Dako Target Retrieval Solution (10x) ENGLISH Code S1699 Intended use For In Vitro Diagnostic Use. This product, after dilution, is to be used on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections mounted on glass slides for target retrieval prior to immunohistochemistry (IHC) procedures or in situ hybridization (ISH) procedures. When used together with Dako PT Link, Code PT100/PT101 this reagent can be used as target retrieval solution after deparaffinization of the slides, and may also be used as a 3-in-1 solution in a 3-in-1 specimen preparation procedure for deparaffinization, re-hydration and epitope retrieval on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections. Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for: 1) Principle of Procedure, 2) Materials Required, Not Supplied, 3) Storage, 4) Specimen Preparation, 5) Staining Procedure, 6) Quality Control, 7) Troubleshooting, 8) Interpretation of Staining, 9) General Limitations. Reagent provided 500 ml citrate buffer, ph 6, 10x concentrated. Description The retrieval procedure involves immersion of tissue sections mounted on slides in diluted Target Retrieval Solution and heating, either in a PT Link (97 C), a water bath (95 99 C) or a press ure cooker (121 C). Target retrieval prior to IHC procedures results in an increase in staining intensity with many primary antibodies. For other antibodies, this procedure is required to obtain positive results. Target retrieval is also a useful alternative to enzyme predigestion for ISH procedures. The 3-in-1 procedure for PT Link involves immersion of tissue sections mounted on slides in diluted Target Retrieval Solution before deparaffinization and heating in PT Link (97 C). T he 3-in-1 procedure prior to IHC procedures performs deparaffinization, re-hydration and target retrieval in one step. When used in PT Link for either heat-induced epitope-retrieval (HIER) or 3-in-1 procedure, the diluted Dako Target Retrieval Solution can be used 3 times within a 5 day period if stored at room temperature. Precautions 1. For professional users. 2. Solution is hot during use, and may cause burns to exposed areas of eyes and skin. 3. Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin. 4. Unused solution should be disposed of according to local, State and Federal regulations. 5. Safety Data Sheet available for professional users on request. Storage Store at 2 8 C. Reagent preparation Prior to use this product must be diluted 1:10 with deionized or distilled water (one part S1699 plus nine parts water) to make a working solution. The final ph should be between 6.00 and 6.20 (optimally 6.10). If ph is above 6.20 adjust with 2N HCI. If ph is below 6.00 adjust with 2N NaOH. Procedure 3- in-1 specimen preparation procedure using PT Link: 1. Prepare a working solution by diluting the concentrate 1:10 in distilled or deionized water. 2. Fill PT Link tanks with sufficient quantity (1.5 L) of working solution to cover the tissue sections. 3. Set PT Link to pre-heat the solution to 65 C. 4. Immerse the mounted, formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections into the pre-heated Target Retrieval Solution (working solution) in PT Link tanks and incubate for 20 40 minutes at 97 C. The optimal incubation time should be determ ined by the user. 5. Leave the sections to cool in PT Link to 65 C. 6. Remove each Autostainer slide rack with the slides from the PT Link tank and immediately dip slides into a jar/tank (e.g., Dako PT Link Rinse Station, Code PT109) with diluted, room temperature Dako Wash Buffer (10x), Code S3006. 7. Leave slides in the diluted, room temperature Dako Wash Buffer (10x), Code S3006 for 1-5 minutes. 8. Place slides on a Dako Autostainer instrument and proceed with staining. The sections should not dry out during the treatment or during the immunohistochemical staining procedure. 9. After staining it is recommended to perform dehydration, clearing and permanent mounting. (106790-005) 301784EFG_004 p. 1/5
