L ESSENTIEL. D après la génétique, un animal se développe sous le contrôle de gènes qui déterminent les transformations de l organisme.

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1 Biologie cellulaire Claude Desplan Le hasard joue un rôle fondamental dans le monde animal. Le développement des systèmes sensoriels, qui met en jeu divers processus aléatoires, mais régulés, en est la preuve. L ESSENTIEL D après la génétique, un animal se développe sous le contrôle de gènes qui déterminent les transformations de l organisme. Cependant, l expression aléatoire des gènes libère ce déterminisme. Les processus aléatoires contrôlent des phénomènes biologiques essentiels de la vie. Les systèmes olfactifs et visuels illustrent cette alliance du déterminisme et du hasard. E n apparence, un embryon en développement obéit à des règles précises qui déterminent ses formes, la localisation et la fonction de ses cellules, ses axes de symétrie et la construction des tissus et des organes. Le processus est parfaitement reproductible : un œuf fécondé de grenouille rousse donne toujours une grenouille rousse. L interprétation la plus courante de ce caractère prévisible est déterministe : les mêmes causes produisent les mêmes effets. Ainsi, la part du hasard semble limitée lors du développement animal. Toutefois, son rôle peut être mis en évidence chez presque tous les organismes en formation. Nous examinerons ici comment il détermine la spécialisation de cellules nécessaires à divers processus sensoriels. Les phénomènes aléatoires sont contraints par divers paramètres physico-chimiques, mais ils permettent d énormes économies de moyens pour l organisme, comme nous l illustrerons avec le système olfactif des vertébrés. Ils sont aussi à la base de mécanismes permettant la vision des couleurs chez les mammifères ou chez les insectes. Ils contribuent à ce qu un tissu, initialement composé de cellules toutes identiques, soit constitué finalement de plusieurs types de cellules. Les récepteurs olfactifs Le cas le plus spectaculaire d orientations aléatoires chez les animaux concerne le système olfactif. Les mammifères, notamment, sont capables de détecter des milliers d odeurs. En 1991, Richard Axel et Linga Bock, de l Université Columbia, à New York, ont montré que la souris dédie près de quatre pour cent de son génome à cette fonction (ils ont reçu le prix Nobel de médecine 2004 pour cette découverte). Son génome contient près de 1400 gènes codant des récepteurs olfactifs capables de reconnaître des composés chimiques. Or, une cellule sensorielle donnée ne produit à sa surface qu un seul récepteur sensoriel ; elle n exprime donc qu un seul gène parmi les de son répertoire olfactif. Si une cellule détectait plusieurs odeurs, le message nerveux transporté jusqu aux centres nerveux olfactifs serait brouillé. 96] Biologie cellulaire Pour la Science - n Novembre 2009

2 David Scharf/Science Faction/Corbis Se pose un problème insoluble de régulation génétique: comment contrôler l expression précise et exclusive de 1400 gènes sans consacrer des milliers de facteurs de transcription à cette fonction? La puissance du hasard fournit la solution: il suffit de laisser chacune des cellules produire de façon aléatoire son récepteur olfactif, c està-dire le gène qu elle exprime, parmi les Le hasard permet ainsi d avoir une représentation statistique adéquate de chacun des récepteurs (voir la figure 2). Quand un gène donné s exprime dans une cellule olfactive, un mécanisme empêche que s expriment simultanément d autres gènes et que soient synthétisés d autres récepteurs, ce qui perturberait la reconnaissance des messages olfactifs. De même, la fabrication d autres récepteurs est inhibée tout au long de la vie de la cellule. Des processus assurant une expression exclusive d un gène du système olfactif ont été sélectionnés. C est ce que l on nomme le principe d exclusion. Comment cette exclusion s opère-telle? Nous l ignorons encore. Nous savons seulement que lorsque l un des gènes est exprimé au hasard dans une cellule, les autres gènes