TRANSFUSION. Groupes sanguins érythrocytaires (système ABO, système RH et système KELL Les examens en immuno-hématologie

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1 TRANSFUSION Groupes sanguins érythrocytaires (système ABO, système RH et système KELL Les examens en immuno-hématologie

2 1900 Landsteiner découvre le 1er système des groupes sanguins : le système ABO 1940 valide le système Rhésus 1952 Dausset met en évidence le système HLA des GB

3 Les groupes sanguins érythrocytaires Les groupes sanguins érythrocytaires sont déterminés pas des antigènes présents (ou non) à la surface des globules rouges Certains antigènes sont situés dans la Mb lipidique (Rhésus), d autres dans les glycolipides sur la face externe de la Mb du GR (ABO)

4 Les groupes sanguins érythrocytaires Génétiquement induits et déterminés indépendants les uns des autres Antigènes allotypiques cad caractères propres à un groupe d individus dans une espèce donnée 29 systèmes de groupes sanguins liés au globule rouge Le plus connu et le plus ancien : le système ABO, le plus important du fait de son implication en transfusion sanguine et pour la transplantation d organe

5 - - RHAG 030 RHAG - - GIL 029 GIL - - P 028 GLOB - - I 027 I - - JMH 026 JMH 11p15.5 MER2 MER2 025 RAPH 19p13.3 CD147 OK 024 OK 11p13 CD44 IN 023 Indian 1q32 CR1 KN 022 Knops 1q32 DAF CROM 021 Cromer 2q14-q21 GYPC GE 020 Gerbich Xp21.1 XK XK 019 Kx 19q13.3 FUT1 H 018 H 6p21.3 C4A, C4B CH/RG 017 Chido Rodger 19p13.3 LW LW 016 Landsteiner Wiener 7p14 AQP1 CO 015 Colton 12p12.3 DO DO 014 Dombrock 1p34 SC SC 013 Scianna Xp22.32 XG XG 012 Xg 7q22.1 ACHE YT 011 Yt 17q21-q22 SLC4A1 DI 010 Diego 18q11-q12 SLC14A1 JK 009 Kidd 1q22-q23 DARC FY 008 Duffy 19q13.3 FUT3 LE 007 Lewis 7q33 KEL KEL 006 Kell 19q13.2 LU LU 005 Lutheran 1q36.13-q34.3 RHD, RHCE RH 004 Rh 22q11.2-qter P1 P 003 P 4q28.2-q31.1 GYPA, GYPB, GYPE MNS 002 MNS 9q34.2 ABO ABO 001 ABO Localisation du gène Gène(s) Symbole Numéro Système

6 Tableau de concordance entre nomenclature internationale (ISBT) et nomenclature utilisée en France (Fischer et Race) Antigènes N ABO A B A,B A1 02 MNS M N S s U 03 P1 P1 04 RH D C E c e ce Ce Cw 05 LU Lua Lub 06 KEL K k Kpa Kpb 07 LE Lea Leb 08 FY Fya Fyb Fy3 09 JK Jka Jkb Jk3

7 Le système ABO Le système ABO présente deux caractéristiques qui sont à l origine des méthodes de groupage et expliquent son rôle important en transfusion et lors des transplantations : La présence ou l absence des antigènes A et/ou B à la surface des GR La présence ou l absence des anticorps naturels anti-a et/ou anti-b dans le plasma correspondants aux antigènes absents sur les GR

8 Les antigènes du système ABO

9 Les antigènes du système ABO Groupe sanguin Antigènes membranaires Anticorps sériques Fréquence en France A A anti-b 45% B B anti-a 9% O H anti-a et anti-b 43% AB A et B aucun 3%

10 Répartition des Ag ABH dans l organisme à la surface des GR, PN, lymphocytes, monocytes et des plaquettes présents sur de nombreuses cellules de l organisme (cellules épithéliales, endothélium vasculaire, secrétions salivaires, cellules rénales) à l exception de l os, des neurones et de la cornée