HIER procedure using PT Link: 1. Prepare a working solution by diluting the concentrate 1:10 in distilled or deionized water. 2. Fill PT Link tanks with sufficient quantity (1.5 L) of working solution to cover the tissue sections. 3. Set PT Link to pre-heat the solution to 65 C. 4. Manually deparaffinize and rehydrate tissue sections mounted on glass slides. For better adhesion of tissue to slide, use of coated or silanized slides is recommended. 5. Immerse room temperature tissue sections into the pre-heated Target Retrieval Solution (working solution), and incubate for 20 40 minutes at 97 C. The optimal incubation time should be determined by the user. 6. Leave the sections to cool in PT Link to 65 C. 7. Remove each slide rack from PT Link tank and immediately dip slides into a jar/tank (e.g., Dako PT Link Jar, Code PT10930) with diluted, room temperature Dako Wash Buffer (10x), Code S3006. 8. Leave slides in the diluted, room temperature Dako Wash Buffer (10x), Code S3006 for 1-5 minutes. 9. Place slides on a Dako Autostainer Platform and proceed with staining. The sections should not dry out during the treatment or during the immunohistochemical staining procedure. 10. After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium. Alternative Procedure: pressure cooker 1. Deparaffinize and rehydrate tissue sections. 2. Immerse sections in coplin jar or other suitable containers filled with diluted Target Retrieval Solution. 3. Heat for 1 10 minutes at 15 psi (121 C). Either immediately vent pressure under slow exhaust to prevent boil over or allow containers holding Target Retrieval Solution and tissue sections to cool to about 85 C before removing from the pressure cooker. 4. Decant Target Retrieval Solution and rinse sections 2 to 3 times with room temperature buffer (Tris, PBS, etc.). 5. Proceed with staining. FRANÇAIS Réf. S1699 Utilisation prévue Pour une utilisation diagnostique in vitro. Après dilution, ce produit est destiné à être utilisé sur des coupes de tissus fixés au formol, inclus en paraffine et montés sur des lames de verre pour la restauration des cibles avant une procédure d'immunohistochimie (IHC) ou d hybridation in situ (ISH). Associé au Dako PT Link (réf. PT100/PT101), ce réactif peut servir de solution de restauration des cibles après déparaffinage des lames, et peut également être utilisé comme solution 3 en 1 lors d une procédure de préparation des échantillons 3 en 1 (déparaffinage, réhydratation et restauration de l épitope) sur des coupes de tissus fixés au formol et inclus en paraffine. Se référer aux Instructions générales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du système de détection relatives aux procédures IHC pour plus d informations concernant les points suivants : 1) Principe de procédure, 2) Matériels requis mais non fournis, 3) Conservation, 4) Préparation des échantillons, 5) Procédure de coloration, 6) Contrôle qualité, 7) Dépannage, 8) Interprétation de la coloration, 9) Limites générales. Réactifs fournis Tampon citrate 500 ml, concentré 10x, ph 6 Description La procédure de restauration comporte l immersion des coupes de tissus montés sur des lames dans la Target Retrieval Solution (solution de travail) diluée et le chauffage dans un PT Link (97 C), un bain-marie (95 99 C) ou un autocuiseur (121 C). La restauration des cibles avant une procédure IHC entraîne une augmentation de l intensité de coloration avec nombre d anticorps primaires. Pour d autres anticorps, cette procédure est nécessaire pour obtenir des résultats positifs. La restauration des cibles est également une option utile pour remplacer la prédigestion enzymatique lors des procédures ISH. La procédure 3 en 1 pour PT Link comporte l immersion des coupes de tissus montés sur des lames dans la Target Retrieval Solution (solution de travail) diluée avant déparaffinage et le chauffage dans un PT Link (97 C). La procédure 3 en 1 avant une procédure IHC inclut le déparaffinage, la réhydratation et la restauration des cibles en une seule étape. Lorsqu elle est utilisée dans le PT Link dans le cadre d une procédure de restauration de l épitope par la chaleur (HIER) ou d une procédure 3 en 1, la Dako Target Retrieval Solution (solution de travail) diluée peut être réutilisée 3 fois dans une période de 5 jours si elle est conservée à température ambiante. Précautions 1. Réservé aux utilisateurs professionnels. 