sont réprimés par la présence de la protéine codée par ce gène, c est-à-dire du récepteur sensoriel inséré dans la membrane de cette cellule. Une des hypothèses est que le récepteur active un processus intracellulaire qui modifie la configuration de l ADN dans le noyau cellulaire, ce qui rendrait les sites chromosomiques où se trouvent les gènes olfactifs inaccessibles à la transcription. Ainsi, une seule règle globale d exclusion permet d établir un «patron olfactif» très compliqué de cellules sensorielles spécialisées. Voir la vie en rose Bien que moins complexe que le système olfactif, le système visuel implique lui aussi des phénomènes stochastiques qui orientent le développement. La plupart des mammifères sont dichromates, c est-à-dire qu ils n ont que deux types de photorécepteurs spécialisés dans la vision des couleurs, les cônes (voir la figure 3). Ces cellules contiennent toutes un pigment photosensible, l opsine. Les uns, les cônes S, contiennent une opsine sensible au bleu ; 1. LA FORMATION DES SYSTÈMES SENSORIELS des animaux dépend souvent de variations aléatoires de l expression de gènes. Par exemple, dans l œil à facettes de cette drosophile, la vision des couleurs dépend d un couplage aléatoire, de la production de pigments sensibles à différentes longueurs d onde. les autres, les cônes L/M, produisent une opsine sensible au rouge-vert. En général, les mammifères distinguent bien le bleu du vert. Mais, comme les daltoniens, ils confondent le rouge et le vert. Les femelles de certaines espèces de singes d Amérique font figure d exception, car elles sont capables de distinguer les couleurs chaudes. À la fin des années 1980, Gerald Jacobs, avec Jay et Maureen Neitz, à l Université de Californie à Santa Barbara, ont montré que le gène de l opsine L/M est porté par le chromosome X et possède deux formes (ou allèles) codant deux opsines différentes: l une sensible au vert, l opsine M, l autre sensible au rouge, l opsine L. Ces femelles ont donc potentiellement trois types de cônes : des cônes S, des cônes M et des cônes L. Pourquoi, chez ces espèces de singes, les femelles sont-elles les seules à voir les Pour la Science - n Novembre 2009 Biologie cellulaire [97

3 a b Bulbe olfactif Glomérule Neurones sensoriels Neurone sensoriel Récepteur olfactif 2. LE SYSTÈME OLFACTIF DES MAMMIFÈRES est capable de distinguer des milliers d odeurs différentes grâce à un processus aléatoire. Les neurones sensoriels de la muqueuse nasale sont connectés à des régions du bulbe olfactif, les glomérules olfactifs, premier relais de l'information olfactive vers le cerveau (a). Il existe autant de types de cellules sensorielles que de gènes codant les récepteurs des molécules odorantes, soit chez la souris (b, en jaune, les récepteurs ; en orange et en vert, deux molécules odorantes). Dans chaque neurone sensoriel, un récepteur olfactif unique est sélectionné de façon aléatoire (c). Lorsque l un des gènes (en vert) s exprime, au hasard, le récepteur présent dans la membrane cellulaire inhibe l expression de tous les autres gènes de la même cellule (flèche rouge). C est la combinaison des récepteurs activés par les molécules odorantes qui crée le message olfactif grâce auquel le cerveau reconnaît l odeur d une rose, par exemple. Les variations aléatoires de l expression des gènes décrites dans cet article sont complétées par un mécanisme d exclusion, qui empêche une cellule de s engager dans une autre direction que celle permise par le hasard. De même, les mutations de gènes, sélectionnées par le milieu, ou la production des anticorps par le système immunitaire illustrent comment le hasard peut être utilisé à d autres échelles. Lorsque les lymphocytes B du système immunitaire se développent dans la moelle osseuse, il se produit un réarrangement au Exclusion et sélection c Protéine Répression ARN messager Gène Récepteur sensoriel hasard des segments de gènes qui codent les régions variables des anticorps. Ces régions variables sont celles qui se lient aux molécules étrangères (les antigènes). La diversité des anticorps