1. Introduction PHYSIOLOGIE DE LA COAGULATION L hémostase est un phénomène physiologique permettant de limiter les pertes sanguines provoquées par une lésion vasculaire. La lésion de l endothélium vasculaire va en effet provoquer la formation d un thrombus plaquettaire (hémostase primaire) et la formation d un réseau de fibrine insoluble qui va consolider ce thrombus (coagulation plasmatique). La coagulation est l aboutissement d une cascade de réactions protéolytiques entraînant l activation en chaîne de facteurs plasmatiques de la coagulation, circulant sous forme de précurseurs inactifs (zymogènes). C est un phénomène localisé au site de la brèche vasculaire car cette cascade de réactions, malgré son auto-amplification, est limitée et régulée par différents systèmes d inhibiteurs physiologiques. L équilibre entre la coagulation et les mécanismes qui vont la limiter est fondamental, une rupture ayant pour conséquence un risque hémorragique (déficit en facteurs) ou thrombotique (excès de facteurs activés ou déficit en inhibiteurs). 2. Les facteurs de la coagulation Ce sont des glycoprotéines plasmatiques. - Les Facteurs II, VII, IX et X sont les zymogènes de sérine protéases (enzymes protéolytiques) : ils n ont pas d activité enzymatique à l état basal, mais peuvent être transformés en sérine protéase par protéolyse limitée. Leur synthèse hépatique est vitamine K dépendante (modification post-traductionnelle). La vitamine K réduite est en effet nécessaire (cofacteur) à la γ-carboxylation des résidus acide glutamique (transformation en acides γ-carboxyglutamiques), cette réaction permettant aux protéines d acquérir la faculté de se lier aux phospholipides membranaires par l intermédiaire d ions calcium (cette liaison conditionne l activation ultérieure du zymogène en facteur activé) - Les Facteurs XI, XII, et la prékallicréine (PK) sont aussi les zymogènes de sérine protéases, mais ne sont pas des protéines vitamine K dépendantes. - Le Facteur XIII est le zymogène d une transglutaminase, enzyme établissant des liaisons covalentes entre 2 protéines. - Les Facteurs V, VIII et le kininogène de haut poids moléculaire (KHPM) n ont pas d activité enzymatique mais jouent le rôle de cofacteur. Pour acquérir cette fonction, les F. V et VIII doivent être au préalable activés par protéolyse. Le KHPM ne nécessite pas de protéolyse pour être actif, mais requiert d être fixé sur une surface électronégative (telle que le sous endothélium). Remarque : le F VIII circule dans le plasma sous forme d un complexe équimoléculaire avec le facteur Willebrand qui assure son transport et sa stabilisation (protection vis à vis de protéases) - Le fibrinogène est le substrat final des réactions de coagulation : protéine soluble, il est transformé en fibrine insoluble par la thrombine (facteur II activé). MAJ : fev 2006 Page 1 sur 5
Lieu de synthèse Vitamine K dépendant Concentration plasmatique (mg/l) Demivie (h) Taux minimum nécessaire à l'hémostase F I (Fibrinogène) Foie Non 2-4 10 3 120 0,5 à 1g/L F II (Prothrombine) Foie Oui 100-150 80 40% F V (Proaccélérine) F VII (Proconvertine) Foie Non 5-10 24 10 à 15% Foie Oui 0,35-0,6 6 5 à 10% F VIII (Fact. antihémophilique A) Foie + SRH Non 0,1-0,2 12 30 à 50% F IX (Fact. antihémophilique B) F X (Fact. Stuart) F XI (Fact. Rosenthal) F XII (Fact. Hageman) Foie Oui 3-5 24 30 à 50% Foie Oui 7-17 48 10 à 20% Foie Non 3-6 60 Environ 30%* Foie Non 30-40 60 - F XIII (stabilisant de la fibrine) Foie Non 20-30 240 2 à 3% SRH : système réticulo-histiocytaire * Valeur insuffisamment documentée 3. Les différentes étapes de la coagulation La coagulation fait intervenir des protéines plasmatiques (facteurs de coagulation et inhibiteurs de la coagulation), une protéine tissulaire (facteur tissulaire), les phospholipides plaquettaires (surface catalytique sur laquelle vont se fixer les facteurs de coagulation) et les ions calcium. In vitro la coagulation peut être initiée de 2 façons différentes : la voie exogène : exposition du sang au contact du facteur tissulaire (FT). la voie endogène : exposition du sang au contact d'une surface chargée négativement. Ces 2 voies, par l activation en chaîne des facteurs de la coagulation, aboutissent à la formation de thrombine, enzyme protéolytique qui va transformer le fibrinogène circulant en fibrine, constituant principal du caillot. MAJ : fev 2006 Page 2 sur 5
In vivo la rupture de la continuité endothéliale avec exposition du facteur tissulaire semble être l'élément primordial responsable de l'initiation de la coagulation. La voie exogène : initiation de la coagulation par le facteur tissulaire (FT) - Le facteur tissulaire = glycoprotéine transmembranaire synthétisée par les fibroblastes présents dans la tunique externe (adventice) des vaisseaux : le FT est séparé du sang par l endothélium, mais entre en contact du sang en cas de lésion du vaisseau. - FT et activation du F VII : lors d une lésion vasculaire, le FT fixe le F VII, en présence d ions calcium, et cela facilite l activation du F VII en sérine protéase (VIIa). Le complexe F VIIa/FT est capable d activer le F VII, dans une réaction d auto-activation (auto-amplification par les premières traces de F VIIa produites). - Activation des F IX et X : le complexe F VIIa/FT active ensuite simultanément les F IX et F X fixés sur les surfaces membranaires (FT = cofacteur). C est la voie principale