APPLICATION AU DOSAGE PAR HPLC D UN PRINCIPE ACTIF DANS UNE SPECIALITE

TRANSPOSITION PAR VALIDATION RESTREINTE D UNE METHODE VALIDEE APPLICATION AU DOSAGE PAR HPLC D UN PRINCIPE ACTIF DANS UNE SPECIALITE 28/11/2007 Yves GUGGISBERG

1-BUT / DOMAINE APPLICATION 2-REFERENTIEL 1 1. BUT : Transposition par validation restreinte d une méthode validée : Proposition de protocole dans le cadre du dosage par HPLC d un principe actif dans une spécialité. 1 2. DOMAINE D APPLICATION : Transposition d une technique de dosage validée d une spécialité : - sur une autre spécialité similaire (cas des génériques) - contenant ou non dans sa formulation un ou plusieurs ecipients différents de ceu présents dans la spécialité dont la technique est validée 2 - REFERENTIEL : European OMLC Network «VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES» PA/PH/OMCL (05) 47, DEF May 2005 (1. Transfert of a method) Procédures opératoires internes (conformité, dosage) 2/45

3 - PRINCIPE Réaliser une séquence définie d injections permettant de : Réaliser un test de conformité du système Répondre au principau tests dans le cadre d une validation restreinte Effectuer le dosage du principe actif dans un produit fini Séquence d injections => Ensemble de données brutes (pesées, chromatogrammes) Traitement des données brutes => Répondre au tests demandés (utilisation sélective des données) 3/45

3 PRINCIPE PROPOSITION DE PROTOCOLE Jour 1 : Jour 2 : - Stabilité - Spécificité matière première - Répétabilité - Spécificité spécialité - Effet matrice - Linéarités gammes étalon et spécialité - Dosage - Eactitude - Fidélité intermédiaire - Effet mémoire L approche de chaque critère de validation comprend 3 parties : 1. Opération : décrit l essai à réaliser pour répondre au test 2. Traitement des données : principe du calcul / formule 3. Conclusion : résultat découlant du calcul Traitement des données et les différents calculs sur logiciel Ecel : - utilisation classique logiciel : fonctions mathématiques courantes (moyennes, écarts, ) - utilisation fonctions statistiques : fonctions spécifiques (droites régression, analyses variance, ) 4/45

3 PROPOSITION PROTOCOLE D INJECTION : JOUR 1 JOUR 1 SPECIFICITE STABILITE REPETABILITE BLANC ETALON 1-0 ETALON 1-1 (pureté) ETALON 1-2 ETALON 1-3 ETALON 1-4 ETALON 1-5 ETALON 1-6 ETALON 1-7 X (t =fin séquence J2) BLANC 5/45

3 PROPOSITION PROTOCOLE D INJECTION : JOUR 2 JOUR 2 SPECIFICITE EFFET MEMOIR E LINEARITE EXACTITUD E FIDELITE INTERMEDIAIRE DOSAGE EFFET MATRICE ETALON SPE ETALON SPE BLANC ETALON 80 % SPECIALITE 80 % ETALON 100 % /1 SPECIALITE 100 % /1 X (pureté) ETALON 100 % /2 SPECIALITE 100 % /2 ETALON 100 % /3 SPECIALITE 100 % /3 ETALON 120 % SPECIALITE 120 % BLANC 0.5 (ETALON + SPE) BLANC 6/45

4 - SPECIFICITE 4-1. Opération : Réaliser une analyse de pureté de pic - Sur chacun des principau pics - D un étalon - D une spécialité - Sur un détecteur à barrettes de diodes Si les opérations de validation sont réalisées sur un détecteur monochromatique : vérifier la spécificité sur un détecteur à barrettes de diodes 4-2. Traitement des données : En fonction de la présence ou de l absence du bruit de fond => adapter les paramètres de calcul de pureté 4-3. Conclusion : L échantillon doit présenter un niveau de pureté acceptable => dans le cas contraire : nécessité d injecter les ecipients 7/45