créée est quasi infinie. Les lymphocytes immatures ainsi produits, tous différents, sont soumis à une sélection dans les organes immunitaires dits lymphoïdes. Une cellule B survit si le réarrangement des gènes donne un anticorps contre un antigène étranger, ou bien est éliminée si l anticorps reconnaît une molécule du soi, ce qui serait dangereux pour l organisme. Delphine Bailly couleurs chaudes? À cause de l inactivation du chromosome X. En effet, les cellules des femelles n expriment qu un seul de leurs chromosomes X, si bien que les quantités de protéines codées par les gènes de ce chromosome sont similaires chez les mâles (qui n ont qu un seul X) et chez les femelles (qui en ont deux). Point clé, cette inactivation se produit de façon aléatoire dans chacune des cellules, si bien que ce n est pas le même chromosome X qui est inactivé dans les différents photorécepteurs d une même rétine. Ainsi, la rétine des femelles de ces singes d Amérique est composée d une mosaïque de trois types de cônes: certains produisent de l opsine S comme chez les mâles et les autres synthétisent, de façon aléatoire, soit l opsine M, soit l opsine L, selon que le chromosome X qui reste actif porte le gène de l opsine M ou L. Ces femelles sont donc trichromates et capables de discriminer les couleurs chaudes. En revanche, les mâles n ont pas le choix puisqu ils n ont qu un seul chromosome X! Ils doivent donc se contenter de deux types de cônes : S et M pour certains mâles, et S et L pour d autres. Ils sont dichromates. Un tandem de gènes soumis au hasard Les mâles des singes de l Ancien Monde (dont nous faisons partie) ont remédié à ce problème. Ils sont capables comme les femelles de détecter un spectre de couleurs étendu du bleu au rouge, et sont trichromates. Comment? Simplement, par un système de production aléatoire de l opsine L ou de l opsine M, mais avec un seul chromosome X. Chez ces singes, le gène de l opsine L/M, sur le chromosome X, a été dupliqué au cours de l évolution : l une des copies code une opsine qui détecte le vert (M), l autre une opsine du rouge (L). Ces deux gènes sont présents «en tandem», c est-à-dire l un après l autre dans le chromosome. Or, comme l a montré le groupe de Jeremy Nathans, de l Université Johns Hopkins, à Baltimore, il n existe qu un seul élément de régulation (le LCR) en amont des deux gènes. Le «choix» et l exclusion découlent de cette organisation : l élément régulateur active aléatoirement l un des deux gènes, de sorte que chacun a d autant plus de chances d être activé qu il en est proche. Aussi, chez un même individu, la majo- 98] Biologie cellulaire Pour la Science - n Novembre 2009

4 rité des cônes produit l opsine correspondant au gène le plus proche de l élément régulateur, et une minorité contient l opsine codée par le gène le plus éloigné de l élément régulateur. Par exemple, les humains ayant hérité d un chromosome X comprenant la séquence «LCR, opsine M et opsine L» possèdent 70 pour cent de cônes à pigment «vert» et 20 pour cent de cônes à pigment «rouge» (plus environ 10 pour cent de cônes «bleus» pour lesquels le mécanisme de régulation reste inconnu). Chez d autres, ayant hérité d un chromosome qui porte les gènes dans l autre ordre possible (LCR- L-M), le rapport est inversé. Toutefois, les deux types de personnes perçoivent les couleurs d un même objet de façon identique : si la rétine des individus du premier type transmet globalement moins de messages «rouges» vers le cerveau puisqu elle comprend moins de cônes activés par cette couleur que chez les individus du deuxième type, le cerveau effectue une correction de ce déficit lorsqu il traite les images. Une expérience étonnante réalisée en 2007 par les équipes de G. Jacobs et J. Nathans a montré qu il est relativement simple de créer un système de production aléatoire des pigments en manipulant quelques gènes. Au cours de cette expérience, les gènes humains codant les opsines L et M ont été transférés à la souris par transgenèse. Les souris, normalement dichromates (S et M), ont alors fabriqué trois