Le Laboratoire de Biologie Médicale

Transcription

1 Etablissement français du sang RHÔNE-ALPES-AUVERGNE LE LIEN ENTRE LA GÉNÉROSITÉ DES DONNEURS DE SANG ET LES BESOINS DES MALADES Le Laboratoire de Biologie Médicale Auvergne-Loire Manuel de prélèvement Avril RAA/LAB/RE/001 version 2

2 Avril RAA/LAB/RE/001 version 2

3 SOMMAIRE A - INTRODUCTION p 1 B - LABORATOIRE DE BIOLOGIE MEDICALE DE L EFS AULO p 2-3 C - REFERENTIELS p 4 D - REVUE DE CONTRAT p Exigences relatives aux demandes d examens p Exigences relatives aux échantillons primaires p 7 3 Exigences relatives aux conditions de conservation et d acheminement p 8 4 Gestion des non conformités p Liste des examens p Modalités de prescription d examens complémentaires p 13 7 Prise en charge des demandes d examens Délai de rendu p 13 8 Transmission des comptes rendus d examens p 14 9 Modalités de conservation ou de restitution des échantillons p Facturation p 14 E - MANAGEMENT DE LA QUALITE p 15 1 Continuité du service p 15 2 Ecoute client p 15 3 Service à la clientèle p 15 GLOSSAIRE p 16 Annexe 1 - Liste des examens IHE Annexe 2 - Liste des examens HLA Annexe 3 - Exemple de prescription d examens IHE Annexe 4 - Exemple de prescription d examens HLA

4

5 A - INTRODUCTION Ce manuel concerne les prélèvements, leurs documents associés et leurs conformités quand ils sont transmis : - par des Etablissements de Soins (ES) ou - par des Laboratoires de Biologie Médicale (LBM). Le respect de ces exigences conditionne l obtention d un résultat analytique fiable et la garantie du lien patientprélèvement, indispensable à la qualité des résultats d examens, à la prestation de conseils et à la sécurité transfusionnelle. Ce document est à disposition des clients (seule la version électronique faisant foi). Ceux-ci sont systématiquement informés en cas de modifications majeures. 1

6 B - LE LABORATOIRE DE BIOLOGIE MEDICALE DE L EFS AULO Le laboratoire unique multisite de Biologie Médicale Auvergne Loire appartient à l EFS Rhône-Alpes Auvergne. Ce laboratoire sous la responsabilité de Philippe Trublereau regroupe 2 activités : - l immuno-hématologie érythrocytaire (IHE) - l histocompatibilité et l immunologie plaquettaire (HLA) 1 - Les 5 sites IHE Réalisent les examens nécessaires pour assurer la sécurité transfusionnelle et participer au suivi de l allo-immunisation fœto-maternelle. Les examens sont référencés Annexe 1 - Liste des examens IHE qui précise les examens réalisés dans le laboratoire ou transmis à un autre site de l EFS dans le cadre de la co-traitance ainsi que le délai de rendu et la cotation. CLERMONT FERRAND 58 rue Montalembert TEL : ou CLERMONT-FERRAND CEDE 1 FA : Contact : Monique CHARTIER Biologiste médical monique.chartier@efs.sante.fr Leslie GERMÉ Biologiste médical leslie.germe@efs.sante.fr Aurélie LAUTRETTE Biologiste médical aurelie.lautrette@efs.sante.fr Corinne CHABRE Biologiste médical corinne.chabre@efs.sante.fr Hélène ODENT-MALAURE Biologiste médical helene.odent-malaure@efs.sante.fr LE PUY EN VELAY 12 bd du Docteur A. Chantemesse TEL : LE PUY EN VELAY FA : Entre 21h et 7h du lundi au vendredi, du samedi 12h au lundi 7h et jours fériés - Tel : Contact : Rachel CONDUCTIER Biologiste médical rachel.conductier@efs.sante.fr Ramona PIRVAN Biologiste médical ramona.pirvan@efs.sante.fr MOULINS 10 av. Général de Gaulle, BP TEL : MOULINS FA : Entre 20h et 8h du lundi au vendredi, du samedi 16h au lundi 8h et jours fériés - Tel : Contact : Guillaume BERLIE Biologiste médical guillaume.berlie@efs.sante.fr ROANNE 28 route de Charlieu TEL : ROANNE FA : Contact : Philippe TRUBLEREAU Biologiste responsable philippe.trublereau@efs.sante.fr Dr Albert FROGET Biologiste médical albert.froget@efs.sante.fr SAINT PRIEST EN JAREZ Plateau de Biologie Hôpital Nord, 108 av. Albert Raimond TEL : SAINT PRIEST EN JAREZ CEDE FA : Contact : Leila MEDJENAH Biologiste médical leila.medjenah@efs.sante.fr Sébastien DUBOEUF Biologiste médical sebastien.duboeuf@efs.sante.fr Dans les périodes d astreinte (assurée 24/24 365/365), selon habilitation, les biologistes médicaux interviennent pour leur activité respective selon un planning défini. Dans les périodes d absence, les biologistes médicaux sont amenés à se remplacer pour leur activité respective. 2

7 B - LE LABORATOIRE DE BIOLOGIE MEDICALE DE L EFS AULO 2 - Les 2 sites HLA Réalisent les examens référencés dans l Annexe 2, visant à assurer : La compatibilité des greffes de Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH). Le suivi des patients en pré ou post transplantation d organes. Les examens HLA dans le cadre des associations HLA et maladies. Le typage HLA des Donneurs Volontaires de CSH. La compatibilité HLA et/ou HPA dans le cadre des inefficacités transfusionnelles, le bilan de suspicion de TRALI Les examens d immunologie plaquettaire et d incompatibilité fœto-maternelle. CLERMONT FERRAND 58 rue Montalembert TEL : CLERMONT-FERRAND CEDE 1 FA : Contact : Fabienne QUAINON Biologiste médical fabienne.quainon@efs.sante.fr SAINT ETIENNE 25 Boulevard Pasteur TEL : SAINT ETIENNE CEDE 2 FA : Contact : Léna ABSI Biologiste médical lena.absi@efs.sante.fr Julie BONNEAU Biologiste médical julie.bonneau@efs.sante.fr Dans les périodes d astreinte (assurée 24/24 365/365), selon habilitation, les biologistes médicaux interviennent pour leur activité respective selon un planning défini. Dans les périodes d absence, les biologistes médicaux sont amenés à se remplacer pour leur activité respective. 3