5 - STABILITE 5-1. Opération : Estimer la durée totale d une séquence Réaliser sur une prise d essai de matière première étalon 100 % : - une injection au temps t = 0 - une injection au temps t = fin séquence 5-2. Traitement des données : Ecart = (aire pic au temps fin 100) - 100 aire pic au temps 0 5-3. Conclusion : Le produit considéré stable si : - aire de fin de séquence est compris entre 98.0 et 102.0 % de l aire du pic de temps 0 - absence de pic supplémentaire 8/45

6 - REPETABILITE 6-1. Opération : Effectuer 7 injections étalon matière première 6-2. Traitement des données : Rejeter la première injection Calculer le CV des 6 injections suivantes 6-3. Conclusion : Le CV doit être inférieur ou égal à 1.0 % 9/45

7 EFFET MATRICE 7-1. Opération : - Injection solution étalon - Injection solution spécialité (c = 100%, par e. solutions pour dosage) - Injection du mélange à parts égales des 2 solutions 7-2. Traitement des données : Comparer les écarts entre : aire pic étalon aire pic spécialité aire pic mélange (0.5 étalon + 0.5 spécialité) 7-3. Conclusion : Théorie : (aire pic étalon + aire pic spécialité)/2 = aire pic mélange L écart doit être compris entre 98.0 et 102.0 % 10/45

8 - LINEARITE 8-1. Opération : Linéarité à effectuer :- sur le principe actif seul = gamme étalon - sur la forme pharmaceutique = gamme spécialité Pour chaque gamme :- 3 points indépendants 80, 100 et 120 % - 3 prises essais différentes (pas de dilution de sol. mère) - la concentration du point 100 % (calculée à partir de la valeur théorique fabricant) - les 2 gammes sont à réaliser le même jour / 1 seule injection de chaque solution 8-2. Traitement des données : Pour chaque gamme (étalon et spécialité) calculer : - les paramètres de régression : droite y=b+a / pente b / ordonnée à l origine a / coefficient détermination R 2 - le test de validité des droites (test de F) 8-3. Conclusion : On doit s assurer que la réponse obtenue est due à une régression linéaire: => par le test de F : si F calculé > F fié pour un alpha=5% (valeur critique de F alpha fié) => et par le calcul de R 2 (> 0.980) : eistence d une pente / ordonnée passe par l origine 11/45

9 - DOSAGE 9-1. Opération : Réaliser 3 prises d essais étalon et 3 prises d essais spécialités Alterner injection étalon et spécialité Une seule injection de chaque solution 9-2. Traitement des données : Vérifier le facteur de réponse des étalons (98.0 < FR < 102.0%) Pour chaque couple étalon/spécialité calculer la valeur de dosage Réaliser la moyenne des 3 valeurs 9-3. Conclusion : La valeur individuelle de chaque dosage doit être comprise entre 95.0 et 105.0 % La moyenne des 3 valeurs doit être comprise entre 95.0 et 105.0 % avec un CV acceptable 12/45

10 - EXACTITUDE 10-1. Opération : Elle est déduite des données de la LINEARITE des gammes Etalon et Spécialité 10-2. Traitement des données : Les valeurs obtenues pour chaque point (80, 100 et 120 %) de la gamme de la spécialité sont projetées sur la gamme étalon On obtient ainsi la quantité recouvrée, à partir de laquelle on calcule le pourcentage de recouvrement Calcul de la quantité recouvrée : On dispose -> pour étalon :droite régression : aire étalon = b +a -> pour spécialité : aire spécialité => quantité recouvrée = (aire pic spécialité a) b Pourcentage de recouvrement : => % recouvrement = (quantité recouvrée 100) quantité (*) (*) soit : valeur théorique, valeur BA fabricant, valeur trouvée lorsque dosage effectué en même temps que la validation restreinte 10-3. Conclusion : L eactitude est vérifiée si la valeur moyenne de recouvrement est comprise entre 95.0 et 105.0 % 13/45

11 FIDELITE INTERMEDIAIRE 11-1. Opération : Correspond à la «répétabilité» des 3 points 100 % de la matière première et du dosage provenant de 3 prises d essais différentes 11-2. Traitement des données : Projection de chaque point de la spécialité sur la droite de régression de la spécialité ET Projection de chaque point étalon sur la droite de régression de la matière première Pour chaque aire mesurée => calculer la concentration corrigée : c c spécialité = (aire spécialité a spécialité) b spécialité c c étalon = (aire étalon a étalon) 11-3. Conclusion : b étalon La Fidélité intermédiaire est satisfaisante si chacun des CV est inférieur à 2.0 % 14/45

