouveaux échographes sont plus performants mais nécessité d utiliser des sondes de haute fréquence ( 7.5 à 12 Mhz) Parfois nécessaire de raser 12
Situation des ovaires Position sous- lombaire en général 3 eme ou 4 eme apophyse transverse lombaire En regard du pôle caudal du rein ( droit plus cranial) En contact avec paroi abdominale Positionnement : Décubitus latéral droit ( on cherche le gauche en premier) puis gauche Position debout Trouver les ovaires Commencer par ovaire gauche Repérer le pôle caudal du rein et balayage crânio caudal et médio latéral Le stroma ovarien est légèrement moins échogène que le cortex rénal Cônes d ombre de bord et renforcement posterieur Difficultés Anoestrus Présence de gaz Format de la chienne Présence de graisse intra-abdominale Race, qualité de la peau Difficiles à visualiser car petite taille Structures folliculaires difficiles à objectiver et très petites < 2 mm 13
Début Pro- Oestrus Dét Position plus caudo-ventrale des ovaires Contours mieux visualisables Image meilleure en coupe longitudinale Taille 1.5 cmx 1 cm Nombreux petits follicules à paroi mince Taille des follicules 2 à 5 mm Croissance rapide en 2 ème partie du Pro-oestrus Follicules préovulatoires 0.95 Période préovulatoire Taille plus importante des ovaires 3 sur 1.5 cm Aspect des follicules Diminution du nombre Croissance rapide à partir du 7 ème jour Taille max juste avant ovulation 6 à 9 mm Follicules de taille variable Epaississement net de la paroi folliculaire ( 1 mm) Luteinisation pré-ovulatoire? 14
Ovulation Ovaires Forme plus ronde Marges irrégulières : «ovaire en grappe» L ovaire prend une forme homogène et devient difficilement visualisable pendant 1 à 2 jours Follicules :différents aspects Disparition des images folliculaires En totalité ou Partiellement Plus fréquemment : persistance de structures anéchogènes ou hypoechogénes plus petites que ls follicule préovulatoires Possibilité de follicules non ovulés Dans les heures suivant l ovulation : parfois présence de liquide autour de l ovaire P= 5,65 ng/ml 7,86 Période post- ovulatoire Ovaires Aspect irrégulier Apparition de corps jaunes Paroi plus épaisse, centre anéchogène réduit, taille légèrement supérieure aux follicules Parfois existence de structures rondes anéchogènes ( 30 % des cas) Corps jaunes CJ p 42 Déforment l ovaire Parois plus épaisses que follicules Contenu souvent légèrement echogéne 15
La Puberté de la chienne Age aux premières chaleurs variable 6 mois à 15 mois ( max 24 mois) Dépend de la race/taille Aspect parfois modifié des premières chaleurs Chaleurs silencieuses Chaleurs fractionnées ( Split heat) Facteurs modifiant la fréquence des chaleurs Age Jeunes parfois Chaleurs atypiques Chiennes âgées Relation au sein de la meute Chaleurs synchronisées ou inhibées Traitements hormonaux Progestagénes, antifongiques Alizine, Antiprolactine Race Jack Russell en chaleurs tous les 2 mois Chaleurs en mars à 12 mois Chaleurs en mai Pertes de sang en aout 16
Berger allemand de 2 ans Chaleurs Fractionnées ou Split Heat Chaleurs anovulatoires Chaleurs à 3 mois et demi d écart Consultation vulve dilatée CKC de 5 ans 04/08 Vulve dilatée, Pas de pertes P= 0, 14ng/ml FV oestrus 06 Vulve dilatée Pas de pertes P= 0, 25 ng/ml Fv oestrus 10/08 Vulve très dilatée pas de pertes P= 0,33 ng/ml Fv oestrus 16/08 vulve pas dilatée pas de pertes P< 0, 10 ng/ml Fv oestrus J8 oestrus P=0,54 J8 Oestrus P=1,78 J10 oestrus P= 6,51 J12 oestrus P=2,25 J14 oestrus P= 9,25 Saillie J15 ET J17 J20 metestrus P =45,60 Chien Loup de sarloos J 10 oestrus P= 3,35 J12 oestrus P=2,87 J18 metoestrus P=1,56 17