Microscopie. Microscopy. Kit coloration de FEULGEN Feulgen staining kit. Réf : Français p 1. English p 5. Version : 6008

Transcription

1 Microscopie Microscopy Français p 1 English p 5 Kit coloration de FEULGEN Feulgen staining kit Version : 6008

2 Microscopie Kit coloration de FEULGEN 1 Composition 1.1 Matériel - 1 tamis - 3 béchers TPX 50 ml - 1 lot de 0 filtres ronds Ø1 mm - 1 pince fine - 1 aiguille lancéolée - 1 lot de 2 petits agitateurs en verre - 1 boîte de 0 lames - 1 boîte de 0 lamelles 1.2 Produits chimiques - Réactif de Schiff 125 ml - Mélange éthanol/acide éthanoïque 3v/1v 125 ml - Acide Chlorhydrique 1N 125 ml - Acide éthanoïque 45 % 125 ml FRANÇAIS 1

3 Microscopie Kit coloration de FEULGEN 2 Protocole Prélever quelques pointes de racines d ail ou d oignon (1 cm de longueur) à l aide d une pince fine. Les racines sont ensuite colorées par la technique de Feulgen : 1 - Plonger les racines dans le bécher contenant le mélange éthanol/acide éthanoïque pendant une durée minimale de 24 heures. 2 - Récupérer les racines grâce au tamis en vidant le bécher au dessus d un pot en verre (poubelle) ; rincer à l eau au dessus de la poubelle ; égoutter sur papier filtre. 3 - Plonger les racines pendant minutes dans le second bécher contenant l acide chlorhydrique 1 N à 60 C. Chauffage préalable du bécher au bain marie ou à l étuve, maintenir la température de l acide : elle doit être de 60 C précisemment pendant toute l hydrolyse. Etape déterminante : Les bases puriques de l ADN sont hydrolysées, les fonctions hemiacetaliques des desoxyriboses sont libérées et peuvent alors réagir avec la fuchsine Récupérer les racines grâce au tamis en vidant le bécher au dessus de la poubelle ; rincer à l eau au dessus de la poubelle ; égoutter sur du papier filtre. 5 - Plonger les racines, pendant à 60 minutes, dans le troisième bécher contenant le réactif de Schiff : les racines se colorent progressivement en rouge violacé. La fuchsine contenue dans le réactif de Schiff réagit avec les fonctions réductrices de l ADN et forme un précipité rose spécifique. 6 - Déposer une goutte de solution d acide éthanoïque à 45 % sur une lame. Y poser les racines colorées, éliminer la partie non colorée avec l aiguille lancéolée et couvrir avec une lamelle. Tapoter fermement sur la lamelle avec le manche de l aiguille lancéolée pour étaler les cellules puis absorber l excédent de la solution avec un papier filtre. 7 - Observer au microscope photonique. Schéma récapitulatif 1-24 h dans un mélange éthanol / acide FRANÇAIS 2

4 Microscopie Kit coloration de FEULGEN 2 - Récupérer les racines Rincer à l eau Egoutter sur papier filtre 3 - Transfert dans HCl 1N à 60 C pendant min (Bains-marie ou étuve) 4 - Récupérer les racines Rincer à l eau Egoutter sur papier filtre 5 - Transfert dans le Réactif de Schiff pendant à 60 min FRANÇAIS 3

5 Microscopie Kit coloration de FEULGEN 6 - Montage sur lame avec Acide éthanoïque 45 % 3 Compléments - lames sécurisées (Réf. : ) - fiches de données de sécurité : contactez-nous pour l envoi des fiches correspondant aux produits chimiques de ce kit. 4 Service après vente La garantie est de 2 ans, le matériel doit être retourné dans nos ateliers. Pour toutes réparations, réglages ou pièces détachées, veuillez contacter : JEULIN - SUPPORT TECHNIQUE Rue Jacques Monod BP EVREUX CEDEX FRANCE +33 (0) FRANÇAIS 4