12 EFFET MEMOIRE 12-1. Opération : Injecter un Blanc en début et en fin de séquence 12-2. Traitement des données et conclusion : Vérifier l absence de pic supplémentaire Si pic : valeur limite : 0.1 % aire pic principal 15/45

14 - EXEMPLE D APPLICATION Molécule Ranitidine chlorhydrate Méthode de dosage : HPLC Application de la méthode validée de la spécialité de référence à une autre spécialité de la série génériques 16/45

Répétabilité RANITIDINE REPETABILITE ETALON N enregistrement : 00/X/MS/0378 Injection 1 2 3 4 5 6 Prise essai (mg) 10,6 10,6 10,6 10,6 10,6 10,6 Moyenne Ecart type C.V. (%) Limite < 1,0 % Aire 1602,39905 1620,13330 1610,09729 1614,60913 1604,12781 1605,80835 1609,52916 6,82 0,42 1,0 17/45

Stabilité RANITIDINE STABILITE ETALON N enregistrement : 00/X/MS/0378 Temps Prise essai (mg) Aire % Ecart / t = 0 (%) t = 0 10,6 1602,39905 100,0 0,0 t = intermédiaire 10,6 1610,22532 100,5 0,5 t = fin 10,6 1605,65558 100,20 0,2 Limite % 98,0-102,0 + / - 2,0 Limite inférieure 98,0-2,0 Limite supérieure 102,0 2,0 18/45

Effet matrice RANITIDINE EFFET MATRICE N enregistrement étalon : 00/X/MS/0378 Etalon Spécialité 0,5 étalon + 0,5 spécialité % Ecart théorie / trouvé (%) Théorie Trouvé Prise essai 0,1005 1,5514 Aire 1504,9 1520,8 1512,85 1526,258 100,9 0,9 Limite % 98,0-102,0 + / - 2,0 Limite inférieure 98,0-2,0 Limite supérieure 102,0 2,0 19/45

Effet mémoire RANITIDINE EFFET MÉMOIRE sur BLANC Injection Pic interférent (oui / non) Blanc 1 Non Blanc 2 Non Conclusion : Absence d'effet mémoire 20/45

Données brutes RANITIDINE DONNEES BRUTES 00/X/MS/0378 ETALON 80% 100%-1 100%-2 100%-3 120% Prise d essai (g) : 0,0804 0,1005 0,1007 0,1003 0,1206 Titre (%) : 100,80% 100,80% 100,80% 100,80% 100,80% Teneur en eau (%) : 0,10% 0,10% 0,10% 0,10% 0,10% Volume de dilution (L) : 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 Concentration (g/l) 0,0810 0,1012 0,1014 0,1010 0,1214 Aire : 1212,297 1504,88013 1521,35 1505,97913 1814,94 00/M/MS/0429 SPECIALITE 80% 100%-1 100%-2 100%-3 120% Prise d essai (g) : 1,2416 1,5514 1,5418 1,5524 1,8530 Poids moyen (g) : 0,3096 0,3096 0,3096 0,3096 0,3096 Teneur théorique (g) : 0,1500 0,1500 0,1500 0,1500 0,1500 Volume de dilution (L) : 8,3333 8,3333 8,3333 8,3333 8,3333 Concentration (g/l) 0,0806 0,1007 0,1000 0,1007 0,1202 Aire : 1235,989 1520,82336 1519,46 1528,87000 1836,08 21/45

