Les ANCA au laboratoire Yves Renaudineau, PU-PH Laboratoire d Immunologie et Immunothérapie EA2216 Immunologie, Pathologie et Immunothérapie CHU Morvan, Brest Club des jeunes néphrologues, 15 mars 2013
Découverte Foie de rat PNN humains AAN AAN ANCA Davies et al, 1982 Van der Woode et al, 1985
I- Immunofluorescence indirecte II- Cibles antigéniques III- Interprétation
Technique Antigène 1- PNN humains Fixation (éthanol, formol ) Conservation Ac sérique Antiglobuline Fluorescente 2-Sérum/Plasma Seuil de positivité 1/20 ème Phénomène de pro-zone 3-Antiglobuline (IgG+++) 4-Contrôles de qualité internes
ANCA 13,6% positifs - 46% vascularites à ANCA - 54% autres pathologies ANCA PNN/éthanol Fluorescence cytoplasmique Fluorescence périnucléaire c-anca 5,8% positifs - 37% vascularites - 63% autres pathologies Fluorescence cytoplasmique PNN/formol-acetone Fluorescence (péri)nucléaire p-anca 7,8% positifs - 54% vascularites - 46% autres pathologies NANA (nuclear associated neutrophil Ab) Deguillaume, IBS, 2006
HOUSTON... WE HAVE A PROBLEM
formes atypiques (>25% des ANCA positifs) canca atypiques canca atypiques AAN+ Fluorescence nucléaire? HEp-2 Monocytes
I- Immunofluorescence indirecte II- Cibles antigéniques III- Interprétation
1-Repos 2-Facteur déclenchant 5-Lésions Endothéliales Infection, génétique, envirronnement Cytokines (IL8) C 2-Adhésion 4-Dégranulation par les ANCA et complément 3-Activation des PNN Récepteurs pour antigènes du PNN
Granules I II gélatinase Surface PR3 MPO Lamp1 PR3 PR3 NB1+Mac1??? Lamp1 BPI Elastase Cat. G Lysozyme Lys. Lysozyme Lactoferrine Etc...
Cas particulier des anti-pr3 Discordance IFI/ELISA: quantitative et qualitative Sensibilité c-anca (85%) > anti-pr3 (60-65%) > deux (55-60%) Structure 3D Deux formes Epitopes masqués
ANCA PNN/éthanol Fluorescence cytoplasmique Fluorescence périnucléaire c-anca+ p-anca PNN/formol-acetone Fluorescence (péri)nucléaire +/- anti-pr3 anti-mpo NANA (titration sur PNN/Ethanol) Si négatif anti-lf, -BPI, -elastase, cathepsine G, etc Si AAN (HEp-2) négatifs
C-ANCA+ PR3+ 33% Granulomatose avec polyangéite MPO+ 0 BPI+ 22% infections (pneumopathies à Pyo) cholangites sclérosantes GAP (qq cas) Divers* 15% P-ANCA+ PR3+ 6% GAP, (MICI qq cas) MPO+ 65% G. éosinophilique avec polyangéite GN pauci-immunes, Goodpasture BPI+ 5% rhumatismes, lymphome B, Divers* 13% rhumatismes, infections NANA Aucune spécificité Colite ulcérative, Crohn, RCH *Cathepsine G, élastase, lactoferrine
I- Immunofluorescence indirecte II- Cibles antigéniques III- Interprétation
Importance du contexte clinique+++ Granulomatose avec polyangéite G. éosinophilique avec polyangéite Polyangéite microscopique Glomérulonéphrite nécrosante focale Sensibilité 85% 40-66% 81% 82% ANCA Spécificité 95% 75% Horton Takayasu Témoins normaux Témoins malades <5% <5% 2% 23% Hagen, Kidney Int, 1998
Suivi des patients c-anca GAP - Corrélation imparfaite taux ANCA(PR3)/clinique - > Anapath p-anca SCS - Si ANCA+ risque rechute 20% à 5ans - Favoriser l ELISA pour le suivi
Syndrome pneumorénale de Goodpasture Anti-GBM antibodies Syndrome des Ac anti-gbm ANCA/MPO retrouvés 1/3 des cas Formes plus sévères Evolution favorable après traitement MBG panca/mpo Anti-GBM Luque-Paz, Autoantibodies, 2013 Serratrice, AJKD, 2004
ANCA et autres pathologies Maladies inflammatoires chroniques du TD (rectocolite hemorragique, Crohn) NANA (PR3+) Hépatites auto-immunes panca/ NANA Infections P.aeruginosae dans mucoviscidose canca atypiques (BPI+)
take home messages - Faible prévalence des ANCA/PR3/MPO en pratique (<15%) - De nombreuses interférences (<50% vascularites à ANCA) - Nécessiter d avoir des techniques de confirmation malgré les limites (anti-pr3) - Importance du contexte clinique - Faible relation entre le titre des ANCA et l évolution de la maladie - Importance du dialogue (biologistes/cliniciens/anatomopathologistes/industriels)
Remerciements CHU de Brest - Laboratoire d immunologie/ea2216 Immunologie Pathologie - Service de Néphrologie - Service de Rhumatologie CHG St Malo - Service de Néphrologie Conflits d intérets: non