8 C - REFERENTIELS - Arrêté du 26 novembre 1999 relatif à la bonne exécution des analyses de biologie médicale (GBEA). - Arrêté du 26 avril 2002 modifiant l arrêté du 26 novembre 1999 relatif à la bonne exécution des analyses de biologie médicale. - Arrêté du 20 juin 2003 fixant la présentation de la fiche de prélèvement de biologie médicale prévue au deuxième alinéa de l article 20-5 du décret n du 4 novembre 1976 fixant les conditions d autorisation des laboratoires d analyses de biologie médicale. - Circulaire DGS/DHOS/AFSSAPS n 03/582 du 15 décembre 2003 relative à la réalisation de l acte transfusionnel. - Décision du 06 Novembre 2006 Les principes des bonnes pratiques transfusionnelles. - Décret n du 30 avril 2002 relatif aux conditions de transmission de prélèvements biologiques aux laboratoires d analyses de biologie médicale et modifiant le décret n du 4 novembre 1976 fixant les conditions d autorisation des laboratoires d analyses de biologie médicale. - Arrêté du 24 avril 2002 portant homologation du règlement relatif aux bonnes pratiques de transport des prélèvements, produits et échantillons issus du sang humain. - Norme NF EN ISO 9001, Octobre Norme NF EN ISO 15189, décembre 2012 : Laboratoires d analyses de biologie médicale - Exigences particulières concernant la qualité et la compétence. - Loi n du 30 mai 2013 portant réforme de la biologie médicale. - Décret n du 26 janvier 2016 relatif à la biologie médicale - EFI Standards: European Federation of Immunogenetics. - WMDA Standards: World Marrow Donor Association. - Nomenclature WHO: Nomenclature Committee for Factors of the HLA System. - Tous les documents COFRAC relatifs à l accréditation, applicables au LBM. 4

9 D - REVUE DE CONTRAT 1 - Exigences relatives aux demandes d examens Demande d examens Chaque prélèvement doit être accompagné d une prescription d examen et/ou une ordonnance qui, a minima, comporte de manière lisible : - identification du patient : nom de famille (nom de naissance), prénom, nom d usage (s il y a lieu), date de naissance, sexe, identifiant patient (lorsqu il existe) - identification du prescripteur et date de prescription - nom, qualité du préleveur - date et heure du prélèvement - nombre d échantillons transmis - identification de l établissement demandeur : Etablissement de soin avec service, UF et numéro de téléphone (et si possible fax) Laboratoire avec adresse et n de téléphone (et si possible fax) - nature des examens demandés - identification du laboratoire ou service de soins destinataires du compte rendu d examens - contexte clinique et/ou degré d urgence à préciser afin d assurer un rendu de résultat compatible avec son utilisation clinique La prescription d examens IHE ou HLA peut être rédigée sur un support pré imprimé mis à disposition par le laboratoire de biologie médicale multisite de l EFS, sur simple demande (Annexe 3 et Annexe 4). Pour tous les clients, la demande/prescription d examen formalise les exigences entre les deux parties. Remarque: Les données d identification du patient portées sur les échantillons doivent être strictement identiques à celles de la demande d examens. Cas particulier : Les prélèvements des donneurs d organes (ganglions et /ou rate) sont conditionnés dans un pot identifié par un numéro cristal selon les recommandations de l Agence de la Biomédecine. Ils sont adressés au laboratoire accompagnés du compte rendu du résultat HLA et du prélèvement d organe. 5

10 D - REVUE DE CONTRAT 1.2 Renseignements cliniques minimum exigés sur la demande Examens IHE Toute information pertinente pouvant influer sur les résultats et leur interprétation doit être communiquée par le client: - Diagnostic médical ou chirurgical - Contexte pathologique ou obstétrical - Notion d injection d immunoglobulines anti-rh1 (dose et date) - Antécédents obstétricaux et transfusionnels (nombre et date, pour la demande de groupe sanguin et de phénotype érythrocytaire, toute transfusion de moins de 4 mois doit être signalée) et réactions transfusionnelles éventuelles dans le cadre d un incident post transfusionnel - Transfusion de PSL envisagée, si oui date et heure - Notion de greffe de CSH date de la greffe - Notion greffe de rein - date de la greffe (dans le cadre du titrage des anticorps immuns anti-a, anti-b) - Notion d hémolyse (clinique ou biologique) ou d inefficacité transfusionnelle - Origine ethnique, si elle est utile en vue de rechercher un phénotype érythrocytaire rare, dans l intérêt des soins prodigués au patient - Traitement par DARATUMUMAB (anti-cd38) Remarques : 1- Les demandes de RAI de patiente ayant reçu une injection prophylactique d immunoglobulines anti-rh1 doivent indiquer la date d injection, la dose injectée, la date et le résultat de la dernière RAI avant injection et le groupage ABO RH-KEL1. 2- Dans le cadre d exploration d anémie hémolytique : préciser le contexte clinique (notamment contexte infectieux récent) et la prise éventuelle de médicaments. 3- En cas de demande d un test de Kleihauer, préciser le terme de la grossesse et le contexte clinique, traumatisme ou accouchement. Dans ce dernier cas et dans le cadre de la prévention de l allo-immunisation anti-rh1, indiquer le groupe sanguin de la mère et associer si possible le prélèvement de l enfant à celui de la mère. 4- Les prélèvements transmis pour exploration complémentaire doivent être accompagnés des résultats préliminaires : pour RAI, résultats réactionnels avec composition du panel utilisé et résultat de groupage sanguin ABO RH- KEL1 si réalisé, intensité réactionnelle pour les TDA, nature d un problème de groupe... Dans le cas contraire, ces examens pourront être réalisés (à l initiative du biologiste) et tarifés (NABM). Cas particulier du nouveau-né : Dans les cas d exploration d incompatibilité foeto-maternelle ou de prévention d allo-immunisation maternelle par immunoglobulines anti-rh1 : la fiche de renseignements cliniques ou la prescription pour l enfant doit mentionner: l identité complète de la mère et, si des prélèvements maternels ne sont pas transmis concomitamment, le statut immuno-hématologique maternel (groupe ABO-RH1 - phénotype RH-KEL1 - résultat et date de la dernière RAI, spécificité des anticorps connus et/ou notion d injection prophylactique d immunoglobulines anti-rh1). 6

11 D - REVUE DE CONTRAT Examens HLA Toute information pertinente pouvant influer sur les résultats et leur interprétation doit être communiquée par le client: - Transplantation d organes : o Tout événement immunisant ou traitement ayant un impact sur les résultats (Transfusion, rejet aigu ou chronique, transplantectomie, infection, vaccination, traitement IVIg, plasmaphérèse, SAL, anti CD20 ). - Greffe de CSH : o Diagnostic clinique o Leucopénie <500 G/L - Association HLA et maladie : o Diagnostic clinique o Antigène ou allèle recherché - Immunologie plaquettaire : o Date de la dernière transfusion o Résultat de la dernière numération plaquettaire o Contexte clinique (grossesse, antécédents obstétricaux, thrombopénie aiguë ou chronique) - Transfusion réfractaire, incident transfusionnel, suspicion de TRALI 2 - Exigences relatives aux échantillons primaires 2.1 Modalités de prélèvement Les modalités de prélèvement doivent répondre aux exigences réglementaires dans le domaine de la biologie médicale. Le prélèvement doit être réalisé sur sang veineux par une personne habilitée à prélever avec du matériel à usage unique. Il ne nécessite pas de préparation particulière du patient. Il est porté une attention toute particulière à l identification du prélèvement : une étiquette d identification est apposée sur le(s) tube(s) par la personne qui a prélevé, au moment du prélèvement (immédiatement après) du patient et en sa présence. Les mentions portées sur l étiquette sont décrites au chapitre 2.3. Elles peuvent être manuscrites. Une dernière vérification des informations portées sur l étiquette est effectuée en demandant au patient de décliner son identité. A défaut, la confrontation de plusieurs types de documents ou sources d informations d identité est systématiquement effectuée (dossier, famille, entourage ). Vérifier si la demande est urgente et la traiter comme telle. Les matériels utilisés et les déchets produits par l activité de prélèvement (les déchets à risques infectieux) sont éliminés selon la réglementation en vigueur pour l élimination des DASRI Exigences qualitatives et quantitatives Facteurs ayant une influence sur la qualité du prélèvement et/ou des résultats d examen Laboratoires IHE Les exigences qualitatives et quantitatives relatives aux types de tubes sont fonction des examens cf. Annexe 1. Tous les prélèvements transmis doivent être non décantés. Caractéristiques des tubes : les tubes doivent être totalement remplis. Les tubes insuffisamment remplis seront traités si possible en technique manuelle. Il est demandé aux préleveurs d informer le LBM de tout changement de référence de tubes utilisés. Remarque : Dans le cadre de l exploration d Événement Indésirable Receveur impliquant des Concentrés de Globules Rouges, le tube pré-transfusionnel peut être demandé par l EFS à un LBM extérieur. 7