Calculs intermédiaires RANITIDINE 00/X/MS/0378 ETALON Ci - Cmoy (Ci - Cmoy) 2 Ai - Amoy (Ai - Amoy) 2 (Ci - Cmoy) (Ai - Amoy) Aires corrigées A i (A i - A moy) 2 (Ai - A i) 2 80% -0,0202 0,00040968-298,4074 89046,9923 6,039927 1209,38479 90793,4501 8,480258 100%-1 0,0000 0-5,8242 33,9210338 0 1510,70431 5,1699E-26 33,92103 120% 0,0202 0,00040968 304,2316 92556,8685 6,157812 1812,02382 90793,4501 8,480258 Somme : 0,0000 0,0008 0,0000 181637,7818 12,1977 4532,1129 181586,9002 50,8816 00/M/MS/0429 SPECIALITE Ci - Cmoy (Ci - Cmoy) 2 Ai - Amoy (Ai - Amoy) 2 (Ci - Cmoy) (Ai - Amoy) Aires corrigées A i (A i - A moy) 2 (Ai - A i) 2 80% -0,0199 0,00039697-294,9758 87010,7147 5,877127 1229,66316 90782,534 40,01339 100%-1 0,0002 3,1454E-08-10,1412 102,84387-0,001799 1533,64657 7,19320019 164,4347 120% 0,0197 0,00038993 305,1170 93096,3735 6,025068 1829,58394 89173,538 42,21877 Somme : 0,0000 0,0008 0,0000 180209,9321 11,9004 4592,8937 179963,2652 246,6669 22/45

Etude de régression ETALON RANITIDINE 3 points 80/100/120% 00/X/MS/0378 Aire moyenne : Concentration moyenne : Coefficient de détermination r 2 = Ecart-type résiduel = ETALON MATIERE PREMIERE 1510,7043 0,1012 0,99972 7,13313 Analyse des variances de régression F calculé 3568,81615 F (1;1;0,05) 161 Au risque alpha de 5%, on conclue que l eistence de la pente est significative t calculé t (1 d.d.l.) Pente B = 14886,9312 Ecart-type de B = 249,197163 59,7395694 6,314 Ordonnée à l origine A = 4,10673167 Ecart-type de A = 25,5534714 0,1607113 12,706 Au risque alpha de 5 %, la différence entre la pente et 0 est significative Au risque alpha de 5%, la différence entre A et 0 est non significative Si la différence entre A et O n'est pas significative, alors on peut conclure que la droite passe par l'origine au risque d'erreur considéré. 23/45

Linéarité ETALON RANITIDINE 2000 1800 1600 1400 LINEARITE ETALON MATIERE PREMIERE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/120 Aire 1200 1000 y = 14887 + 4,1067 R 2 = 0,9997 00/X/MS/0378 Linéaire (00/X/MS/0378) 800 600 400 200 0 0,0000 0,0200 0,0400 0,0600 0,0800 0,1000 0,1200 0,1400 concentration (g/l) 24/45

Etude de régression SPECIALITE RANITIDINE 3 points 80/100/120% 00/M/MS/0429 Aire moyenne : Concentration moyenne : Coefficient de détermination r 2 = Ecart-type résiduel = SPECIALITE 1530,9646 0,1005 0,99863 15,70563 F calculé F (1;1;0,05) Analyse des variances de régression 729,580131 Au risque alpha de 5%, on conclue que l eistence de la pente est significative 161 t calculé t (1 d.d.l.) Pente B = 15122,4588 Ecart-type de B = 559,868341 27,010741 6,314 Ordonnée à l origine A = 11,3745572 Ecart-type de A = 56,9847967 0,19960688 12,706 Au risque alpha de 5 %, la différence entre la pente et 0 est significative Au risque alpha de 5%, la différence entre A et 0 est non significative Si la différence entre A et O n'est pas significative, alors on peut conclure que la droite passe par l'origine au risque d'erreur considéré. 25/45

Linéarité SPECIALITE RANITIDINE LINEARITE SPECIALITE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/120 2000 1800 1600 1400 Aire 1200 1000 y = 15122 + 11,375 R 2 = 0,9986 00/M/MS/0429 Linéaire (00/M/MS/0429) 800 600 400 200 0 0,0000 0,0200 0,0400 0,0600 0,0800 0,1000 0,1200 0,1400 concentration (g/l) 26/45

Eactitude RANITIDINE 00/X/MS/0378 ETALON Concentration (g/l) Aire Concentration corrigée (g/l) 80% 0,0810 1212,2969 0,0812 100%-1 0,1012 1504,8801 0,1008 120% 0,1214 1814,9359 0,1216 Teneur réelle (g): 0,15232 00/M/MS/0429 SPECIALITE Concentration (g/l) Aire Concentration Recouvrée (g/l) Recouvrement (%) Concentration (g/l) Recouvrement (%) 80% 0,0806 1235,9888 0,0827 102,72 0,0840 104,30 100%-1 0,1007 1520,8234 0,1019 101,21 0,1035 102,78 120% 0,1202 1836,0815 0,1231 102,35 0,1250 103,93 Moyenne (%): 102,09 103,67 27/45

