Un nouvel outil pour mieux évaluer le risque viral environnemental : Qualification du biocollecteur Coriolis µ pour la récupération et l'identification des virus dans l'air Adjidé C.C., Segard C., Desjonquères Q., Hirsch M.P. Rossy D., Fave M.H., Brissaud C., Sylvain K., Trouillet L. Duverlie G., Ganry O. CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 1
Sommaire 1. Introduction 2. Matériel & méthode 3. Résultat 4. Discussion 5. Conclusions 6. Perspectives CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 2
Introduction Évaluer le risque viral environnemental associé aux soins méthodes actuelles non adaptées à cette problématique Peu de données sur le contenu de l air en virus pourtant incriminés dans 25-30% des infections nosocomiales (pic hivernal) Qualification d un biocollecteur capable de collecter des virus dans l air : validation sur VRS Le VRS résiste 30 min sur la peau, 6 h sur surface inerte Dose infectante : 100 à 600 particules virales Durée de contagiosité varie avec l âge du patient et statut immunitaire CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 3
Objectif de l étude Évaluer la capacité d un biocollecteur à recueillir et à concentrer les particules virales de l air dans un liquide et à permettre leur mise en évidence par des analyses par PCR Meilleure évaluation de la biocontamination d origine virale à l aide d une autre méthode que la culture cellulaire Biocollecteur Coriolis µ CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 4
Étude préliminaire 2006 32 prélèvements dans l entourage de 4 enfants VRS positifs Distance : 1 m, enfant au repos Volume d air = 3 m 3 Volume liquide = 15 ml Hanks Prise d échantillon pour PCR = 200 µl de l homogénat Analyse en PCR classique 0 résultat positif Axes d amélioration = prélèvements d air = méthode d analyse CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 5
Matériel et méthode 2007-2008 Lieu et conditions Décembre 2007 et janvier 2008 1 à 2 prélèvements par chambre (répété 2 fois) Pédiatrie cardio-pneumologie, chambres d enfants VRS + Pendant et après la kinésithérapie Prélèvements d air biocollecteur Coriolis µ, (Bertin Technologies ) basé sur une technologie cyclonique débit 300 l/min 10 min 15 ml de liquide de Hanks CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 6
Matériel et méthode - suite Échantillons Conservés à -80 C en attendant d être traités Concentrés à l aide de filtres (Millipore ) après décongélation Extraction des ARN VRS sur EZ1 (Qiagen ) à partir de 200µl de concentrat Deux techniques de PCR qualitative PCR classique + révélation gel (Kit Qiagen one-step RT-PCR) PCR en temps réel (Kit VRS Cepheid sur SMART CYCLER ) Résultat positif si signal observé < à 45 CT douteux si signal observé mais > à 45 CT négatif si la courbe est plate CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 7
Prélèvements d air réalisés 2006 2007-2008 Nb prélèvements 32 44 Nb patients 4 14 Ages <1 an moy. = 4 mois (57% <3 mois tous <1 an) Période de kiné per- - 19 (18 avec toux franche) Distance appareil enfant post- - 25 sans 32 0 100 cm 32 25 40-45 cm - 11 20-30 cm - 8 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 8
Prélèvements d air analysés 2006 2007-2008 Nb prélèvements 32 44 Nb analyses 6 37 Période de kiné per- - 19 post- - 18 Distance appareil enfant sans 6-100 cm 6 18 40-45 cm - 11 20-30 cm - 8 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 9
Résultats 7 prélèvements non analysés : doublons 6 prélèvements exclus après analyse : - patient VRS négatif - délai de prélèvement > 5 j 31 prélèvements analysés et interprétés 6 échantillons positifs ou douteux (= un signal) 12 enfants inclus 3 enfants positifs ou douteux CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 10
Discussion : délai de prélèvement Délai entre diagnostic virologique et prélèvement d air RT PCR VRS air Positif ou douteux négatif 12 h 1 25 24 h 5 72 h 0 Total 6 25 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 11
Discussion : distance patient-prélèvement Distance entre l enfant et le prélèvement d air Positif ou douteux RT PCR VRS négatif Total échantillons 100 cm 2 16 17 40-45 cm 2 6 7 20-30 cm 2 5 7 Total 6 27 31 CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 12
Conclusion Capacité du biocollecteur à collecter les virus aéroportés confirmée Méthode RT PCR en temps réel plus adaptée dans le cas de faibles concentrations Étape de concentration des échantillons cruciale Importance des prélèvements au plus tôt / proche du patient / pendant kinésithérapie CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 13
Perspectives Nécessité de mener de nouvelles campagnes de manière à avoir plus de données et optimiser les étapes analytiques Nécessité de travailler sur d autres virus «à risque» avec des amorces spécifiques ou multiplex Améliorer la maîtrise de la contamination de l air par les particules virales et mieux maîtriser le risque lié et leur dissémination CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 14
Merci à tous Contacts : crespin.adjide@chu-amiens.fr segard.christine@chu-amiens.fr CC Adjidé, CHU Amiens SFHH, Nice 4 juin 2009 15