PNF-01-P ANESTHÉSIE DES POISSONS

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1 PNF-01-P ANESTHÉSIE DES POISSONS Justification Cette procédure normalisée de fonctionnement doit être connue de toute personne (= opérateur) qui anesthésie des poissons dans le cadre d études sur le terrain ou en laboratoire. Autorité Les personnes (étudiants, techniciens, biologistes, chercheurs) effectueront les anesthésies de poissons sous la supervision directe ou indirecte du chercheur ou du chargé de projet. Formation préalable des opérateurs : Bonne connaissance de : l anatomie, de la physiologie et du comportement de l espèce de poisson de la composition, de l'action et des règlements associés aux produits utilisés pour la contention chimique (anesthésiologie/pharmacologie/règlements sur les produits contrôlés). la santé et sécurité : Prévention des blessures Notions de biosécurité (prévention des morsures/blessures, zoonoses, désinfection et asepsie) Si applicable (travaux sur le terrain) : formation sur les risques inhérents au travail en mer (navires, petites embarcations, hélicoptère) Si applicable : SIMDUT Principe directeur du CCPA: On doit utiliser des anesthésiques dans les expériences pour lesquelles on prévoit l occurrence de stimuli nocifs et dans les cas où les manipulations pourraient faire en sorte que l animal se blesse en essayant de s échapper ou encore si les manipulations seront importantes et longues et dont on peut raisonnablement présumer qu il en résultera traumatisme et effets physiologiques négatifs pour les poissons (CCPA, lignes directrices sur le soin et l utilisation des poissons en recherche, en enseignement et dans les tests # 86) Autres principes directeurs du CCPA concernant le soin et l utilisation des animaux sauvages Principes directeurs généraux : #1, 2, 3, 6, 10, 11 et 12 Principes directeurs spécifiques à l anesthésie : # 18, 19, 22, 23, 24 Autres principes directeurs du CCPA concernant le soin et l utilisation des poissons en recherche, en enseignement et dans les tests. Principes directeurs généraux : # 1, 2, 3, 4, 5, 11, 19, 22 Principes directeurs spécifiques à l anesthésie : # 86, 87, 88 et 89

2 Méthodes L anesthésie permet d insensibiliser un animal en le rendant inconscient ou en le plaçant sous forte sédation avec un minimum de stress et sans le blesser. Elle est utilisée lorsque les manipulations effectuées sont invasives et engendrent une douleur (ex. opération chirurgicale), lorsqu elles sont de longue durée ou lorsqu elles demandent que le poisson demeure immobile. Matériel: Anesthésique Bassin d anesthésie aux parois lisses et sans danger d abrasion pour le poisson, adapté aux types de manipulations qui seront effectuées et équipé d un système de bullage Récipient de transport aux parois lisses et sans danger d abrasion pour le poisson si le transfert du poisson prend plus de 30 secondes Bassin de réveil aux parois lisses et sans danger d abrasion pour le poisson équipé d un système de bullage et/ou d approvisionnement en eau continu. Puise ou filet sans nœud adapté à la taille des individus manipulés. Thermomètre, oxymètre (lorsque l on fait du transport, mais pas pour une anesthésie en laboratoire quand on a un bassin avec un bon bullage). Chronomètre Balance pour poissons Balance de précision, cupules et spatule Eau distillée Éthanol 100% Bouteille Nalgene foncée (pour la solution-mère) PNF-03 : nettoyage et désinfection du matériel et le matériel qui s y rapporte PNF-04 : contention et manipulation des poissons et le matériel qui s y rapporte PNF-02 : euthanasie des poissons (si nécessaire) et le matériel qui s y rapporte PNF-05 : collecte et disposition des poissons morts (si nécessaire) et le matériel qui s y rapporte Produit utilisé : Sel d éthyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS-222) Préparation Si possible, mettre à jeun les poissons 18 à 72 heures avant l anesthésie. Nettoyer et désinfecter les bassins qui seront utilisés pour l anesthésie et le réveil (PNF-03).

3 Déterminer le type d anesthésique qui convient le mieux pour l espèce, la taille des individus et le type et la durée des manipulations qui seront faites par la suite (Tableau 1). Lire et comprendre les instructions fournies par le fabricant avec l anesthésique et préparer les solutions mères si nécessaire. Déterminer la concentration d anesthésique (degré d analgésie) nécessaire en fonction des manipulations qui seront effectuées, de l espèce, de la taille et du nombre d individus pour assurer une analgésie suffisante. On doit calculer la dose du médicament de façon à pouvoir administrer en une seule fois un volume permettant d assurer une contention efficace et rapide tout en respectant la limite maximale de sécurité du médicament en question. Déterminer le temps nécessaire pour que l anesthésie soit complète et efficace et déterminer la durée maximale de son effet pour planifier les manipulations ultérieures. La taille, l espèce ainsi que le stade de maturité sexuelle peuvent influencer l efficacité des différents anesthésiques utilisés. Effectuer un test sur quelques individus avant d anesthésier un grand nombre de poissons est toujours préférable. Les chercheurs doivent s assurer que l anesthésique sélectionné n a pas d effet secondaire toxique pour le poisson et le personnel, qu il est biodégradable et qu il peut s éliminer du poisson sans laisser de séquelles physiologiques, immunologiques ou comportementales. Préparer le bassin d anesthésie et de réveil S assurer que les paramètres de l eau (température, salinité, oxygène) du bassin d anesthésie, du bac de transport et du bassin de réveil sont similaires à ceux du milieu d élevage ou du milieu naturel d où le poisson a été prélevé (bassin d élevage, milieu naturel) et que ces derniers sont stables. S assurer que le tout le matériel nécessaire est prêt Tableau 1 : Application et dosage Salmonidés échantillonnage 0,8 g/5 L Frai 0,6 g/5 L Échantillonnage alevin 0,4 g/5 L Plies Adultes 0,9 g/5 L Juvéniles 0,3 g/5 L Procédure Les poissons prélevés sont immédiatement placés dans le bassin d anesthésie ou placés dans un bac de transport si le déplacement du poisson à partir de son milieu de prélèvement (milieu naturel, bassin d élevage, etc.) jusqu au bassin d anesthésie prend plus de 30 secondes. En général le bac de transport contient peu d eau et pas de système de maintien de la qualité de l eau (ex. système de bullage, de maintien de température, etc.). Par conséquent, le poisson ne doit, en aucun cas, être mis en attente dans ce type de bac. Prévoir un bassin d attente pour une telle éventualité.