types de cônes (S, M et L) répartis au hasard dans la couche des photorécepteurs de la rétine. Plus étonnant, des tests comportementaux ont montré qu elles sont devenues trichromates: le cerveau est donc capable d interpréter une information pour laquelle il n était pas préparé. Les avantages de l aléa L évolution de la trichromatie chez les singes de l Ancien Monde a été bénéfique pour ces animaux ramasseurs de fruits: ils ont pu ainsi distinguer les fruits mûrs de ceux qui ne l étaient pas. De plus, chez ces singes, la recherche du partenaire sexuel dépend d interactions visuelles à distance et non de phéromones. Pendant la période de rut, les parties génitales des femelles, et leurs visages souvent, sont rouges. La sensibilité des mâles à un spectre de couleurs étendu est donc un avantage reproductif qui a été Photo Quest Ltd/Science photo library/corbis 3. LES CÔNES DE LA RÉTINE (ici en violet, les autres cellules étant les bâtonnets) contiennent les pigments sensibles au bleu, au vert et au rouge. Les femelles des singes d Amérique et de l Ancien Monde peuvent, grâce à un mécanisme génétique, avoir ces trois types de cônes. Chez les mâles, seuls ceux de l Ancien Monde sont également trichromates. sélectionné en même temps à l apparition de ce caractère sexuel secondaire. Ainsi, le hasard a permis de faire évoluer en une seule étape un système dichromatique en un système trichromatique. Mais une question se pose: pourquoi la répartition aléatoire des opsines vertes et rouges dans la rétine a-t-elle été sélectionnée? Estce parce qu elle permet une meilleure vision des couleurs, donc une meilleure adaptation à l environnement? Ou bien est-ce en raison de sa simplicité? Pour répondre, tournons-nous vers les poissons tétrachromates, comme le poisson zèbre. Ils disposent de cônes S, M et L, mais aussi de cônes sensibles aux ultraviolets. Or, comme l a montré Pamela Raymond, à l Université du Michigan, ces cônes sont répartis de façon ordonnée et cristalline, chaque type représentant exactement 25 pour cent de la rétine, ce qui suggère qu un processus déterministe a contrôlé leur mise en place. Si les cônes sont répartis de façon déterministe et précise chez les poissons, pourquoi n en est-il pas de même chez les singes? L explication se trouve sans doute du côté du milieu de vie. Celle que nous proposons est purement spéculative. Les poissons vivent dans une eau souvent trouble dans laquelle peu d éléments répétitifs et réguliers se détachent. En revanche, les singes sont confrontés à des objets disposés avec régularité, tels les arbres dans une forêt. La répartition régulière de leurs cônes créerait une confusion entre ces objets, voire conduirait à des illusions d optique comparables à l impression que l on a quand une roue tourne presque aussi vite qu une caméra : cette roue semble tourner à l envers. L expression aléatoire des gènes représenterait donc, ici encore, un bénéfice adaptatif. Les facettes de la drosophile Généralement, les processus aléatoires n ont pas de conséquences au-delà de la cellule où ils se déroulent. Parfois, pourtant, d autres cellules y sont associées. Le meilleur exemple est celui du développement de l œil de la drosophile. Il est composé de quelque 800 facettes, les ommatidies. Chacune possède sa propre lentille et voit un seul point de l espace, ou pixel. Sous chacune de ces lentilles, se trouvent huit photorécepteurs dont deux, nommés R7 et R8, sont spécialisés dans la vision des couleurs (voir l encadré page 92). Comme les cônes de la rétine humaine, ils sont sensibles à différentes longueurs d onde de la lumière: deux types d ultraviolets pour la cellule R7, le bleu ou le vert pour la cellule R8. Le lobe optique compare les informations provenant d un photorécepteur R7 et d une cellule R8 appartenant à une même ommatidie. Il peut ainsi déduire la couleur du point de l espace qui est «vu» par cette facette de l œil. Dans certaines ommatidies, la cellule R7 contient une opsine (une rhodopsine, Rh) sensible aux ultraviolets proches (Rh4) tandis que la cellule R8 est dotée d une opsine sensible au vert (Rh6). Ces ommatidies Pour la Science - n Novembre 2009 Biologie cellulaire [99