2. La solution est chaude lors de son utilisation, ce qui peut causer des brûlures aux yeux ou sur les zones cutanées exposées. 3. Porter un vêtement de protection approprié pour éviter le contact avec les yeux et la peau. 4. Les solutions non utilisées doivent être éliminées conformément aux réglementations locales et nationales. 5. La fiche technique de sécurité destinée aux utilisateurs professionnels est disponible sur demande. Conservation Conserver entre 2 et 8 C. (106790-005) 301784EFG_004 p. 2/5
Préparation des réactifs Avant utilisation, le produit doit être dilué à 1:10 avec de l eau déionisée ou distillée (un volume de S1699 pour neuf volumes d eau) afin de préparer la solution de travail. Le ph final doit se situer entre 6,00 et 6,20 (idéalement, 6,10). Si le ph est supérieur à 6,20, ajuster avec 2N HCI. Si le ph est inférieur à 6,00, ajuster avec 2N NaOH. Procédure Procédure de préparation des échantillons 3 en 1 avec le PT Link : 1. Préparer une solution de travail en diluant le concentré à 1:10 dans de l eau distillée ou déionisée. 2. Remplir les réservoirs de PT Link d une quantité suffisante (1,5 L) de solution de travail pour recouvrir les coupes de tissus. 3. Régler le PT Link pour un préchauffage de la solution à 65 C. 4. Immerger les coupes de tissus montés, fixés au formol et inclus en paraffine dans la Target Retrieval Solution (solution de travail) préchauffée dans les réservoirs du PT Link et laisser incuber pendant 20 à 40 minutes à 97 C. Le temp s d incubation optimal doit être déterminé par l utilisateur. 5. Laisser les coupes refroidir dans le PT Link jusqu à revenir à 65 C. 6. Retirer chaque portoir à lames Autostainer contenant les lames du réservoir du PT Link et plonger immédiatement les lames dans une cuve/un réservoir (ex. : Dako PT Link Rinse Station, réf. PT109) contenant du Dako Wash Buffer (10x), réf. S3006, dilué, à température ambiante. 7. Laisser les lames dans le Dako Wash Buffer (10x), réf. S3006, dilué, à température ambiante pendant 1 à 5 minutes. 8. Placer les lames sur un instrument Dako Autostainer et procéder à la coloration. Les coupes ne doivent pas sécher lors du traitement ou lors de la procédure de coloration immunohistochimique. 9. Après coloration, il est recommandé d effectuer une déshydratation, une élimination des agents de déshydratation et un montage permanent. Procédure HIER utilisant le PT Link : 1. Préparer une solution de travail en diluant le concentré à 1:10 dans de l eau distillée ou déionisée. 2. Remplir les réservoirs de PT Link d une quantité suffisante (1,5 L) de solution de travail pour recouvrir les coupes de tissus. 3. Régler le PT Link pour un préchauffage de la solution à 65 C. 4. Déparaffiner manuellement et réhydrater les coupes de tissus montés sur des lames de verre. Pour une meilleure adhérence des tissus à la lame, il est recommandé d utiliser des lames enduites ou silanisées. 5. Immerger les coupes de tissus à température ambiante dans la Target Retrieval Solution (solution de travail) préchauffée et laisser incuber pendant 20 à 40 minutes à 97 C. Le temps d incubation optimal doit être déterminé par l utilisateur. 6. Laisser les coupes refroidir dans le PT Link jusqu à revenir à 65 C. 7. Retirer chaque portoir à lames du réservoir du PT Link et plonger immédiatement les lames dans une cuve/un réservoir (ex. : Dako PT Link Jar, réf. PT10930) contenant du Dako Wash Buffer (10x), réf. S3006 dilué, à température ambiante. 