de la coagulation. Résultat = Xa et IXa. La voie endogène : la phase contact - les facteurs du système contact : 3 zymogènes : F XII F XI Prékallicréine (PK) 1 cofacteur : Kininogène de haut poids moléculaire (KHPM) - Activation du système contact : Fixation aux surfaces électronégatives du sous-endothélium du F XII et du KHPM, et par l intermédiaire de ce dernier du F XI et de la PK. Activation du F XII : Cette fixation entraîne une auto-activation progressive et lente du F XII en F XIIa. Le F XIIa transforme la PK en Kallicréine, celle-ci activant le F XII par protéolyse : boucle d amplification de l activation du F XII. Activation du F XI : Le F XIIa formé transforme par protéolyse le F XI en XIa. Le F XI peut également être activé par la thrombine (permettant la formation de XIa en cas de déficit en F XII). calcium. Activation du F IX : Le F XIa généré active le F IX en présence d ions - Cette voie n a qu un rôle accessoire puisque les déficits constitutionnels sévères en F XII, PK ou KHPM ne s accompagnent pas de manifestations hémorragiques. En revanche, les déficits constitutionnels en F XI sont associés à des hémorragies parfois sévères (importance de l activation rétro-active du F XI par la thrombine). Par ailleurs, les facteurs du système contact participent à d autres processus physiologiques : fibrinolyse, inflammation, activation du complément. Résultat = IXa Le complexe ténase - Activation du F IXa = protéolyse du F IX MAJ : fev 2006 Page 3 sur 5
* par le complexe F VIIa/FT Ca²+ (voie exogène) * par le F XIa en présence d ions Ca²+ - Le F IXa forme un complexe équimoléculaire avec le F VIIIa (son cofacteur) en présence de phospholipides (PL) chargés négativement (surface des plaquettes activées) et d ions Ca²+. Ce complexe, appelé ténase, active le F X en Xa. L activation du facteur VIII (nécessaire à l activité du complexe) est catalysée par le F Xa ou la thrombine, une fois les premières traces formées (activation rétroactive). Remarque : l absence de l un ou l autre des F VIII ou IX se traduit par une maladie hémorragique très sévère, l hémophilie, de transmission récessive liée à l X. Le complexe Prothrombinase et la formation de la thrombine - Activation du F Xa = protéolyse du FX par le complexe F VIIa/FT Ca²+ (voie exogène) par la ténase = complexe IXa VIIIa PL Ca²+ - Le facteur Xa forme un complexe équimoléculaire avec le F Va (son cofacteur) en présence d ions Ca²+ et des PL anioniques (surface plaquettaire). Ce complexe, appelé prothrombinase, active la prothrombine en thrombine. L activation par protéolyse du F V est nécessaire pour qu il puisse interagir avec la prothrombine et le F Xa. Initialement cette activation est vraisemblablement catalysée par le F Xa. Mais la thrombine formée est elle aussi capable de l activer, auto-amplifiant sa propre production. Rôles de la thrombine - Amplification du processus La thrombine amplifie immédiatement sa propre formation : elle stimule les plaquettes : recrutement et activation de nouvelles plaquettes : accroissement du thrombus plaquettaire avec un exposition plus grande de PL acides membranaires, c est à dire de surface catalytique. elle active les cofacteurs VIII et V elle active le F XI - La thrombine peut aussi activer d autres types cellulaires que les plaquettes, en particulier les leucocytes et les cellules vasculaires. Elle participe ainsi aux événements qui suivent une lésion vasculaire : réaction inflammatoire, remodelage vasculaire et cicatrisation. - Formation du caillot de fibrine Lorsque la concentration de thrombine formée atteint un certain seuil, la thrombine convertit le fibrinogène soluble en fibrine insoluble. La fibrine forme un réseau autour de l agrégat de plaquettes pour réaliser le caillot. Le fibrinogène est constitué de 3 paires de chaînes Aα, Bβ, γ. La thrombine clive l extrémité N-terminale des chaînes Aα et Bβ, détachant 2 fibrinopeptides A et 2 fibrinopeptides B, pour transformer le fibrinogène en un monomère de fibrine. Les nouvelles séquences N-terminales des chaînes α et β des monomères de fibrine s apparient avec des MAJ : fev 2006 Page 4 sur 5
séquences complémentaires sur les chaînes γ et β d un monomère voisin : un polymère instable de fibrine se forme. Il va être stabilisé par le F XIIIa. L activation du F XIII est réalisée par la thrombine et régulée par la présence de calcium et de fibrine qui sert de cofacteur. Le F XIIIa est une transglutaminase qui stabilise le caillot en créant des liaisons covalentes entre les monomères de fibrine adjacents. Schéma récapitulatif KHPM PK Voie endogène XII XIIa Voie exogène +++ XI XIa VII + Facteur tissulaire IX Ténase IXa VIIIa Ca++ PL X Xa Va Ca++ PL Prothrombinase XIIIa II IIa (thrombine) V VIII Caillot insoluble Polymères Monomères Fibrinogène XI XIII de fibrine de fibrine soluble de fibrine Régulation de la coagulation La protection contre l extension du processus de coagulation à distance de son site d initiation est assurée par plusieurs mécanismes. Les facteurs de coagulation activés localement sont rapidement dilués dans la circulation (flux sanguin) où ils vont être inactivés par des inhibiteurs physiologiques de la coagulation (anticoagulants circulants naturels). Bibliographie Sampol J. Manuel d hémostase (1995), Elsevier. Samama MM. Hémorragies et thromboses (2004), Masson. (Jérémie GERARD, février 2006) MAJ : fev 2006 Page 5 sur 5