4 Éviter de stresser l animal avant et après l administration de l anesthésique Le poisson est sous surveillance constante durant toute la durée de l anesthésie. Chronométrer et noter le temps de chaque étape de l anesthésie (si un ajustement du dosage est requis). Ces notes permettront d affiner la méthodologie au fur et à mesure. Tableau 2. Stades de l anesthésie Stade Description Normal Réagit aux stimuli, rythme operculaire et tonus musculaire normaux Légère sédation Légère perte de réactivité aux stimuli externes à l exception d une forte pression; réagit uniquement aux forts stimuli tactiles et vibratiles. Forte sédation Perte totale de réactivité aux stimuli externes à l exception d une forte pression; légère diminution du taux operculaire; équilibre normal Perte partielle d équilibre Perte partielle du tonus musculaire ; nage erratique; augmentation de la ventilation operculaire; réagit uniquement aux forts stimuli tactiles et vibratiles; Perte totale d équilibre Perte totale du tonus musculaire et de l équilibre ; mouvements operculaires faibles, mais réguliers; perte des réflexes spinaux Perte des réflexes Perte totale de réactivité; mouvements operculaires lents et irréguliers; rythme cardiaque très lent; perte de tous les réflexes Asphyxie (Medullary collapse) Arrêt du mouvement operculaire; rapidement suivi d un arrêt cardiaque (en général) *Le poisson peut facilement récupérer durant les trois premiers stades L anesthésie doit s effectuer en une seule fois La mise en place de l anesthésie doit être aussi rapide que possible, particulièrement pour les activités de terrain. Pendant l anesthésie Le personnel réalisant l anesthésie doit porter des vêtements protecteurs, des gants et des lunettes de sécurité. Le poisson est manipulé avec soin dans des filets à surface lisse (filet sans nœuds) et les soins nécessaires doivent être pris pour minimiser le stress chez le poisson. Le temps nécessaire pour réaliser l anesthésie ne doit pas excéder 3 minutes. Les paramètres de qualité de l eau sont maintenus durant toute la procédure. L eau n est plus renouvelée, mais l apport constant d oxygène est assuré par la présence de bulleurs.

5 Lorsque le temps d anesthésie est trop long, que la température augmente de plus de 2ºC ou que le taux d oxygène dissous est inférieur à 5 mg / L, le bac d anesthésie doit être renouvelé. L anesthésie est complète lorsque le poisson ne réagit plus au toucher. Les opercules peuvent bouger, mais il doit y avoir perte de mouvements globaux. Lors de manipulations de moyenne ou longue durée (lors de chirurgie par exemple), une irrigation continue des branchies est effectuée par la bouche à l aide d une solution de MS-222 aérée. Après l anesthésie Dès la fin des manipulations, les poissons sont immédiatement placés dans des bassins de réveil contenant de l eau saine et oxygénée jusqu à ce que les effets de l anesthésie aient disparus. Le rétablissement est effectué sous surveillance continue et si le poisson ne se rétablit pas ou montre des problèmes de comportement une fois que le temps de réveil est passé (2 fois le temps d induction de l anesthésie), ce dernier doit être euthanasié dans les plus brefs délais (PNF 02) si après avoir tenté de le ventiler il ne s est toujours pas rétabli. Disposer des carcasses selon le protocole PNF-05 Nettoyer et désinfecter le matériel ayant servi à l anesthésie Disposer de l eau contenant l anesthésique selon la réglementation en vigueur à l UQAR. Note : Maintenir des registres pour les produits réglementés (contrôlés) tel que stipulé par Santé Canada (obligation légale) et se conformer aux règles d usage. Consulter un vétérinaire pour l utilisation des produits moins fréquemment utilisés ou les procédures moins courantes. Procéder à des essais avant d effectuer l anesthésie Pour éviter d administrer en trop grande dose l anesthésique et pour évaluer le comportement normal du poisson, savoir identifier les stades d induction et de réveil Disposition du matériel à usage unique et des produits réglementés (contrôlés) : Doit être effectué selon les règlements en vigueur à l UQAR. Doit être effectué selon les règlements en vigueur à l UQAR Les bacs à déchets biomédicaux devront être entreposés dans un congélateur jusqu à leur cueillette pour élimination. Les produits pharmaceutiques périmés doivent être récupérés et éliminés en fonction des règles en vigueur à l UQAR. Approuvées par la résolution UQAR-CPA du 17 avril 2008 Modifiée par la résolution UQAR-CPA du 20 février 2014