Fidélité intermédiaire RANITIDINE 00/X/MS/0378 ETALON Concentration (g/l) Aire Concentration corrigée (g/l) 100%-1 0,1012 1504,8801 0,1008 100%-2 0,1014 1521,3455 0,1019 100%-3 0,1010 1505,9791 0,1009 C.V. (%) : 0,61 00/M/MS/0429 SPECIALITE Concentration (g/l) Aire Concentration corrigée (g/l) 100%-1 0,1007 1520,8234 0,0998 100%-2 0,1000 1519,4641 0,0997 100%-3 0,1007 1528,8700 0,1003 C.V. (%) : 0,34 28/45

Superposition des 2 droites ETALON / SPECIALITE RANITIDINE 2000 SUPERPOSITION DES 2 DROITES ETALON / SPECIALITE 1800 y = 15122 + 11,375 1600 1400 Aire 1200 1000 800 y = 14887 + 4,1067 00/X/MS/0378 00/M/MS/0429 Linéaire (00/M/MS/0429) Linéaire (00/X/MS/0378) 600 400 200 0-0,0200 0,0000 0,0200 0,0400 0,0600 0,0800 0,1000 0,1200 0,1400 concentration (g/l) 29/45

Dosage RANITIDINE Dosage de la ranitidine base par HPLC Titre étalon 100,8% Poids moyen SPECIALITE (g) 0,30962 Teneur en eau étalon 0,1% MM ranitidine (g/mol) 314,4 Volume dilution étalon 1000 MM ranitidine (g/mol) 350,9 Volume dilution dosage 8333,33 Masse (g) Aire F.R. Teneur (mg/unité) C.V. (%) F.R. % Etalon 1 0,1005 1504,88013 14974 99,1% SPE MS/0429 1 1,5514 1520,82336 152,40 Etalon 2 0,1007 1521,34546 15108 0,28 100,6% SPE MS/0429 2 1,5418 1519,46411 151,86 Etalon 3 0,1003 1505,97913 15015 100,3% SPE MS/0429 3 1,5524 1528,87000 152,69 Teneur moyenne (ranitidine base) Théorie (mg/unité) = Erreur maimum tolérée = Limite inférieure = Limite supérieure = Teneur (mg/unité) = 150,0 5,0% 142,5 157,5 152,3 30/45

EXEMPLE MODELE DE RAPPORT FINAL DE VALIDATION RESTREINTE DOMAINE DE CONCENTRATION Teneur théorique 100 % : 150 mg Points de gamme : 80 % 100 % 120 % PURETÉ DE PIC (sur barrette de diodes) Etalon Pur Impur Spécialité Pur Impur STABILITÉ de la spécialité sur la durée d'analyse Stable Instable EFFET MÉMOIRE Etalon Spécialité EFFET MATRICE EXACTITUDE Oui Non Oui Non Oui Non Limites : 95,0-105,0 % Sur une teneur théorique de 100 % :102,1 % Sur la teneur mesurée : 103,7 % FIDÉLITÉ INTERMÉDIAIRE («Répétabilité») C.V. limite : 2,0 % Etalon : 0,61 % Spécialité : 0,34 % LINÉARITÉ Coefficient de détermination r2 Limite inférieure : 0,98 Etalon 0.999 Spécialité 0.998 Analyse de variance de régression Eistence d'une pente significative : Etalon Oui Non Spécialité Oui Non Paramètres de régression Etalon : ordonnée origine A = 4,10 pente B = 14886,93 Spécialité : ordonnée origine A = 11,37pente B = 15122,46 Comparaison des paramètres de régression avec 0 La différence de A avec 0 doit être non significative (au risque d'erreur de 5 %). La différence de B avec 0 doit être significative (au risque d'erreur de 5 %). Etalon : - A ord. Origine Différence significative Différence non significative - B pente Différence significative Différence non significative Spécialité : - A ord. Origine Différence significative Différence non significative - B pente Différence significative Différence non significative Comparaison des paramètres de régression étalon/spécialité Théorie : la différence entre les paramètres de régression doit être non significative. Comparaison des pentes Différence significative Différence non significative Comparaison ordonnées à l'origine Différence significative Différence non significative 31/45