12 D - REVUE DE CONTRAT Laboratoires HLA Les exigences qualitatives et quantitatives relatives aux types de tubes sont fonction des examens cf. chapitre 5.2. La liste des examens HLA réalisés au laboratoire est en Annexe 2. - Facteurs liés au prélèvement pouvant entraîner le non-traitement du prélèvement : o Prélèvement réalisé sur anticoagulant inadéquat ou arrivé hors délai de conservation des cellules o Les antécédents de transfusion de concentrés plaquettaires de moins de 3 jours doivent être signalés (pour les tests d Auto Ac anti plaquettes) o Les traitements par corticoïdes et immunoglobulines doivent être signalés. - Pour les typages HLA, HPA en biologie moléculaire : > 500 leucocytes/µl. 2.3 Exigences relatives à l identification de chaque tube prélevé - Les mentions ou une étiquette d identification sont apposées sur chaque tube par la personne qui a prélevé, au moment du prélèvement du patient et en sa présence. - L étiquetage doit mentionner : le nom de famille, le prénom, le nom d usage (s il y a lieu), le sexe, la date de naissance, l identifiant patient lorsqu il existe, si possible la date et l heure de prélèvement. Dans tous les cas, ces éléments seront sur la prescription ou la fiche de prélèvement. 3 - Exigences relatives aux conditions de conservation et d acheminement Le transport des examens vers le laboratoire doit s effectuer le plus rapidement possible après le prélèvement en prenant toutes les mesures nécessaires pour éviter les risques de contamination du personnel. Il doit se faire selon la réglementation en vigueur (la séparation échantillons/documents est obligatoire, l emballage doit répondre aux exigences réglementaires). 3.1 Examens IHE Le délai d acheminement des échantillons primaires doit être le plus court possible afin d obtenir des résultats d examens compatibles avec leur utilisation clinique et les méthodes validées du laboratoire. Les prélèvements sont transportés à température ambiante : - en contexte transfusionnel : le plus rapidement après le prélèvement (limite de validité usuelle de la RAI 72h). - en cas de transmission différée ( 48h) : conserver l échantillon à 5 +/- 3 C avant transport. Remarque : TDA et Agglutinines Froides délai de transport 48 h maximum, pour Agglutinines Froides strictement à température ambiante. Remarque : lorsque 2 déterminations de groupage sont adressées concomitamment, chaque demande doit être séparée physiquement afin de pouvoir différencier les deux prélèvements. 3.2 Examens HLA Les échantillons doivent être acheminés dans les meilleurs délais : o 7 jours pour les examens HLA o 2 jours pour les examens concernant les plaquettes Les prélèvements sont conservés et transportés à température ambiante. Remarque : lorsque 2 déterminations de groupage sont adressées concomitamment, chaque demande doit être séparée physiquement afin de pouvoir différencier les deux prélèvements. 8

13 D - REVUE DE CONTRAT 4 Gestion des non-conformités (NC) La revue de contrat est conduite pour chaque demande. A réception des examens, les demandes sont horodatées. Outre la vérification de la conformité, une adaptation éventuelle de la prescription peut être réalisée (ajout ou suppression d examens), faisant systématiquement l objet d un enregistrement informatique et d une information au prescripteur. Les prescriptions orales supplémentaires sont acceptées et tracées sur la demande initiale si le prélèvement est conforme. La détection au laboratoire d une NC de demande peut être réalisée à trois niveaux : à l occasion de la vérification pré-analytique, à l occasion de l enregistrement informatique et à l occasion de la confrontation des résultats avec l antériorité. 4.1 Anomalies à réception A la réception des demandes, la vérification pré-analytique s assure du respect des exigences décrites ci-dessus. Toute NC fait l objet d un enregistrement informatique. Elle est signalée sur le compte rendu de résultats. La conduite à tenir vis à vis des NC est la suivante : l observation d une NC de la demande d examen ou de l échantillon biologique peut entraîner le refus de la demande ou sa mise en attente pour complément d information, en fonction de son niveau de gravité. Dans aucun cas, un refus ne doit retarder la fourniture des Produits Sanguins Labiles (PSL) notamment en cas d urgence vitale, ni l éventualité d une greffe. En cas de NC majeure, aucun examen n est réalisé. Dans certains cas (prélèvement unique, d obtention difficile ou en cas d urgence vitale), le biologiste peut déroger à ces critères. Cette dérogation est tracée. Les différents types de NC sont décrits si dessous : NON-CONFORMITES CONCERNANT LA DEMANDE D EAMENS Nature de la non-conformité Absence de demande d examens Absence (ou non lisibilité) de nom de famille, prénom, date de naissance, sexe et le cas échéant nom d usage. L absence de nom de famille (naissance) est enregistrée en non-conformité pour les femmes. Double étiquetage différent Absence de l identification du prescripteur Absence (ou non lisibilité) du service prescripteur Refus de la demande OUI OUI OUI NON OUI sauf si régularisation rapide Absence (ou non lisibilité) du nom du préleveur OUI sauf si régularisation rapide (1) Absence de date de prélèvement (2) Nature des examens non précisée Les renseignements cliniques pertinents relatifs aux examens Absence de critères permettant de différencier 2 déterminations demandées simultanément OUI sauf si régularisation rapide ou si la date est présente sur le tube OUI sauf si régularisation rapide NON si nécessaire ils doivent être demandés par le biologiste OUI Refus des 2 déterminations (1) Pas de refus si examens HLA ou si transmission interlaboratoire des échantillons biologiques (l absence du nom du préleveur sur les demandes d examens transmises en 2ème intention par les laboratoires de biologie médicale ne fait pas l objet d un enregistrement de NC). (2) Pour IHE, l absence d heure de prélèvement est gérée comme une absence de date sauf accord avec le prescripteur. Si l absence d heure empêche de différencier 2 déterminations demandées pour un même préleveur, traitement d une seule demande. 9