11 Les anticorps naturels,réguliers Naturels : Présents dans le plasma d un sujet en dehors de toute stimulation antigénique reconnue (transfusion ou grossesse) Sont dirigés contre les antigènes que le sujet ne possèdent pas sur leur GR Réguliers : existent constamment chez les individus ne possédant pas l antigène correspondant Apparaissent chez l enfant entre 0 et 6 mois (suite à l hétéro immunisation par les bactéries de la flore intestinale) Intérêt primordial en transfusion sanguine en raison du risque d incident dès la 1ère transfusion incompatible

12 Les anticorps immuns, irréguliers N existent pas à l état naturel Apparaissent à la suite d une immunisation préalable : grossesse ABO incompatible

13 Détermination du groupe ABO Le groupage ABO repose sur deux épreuves qui doivent être concordantes : Epreuve globulaire dite de Beth-Vincent consiste à rechercher par une technique d agglutination les antigènes présents sur les hématies GR à tester (antigènes à déterminer) + sérums tests connus (anticorps monoclonaux anti-a et anti-b)

14 Réaction d agglutination Agglutination Formation d un réseau

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16 Absence d agglutination Agglutination

17 Interprétation difficile : Double population avec le sérum test anti-a - Patient A transfusé en O - Patient ayant subi une allogreffe de moelle (A/O ou O/A)

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19 Détermination du groupe ABO Epreuve sérique dite de Simonin Consiste à identifier les anticorps naturels réguliers dirigés contre les antigènes absents Plasma à tester (anticorps naturels) + GR tests connus Le groupe ne sera définitif qu à la suite de 2 déterminations réalisées à partir de 2 prélèvements sanguins différents

20 Groupage ABO BETH VINCENT anti-a anti-b SIMONIN GR A GR B O A B _ _ AB

21 Règles de compatibilité ABO POUR LES GLOBULES ROUGES SYSTEME ABO donneur universel Ac anti-a Ac anti-b A A Ac anti-b O O compatibilité AB AB Ac anti-a B B identité identité compatibilité pas d'ac receveur universel

22 Règles de compatibilité ABO POUR LE PLASMA A AB O B

23 Le système RH (Rhésus) Système complexe de groupe sanguin On compte 52 antigènes appartenant à ce système En pratique courante seuls 5 sont à connaître : D, C, c, E, e La présence de l antigène D défini le groupe Rhésus positif (85%) son absence le groupe Rhésus négatif Le phénotype Rhésus est déterminé par la présence ou l absence des 5 antigènes : D, C/c, E/e

24 Le système Rhésus comprend 52 antigènes situés sur la membrane du GR

25 Les antigènes ANTIGENES D (RH1) C (RH2) E (RH3) c (RH4) e (RH5) Fréquence en France 85% 70% 30% 80% 98%

26 Phénotype Rhésus (RH) du receveur (fréquence en France) D+C+E-c+e+ (RH : 1, 2, -3, 4, 5) (0,34) D+C+E-c-e+ (RH : 1, 2, -3, -4, 5) (0,20) D+C-E+c+e+ (RH : 1, -2, 3, 4, 5) (0,12) D+C+E+c+e+ (RH : 1, 2, 3, 4, 5) (0,12) Phénotype Rhésus (RH) du CGR à transfuser par ordre prioritaire D+C+E-c+e+ (RH : 1, 2, -3, 4, 5) D+C+E-c-e+ (RH : 1, 2, -3, -4, 5) D+C-E-c+e+ (RH : 1, -2, -3, 4, 5) D-C-E-c+e+ (RH : -1, -2, -3, 4, 5) D+C+E-c-e+ (RH : 1, 2, -3, -4, 5) D+C-E+c+e+ (RH : 1, -2, 3, 4, 5) D+C-E-c+e+ (RH : 1, -2, -3, 4, 5) D+C-E+c+e- (RH : 1, -2, 3, 4, -5) D-C-E-c+e+ (RH : -1, -2, -3, 4, 5) D+C+E+c+e+ (RH : 1, 2, 3, 4, 5) D+C+E-c+e+ (RH : 1, 2, -3, 4, 5) D+C+E-c-e+ (RH : 1, 2, -3, -4, 5) D+C-E+c+e+ (RH : 1, -2, 3, 4, 5) D+C-E-c+e+ (RH : 1, -2, -3, 4, 5) D+C-E+c+e- (RH : 1, -2, 3, 4, -5) D-C-E-c+e+ (RH : -1, -2, -3, 4, 5) D+C+E+c-e+ (RH : 1, 2, 3, -4, 5) (0,04) D+C-E-c+e+ (RH : 1, -2, -3, 4, 5) (0,02) D+C-E+c+e- (RH : 1, -2, 3, 4, -5) (0,01) D-C-E-c+e+ (RH : -1, -2, -3, 4, 5) (0,15) D+C+E+c-e+ (RH : 1, 2, 3, -4, 5) D+C+E-c-e+ (RH : 1, 2, -3, -4, 5) D+C-E-c+e+ (RH : 1, -2, -3, 4, 5) D-C-E-c+e+ (RH : -1, -2, -3, 4, 5) D+C-E+c+e- (RH : 1, -2, 3, 4, -5) D-C-E-c+e+ (RH : -1, -2, -3, 4, 5)

