Proposition de développement d une stratégie de contrôle de la cysticercose par l amélioration de la filière porcine Ronan Jambou (IPM) Harentsoaniaina Andriamanivo (DRZV) V Porphyre (CIRAD) 1
2 Présentation des activités de l Institut Pasteur
8 unités de recherche Paludisme 4 axes de recherche majeurs Maladies émergentes Recherche clinique Développement/évaluation tests diagnostiques Résistance aux anti infectieux Virologie Peste Mycobactérie Bilharziose i Entomologie Immunologie (2010) Bactériologie (2010) 4 objectifs stratégiques Renforcement deséquipes Mise en place de plates formes Collaboration loco régionale Partenariat international i l/ RIIPP 3 Présentation des activités de l Institut Pasteur
Activités de service 3 lb laboratoires de services CBC : 5 biologistes / 30 personnes 250 400 patients / jours (en cours d accréditation) LHAE : 2 biologistes eau, aliments, exportation accrédité COFRAC LES : 2 biologistes i produits halieutiques laboratoire agréé (2010) Centre de vaccination international 4 Présentation des activités de l Institut Pasteur
Epidemiology Map shown on WHO conference called «Implementing a global program for combating cysticercosis», 19-21 sept, 2006 5-50 000 000 infected people - 50 000 deaths per year
Taenia solium life cycle LARVAL FORM 1 First cause of seizure In tropical countries CYSTICERCOSIS cysticerci 4 Loss of value =2/3 3 b FECES a 2 TAENIASIS PROGLOTTIDS AND EGGS ADULT FORM 6
Human diagnosis HUMAN Neuro-imaging = poorly available serological test = EITB = reference test (antigen detection) PCR ANIMAL Tongue palpation Serological test = no 7
Strategy to eradicate Cysticercosis QC = Meat Tests Seizures diagnosis: (PCR, WB, RDTs) CYSTICERCOSIS cysticerci Livestock Tests FECES a TAENIASIS Good rearing practice b Treatment 8
Objectifs Développer des tests biologiques simples utilisables en élevage pour le dépistage des cochons atteints de cysticercose Développer un guide de «bonnes pratiques» adapté au contexte locale (élevages commerciaux, élevages traditionnels) pour éviter la contamination par la cysticercose Développer un système qualité reconnu pour rassurer les consommateurs 9
Développement guide Plan d action DRZV/DSV/IPM Guide de bonne pratique DRZV/DSV Test du plan d action en élevage commerciaux - Sélection «élevages commerciaux» - Utilisation du guide de bonne pratique d élevage - Dépistage systématique en élevage et en abattoir - Mise en place d un système de traçabilité - Création d un label «viande indemne de cysticercose». Phase I = zone pilote Phase I I = extension nationale Enquête de pratique DRZV/DSV Bilan situation Coordination IPM/DRZV Test d extension aux élevages traditionnels - identification d une zone d action -IEC - Amélioration des modes d élevage - Procédure d intégration dans la filière qualité Développement RDT Séroépidémiologie Elevages traditionnels DRZV/DSV clonage IPM/IPP production Contrôle de qualité de la viande Développement de stratégie de test de la viande de consommation IPM/DRZV Validation abattoirs animale Elevage positif Elevage négatif Développement RDT villages Validation humaine IPM épilepsie Valorisation Produits Label Communications publications IPM/DRZV/DSV Phase I = IPM 10
Mains problems and solution Current diagnosis tools required antigens proteins extracted from infected pork: Availablity of parasites Laboratory-dependant preparation Quantity produced insufficient for diagnosis of mass campaigns Solution recombinant proteins Possible by the current sequencing of Taenia solium genome Goal of the study: bioguided screening of cysticerci proteins 11
bioguided Screening Crude extract of cysticerci proteins Fractioning -Anion exchange chromatography -Gel filtration Testing -Immuno-electrotransfer u o e ect ot a s e blot -Lymphoproliferation assay 12
Partenaires impliqués Coordination: IPM, DRZV Mise au point et valorisation du test de dépistage: IPM, DRZV, IPP Rédaction du guide de bonne pratique: DRZV, CIRAD, DSV, Qualireg Mise en place de la filière qualité: AVSF, DRZV, CIRAD, DSV Extension en milieu rural: AVSF, DRZV, DSV,IPM Contrôle rétrospectif en alimentation humaine: IPM 13
Merci de votre attention Misaotra Betsaka 14
«Circulation des zoonoses et des parasitoses dans l océan Indien» Colloque conjoint de Parasitologie / Vet2011 9-10-11 Novembre 2011 A l Académie Malgache, Antananarivo Madagascar avec le parrainage de l'académie Nationale des Arts, des Lettres et des Sciences de Madagascar sous l égide de Académie de médecine de Madagascar Société Française de Parasitologie Ordre National des Docteurs Vétérinaires de Madagascar 15
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Antigens choice Inflammatory reaction Treatement CS50: glycosylated proteins Vesicular fluid (VF) proteins CS50: proteins fractionnated on Con-A matrix which retains Glycoproteins Forme Active active form Forme Transitionnal transitionnelle form Forme Calcified calcifiée form Glycoprotéines Glycoproteins (GP) Ag Vesicular de LC Fluid antigens Vesicular fluid: Proteins obtained after a centrifugation of crude extract at 20 000g 17 BACK
Fractionnation Crude extract Anion exchange chromatography (AIEX) Gel filtration / Isoelectrofocalisation 18
Fractionnation Fraction 13 Fraction 12 Fraction 11 Fraction 10 Fraction 9 Fraction 8 Fraction 7 Fraction 6 Fraction 5 Fraction 4 Fraction 3 Fraction 2 Fraction 1 AIEX Dependant on the charge oh the proteins 19 MW MW
Conclusions LPT: -CS50: crude extract not usable -VF: can differentiate healthy cases against patients Define proteins associated with this proliferation Try to link a protein to a stage of the disease AIEX: Test with EITB Follow with a second step of fractionnation Perspectives: Produce RDTs usable in field area Participate to the eradication effort 20