14 D - REVUE DE CONTRAT Absence d échantillon biologique NON-CONFORMITES CONCERNANT L ECHANTILLON BIOLOGIQUE Nature de la non-conformité Absence (ou non lisibilité) de nom de famille, prénom, date de naissance, sexe et le cas échéant nom d usage Double étiquetage différent Discordance entre identité sur demande et échantillon biologique Absence de date de prélèvement (1) Echantillon biologique non adapté Prélèvement hémolysé Refus de la demande OUI OUI OUI OUI OUI sauf si la date est présente sur la demande ou régularisation rapide OUI pour examens IHE si hémolyse interfère sur l interprétation des résultats Sérum ou plasma décanté OUI (2) (1) Pour IHE, l absence d heure de prélèvement est gérée comme une absence de date sauf accord avec le prescripteur. Si l absence d heure empêche de différencier 2 déterminations demandées pour un même préleveur, traitement d une seule demande. (2) Sauf pour HLA : accepté si le laboratoire expéditeur est accrédité. En cas d échantillon altéré (lactescent, légère hémolyse, ictérique ), le compte rendu mentionnera cette particularité. Régularisation : il s agit de la réception d une nouvelle demande conforme (par fax ou transmission à l accueil du laboratoire) ou de l obtention par téléphone des renseignements manquants (ceux-ci sont tracés par le laboratoire). La régularisation des NC concerne les anomalies de la demande d examens. Le laboratoire informe le client de la nature de la NC par téléphone ou fax. Celui-ci doit fournir les informations nécessaires (coursier, fax ou téléphone) afin de régulariser au plus vite : la régularisation doit être compatible avec un délai raisonnable d exécution de l examen et de rendu des résultats. Lors de discordances d identité patients / données connues à l EFS, une conduite à tenir est formalisée : demande de renseignements complémentaires en vue de mise à jour du dossier. 4.2 Autres anomalies détectées Une remise en cause du lien patient / échantillon primaire peut survenir à l occasion de la confrontation du résultat de certains examens avec leur antériorité, après élimination d une cause liée au laboratoire. Cette discordance avec l historique pourra faire évoquer entre autres les hypothèses suivantes : - greffe, transfusions récentes, - erreur de patient pour l échantillon concerné, - erreur de patient lors d un prélèvement antérieur, - patient réellement différent (homonymie, usurpation d identité). La discordance est tracée dans le logiciel médico-technique; de nouveaux prélèvements et demandes d examens sont nécessaires. Dans tous les cas, l hémovigilant de l ES, le prescripteur et/ou le cadre du service sont informés, ainsi que le biologiste dans le cadre d un prélèvement transmis. 10

15 D - REVUE DE CONTRAT 5 Liste des examens 5.1 Examens immuno-hématologie EAMENS Groupe sanguin standard ABO RH1 Phénotype érythrocytaire RH KEL1 Phénotype étendu Phénotype complet Recherche d Anticorps Irréguliers anti-érythrocytaires (RAI) Epreuve Directe de Compatibilité au laboratoire (EDC) Test Direct à l Antiglobuline (TDA - Anciennement Test de Coombs Direct) ECHANTILLONS DE SANG 1 tube EDTA 5mL 1 tube EDTA 5mL 1 tube EDTA 5mL 1 tube EDTA 5mL 1 tube EDTA 5mL PRINCIPE DE LA METHODE - COMMENTAIRES Détermination du groupe sanguin et du phénotype Rhésus D et du phénotype érythrocytaire C,E,c,e,K (RH1, RH2, RH3, RH4, RH5, KEL1) par hémagglutination en vue d une transfusion ou dans le cadre d un suivi de grossesse. Un groupage sanguin ABO RHKEL1 valide est réalisé sur deux prélèvements effectués à des moments différents ou par deux préleveurs à raison d une détermination par prélèvement. Détermination d au moins un antigène de groupe sanguin autre que ceux indiqués dans les examens précédents par hémagglutination. Cet examen peut être effectué à l initiative du biologiste à l occasion d une identification d anticorps irréguliers ou d un protocole transfusionnel particulier. Détermination par hémagglutination de la présence d anticorps anti-érythrocytaire dans le plasma en vue d une transfusion, après transfusion ou dans le cadre d un suivi de grossesse. Cet examen comporte un dépistage suivi d une identification s il est positif. En cas d échantillon sanguin reçu au laboratoire dans un délai supérieur à 72 heures suivant le prélèvement, la RAI n est pas validée pour la transfusion sauf protocole RAI étendue. Pour les demandes d identification ou de suivi de prophylaxie anti- RH1 (joindre les résultats réactionnels et / ou indiquer les données concernant l injection cf. chapitre 1.2.1), l étape de dépistage n est pas systématique. Compatibilité in vitro entre les concentrés de globules rouges à transfuser et le plasma du patient par hémagglutination. Délai de validité de l échantillon : 72h L EDC n est jamais réalisée sans RAI valide. Document associé : demande de PSL (nombre et qualification). En cas d examen réalisé pour un nouveau-né de moins de 3 mois, joindre un échantillon sanguin de la mère. Mise en évidence de la sensibilisation in vivo des globules rouges par des anticorps de nature IgG ou des fractions du complément, par hémagglutination. Examen mis en oeuvre dans le cadre des anémies hémolytiques, d un incident transfusionnel, du suivi des nouveaux nés. Délai de validité de l échantillon : 48h Titrage d agglutinines froides 1 tube EDTA 5mL Titrage d agglutinines froides dans le plasma. Transport et conservation à température ambiante (< 48h). Cet examen peut être effectué à l initiative du biologiste à l occasion d un TDA positif de type complément. Titrage d anticorps immuns anti-a / anti-b Titrage d anticorps irréguliers autres que les anticorps immuns anti-a / anti-b 2 tubes EDTA 5mL Détermination du titre des anticorps anti-a et anti-b dans le suivi des allogreffes de CSH ou greffe rénale. Dans le cas de greffe rénale, le titrage des IgM est réalisé. 1 tube EDTA 5mL Titrage obligatoire d un allo-anticorps anti-érythrocytaire d intérêt obstétrical dans le cadre du suivi d une grossesse. Titrage effectué comparativement avec l échantillon antérieur conservé en sérothèque. 11

16 D - REVUE DE CONTRAT EAMENS Elution d anticorps Test de Kleihauer ECHANTILLONS DE SANG 1 tube EDTA 5mL 1 tube EDTA 5mL PRINCIPES DES METHODES L élution permet en cas de sensibilisation des hématies du patient par des auto-anticorps ou des allo-anticorps, de dissocier les liaisons antigènes-anticorps et de recueillir les éventuels anticorps fixés sur les hématies puis de les identifier. Cet examen est mis en oeuvre en cas : - d incompatibilité fœto-maternelle (IFM ABO, IFM par allo Ac maternel de nature IgG), - de bilan d incident post transfusionnel - à l initiative du biologiste lors de la découverte d un TDA positif (type IgG). Technique cytochimique qui permet de quantifier la présence d érythrocytes contenant de l hémoglobine fœtale. Interprétation rendue en fonction du nombre d hématies maternelles. Remarque : examens réalisables sur un même échantillon de 5 ml : groupe sanguin RH KEL1, phénotype étendu, phénotype complet, test direct à l antiglobuline, recherche d anticorps irréguliers, épreuve de compatibilité. 5.2 Examens HLA EAMENS Typage HLA classe I et II Chimérisme Recherche et identification des Ac anti HLA Cross match lymphocytaire Recherche et identification des Auto Ac anti plaquettes Recherche et identification des Allo Ac anti plaquettes Cross match plaquettaire dans les allo immunisations foeto maternelles ECHANTILLONS DE SANG 2x 5 ml ACD ou EDTA 4 x 5 ml EDTA 1 x 7 ml sec Receveur : 1x7mL sec + 2x5mL ACD ou EDTA Donneur d organe : 2 à 3 ganglions et un morceau de la rate Donneur vivant : 4x10mL ACD 1 x 7 ml sec + 2 x 5 ml EDTA 1 x 7 ml sec 1 x 7 ml sec (mère) 2 x 5 ml EDTA (père) PRINCIPES DES METHODES Sérologie : technique de lymphocytotoxicité complément dépendante sur des cellules mononuclées isolées à partir du sang périphérique, des ganglions ou de la rate. Biologie moléculaire : technique PCR-SSP, Luminex (PCR-SSO) sur ADN extrait à partir des cellules nucléées. Technique PCR-STR en multiplex sur ADN extrait à partir du sang périphérique ou de la moelle. Un tri cellulaire des populations CD3 et CD33 est réalisé en parallèle du sang total. En lymphocytotoxicité complément dépendante avec la détermination des isotypes IgG/IgM. En technique sensible : Luminex pour le dépistage et l identification des Ac anti HLA et des Ag permis. En lymphocytotoxicité complément dépendante. En Technique sensible = Cytométrie en flux après marquage des CD3 et CD19 pour les patients hyperimmunisés ou les greffes avec des donneurs vivants. Contrôle du typage HLA du donneur d organe en lymphocytotoxicité/ PCR-SSP. En cytométrie en Flux vis à vis d un panel de plaquettes, ou des plaquettes du patient dans les thrombopénies aiguës ou chroniques. ELISA indirect à l aide d Ac monoclonaux anti GP plaquettaires. Cytométrie en Flux vis-à-vis des plaquettes du père. Typage plaquettaire 2 x 5 ml EDTA Biologie moléculaire : en PCR-SSP sur ADN extrait à partir des cellules nucléées. 12