27 Les Anticorps du système Rhésus Toujours acquis, secondaires à une alloimmunisation, lors d une transfusion ou d une grossesse Probabilité d apparition fonction de l immunogénicité L antigène Rh standard (D) est le plus immunogène puis dans l ordre E, c et e de classe IgG, hémolysants, capables de traverser le placenta, responsables de la symptomatologie présentée par un nouveau-né Rhésus + né de mère Rhésus - : maladie hémolytique du nouveau-né

28 Règles de compatibilité Rhésus POUR LES GLOBULES ROUGES Rh - Rh + = Ag D+

29 Les autres systèmes érythrocytaires Importance transfusionnelle car certains de leurs antigènes sont fortement immunisants Système KELL: l Antigène K est un puissant immunogène pour les sujets K- (91% de la population K-) Système Duffy : antigène Fya et Fyb Système MNS : antigène S et s Système Kidd : antigène Jka et JKb

30 Les autres systèmes érythrocytaires L absence d un Antigène dans l un de ces systèmes ne s accompagne pas d anticorps naturels, comme dans le système ABO, mais une transfusion ou une grossesse peuvent provoquer la formation d anticorps immuns (allo-immunisation) responsables ultérieurement d accidents transfusionnels ou de MHNN

31 Les examens immunohématologiques Groupage ABO RH1 (RhD) Phénotypage RH et Kell Phénotypage étendu Recherche d anticorps irréguliers (RAI) Epreuve de compatibilité au laboratoire Tests de Coombs

32 Exigences relatives aux échantillons : Qualité et quantité : Type d analyse Groupe ABO.RH1 et phénotype RH.KEL1 RAI chez l adulte ABO.RH1 et RH.K et RAI chez l adulte RAI chez le nouveau-né ABO.RH1 et RH.K et RAI chez le nouveau-né Titrage et dosage pondéral anti-rh1 Test de Kleihauer Bilan de réaction transfusionnelle Bilan de maladie hémolytique du nouveau-né AHAI : TCD Elution Hémolysine AF-RAI Test de Coombs Direct (TCD) Nombre de ml sur anticoagulant Nombre de ml sur tube sec ou anticoagulant Identification du patient : Nom patronymique / Nom marital / Prénom(s) / Date de naissance / Sexe. Exigences relatives aux documents accompagnateurs : -Etablissement de soins : service demandeur / ligne téléphonique directe -Prescripteur : nom, signature du médecin prescripteur, date de prescription -Préleveur : nom et qualité du préleveur, signature, date et heure du prélèvement -Identification du patient : nom patronymique, nom marital, sexe et date de naissance -Nature des analyses demandées -Renseignements cliniques éventuels -Si une transfusion est envisagée, date et heure prévues, niveau d urgence.

