Les nouveautés en Biologie Moléculaire
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- Fabien Julien
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1 Jérémie Gras Médecin Biologiste Colloque Médical 40 ans de la Clinique Saint-Luc Samedi 25 octobre 2014
2 PLAN 1. Point technique 2. Applications d aujourd hui 3. Applications de demain
3 Biologie moléculaire? 1. Point technique Etude des acides nucléiques: ADN, ARN Nombreuses applications : Détection de pathogènes Quantification de virus Recherche de mutations Identification criminelle
4 1. Point technique Biologie moléculaire = amplification moléculaire = PCR ADN- double brin Fin de cycle: 2 copies 1. Dénaturation - 95 C 2. Hybridation- 3. Polymérisation 60 C 72 C + amorces + Taq polymerase + dntp 3 étapes= 1 cycle PCR
5 1. Point technique ADN- double brin 1 cycle- 2 copies 2 cycles- 4 copies 3 cycles- 8 copies 4 cycles- 16 copies PCR- Amplification exponentielle!
6 PCR en temps réel 1. Point technique Fluorescence Sonde Seuil Nombre de cycles
7 1. Point technique Quantification? Situation 1 Pas de virus Situation 2 Quelques copies de virus Situation 3 Nombreuses copies de virus Fluorescence Seuil Nombre de cycles Cp: Crossing point: 30 cycles Cp: Crossing point: 15 cycles
8 Génotypage? Sonde normale (465 nm) 1. Point technique Sonde pathologique (510 nm) Fluorescence Fluorescence Seuil Seuil Nombre de cycles Nombre de cycles Fluorescence sonde pathologique (510 nm) Homozygote muté Hétérozygote Homozygote normal Fluorescence sonde normale (465 nm)
9 PLAN 1. Point technique 2. Applications d aujourd hui 3. Applications de demain
10 2. Applications d aujourd hui Détection de pathogènes Infections sexuellement transmissibles (IST) Recherche de mutations/ génotypage Mutation facteur V Leiden Mutation facteur II
11 2. Applications d aujourd hui
12 2. Applications d aujourd hui Infections sexuellement transmissibles Cas 1: jeune homme 21 ans Ecoulement urétral: d emblée suspicion d urétrite à Chlamydia Sédiment urinaire: 29 GB/champ, pas de bactéries Analyse moléculaire effectuée sur urines
13 2. Applications d aujourd hui Infections sexuellement transmissibles Cas 1: PCR Chlamydia 465nm: filtre Chlamydia
14 2. Applications d aujourd hui Infections sexuellement transmissibles Cas 2 Femme 18 ans Douleurs lombaires bilatérales -> salle d urgence Conclusion : suspicion pyélonéphrite -> hospitalisation Cependant le 18/08: CRP à 390 mg/l!!
15 2. Applications d aujourd hui Infections sexuellement transmissibles Cas 2: CT scan
16 2. Applications d aujourd hui Infections sexuellement transmissibles Cas 2: PCR Gonocoque sur liquide d ascite
17 2. Applications d aujourd hui Infections sexuellement transmissibles évolution CRP après laparoscopie, lavements, antibiothérapie adaptée
18 2. Applications d aujourd hui Recherche de mutations thrombogènes Cas 1: Jeune femme 28 ans Antécédents: Bypass Anamnèse: Tabagisme (10 cigarettes/jour) Pas de CO mais Nuvaring Affection actuelle: Dyspnée, douleur thoracique Gène douloureuse des 2 mollets
19 2. Applications d aujourd hui Recherche de mutations thrombogènes Cas 1: Jeune femme 28 ans Bio 28/03 à 20h37 (MT): D dimères 3,17 µg/ml( ) Tropo 81,8 pg/ml ( ) Urgences: Embolie pulmonaire massive Hospit en cardio pour traitement héparine+ relais Sintrom
20 2. Applications d aujourd hui Recherche de mutations thrombogènes Cas 1: Jeune femme 28 ans Mutation facteur V Leiden, hétérozygote
21 2. Applications d aujourd hui Recherche de mutations thrombogènes Cas 2 Jeune femme 31 ans Antécédents: Patiente migraineuse connue Anamnèse: Tabagisme Contraception orale Affection actuelle: Céphalées violentes (intensité 9/10) Nausées Paresthésies intermittentes main droite
22 2. Applications d aujourd hui Recherche de mutations thrombogènes Cas 2 Jeune femme 31 ans Bio 25/11 à 11h46 (Urg): D dimères 1,35 µg/ml( ) CRP 6,03 mg/l ( ) GB 11000/µL, 72% N ( ) CT scan: Thrombophlébite du sinus longitudinal Hospit en neuro pour traitement + relais Sintrom
23 2. Applications d aujourd hui
24 2. Applications d aujourd hui Mutation facteur II, état hétérozygote
25 2. Applications d aujourd hui Autres applications actuelles Test PCR JAK 2 PCR BCR-ABL PCR Charges virales HBV, HCV PCR Bordetella pertussis Utilisation Diagnostic, suivi des syndromes myéloprolifératifs Diagnostic, suivi des Leucémies myéloïdes chroniques Suivi des hépatites Diagnostic coqueluche
26 PLAN 1. Point technique 2. Applications d aujourd hui 3. Applications de demain
27 3. Applications de demain PCR multiplex avec approche syndromique: Pathogènes multiples digestifs, respiratoires, Séquençage de nouvelle génération: Ensemble du génome en quelques heures
28 3. Applications de demain PCR multiplex: pathogènes respiratoires Influenza A, B, H1N1, RhinoVirus Coronavirus NL63, 229E, OC43, HKU1 ParaInfluenza 2,3,4, contrôle interne ParaInfluenza 1, hmpv, BocaVirus, Mycoplasme RSV, adenovirus, enterovirus, parechovirus
29 3. Applications de demain
30 3. Applications de demain Séquençage de nouvelle génération: BRCA 1,2 Dépistage néonatal non invasif Applications pour signature génétique des leucémies (KUL) Médecine personnalisée, pharmacogénomique, théranostique
31 3. Applications de demain Séquençage de nouvelle génération:
32 3. Applications de demain Séquençage de nouvelle génération:
33 Equipe des biologistes Saint-Luc Bouge Médecin Biologiste Pharmacien Biologiste Pharmacien Biologiste Pharmacien Biologiste Médecin Biologiste Médecin Biologiste Pharmacien Biologiste Philippe Gillion Jean-Marie Gilson Catherine Rosseels Christine Eucher Kim Laffineur Jérémie Gras Julie Cadrobbi
34 Merci de votre attention!
35 Jérémie Gras Médecin Biologiste Colloque Médical 40 ans de la Clinique Saint-Luc Samedi 25 octobre 2014
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