17 D - REVUE DE CONTRAT 6 Modalités de prescriptions d examens complémentaires Le laboratoire pourra ajouter ou conseiller des examens complémentaires dans les cas suivants : - permettre l interprétation des examens réalisés (ex : phénotype érythrocytaire si identification d anticorps). - assurer la sécurité transfusionnelle (ex : élution d anticorps fixés sur les globules rouges si Test Direct à l Antiglobuline de type IgG et antécédent transfusionnel de moins de 3 mois.). - s assurer de l identité du patient. - assurer le suivi Immuno-hématologique des grossesses (ex : titrage si identification d allo-anticorps ). Le prescripteur peut rajouter oralement des examens complémentaires à une demande après que celle-ci soit enregistrée au laboratoire. Cette information sera tracée sur la prescription. Selon les recommandations de l Agence de la Biomédecine, ou les protocoles convenus avec les clients, ou après validation par le prescripteur et/ou CSTH dans le cadre des ES, le laboratoire peut être amené à réaliser des examens complémentaires nécessaires à l interprétation des résultats et à la conclusion du bilan, à conseiller des examens complémentaires jugés utiles dans le cadre du suivi du patient, ou à supprimer des examens inutiles ou redondants pour le même patient. En cas de prélèvement avéré insuffisant pour valider des examens complémentaires, le prescripteur en est informé sur le compte-rendu. Les examens complémentaires seront traités comme une nouvelle demande. 7 Prise en charge des demandes d examens Délai de rendu 7.1 Examens IHE Après la revue de contrat, les demandes d examens sont prises en charge et les examens réalisés dans les délais spécifiés dans l Annexe 1. En cas d urgence, la réalisation de l examen est effectuée à réception des échantillons et les résultats sont communiqués le plus rapidement possible. En cas de limite de méthode, de difficulté fortuite et ponctuelle d un des sites à assurer le rendu de résultats, une transmission entre sites EFS AULO est possible. Remarque : le laboratoire IHE ne réalise que les examens cités dans la liste des examens (Annexe 1). Néanmoins, il peut être amené à transmettre à des laboratoires spécialisés, certains examens liés à la sécurité transfusionnelle ou foeto-maternelle tels que : dosage pondéral, génotypage érythrocytaire (examen Hors Nomenclature) Examens HLA En cas d urgence (typage pour PMO, crossmatch pré-greffe, inscription d un patient), la réalisation des examens 24h/24 est effectuée à réception des échantillons et les résultats sont communiqués le plus rapidement possible au service prescripteur (délai 5h). Pour les examens concernant l immunologie plaquettaire, en fonction du bilan et du degré d urgence le délai est compris entre 1 et 5 jours. 13

18 D - REVUE DE CONTRAT 8 Transmission des comptes-rendus d examens Les résultats d examens sont transmis au prescripteur dans le respect des dispositions réglementaires permettant de sauvegarder la confidentialité. Aucun résultat de groupe n est transmis par téléphone. Les comptes-rendus sont adressés au prescripteur (ou ES prescripteur) et/ou au patient soit : - Par courrier, sous enveloppe, expédition selon la demande contractuelle du client, par voie postale ou par coursier de l ES. - Directement retirés par le patient (sur présentation d une pièce d identité). - Par fax (à titre exceptionnel et à condition que le client s assure que le télécopieur se situe dans un endroit permettant le respect de la confidentialité des résultats des patients, procédure encadrée réservée aux cas d urgence signalés ou en cas d exigence du client). Il est suivi de l envoi du compte rendu par courrier. - Par réseau informatique (pour les examens et clients concernés sous réserve d une convention et d un dossier de validation) suivi de l envoi du compte-rendu par courrier. Le prescripteur est averti par téléphone lorsqu un résultat est critique ou nécessite une attitude thérapeutique particulière. 9 Modalités de conservation ou de restitution des échantillons 9.1 Examens IHE Après examens, les échantillons sont conservés a minima 4 jours à température contrôlée, ce qui permet dans ce délai: - de réaliser un examen complémentaire (selon validité de la méthode et quantité restante). - de demander la restitution des échantillons. Cette demande peut être faite par écrit par le prescripteur, le LBM ou l établissement de soin, à qui revient l organisation de retour. Les plasmas de femmes enceintes immunisées sont conservés congelés. 9.2 Examens HLA Le laboratoire conditionne les échantillons selon les examens demandés (sérum, cellules, ADN) et les conserve pour une durée garantissant la possibilité de réaliser des examens complémentaires (selon quantité restante). 10 Facturation Les examens réalisés sont facturés au client demandeur : - selon la réglementation en vigueur pour les actes cotés en B - selon Annexe 1 et les modalités de fonctionnement établies entre le client et l EFS pour les examens IHE - selon les modalités de fonctionnement établies entre le client et l EFS pour les examens HLA. 14