8. Laisser les lames dans le Dako Wash Buffer (10x), réf. S3006, dilué, à température ambiante pendant 1 à 5 minutes. 9. Placer les lames sur une plate-forme Dako Autostainer et procéder à la coloration. Les coupes ne doivent pas sécher lors du traitement ou lors de la procédure de coloration immunohistochimique. 10. Après la coloration, les lames doivent être montées à l aide d un milieu de montage aqueux ou permanent. Autre procédure : autocuiseur 1. Déparaffiner et réhydrater les coupes de tissus. 2. Immerger les coupes dans une jarre de Coplin ou autre récipient approprié rempli de Target Retrieval Solution (solution de travail) diluée. 3. Chauffer pendant 1 à 10 minutes à 15 psi (121 C ). Ensuite, évacuer immédiatement la pression en ouvrant lentement l échappement pour éviter l ébullition ou laisser refroidir le récipient contenant la Target Retrieval Solution et les coupes de tissu à environ 85 C avant de le sortir de l autocuiseur. 4. Laisser décanter la Target Retrieval Solution et rincer les coupes 2 ou 3 fois avec un tampon à température ambiante (Tris, PBS, etc.). 5. Procéder à la coloration. DEUTSCH Code-Nr. S1699 Verwendungszweck Zur In-vitro-Diagnostik. Dieses Produkt wird verdünnt und vor immunhistochemischen (IHC) oder In-situ-Hybridisierungs-Verfahren (ISH) zur Epitop-Demaskierung von formalinfixierten, paraffineingebetteten, auf Glasobjektträgern fixierten Gewebeschnitten angewendet. Bei Verwendung mit Dako PT Link, Code-Nr. PT100/PT101, kann dieses Reagenz als Demaskierungslösung nach Entparaffinierung der Objektträger eingesetzt werden; es eignet sich auch als 3-in-1 -Puffer für 3-in-1 -Probenvorbereitungsverfahren zur gleichzeitigen Entparaffinierung, Rehydrierung und Demaskierung von formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitten. Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen Färbung von Dako bzw. den Anweisungen des Detektionssystems für IHC-Verfahren entnehmen: 1) Verfahrensprinzip, 2) Erforderliche, aber nicht mitgelieferte Materialien, 3) Aufbewahrung, 4) Vorbereitung der Probe, 5) Färbeverfahren, 6) Qualitätskontrolle, 7) Fehlersuche und -behebung, 8) Auswertung der Färbung, 9) Allgemeine Beschränkungen. (106790-005) 301784EFG_004 p. 3/5
Geliefertes Reagenz 500 ml Zitratpuffer, ph 6, 10fach konzentriert Beschreibung Zur hitzeinduzierten Epitopdemaskierung gehört ein Eintauchen der auf Objektträgern fixierten Gewebeschnitte in eine verdünnte Demaskierungslösung, deren Temperatur in einem PT Link (97 C), einem Wasserbad (95 99 ºC) oder einem Dampfdrucktopf (121 C) beibehalten wird. Bei vielen Primärantikörpern kann durch eine Epitopdemaskierung vor IHC-Färbeverfahren die Färbungsintensität verstärkt werden, und bei bestimmten Antikörpern ist dieses Verfahren sogar eine Voraussetzung für positive Ergebnisse. Die Epitopdemaskierung ist bei ISH-Verfahren eine sinnvolle Alternative zur enzymatischen Andauung. Das 3-in-1 -Verfahren für PT Link umfasst das Eintauchen der auf Objektträgern fixierten Gewebeschnitte in eine verdünnte Demaskierungslösung vor der Entparaffinierung und der Erwärmung in PT Link (97 C). Vor IHC-Verfahren wird bei 3-in-1 -Verfahren die Entparaffinierung, Rehydrierung und Epitopdemaskierung in einem einzigen Schritt vorgenommen. Sowohl für die hitzeinduzierte Epitopdemaskierung (HIER) als auch für 3-in-1 -Verfahren mit PT Link kann die verdünnte Demaskierungslösung von Dako innerhalb von 5 Tagen 3 Mal verwendet werden, sofern sie bei Raumtemperatur aufbewahrt wird. Vorsichtsmaßnahmen 1. Nur für Fachpersonal bestimmt. 2. Die Lösung ist während des Gebrauchs heiß und kann bei Kontakt mit den Augen oder der Haut zu Verbrennungen führen. 3. Geeignete Schutzkleidung tragen, um Augen- und Hautkontakt zu vermeiden. 4. Nicht verwendete Lösung entsprechend örtlichen, bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien entsorgen. 