AUTRE EXEMPLE Molécule Phloroglucinol Méthode de dosage : HPLC Application de la méthode validée d une spécialité à une autre spécialité de la série génériques 32/45

Pureté de pic PHLOROGLUCINOL MATIERE PREMIERE 33/45 SPECIALITE

Données brutes PHLOROGLUCINOL RAPPORT DÉTAILLÉ 99/X/MS/1427 ETALON Statistiques de la régression Coefficient de détermination multiple Coefficient de détermination R^2 Coefficient de détermination R^2 Erreur-type Observations 0,999000532 0,998002062 0,996004124 9,78987629 3 ANALYSE DE VARIANCE Degré de liberté Somme des carrés Moyenne des carrés F calculé Valeur critique de F Régression 1 47874,45481 47874,45481 499,5160344 0,028465305 Résidus 1 95,84167777 95,84167777 Total 2 47970,29649 34/45

Données brutes PHLOROGLUCINOL Coefficients Erreur-type Statistique t Probabilité Limite inférieure seuil de confiance = 95% Limite supérieure seuil de confiance = 95% Ordonnée à l'origine, a -24,63764417 35,27597435-0,698425618 0,611872946-472,8594763 423,5841879 Pente, b 1241,652972 55,55530234 22,34985536 0,028465305 535,75895 1947,546993 ANALYSE DES RÉSIDUS Observation 1 2 Prévisions pour Y 598,0513211 755,2445873 Résidus 3,93237891-7,993057295 CONCLUSION DROITE ETALON Eistence d une pente significative au risque d erreur de 5 % L ordonnée à l origine n est pas significativement différente de 0 au risque d erreur de 5 % 3 907,4712416 4,060678385 35/45

Linéarité ETALON PHLOROGLUCINOL 1000 800 LINEARITE ETALON MATIERE PREMIERE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/120 y = 1241,7-24,638 R 2 = 0,998 points de gamme étalon DROITE ETALON Aire 600 400 200 0 0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800 Concentration g/l 36/45

Données brutes PHLOROGLUCINOL RAPPORT DÉTAILLÉ 99/M/MS/1301 SPECIALITE Statistiques de la régression Coefficient de détermination multiple 0,999230052 Coefficient de détermination R^2 Coefficient de détermination R^2 Erreur-type Observations 0,998460697 0,996921394 8,337793446 3 ANALYSE DE VARIANCE Degré de liberté Somme des carrés Moyenne des carrés F calculé Valeur critique de F Régression 1 45092,99984 45092,99984 648,6446851 0,024983522 Résidus 1 69,51879955 69,51879955 Total 2 45162,51864 37/45

Données brutes PHLOROGLUCINOL Coefficients Erreur-type Statistique t Probabilité Limite inférieure seuil de confiance = 95% Limite supérieure seuil de confiance = 95% Ordonnée à l'origine, a -1,032720855 29,94840354-0,0344833 0,978055922-381,5616374 379,4961957 Pente, b 1208,966229 47,46907157 25,4685037 0,024983522 605,8170711 1812,115387 ANALYSE DES RÉSIDUS CONCLUSION DROITE SPECIALITE Observation 1 2 Prévisions pour Y 601,9996342 751,0651703 Résidus 3,428525784-6,807720263 Eistence d une pente significative au risque d erreur de 5 % L ordonnée à l origine n est pas significativement différente de 0 au risque d erreur de 5 % 3 902,3068455 3,379194478 38/45

Linéarité SPECIALITE PHLOROGLUCINOL LINEARITE SPECIALITE DROITE DE REGRESSION 3 POINTS DE GAMME 80/100/120 1000 800 y = 1209-1,0327 R 2 = 0,9985 points de gamme spécialité DROITE SPECIALITE Aire 600 400 200 0 0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800 Concentration g/l 39/45

