Les études toxicologiques

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1 Les études toxicologiques

2 LE PRODUIT À TESTER De nombreux facteurs peuvent influencer la pharmacocinétique et/ou la toxicité : forme galénique impuretés excipients taille des particules Les études toxicologiques seront réalisées avec des lots de produits proche de ceux qui seront utilisés pour les essais cliniques ou commercialisés. Collaboration toxicologues/galénistes.

3 LA VOIE D'EXPOSITION En général la voie orale plus une autre voie (intrapéritonéale, I.V., inhalation,...) Dépend de l'utilisation envisagée Si une utilisation I.V. est prévue, l'utilisation de cette voie est obligatoire Les différences de toxicité observées entre deux voies doivent être expliquées : Intérêt des études toxicocinétiques

4 Voie orale Solutions Suspensions dans l'eau dans une solution d'hydroxyméthyl cellulose à 0.5 %... Gavage Dans l'alimentation La voie I.V. Bolus Perfusion

5 Application sur la peau Animal rasé ou "nu" Eviter le léchage Utiliser éventuellement un pansement Inhalation Gaz Utilisation d'un masque Exposition de l'animal entier peu utilisé pour les médicaments contamination (peau, nourriture...)

6 LES DOSES Exprimées en mg/kg Le choix des doses ICH M3 (R2)

7 Les études toxicologiques réalisées en vue de l obtention d une AMM But : évaluer les propriétés d une nouvelle molécule sur le plan de la sécurité Appréciation générale du bénéfice attendu par rapport aux risques encourus Ces études permettent d évaluer les doses maximales tolérables les organes, tissus et cellules cibles les fonctions physiologiques altérées les risques d altérations génétiques et de cancérogenèse les risques sur la fonction de reproduction

8 Toxicité par administration unique = toxicité aiguë Première des études toxicologiques Administration unique d une dose élevée La recherche d une dose létale n est plus obligatoire depuis longtemps

9 DOSE MINIMALE MORTELLE (DMM) Dose minimale capable de tuer un animal (arrêt cardiaque) Donne une indication pour les études de DL50 (si on la recherche)

10 LA DL50 (Dose létale 50) Dose qui tue 50 % des animaux Directive de 1987 (CEE) demande une DL50 approximative "La DL50 est approximativement de..." "La DL50 est supérieure à...«on peut donner la «DL0»

11 Utile pour classer le produit dans l'échelle des toxicités Parfois utile en cas d'intoxication accidentelle ou volontaire chez l'homme (connaissance des organes cibles et des lésions observées) Utile pour le choix des doses des études ultérieures Première approche de la dose maximale tolérée

12 Protocole standard des études de tox aigue Deux espèces rongeurs (en général rat et souris) On utilise parfois le chien en tox aigue mais en principe à des doses non létales Tests sur substance médicamenteuses et parfois sur métabolites et impuretés Travailler sur les 2 sexes au moins pour une espèce

13 Deux voies d'administration (en général P.O., I.P.) Toutes les conditions opératoires (âge et poids des animaux, conditions d'administration...) doivent être fixées et précisées dans le rapport final Si DL50, recherche approximative : 3 groupes de 3 ou 5 animaux sont suffisants La DL50 peut être approchée avec 30 animaux (vs 400 auparavant)

14 Surveillance des animaux Pendant les heures qui suivent Jusqu'à 14 jours Mortalité, évolution pondérale Système nerveux central comportement mouvements réactions aux stimuli Système nerveux végétatif myosis mydriase Fonction respiratoire...

15 Fonction cardiaque Tachycardie Bradycardie... Fonction digestive Vomissements Diarrhée

16 Causes des décès Autopsie Recherche de l'organe-cible Période où la mort survient

17 Toxicité par administration réitérée = toxicité chronique et subaiguë BUTS Mettre en évidence les altérations fonctionnelles et anatomopathologiques consécutives aux administrations répétées de la substance Déterminer la dose maximale non toxique Coefficient de sécurité Dose non toxique/dose thérapeutique chez l homme Ou calcul sur les AUC

18 Quel est le premier organe lésé? Au bout de combien de temps? Le changement est-il réversible?

19 Des études toxicocinétiques sont réalisées en parallèle Lot satellite (rongeur) 3 animaux/points 3/5 points/dose

20 ICH M3 (R2) Choix des doses Durée des études

21 Protocole des études de tox en doses répétées IMPORTANCE DU CHOIX DES ESPÈCES Métabolisme proche de l homme (mais le métabolisme chez l homme est souvent inconnu à ce stade) Deux espèces dont une non rongeur (chien, singe) Le nombre d animaux pour l espèce non rongeur sera réduit (4 de chaque sexe) LE PRODUIT TESTÉ SERA AUSSI PROCHE QUE POSSIBLE DU PRODUIT FINI QUI SERA COMMERCIALISÉ LA VOIE D ADMINISTRATION SERA IDENTIQUE À CELLE QUI SERA UTILISÉE CHEZ L HOMME

22 CHOIX DES DOSES Une dose faible, que l on espère bien tolérée (sans toxicité) mais qui sera déjà un multiple de la dose thérapeutique humaine Une dose forte qui est souvent la dose maximale tolérée. Dose toxique mais non létale Une dose intermédiaire

23 RECHERCHE D'UNE DOSE SANS EFFET No Observed Adverse Effect Level = N.O.A.E.L. No observed Effect Level = N.O.E.L.

24 Examen clinique quotidien Dosages biochimiques et hématologiques Recherche de phénomènes particuliers Accumulation Induction enzymatique En fin d'étude Euthanasie de l'animal Etude histologique de 31 tissus ou organes + pesées Les animaux morts en cours d'étude sont également autopsiés Importance des témoins Animaux Produits de référence

25 Etudes de Pharmacocinétique (toxicocinétique) et de métabolisme sous l'angle de la sécurité (ICH) Améliorer l'interprétation des études toxicologiques Validation des résultats des études toxicologiques Pertinence du choix des espèces Relation Concentration/Toxicité Rôle des métabolites

26 Exemple d une étude 4 semaines chez le chien NOAEL = 4.6 mg/kg/j

27 Exemple tox répétée

28 Exemple de données individuelles histopathologie

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