5. Auf Anfrage ist für Fachpersonal ein Sicherheitsdatenblatt erhältlich. Lagerung Bei 2 8 C aufbewahren. Vorbereitung der Reagenzien Vor dem Gebrauch muss durch Verdünnung dieses Produkts im Verhältnis 1:10 mit entionisiertem oder destilliertem Wasser (ein Teil S1699 plus neun Teile Wasser) eine Arbeitslösung hergestellt werden. Der endgültige ph sollte zwischen 6,0 und 6,2 liegen (optimaler Wert 6,1). ph-werte über 6,2 mit 2 N HCl einstellen. ph-werte unter 6,0 mit 2 N NaOH einstellen. Verfahren 3-in-1-Probenvorbereitung mit PT Link: 1. Durch Verdünnen des Konzentrats mit destilliertem oder entionisiertem Wasser im Verhältnis 1:10 eine Arbeitslösung ansetzen. 2. Die PT Link-Behälter mit einer ausreichenden Menge (1,5 L) Arbeitslösung füllen, um die Gewebeschnitte zu bedecken. 3. Den PT Link auf 65 C einstellen, um die Lösung vorzuwärmen. 4. Die formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitte auf den Objektträgern in die vorgewärmte Demaskierungslösung (Arbeitslösung) in die PT Link -Behälter eintauchen und 20 40 Minuten lang bei 97 C inkubieren. Die o ptimale Inkubationsdauer ist vom Anwender selbst zu ermitteln. 5. Die Schnitte in PT Link auf 65 C abkühlen lasse n. 6. Die Autostainer-Objektträgergestelle mit den Objektträgern einzeln aus dem PT Link-Behälter herausnehmen und die Objektträger sofort in den Behälter (z.b. Dako PT Link Rinse Station, Code-Nr. PT109) mit verdünntem und auf Raumtemperatur gebrachtem Dako Wash Buffer (10x), Code-Nr. S3006, eintauchen. 7. Die Objektträger 1 5 Minuten im verdünnten raumwarmen Dako Wash Buffer (10x), Code-Nr. S3006, belassen. 8. Objektträger in einen Dako Autostainer einsetzen und mit der Färbung fortfahren. Die Gewebeschnitte dürfen während der Behandlung oder des immunhistochemischen Färbeverfahrens nicht austrocknen. 9. Nach der Färbung sollte eine Dehydrierung, Spülung und Permanentfixierung erfolgen. HIER-Verfahren mit PT Link: 1. Durch Verdünnen des Konzentrats mit destilliertem oder entionisiertem Wasser im Verhältnis 1:10 eine Arbeitslösung ansetzen. 2. Die PT Link-Behälter mit einer ausreichenden Menge (1,5 L) Arbeitslösung füllen, um die Gewebeschnitte zu bedecken. 3. Den PT Link zum Vorwärmen der Lösung auf 65 C e instellen. 4. Die Gewebeschnitte auf den Objektträgern manuell entparaffinieren und rehydrieren. Für eine bessere Haftung der Gewebeschnitte werden beschichtete Objektträger bzw. Silanized Slides empfohlen. 5. Die raumwarmen Gewebeschnitte in die vorgewärmte Demaskierungslösung (Arbeitslösung) eintauchen und 20 40 Minuten lang bei 97 C inkubieren. Die optimale Inkubationsdauer ist vom Anwender selbst zu ermitteln. 6. Die Schnitte in PT Link auf 65 C abkühlen lasse n. 7. Die Objektträgergestelle einzeln aus dem PT Link-Behälter herausnehmen und die Objektträger sofort in den Behälter (z.b. Dako PT Link Jar, Code-Nr. PT10930) mit verdünntem und auf Raumtemperatur gebrachtem Dako Wash Buffer (10x), Code-Nr. S3006, eintauchen. 8. Die Objektträger 1 5 Minuten im verdünnten raumwarmen Dako Wash Buffer (10x), Code-Nr. S3006, belassen. 9. Objektträger in einen Dako Autostainer einsetzen und mit der Färbung fortfahren. Die Gewebeschnitte dürfen während der Behandlung oder des immunhistochemischen Färbeverfahrens nicht austrocknen. 10. Nach dem Anfärben müssen die Objektträger mithilfe eines wässrigen oder permanenten Fixiermittels fixiert werden. (106790-005) 301784EFG_004 p. 4/5
Alternatives Verfahren: Dampfdrucktopf 1. Gewebeschnitte entparaffinieren und rehydrieren. 2. Die Schnitte in einer Coplin-Schale oder einem ähnlichen geeigneten Behälter in verdünnte Demaskierungslösung eintauchen. 3. Bei 1 bar (15 psi) und 121 C 1 10 Minuten lang erwärmen. Den Druck entweder sofort langsam ablassen, um ein Überkochen zu verhindern, oder die Behälter mit der Demaskierungslösung und den Gewebeschnitten vor der Entnahme aus dem Dampfdrucktopf auf etwa 85 C abkühlen lassen. 4. Die Demaskierungslösung abgießen und zwei- bis dreimal mit raumwarmem Puffer (Tris, PBS oder dergl.) spülen. 5. Mit der Färbung fortfahren. Edition 10/10 (106790-005) 301784EFG_004 p. 5/5