Fiches techniques et procédures de laboratoire BIOLTROP Hématimètre de Malassez et cellule de Nageotte Yves GILLE, Antoine Pierson (BiolTrop) Préalable Il existe différents types d'hématimètres. Ici, on ne parlera que de ceux de type Malassez et Nageotte. Ces hématimètres diffèrent par leur quadrillage, mais tous deux permettent de numérer, dans un volume précis et connu, tous les éléments visibles à l'objectif 40. Il existe maintenant des cellules de comptage à usage unique, en plastic. Elles seront traitées dans : cellules de comptage à usage unique. Pour obtenir une numération proche de la réalité, il est important de : Ne pas rayer le quadrillage lors du nettoyage de l'hématimètre ; Bien monter la lamelle sur l'hématimètre ; Déposer la goutte de l échantillon à numérer correctement, comme décrit ci-dessous ; Bien laisser sédimenter les particules à numérer avant le comptage. Matériel 1. On dépose, entre hématimètre et lamelle, une goutte de l'échantillon, dilué ou non ; 2. On compte dans le quadrillage (volume précis) les éléments voulus ; 3. On ramène le résultat obtenu en éléments par litre de sang (ou autres). 6 décembre 2010 1/1
Description Cellule de Malassez Volume du quadrillage total : 1 µl Dimensions d'une bande : L : 2,5 mm, l : 2 mm, H (ou profondeur) : 0,20 mm Constitué de : 100 rectangles d'égales surfaces 6 décembre 2010 2/1
Cellule de Nageotte Le quadrillage total constitué de : 40 bandes (Chaque bande a un volume de 1,25 microlitre) Dimensions d'une bande : L : 10 mm,l : 0,25 mm, H (ou profondeur) : 0,50 mm Comment choisir entre l'hématimètre de Malassez et la cellule de Nageotte? En général pour LCR et urine : Cellule de Nageotte ; En fait ce choix n'a pas une importance réelle : Il dépend surtout de l'habitude de l'opérateur. Manipulations préalables Si le liquide à analyser est hémorragique Avant de compter les leucocytes il est préférable de lyser les hématies en diluant au 1/2 le liquide hémorragique à l'aide d'une solution à 0,5% d acide acétique dans l'eau. Ne pas oublier de multiplier par 2 (facteur de dilution dû à la solution d'acide acétique) le résultat du comptage des leucocytes. 6 décembre 2010 3/1
Si on prévoit un nombre élevé de leucocytes ou d'hématies Diluer le liquide à analyser1nbsp ; : 1/2, 1/5, 1/10 ou plus, dans du sérum physiologique. Ne pas oublier de multiplier le résultat du comptage par la dilution. Avant de charger la cellule 1. Placer une lamelle sur la cellule : Cellule de Malassez : lamelle plane Cellule de Nageotte : lamelle ordinaire (plus fine qu'une lamelle plane) 2. Poser la cellule sur une surface bien horizontale. 3. «Coller» la lamelle sur l'hématimètre, en humectant les deux bords de celui-ci avec un petit chiffon humide propre et essoré. 4. Faire glisser la lamelle sur la largeur de l'hématimètre et vérifier la bonne adhésion «hématimètre - lamelle». Introduire le liquide à analyser dans la cellule 1. Homogénéiser le liquide à analyser (ou sa dilution). 2. Entre hématimètre et lamelle, laisser rentrer, par capillarité, une goutte de l'échantillon à numérer grâce à une pipette Pasteur. (La goutte ne doit pas déborder dans les rigoles de l'hématimètre et la goutte doit recouvrir complètement et d'un seul coup toute la surface quadrillée de l'hématimètre.) Attendre au moins 5-10 minutes, la cellule bien à l'horizontal, en chambre humide, avant d'entreprendre le comptage (les éléments cellulaires doivent sédimenter). Compter les éléments cellulaires Pour les éléments chevauchent les lignes, comptez tous ceux qui chevauchent les lignes à gauches et en haut. Ne comptez aucun élément qui chevauchent les lignes à droite et en bas. Hématimètre de Malassez : la totalité du quadrillage (1 µl) Cellule de Nageotte : compter 4 bandes (5 µl) Calculer le nombre d'éléments cellulaires par microlitre Soit n le nombre d'éléments comptés (hématies ou leucocytes) N le nombre d'éléments par microlitre (µl) V le volume de comptage Malassez : V = 1 µl (totalité du quadrillage) Nageotte : V = 5 µl (4 bandes de 1,25 µl) N = n / V 6 décembre 2010 4/1
Cellule de Malassez : N = n / 1 ou N = n Cellule de Nageotte : N = n / 5 Si comptage effectué sur du liquide dilué : ne pas oublier de multiplier le nombre d'éléments comptés doit être multiplié par le taux de dilution. 6 décembre 2010 5/1