19 E - MANAGEMENT DE LA QUALITE L EFS RAA est certifié ISO 9001 pour l ensemble de ses activités depuis Le laboratoire unique multisite AULO est engagé dans une démarche d accréditation selon la norme ISO Le certificat n du «COFRAC» mentionnant les examens réalisés sous accréditation selon la norme NF EN ISO15189 est consultable : Liste des sites et portées disponibles sur Les sites d histocompatibilité sont accrédités : - EFI pour l ensemble de leurs activités de greffe d organes/csh et association HLA-maladies, - WMDA pour le registre des donneurs de CSH. Tous les examens sont réalisés conformément à des modes opératoires écrits, mis à jour au fur et à mesure de l évolution des techniques. La politique de contrôle qualité interne de chaque examen fait l objet d une description détaillée quant aux échantillons de contrôles, à leurs conditions de réalisation, aux règles d acceptabilité et à la conduite à tenir en cas de NC. La conformité des activités des laboratoires par rapport aux différents référentiels opposables est régulièrement évaluée par des audits internes. Toute NC relevée donne lieu à une analyse des causes suivie d action(s) corrective(s) dont l efficacité est suivie dans le temps. Le laboratoire s engage à ne collecter que les informations nécessaires à l identification correcte du patient, à la réalisation des examens et aux besoins de facturation. Les patients disposent d un droit d accès et, en cas d inexactitude, de rectification des données les concernant. Le laboratoire s engage à assurer la confidentialité des données collectées, des résultats des examens transmis et la protection du stockage électronique des données. Les accès aux locaux du LBM sont sécurisés et le personnel est soumis au secret professionnel, à la clause de non concurrence et de conflit d intérêt. 1 Continuité du service La continuité de service est organisée 24h/24 : - par la présence en garde ou en astreinte de technicien(s) - par l existence d une astreinte de biologie, de conseil transfusionnel et de greffe. Des procédures dites dégradées décrivent les modalités de gestion en situation de crise pouvant mettre en cause la continuité du service. 2 Ecoute client Dans un souci d efficacité et d amélioration continue de la qualité, le laboratoire a mis en place une démarche d écoute client à travers laquelle toutes les réclamations et observations des clients sont prises en compte et traitées dans la mesure du possible. 3 Service à la clientèle De façon à assurer aux clients une totale transparence des activités du LBM, ces derniers ont la possibilité de visiter les sites du laboratoire sur simple demande. En cas de retard dans la réalisation des examens, de changement de méthode ou de modalités de transmission d examens non énoncés ci-dessus, chaque site s engage à prévenir ses clients notamment en cas d impact pour le patient. Les biologistes assurent les conseils en matière de choix des examens et d utilisation des prestations du laboratoire, notamment quant à la fréquence des prescriptions et le type d échantillon primaire requis. Ils fournissent les prestations de conseil et les avis et interprétations en fonction des résultats des examens. Les biologistes participent régulièrement aux staffs cliniques avec les services de transplantation ou le CSTH. L ensemble des biologistes est à la disposition des prescripteurs à l occasion de réunions ayant pour objet le recours aux prestations du laboratoire et la délivrance de conseils sur des sujets scientifiques particuliers. 15

20 GLOSSAIRE AULO CSH CSTH DASRI EDC EFI EFS ES HLA HPA IFM IHE LBM NC PMO PSL RAI RAA TDA TRALI Auvergne-Loire Cellules Souches Hématopoïétiques Comité de Sécurité Transfusionnelle et d Hémovigilance Déchets d Activités de Soins à Risques Infectieux Epreuve Directe de Compatibilité European Federation of Immunogenetics Etablissement Français du Sang Etablissement de Santé Human Leucocyte Antigen Human Platelet Antigen Incompatibilité Foeto-Maternelle Immuno-Hématologie Erythrocytaire Laboratoire de Biologie Médicale Non Conformité Prélèvement Multi Organes Produits Sanguins Labiles Recherche d Anticorps Irréguliers Rhône-Alpes Auvergne Test Direct à l Antiglobuline Transfusion-Related Acute Lung Injury/syndrome respiratoire aigu posttransfusionnel WMDA World Marrow Donor Association 16

21 ANNEES

22 Annexe 1 : Liste des examens IHE Examen Tube Clermont-Ferrand Saint-Priest-en-Jarez Le-Puy-en-Velay Moulins Roanne Délai de réalisation Réalisée dans le cadre de la permanence des soins Cotation Code NABM Réception (* pour les demandes urgentes) Groupage sanguin ABO- RH1 Phénotypes RH (RH2, RH3, RH4, RH5) et Kell (KEL1) Antigène érythrocytaire FY1 FY2 JK1 JK2 MNS3 MNS4 et autres antigènes RAI Dépistage RAI - Identification EDC : Epreuve Directe de Compatibilité pour chaque unité de sang TDA : Test Direct à l Antiglobuline AGH spécifique Titrage des allo anticorps (autres que les anticorps naturels ou anti A ou anti B) dans le cadre d'un suivi de grossesse. AF : Titrage d Agglutinines Froides Titrage des anticorps Immuns anti-a anti-b Elution d anticorps Test de Kleihauer Quantification des Hématies 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 2 tubes EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 1 tube EDTA 5 ml 24h/24 24h/24 24h/24* 24h/24* 24h/24 24h ¹ OUI B h ¹ OUI B T T T 48h ¹ NON B15 par antigène (max 5 Ag) h ¹ OUI B h ¹ ² OUI B h ¹ ² 24h ¹ OUI OUI B B15 par AGH spécifique 1154 T T T 48h ¹ NON B T T T 48h ¹ NON B T T T 48h ¹ NON B15 par spécificité 1151 T T T 48h ¹ NON B T 24h ¹ NON B : réalisé sur site. T : transmission intersite (vers les sites de Clermont-Ferrand ou Saint Priest en Jarez). 1 : en jour ouvré, hors situation d urgence. ² : sauf cas complexe. Le délai d acheminement des échantillons primaires doit être le plus court possible afin d obtenir des résultats d examens compatibles avec leur utilisation clinique et les méthodes validées du laboratoire. Les prélèvements sont transportés à température ambiante : - en contexte transfusionnel : le plus rapidement après le prélèvement (limite de validité usuelle de la RAI 72h). - en cas de transmission différée ( 48h) : conserver l échantillon à 5 +/- 3 C avant transport. Remarque : TDA et Agglutinines Froides délai de transport 48 h maximum, pour Agglutinines Froides strictement à température ambiante.

23 Annexe 2 : Liste des examens HLA LIBELLE DE L EAMEN examens réalisé sur le(s) site(s) de : SAINT ETIENNE CLERMONT FERRAND Typage HLA Typage HLA classe I LCT Typage HLA classe II LCT Typage HLA classe I et II pour don d organes jour Typage HLA classe I et II pour don d organes Garde Typage HLA classe I et II pour receveur d organes par détermination Typage HLA classe I (ABC) générique BM par locus Typage HLA classe II (DRDQ) générique BM par locus Typage HLA classe I (ABC) allélique BM par locus Typage HLA classe II (DRDQDP) allélique BM par locus Recherche de l allèle HLA-B*5701 Anticorps anti HLA Recherche Ac anti Ly T LCT avec et sans DTT Recherche des Ac anti HLA classe I et II en Luminex Identification des Ag permis de classe I en Single Antigen Identification des Ag permis de classe II en Single Antigen Cross match Cross match pré greffe en LCT Jour Cross match pré greffe en LCT Garde Cross match pré greffe en LCT non suivi de greffe Cross match post greffe par serum en LCT Cross match CMF par sérum Cross match en LCT sur 2 à 10 dons de plaquettes Chimérisme Etude du chimérisme sur sang ou moelle Etude du chimérisme sur cellules triées du sang ou de la moelle Mise au point d'un suivi de chimérisme post greffe : définition des marqueurs (étude des marqueurs donneur et receveur) et gamme de sensibilité (Par échantillon receveur : analyse de marqueurs génétiques polymorphes, gamme de sensibilité, Inclus : extraction d'adn + dosage + conservation à long terme + contrôle préanalytique + enregistrement base de données + 2PCR + gamme de sensibilité, Exclus : extraction ADN et conservation à long terme pour échantillon donneur) Plaquettes Typage plaquettaire (HPA) Auto Ac anti plaquettes Identification des Auto Ac anti plaquettes Allo Ac anti plaquettes Identification des Allo Ac anti plaquettes Cross match plaquettaire Divers Congélation de cellules mononucléees par ampoules Décongélation de cellules mononucléées Sérothèque ou plasmathèque ou DNAthèque (conservation à -20 c) Sérothèque ou cellulothèque (conservation à -80 c) Conservation d'un aliquot dans l azote liquide (à long terme) quel que soit la nature de l'échantillon (culot sec, cellules cryopreservées, ) Numération cellulaire (Malassez ou automate) Extraction de l ADN Contrôle rapide de la qualité d une PCR, d un ADN ou d un ARN sur gel d agarose : examen réalisée sur site.