Comparaison des droites PHLOROGLUCINOL COMPARAISON DES DROITES DROITE ETALON DROITE SPECIALITE 99/X/MS/1427 99/M/MS/1301 a 1 = -24,63764417 a 2 = -1,032720855 b 1 = 1241,652972 b 2 = 1208,966229 S2 = 1 95,84167777 S 2 = 2 69,51879955 Sa 1 = 35,27597435 Sa 2 = 29,94840354 Sb 1 = 55,55530234 Sb 2 = 47,46907157 Egalité des variances (F-test) : VERIFIER SI LES 2 VARIANCES SONT IDENTIQUES S 2 1 = S 2 2 F calculé = 1,378644027 F = (S 2 2 /S2 1 ) F (0,05;1;1) = 161,4 lu sur table avec S 2 2 >S2 1 Hypothèse H0 : S 2 1 = S 2 2 => F calculé < F fié => CONCLUSION les 2 variances peuvent être considérées comme identiques 40/45

Comparaison des droites PHLOROGLUCINOL Comparaison des pentes b Sb 1 -b 2 = t calculé = 73,07328085 0,447314561 S b1-b2 = (Sb 1 2 +Sb 2 2 ) 1/2 t = (b 1 -b 2 )/S b1-b2 t (0,05;2) = 4,303 lu sur table Hypothèse H0 : b1 = b2 => t calculé < t fié => CONCLUSION les 2 pentes peuvent être considérées comme identiques avec b 1 >b 2 Comparaison des ordonnées à l'origine Sa 1 -a 2 = 46,27419627 S a1-a2 = (Sa 1 2 +Sa 2 2 ) 1/2 t calculé = 0,51010985 t = (a 1 -a 2 )/ Sa1-a2 t (0,05;2) = 4,303 lu sur table avec a 1 >a 2 Hypothèse H0 : a1 = a2 => t calculé < t fié => CONCLUSION les 2 ordonnées à l'origine peuvent être considérées comme identiques 41/45

Comparaison des droites PHLOROGLUCINOL CONCLUSION COMPARAISON DES DROITES : Les variances ne sont pas significativement différentes au risque d erreur de 5 % Les pentes ne sont pas significativement différentes au risque d erreur de 5 % Les ordonnées à l origine ne sont pas significativement différentes au risque d erreur de 5 % 42/45

Superposition des 2 droites ETALON/SPECIALITE PHLOROGLUCINOL SUPERPOSITION DES 2 DROITES ETALON / SPECIALITE 1000 SPECIALITE y = 1209-1,0327 800 R 2 = 0,9985 600 points de gamme spécialité Aire 400 200 ETALON y = 1241,7-24,638 R 2 = 0,998 points de gamme étalon DROITE SPECIALITE DROITE ETALON 0 0,000 0,100 0,200 0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800-200 Concentration g/l 43/45

Eactitude PHLOROGLUCINOL EXACTITUDE 99/X/MS/1427 ETALON concentration (g/l) aire 80% 0,5015 601,984 100%-1 0,6281 747,252 120% 0,7507 911,532 99/M/MS/1301 SPECIALITE concentration (g/l) aire concentration recouvrée (g/l) recouvrement (%) biais (%) 80% 0,4988 605,428 0,5074 101,73-1,73 100%-1 0,6221 744,257 0,6193 99,54 0,46 120% 0,7472 905,686 0,7493 100,28-0,28 moyenne (%) : 100,52 44/45

Fidélité intermédiaire PHLOROGLUCINOL (REPETABILITE des 3 points étalon et spécialité) Points 100% ETALON 99/X/MS/1427 100%-1 100%-2 concentration (g/l) 0,6281 0,6231 aire 747,252 748,299 [C] corrigée ETALON (g/l) 0,6217 0,6225 recouvrement (%) 98,98 99,90 100%-3 0,6241 752,569 0,6259 100,30 moyenne : 0,6234 99,73 écart-type : 0,0023 0,68 CV (%) : 0,36 0,68 Points 100% SPECIALITE 99/M/MS/1301 100%-1 100%-2 concentration (g/l) 0,6221 0,6221 aire 744,257 753,307 [C] corrigée SPECIALITE (g/l) 0,6165 0,6240 recouvrement (%) 99,09 100,30 100%-3 0,6226 756,156 0,6263 100,60 moyenne : 0,6222 100,00 écart-type : 0,0051 0,79 CV (%) : 0,83 0,79 45/45