5 discriminent les couleurs chaudes du spectre. D autres ommatidies ont une cellule R7 sensible aux ultraviolets plus lointains (opsine Rh3) et un photorécepteur R8 sensible au bleu (opsine Rh5). Elles discriminent les couleurs froides. La drosophile est donc un double dichromate! Les ommatidies Rh4/Rh6 et Rh3/Rh5 sont réparties de façon aléatoire dans la rétine, avec une proportion de 70 pour cent pour les premières et de 30 pour cent pour les secondes. Or dans une même ommatidie, l opsine Rh3 est toujours synthétisée dans la cellule R7 lorsque l opsine Rh5 l est dans la cellule R8, et similairement pour les opsines Rh4 et Rh6. Comment est-ce possible? En 2006, notre équipe a mis en évidence un mécanisme à plusieurs étapes qui dépend de la synthèse aléatoire d une protéine, Spineless, par les cellules R7 (voir l encadré ci-dessous). Cette protéine est un activateur de la synthèse d opsine Rh4, et un répresseur de la production de l opsine Rh3. Elle est aussi un répresseur d un signal venant des cellules R7qui détermine la synthèse de l opsine bleue (Rh5) dans les cellules R8. Cela détermine le couplage des synthèses d opsine dans les deux types de photorécepteurs. Comment expliquer la proportion 70/30 des ommatidies sensibles aux couleurs froides et aux couleurs chaudes? Elle est très conservée entre les différentes espèces de mouches, même si elles vivent dans des environnements différents et ont divergé au cours de l évolution il y a plus de 120 millions d années. Cette proportion représenterait donc une propriété intrinsèque encore inconnue du système de détection des couleurs et non une adaptation à l environnement. Dans les exemples développés jusqu à présent, le milieu environnant la cellule ou micro-environnement avait peu d influence sur son devenir. Parfois, cependant, une interaction entre cellules voisines détermine des destins différents pour ces cellules. Par exemple, dans l embryon de drosophile, une seule cellule, parmi un groupe UN ALÉA VISUEL CHEZ LA DROSOPHILE a Dans l œil composé de la drosophile, les photorécepteurs R7 et R8 de chaque facette, ou ommatidie, sont spécialisés dans la vision des couleurs. Le pigment produit par R7 est toujours associé à un autre pigment dans R8, celui-ci étant sensible soit au bleu, soit au vert (a). Ces deux cellules R7 et R8 sont entourées par six autres récepteurs (b, en vert), que l on discerne (en orange et vert) sur la vue en coupe d un œil composé (c, en vert les lentilles recouvrant les ommatidies). Le couplage entre les cellules R7 et R8 repose sur la production aléatoire, dans R7, de la protéine Spineless (d). En l'absence de cette molécule, R7 fabrique de l opsine Rh3, sensible aux ultraviolets lointains du spectre lumineux, et R8 produit un pigment sensible au bleu, la rhodopsine Rh5, sous l influence d un signal que R7 lui envoie. En présence de Spineless, R7 fabrique de la rhodopsine Rh4, sensible aux ultraviolets proches, et le signal de synthèse de la rhodopsine Rh5 dans R8 est inhibé; une rhodopsine sensible au vert (Rh6) est alors synthétisée. En conséquence, une cellule R7 productrice de Spineless, et donc de rhodopsine Rh4, est toujours associée à une cellule R8 qui synthétise la rhodopsine sensible au vert (Rh6). Inversement, en l absence de Spineless, la cellule R7 produit de la rhodopsine Rh3, et elle est associée à une cellule R8 qui synthétise de la rhodopsine bleue (Rh5). b R8 R7 R8 Rh5 R7 Rh3 d Signal R8 Rh6 R7 Rh4 Spineless