24 Annexe 3 : exemple de prescription d examens IHE EFS Rhône-Alpes Auvergne FORMULAIRE DE PRESCRIPTION D'EAMENS D'IMMUNOHEMATOLOGIE ERYTHROCYTAIRE RAA/LAB/IHE/FO/117 - Version 2 Coordonnées des sites du LBM REMPLIR UNE DEMANDE PAR PRELEVEMENT Tél : Tél : Tél : Tél : Tél : Site de Clermont-Ferrand Site de Moulins Site du Puy-en-Velay Site de Roanne Site de Saint-Priest - en Jarez Fax : Fax : Fax : Fax : Fax : Etablissement de santé prescripteur :... Service :... Téléphone (obligatoire):... Code UF :... RESERVE LABORATOIRE EFS Nom de famille (naissance) : Prénom : Nom d usage (marital) s il y a lieu : Date de naissance :..... Sexe : M F Adresse : Nom de de famille (naissance) :... Prénom :. Nom d usage (marital) s il y a lieu :... Date de naissance :. Groupe sanguin/ RH1:.... Présence d anticorps : si oui lequel médecin traitant ou Clinique domicile du patient LBM retrait à l EFS par le LBM Transmission de la facture à l Etablissement de santé demandeur retrait à l EFS par le patient Groupe Sanguin Phénotype RH-KEL1 1 tube EDTA RAI Transfusions de CGR dans les 4 mois précédant cet examen: oui (date) non Identification d anticorps (1 tube EDTA) Contrôle de gamma globulines anti-d (anti-rh1) : Dose/ Injection faite le Date de la dernière RAI Négative :... Test Direct à l Antiglobuline (Coombs Direct) (1 tube EDTA) Epreuve de Compatibilité (1 tube EDTA) (EDC, avant transfusion de CGR) Elution d anticorps (1 tube EDTA) Titrage d anticorps (1 tube EDTA) Anti A/Anti B, greffe : CSH ou Rein (2 tubes EDTA) Phénotype étendu (1 tube EDTA) FY1 FY2 JK1JK2 MNS3 MNS4 Phénotype complet (1 tube EDTA) FY1 FY2 JK1JK2 MNS1 MNS2 MNS3 MNS4 LE1 LE2 P1 Bilan Incident transfusionnel (1 tube EDTA) Après CGR seulement Agglutinines Froides si TDA positif de type complément Renseignements cliniques obligatoires:... (1 tube EDTA, transport à T ambiante) AUTRES :... Kleihauer (1 tube EDTA) Examens réalisés UNIQUEMENT sur le site de Saint Priest en Jarez Transmis uniquement par le site du Puy vers le site de Saint-Priest-en-Jarez INTERVENTION CHIRURGICALE : TRANSFUSION DE PSL : GROSSESSE : non oui Accouchement prévu le... AUTRE DIAGNOSTIC:... *a pris des modalités au verso Manuel de prélèvements du LBM en électronique: par moteur de recherche «manuel de prélèvements Auvergne-Loire» ou site de l ES le cas échéant INFORMATIONS IMPORTANTES A VOIR AU DOS Version électronique GEDEON faisant foi

25 Annexe 3 : exemple de prescription d examens IHE (suite) EFS Rhône-Alpes Auvergne FORMULAIRE DE PRESCRIPTION D'EAMENS D'IMMUNOHEMATOLOGIE ERYTHROCYTAIRE RAA/LAB/IHE/FO/117 - Version 2 L ensemble des dispositions est présenté dans le manuel de prélèvement du LBM. Echantillons : Tous les examens sont réalisés sur sang veineux, 1 seul tube EDTA (5ml, plein) est nécessaire pour réaliser l ensemble des examens, à l exception du traitement des cas complexes (contacter le laboratoire). Conditionnement : La séparation tubes/documents est obligatoire (au minimum : tubes en emballage étanche). Un prélèvement par conditionnement. Température de transport : Le transport est réalisé à température ambiante. Délai de transport : 48h. Au-delà, conserver l échantillon à 5+/- 3 C avant transport (sauf TDA et Agglutinines Froides : délai de transport 48h maximum, pour Agglutinines Froides strictement à température ambiante). Critères d'acceptabilité des tubes et des prescriptions (demandes) Sur le tube et sur la demande : stricte concordance des éléments mentionnés nom de famille (de naissance) obligatoire nom d usage (marital, s il y a lieu) prénom (1 er prénom de l état civil) date de naissance sexe Sur la demande: 1- Identification du prescripteur (Etablissement de soins et médecin prescripteur de l acte de biologie). 2- Identification OBLIGATOIRE du préleveur : celui-ci indique lisiblement son nom sa qualité, ce qui l engage à avoir identifié le patient au moment du prélèvement : en l interrogeant directement ou en cas d impossibilité majeure, en s assurant de son identité au moyen de son dossier, de sa famille, ou selon la procédure en vigueur dans l Etablissement de soins. 3- Date et heure du prélèvement sanguin Les étiquettes, si elles sont incomplètes ou mal orthographiées, DOIVENT être corrigées, même manuellement, à la fois sur le tube et sur la demande, au moment de l identification du patient lors du prélèvement sanguin. Gestion des non conformités Motifs majeurs d annulation des examens IHE (l information est transmise par téléphone et sur le compte rendu) - toute discordance d identité entre tube/demande - absence de nom de famille (de naissance) pour les personnes mariées - double étiquetage différent - 2 groupes sanguins prélevés par la même personne à la même heure, ou par 2 personnes mais non différenciables. D autres non conformités considérées comme mineures au laboratoire pourront faire l objet d un appel auprès du préleveur afin que la correction soit apportée, dans des délais compatibles avec la réalisation de l examen. L information est indiquée sur le compte rendu. A titre exceptionnel et au cas par cas selon les circonstances et la non-conformité, le biologiste se réserve le droit de faire réaliser les examens prescrits. Réalisation du prélèvement, validité des examens Un groupe sanguin doit être OBLIGATOIREMENT contrôlé sur un 2 ème prélèvement réalisé à un autre moment ce qui permet un 2ème contrôle d identité, si possible par un préleveur différent. Le groupe sanguin-phénotype doit être effectué à distance des transfusions (délai > 4 mois). Un phénotype étendu est conseillé en cas d immunisation et réalisé en cas de pathologie de l hémoglobine, à distance des transfusions (> 4 mois). L épreuve de compatibilité directe au laboratoire (EDC) est indispensable chez un malade immunisé. La validité d'une EDC est de 72 heures (à compter de l heure de prélèvement). Le laboratoire peut aussi la réaliser si elle est notifiée sur la prescription de CGR. Avant toute prophylaxie anti-d (injection de Gamma-globulines anti RH1), s assurer de la réalisation si possible dans les 3 jours précédents, au plus tard dans les 8 jours précédents d une RAI. Les renseignements concernant la prophylaxie (dose/date d injection/date dernière RAI négative avant injection) doivent être notés sur la demande. Des examens d immuno-hématologie complémentaires peuvent être réalisés à l initiative du biologiste conformément à la NABM et aux exigences réglementaires de laboratoire par exemple: pour assurer l identitovigilance du patient, permettre l interprétation des examens réalisés (phénotypes si identification d Ac..), assurer la sécurité transfusionnelle des transfusions (TDA positif suivi d une élution selon contexte transfusionnel ), suivi Immuno-hématologique des grossesses (par exemple titrage d Ac ), Agglutinines Froides si TDA positif de type complément. Le laboratoire se réserve la possibilité d annuler des examens redondants. Information : la délivrance de produits sanguins labiles se fait sur la présentation de la prescription des PSL, d une carte de groupe valide* ou de 2 déterminations* de groupe sanguin et, lors de la prescription de CGR, d un résultat de RAI de moins de 72 heures (hors protocole «RAI étendue»en accord avec le service Délivrance). * 2 prélèvements réalisés à 2 moments différents (permettant 2 contrôles d identité) et si possible par 2 préleveurs. Pour toute demande de transmission par télécopie, le client s assure de la confidentialité du fax. Version électronique GEDEON faisant foi