33 Les examens immunohématologiques Groupage ABO RH1 correspond à la détermination du groupe ABO indissociable de la recherche du Rhésus standard D le groupage est considéré comme définitif si les résultats sont concordants sur deux déterminations sur 2 prélèvements différents Contexte pré-transfusionnel avéré ou potentiel et contexte périnatal La transmission électronique des résultats est la règle pour la délivrance des PSL

34 Phénotype Rhésus Kell Recherche grâce à l utilisation de sérums tests anti-c, anti-e, anti-c, anti-e et anti-k la présence ou l absence à la surface des hématies des 5 antigènes suivants : C (RH2), E (RH3), c (RH4), e (RH5) et K (KEL1) Contexte prétransfusionnel avéré ou potentiel Contexte pré et périnatal Validation de l identification d anticorps antiérythrocytaires

35 Phénotype étendu Recherche de la présence ou l absence des antigènes : Jka, Jkb (système Kidd), Fya, Fyb (système Duffy), S, s (système MNS) Champ d application : - patient présentant un anticorps irrégulier dans l un des systèmes concernés - à titre préventif chez patients devant recevoir des transfusions itératives - patients en instance de greffe

36 Recherche d Anticorps Irréguliers (RAI) NB : Les anticorps immuns sont décelables avec un maximum de probabilité du 7ème au 15ème jour après la transfusion Examen consistant à dépister et identifier les anticorps dirigés contre les antigènes érythrocytaires autres que A et B dans le sérum à étudier grâce à une gamme d hématies tests Délai de réalisation de 45 mn à plusieurs heures Validité 72H

37 Recherche d Anticorps Irréguliers (RAI) Champ d application : Obligatoire chez tout patient susceptible d être transfusé Contexte de greffe ou de transplantation Contexte pré ou périnatal Chez le patient transfusé itératif en bonne place au cours des séries de transfusion Chez le patient transfusé dans le cadre du suivi post-transfusionnel (dans un délai de 1 mois après le dernier épisode transfusionnel)

38 CAT en cas d urgence hémorragique Urgence vitale immédiate : distribution sans délai Prélèvement 2 déterminations groupe + RAI pas de groupe ni de RAI si non disponibles CGR O sans hémolysines Urgence vitale : délai de distribution inférieur à 30 minutes Prélèvement 2 déterminations groupe + RAI pas de RAI si non disponible nécessité de groupe ABO conforme Urgence «relative» : délai de distribution de 2-3 heures Prélèvement 2 déterminations groupe + RAI nécessité de groupe et RAI conformes

39 CHOIX DES CGR EN URGENCE VITALE Dans le cadre d un dépôt d urgence ayant en stock des CGR : O- (D-C-E-c+e+K-) non réservé à la transfusion isogroupe O+ (D+C+E-c-e+K-) non réservé à la transfusion isogroupe En fonction de D et Rhésus-Kell D D non connu D négatif D positif D positif D positif Patient CGR à transfuser O-D-C-E-c+e+K- O-D-C-E-c+e+K- O+D+C+E-c-e+K- O+D+C+E-c-e+K- O-D-C-E-c+e+K- Rhésus Kell non connu connu ou non non connu connu : C+ connu : C-

40 Epreuve directe de compatibilité au laboratoire EDCL Qualification biologique du don Consiste à tester le sérum du receveur vis-à-vis du CGR à transfuser (l objectif étant de détecter certains Ac masqués par la présence d autres Ac, ou des Ac rares) Validité 72H Champ d application : Receveur présentant ou ayant présenté un ou plusieurs allo-anticorps anti-érythrocytaires Nouveau-né présentant un test de Coombs positif ou né de mère allo-immunisée

41 Test de Coombs Permet la mise en évidence de la sensibilisation in vivo des hématies humaines par des anticorps grâce à l utilisation d un réactif appelé antiglobuline humaine Champ d application : Maladie hémolytique du nouveau-né Incident transfusionnel Anémie hémolytique autoimmune

42 Recherche d'anticorps fixés sur les hématies Ac non spontanément agglutinables + anti-gammaglobulines humaines Hématies fœtales ayant fixé l'ac complexe agglutinant