6 Microscopy Feulgen staining kit 1 Kit 1.1 Material required 1 sieve 3 50 ml TPX beakers 1 set of 0 round filters Ø1 mm 1 fine forceps 1 lanceolate needle 1 set of 2 small shakers in glass 1 box of 0 slides 1 box of 0 coverslips ENGLISH 5

7 Microscopy Feulgen staining kit 1.2 Chemicals required 125 ml of Schiff s reagent 125 ml of ethanol/acetic acid mixture in a volume ratio of 3:1 125 ml of 1N hydrochloric acid 125 ml of 45 % acetic acid 2 Protocol Take a few garlic or onion root tip samples (1cm in length) with the help of fine forceps. The roots will later be stained using the Feulgen technique: 1/ Dip the roots in the beaker containing the ethanol/acetic acid mixture for at least 24 hours. 2/ Collect the roots with the help of the sieve by emptying the beaker over a glass jar (waste bin); rinse with water over the bin; drain on filter paper. 3/ Dip the roots for minutes in the second beaker containing 1 N hydrocholirc acid at 60 C. Beaker pre-heated in a water bath or in an oven, maintained at the temperature of the acid; the temperature must remain exactly at 60 C throughout the whole hydrolysis process. Determining stage : The DNA purine bases are hydrolized, the hemiacetalic functions of the deoxyribose are set free and can therefore react with the fuchsin. 4/ Collect the roots with the help of the sieve by emptying the beaker over the waste bin; rinse with water over the bin; drain on filter paper. 5/ Dip the roots for to 60 minutes, in the third beaker containing the Schiff s reagent: the roots get gradually stained into a purplish-pink colour The fuchsin present in the Schiff s reagent reacts with the reducing functions of the DNA and forms a specific pink precipitate. 6/ Place a drop of the 45 % acetic acid solution on a slide. Place the stained roots on it, remove the non-stained portions with the help of the lanceolate needle and cover with a coverslip. Use the handle of the lanceolate needle to tap firmly on the coverslip in order to spread the cells, and then use the filter paper to absorb the excess solution. 7/ Observe under a photon microscope. ENGLISH 6

8 Microscopy Feulgen staining kit Summary diagram 1/ 24 hr in Ethanol/acid mixture 2/ Collect roots Rinse with water Drain on filter paper 3/ Transfer into 1N HCl 60 C min (Water bath or oven) 4/ Collect roots Rinse with water Drain on filter paper ENGLISH 7

9 Microscopy Feulgen staining kit 5/ Transfer into Schiff s reagent to 60 min 6/ Mount on slide with 45 %Acetic acid 3 Additional material Secure plates (Ref: ) Safety data sheet: Contact us in case you require the safety sheets corresponding to the chemical products in this kit. 4 After-Sales Service This material is under a two year warranty and should be returned to our stores in the event of any defects. For any repairs, adjustments or spare parts, please contact: JEULIN - TECHNICAL SUPPORT Rue Jacques Monod BP EVREUX CEDEX FRANCE +33 (0) ENGLISH 8

10 Assistance technique en direct Une équipe d experts à votre disposition du Lundi au Vendredi (8h à 17h) Direct connection for technical support A team of experts at your disposal from Monday to Friday (opening hours) Vous recherchez une information technique? Vous souhaitez un conseil d utilisation? Vous avez besoin d un diagnostic urgent? Nous prenons en charge immédiatement votre appel pour vous apporter une réponse adaptée à votre domaine d expérimentation : Sciences de la Vie et de la Terre, Physique, Chimie, Technologie. You re looking for technical information? You wish advice for use? You need an urgent diagnosis? We take in charge your request immediatly to provide you with the right answers regarding your activity field : Biology, Physics, Chemistry, Technology. Service gratuit * : + 33 (0) * Hors coût d appel Free service * : + 33 (0) * Call cost not included Aide en ligne : Rubrique FAQ Rue Jacques-Monod, Z.I. n 1, Netreville, BP 1900, Evreux cedex, France Tél. : + 33 ( 0 ) Fax : + 33 ( 0 ) Internet : - support@jeulin. fr Phone : + 33 ( 0 ) Fax : + 33 ( 0 ) Internet : - export@jeulin.fr SA capital Siren R.C.S. B Siret