26 Annexe 4 : exemple de prescription d examens HLA EFS Rhône-Alpes Auvergne RAA/LAB/HLA/FO/151 - Version 2 FEUILLE DE PRESCRIPTION HLA LABORATOIRE D HISTOCOMPATIBILITE ET D IMMUNOLOGIE PLAQUETTAIRE N Agrément : Site de Saint Etienne 25 Boulevard pasteur St Etienne cedex 02 Tél. : Fax : Site de Clermont Ferrand 58 Rue Montalembert Clermont Ferrand cedex 01 Tél : Fax : IDENTIFICATION PATIENT ETABLISSEMENT DEMANDEUR PRELEVEMENT SANGUIN Nom de naissance : Nom de l établissement : Date : Nom marital ou d usage : Prénom : Date de Naissance : Adresse : Sexe : Service : Code U.F. : Nom du prescripteur : Tel : Signature : Heure : Nom du Préleveur : Signature : G R O U P A G E HLA GREFFE DE MOELLE Patient Donneur familial 1 ère détermination Diagnostic : Lien de parenté : 2 ème détermination Etude du chimérisme post greffe 2 x5ml EDTA 4x5ml EDTA GREFFE D ORGANE Typage Patient Typage Donneur vivant 1 ère détermination 2 ème détermination BILAN DE REJET Cross-Match post greffe et Ac anti HLA classe I et II 2x 5ml EDTA ou ACD 2x5mlACD ou EDTA +1x 5ml Sec Typage Donneur décédé : Cross Match Pré Greffe : Donneur décéde Receveur Donneur 2x5mlACD ou EDTA +2x 5ml sec (1x7ml) 2-3 ganglions et morceau de rate Donneur Vivant Receveur Donneur 3x5ml EDTA ou ACD 2x5mlACD ou EDTA +2x 5ml ou 1x7ml sec 4x 10ml ACD HLA ET MALADIES Classe I (HLA-A, B) Classe II (HLA-DR, DQ) HLA-B27 HLA-B*57 :01 HLA-DQ2/DQ8 HLA-DQB*06 :02 HLA-A29 HLA-B51 Autres : Pathologie Suspectée : A N T I C O R P S A N T I - HLA Classe I et II TRANSFUSION bilan pré-transfusionnel Effet indésirable receveur Autre : GREFFE D ORGANE Date de transplantectomie : Bilan pré greffe Avant Echange plasmatique ou IA Rejet humoral Bilan post greffe Après Echange plasmatique ou IA Traitement spécifique I M M U N O L O G I E P L A Q U E T T A I R E 2x 5ml ACD ou EDTA 1x 7ml ou 2x5ml Sec avec gel Auto Ac Anti-Plaquettes Numération plaquettaire : 2x5ml EDTA+1x5ml Sec Allo-Ac Anti-Plaquettes Grossesse (accouchement prévu le :.) Autres : 1x5ml sec Typage Plaquettaire HPA 2x5ml EDTA ALLO IMMUNISATION FOETO MATERNELLE Mère : Conjointe de M. Allo Ac Anti-Plaquettes + Auto-Ac Anti-Plaquettes + Typage Plaquettaire HPA 2x5ml EDTA+1x5ml Sec Père : Conjoint de Mme.. Cross-Match Plaquettaire + Typage Plaquettaire HPA 3x5ml EDTA Enfant : de. Typage Plaquettaire HPA 1ml EDTA minimum Un consentement du patient au verso est indispensable pour les analyses HLA et maladie

27 Annexe 4 : exemple de prescription d examens HLA (suite) EFS Rhône-Alpes Auvergne FEUILLE DE PRESCRIPTION HLA RAA/LAB/HLA/FO/151 - Version 2 Manuel de prélèvements du LBM en électronique : par moteur de recherche «manuel de prélèvements Auvergne-Loire» ou sur site de l EFS le cas échéant L ensemble des dispositions est présenté dans le manuel de prélèvement LBM Conditionnement : La séparation tubes / documents est obligatoire l emballage doit répondre aux exigences réglementaires. Température de transport : Le transport est réalisé à température ambiante. Délai d acheminement : 7 jours pour les analyses concernant l HLA 2 jours pour les analyses concernant les plaquettes Critères d acceptabilité des tubes et des feuilles de prescription («ordonnances») : - Toutes les analyses doivent être accompagnées d une feuille de prescription émanant du service pour les patients hospitalisées et/ ou d une ordonnance pour les patients en consultation. En cas d une analyse urgente prévenir le laboratoire par téléphone. Sur le tube et sur la demande : Nom de naissance obligatoire, Nom marital (s il y a lieu), prénom, date de naissance, sexe Sur la demande : Identification de prescripteur, date du prélèvement sanguin, identification du préleveur Motifs majeurs d annulation des analyses HLA (l information est transmise au service et ou au prescripteur, par téléphone immédiatement ou une fiche de nonconformité: Toute discordance d identité entre le prélèvement et la feuille de prescription. Toute anomalie relevant d un problème technique ou biologique sur le prélèvement qui empêcherait la réalisation du résultat (ex : typage HLA non réalisable si la numération leucocytaire est inférieure à 500 leucocytes/mm 3 ). La recherche des Auto Ac anti plaquettes sont irréalisables si le patient a un taux de plaquettes < 30G/L, si une transfusion récente a eu lieu < 3j, ou si le patient est sous traitement IGIV. A titre exceptionnel et au cas par cas, en cas d urgence, le biologiste se réserve le droit de prendre en compte un prélèvement non-conforme, celui-ci fera alors l objet d une mesure dérogatoire. Pour toute demande de transmission par télécopie, le client s assure de la confidentialité du fax.