6 Visual Unlimited/Corbis de cellules a priori identiques, peut devenir un neuroblaste, une cellule qui va donner naissance à une série de neurones. Plusieurs équipes ont décrypté à partir de 1990 le mécanisme en jeu, nommé inhibition latérale. Supposons deux cellules A et B, voisines et identiques; elles expriment un gène de type «proneural». Le gène de la cellule A contrôle la synthèse d un signal nommé Delta. Ce signal se lie, sur la membrane de la cellule B, à un récepteur, la protéine Notch, qui est alors activé. Cela inhibe la synthèse du signal Delta, et stimule la synthèse de Notch. La cellule B devient donc plus réceptive au signal provenant de la cellule A (puisqu elle produit davantage de récepteurs) et en émet moins vers ses voisines. Au départ, la cellule A produit autant de signal que la cellule B, en petite quantité. C est là que le hasard entre en scène. Il suffit que le niveau d expression du gène proneural (qui contrôle la production de Delta) devienne légèrement plus élevé dans la cellule A que dans la cellule B, du fait de variations aléatoires, pour que la première se mette à produire un peu plus de signal Delta que la seconde. Les cellules voisines, un peu plus stimulées, synthétisent un peu plus de récepteurs Notch et émettent moins de signal Delta. Une asymétrie s installe, et ne fait que s amplifier : la cellule A est de moins en moins stimulée par sa voisine B qui, au contraire, devient de plus en plus réceptive à la protéine Delta. c Rapidement, la cellule dans laquelle est apparue la variation aléatoire de la synthèse de Delta présente des caractéristiques de neuroblaste ; ses voisines restent des cellules épithéliales. L un des avantages du système est que si, pour une raison quelconque, la cellule ainsi sélectionnée meurt, elle cesse d inhiber ses voisines. L une d elles peut alors la remplacer et devenir un neuroblaste. Le système est donc fiable, car il résiste aux perturbations. Un hasard déterministe Dans tous les cas que nous avons évoqués, l expression des gènes varie au cours du temps, mais cette variation, ou «bruit de fond», est insuffisante pour causer l activation d un processus biologique. Cependant, si elle dépasse un certain seuil, la protéine correspondante est produite en quantité suffisante pour exercer son action régulatrice (elle active par exemple l expression d autres gènes ou interagit avec d autres protéines). La cellule est alors orientée dans une «direction»: un type de différenciation ou de fonction. Cette orientation d origine aléatoire est immédiatement suivie d une exclusion : tout autre «choix» est interdit dans cette cellule, par divers mécanismes. Ici, l exclusion régule l intervention du hasard, à la différence d autres phénomènes biologiques où seule la sélection naturelle joue ce rôle (voir l encadré page 90). Le système associant bruit de fond, seuil d activation, et exclusion a des implications importantes pour le développement des organismes. Il permet d énormes économies de moyens transcriptionnels, comme l illustre le système olfactif des vertébrés. Il est à l origine de la création d une diversité de récepteurs sensibles aux couleurs (dans la rétine des mammifères ou l œil de drosophile) ou évitant des illusions d optique ; il permet aussi que se différencient deux types de cellules au sein du même amas cellulaire (le neuroblaste de la drosophile). Il existe donc toujours une part de déterminisme, représenté ici par l exclusion, dans l expression du hasard. C est vraisemblablement cette alliance une forme de hasard déterministe qui rend les systèmes biologiques performants, c est-à-dire adaptés à leur environnement. L AUTEUR Claude DESPLAN est professeur de biologie au Centre de génétique développementale de l Université de New York, à Manhattan. BIBLIOGRAPHIE G.H. Jacobs et J. Nathans, The evolution of primate color vision, Sci. Am., vol. 300, pp , R. Kageyama et al., Dynamic Notch signaling in neural progenitor cells and a revised view of lateral inhibition, Nature Neuroscience, vol. 11, pp , R. Losick et Cl. Desplan, Stochastic choices and cell fate, Science, vol. 320, pp , R.J. Johnston, Jr. et Cl. Desplan, Stochastic neuronal cell fate choices, Curr. Opin. Neurobiol., vol. 18, pp , M. Leisner et al., Stochastic switching to competence, Curr. Opin. Microbiol., vol. 11, pp , G.M. Süel et al., Tunability and noise dependence in differentiation dynamics, Science, vol. 315, pp , M.F. Wernet et al., Stochastic expression of spineless creates the retinal mosaic for color vision, Nature, vol. 440, pp , Biologie cellulaire [101