Dosage sérique de la 25 OH vitamine D. Techniques Limites Interprétation

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1 Dosage sérique de la 25 OH vitamine D Techniques Limites Interprétation

2 25 OH D: vitamine D dosée Principale forme circulante de vitamine D Les concentrations sériques de 1,25 (OH) 2 D sont 1000 fois moins importantes que celles de 25 OH D 2 formes à doser chimiquement proches : 25 OH D2 25 OH D3 Forme d origine végétale donc exclusivement thérapeutique Forme d origine animale donc endogène et /ou thérapeutique

3 Processus et sources d erreur Conservation Interférence avec le contenant Comparaison par rapport à une valeur antérieure mesurée par une autre méthode Seuils décisionnels Prélèvement Analyse Résultats Interprétation Robustesse de la méthode Biais Incertitude de mesure

4 Stabilité de la 25 OH D en tube Étude :Wielders JP, Wijnberg FA, Clinical Chemistry, 2009 Bonne conservation en sang total et en sérum réfrigéré Réserve sur les tubes avec gel séparateur: à éviter.

5 Techniques existantes Chimiques: HPLC LC/ / MS² RIA: Diasorin, IDS ELISA: IDS Immunochimiluminescence CLIA Diasorin IDS Roche Diagnostics Abbott

6 Techniques chimiques Chromatographie Avantage : très grande précision de mesure. Séparation des 25 OH D2 et 25 OH D3 Inconvénient : méthode complexe avec une étape d extraction de la vitamine D du sérum Spectrométrie de masse: Identification biochimique fiable et très précise Appareil installé dans les laboratoires de recherche ou de références. Pas de fournisseur fournissant une technique de dosage. La méthode doit être mise au point et validée. Technique absente des LABM

7 Techniques RIA RIA : Radio immunologic assay. Techniques dites «chaudes», utilisant un anticorps antivitamine D. Technique précise Les seuils de décision clinique ont été établis sur la méthode RIA de Diasorin: test de référence actuel Réglementation encadrant les techniques et les locaux de réalisation de la RIA sont strictes pour la protection des manipulateurs.

8 Techniques CLIA et ELISA Techniques immunologiques «froides» Techniques automatisées utilisées pour d autres paramètres dosables Grande diffusion dans les LABM Techniques très répandues mais différentes de la technique de référence. Quelle est la corrélation de ces méthodes par rapport à la RIA?

9 Corrélation entre les méthodes Étude; suédoise: Snellman et all., 2010 HPLC vs RIA (IDS) vs CLIA (Diasorin) 204 patients Conclusion : pas de taux comparables entre les 3 méthodes utilisées Impact clinique significatif

10 Corrélation entre les méthodes Impact de ces 3 méthodes par rapport à un seuil décisionnel de 50 nmol/l

11 Contrôle externe Une autre approche à mis en lumière ce problème: l EEQ DEQAS (vitamin D External Quality Assessment Scheme) Montre des CV importants (> 10%) Confirme des différences de résultats inter-méthodes

12 Résultat CQE inter-méthodes

13 Spécificité des tests immunologiques (RIA, CLIA, ELISA) D2 / D3 Test 25(OH)D2 25(OH)D3 RIA Diasorin 100% 100% CLIA Diasorin Liaison 104% 100% IDS RIA 75% 100% IDS EIA 75% 100% Roche CLIA (arrêté depuis 09/2010) < 10 % 100% Source afsspas : Recommandations à destination des biologistes concernant la spécificité des dosages de vitamine D Diasorin dispose de la meilleure spécificité

14 Vers une nouvelle méthode de référence Passer à une méthode de référence internationale chimique : LC/ MS² Mettre au point des étalons auxquels les fournisseurs pourront calibrer leur méthode et la rattacher à la méthode de référence. Travail similaire aux HbA1c Enfin, vérifier et/ou faire évoluer les valeurs de références une fois les techniques standardisées.

15 Requirements for 25(OH)D assays Choose an assay that measures both 25(OH)D2 and 25(OH)D3 If using an assay that separates 25(OH)D2 and 25(OH)D3 (i.e. HPLC or LC/MS-MS) indicate the sum of the 2 compounds (25(OH)D2+25(OH)D3) as the main results in your results sheet Participate to an external quality control scheme that provides materials with adocumented commutability with human sera (e.g. the UK based DEQAS) An internal quality control program has to be carried out in every laboratory by using different levels samples and valuable criteria for rejecting or accepting the analytical run Do not use population-based reference values (i.e. the concentrations of an apparently healthy population) in addition to a recommended range for 25(OH)D. This is highly confusing for the clinician We recommend serum as the sample of choice. Try to avoid gel tubes until more data are available Express results in ng/ml

16 Serum 25(OH)D range (ng/ml) according to the authors. Proposed 25(OH)D range Number of experts

17 Attention aux changements de méthodes de dosage Le changement de technique dans le dosage de 25 OH D entre 2 dosages pour un même patient rend difficile l interprétation des résultats Rester prudent sur l interprétation en tenant compte du CV > 10%. Test en voie de standardisation internationale Attention nouveaux tests Abbott et Roche, pas de données sur ces 2 tests qui risque d être très largement utilisés étant donné le nombre de LABM équipés d appareils adaptés à ces techniques

18 Conclusion Vitamine D : 25 OH D un paramètre en plein essor avec des implications cliniques de plus en plus nombreuses Des techniques hétérogènes Suivre un patient par une même technique spécifique des 2 formes de vitamine D