Entérobactérie GELOSE EMB

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1 GELOSE EMB Milieu sélectif des Gram Peptone 10,0g Lactose 10,0g Eosine 0,4g Bleu de méthylène 0,0625g Hydrogénophosphate de potassium 2,0g Agar 15,0g La dégradation du lactose se traduit par une coloration rose ou un aspect métallique des colonies, dans le cas contraire, les colonies sont incolores. L aspect des colonies permet donc d orienter le diagnostic : - Colonies de 2 à 3 mm de diamètre, plates, violet très foncé, avec très souvent un reflet métallique en dos de scarabée : colonies d Escherichia coli probable. - Colonies de 4 à 6 mm de diamètre, convexes, rosées avec un centre violet (aspect en œil de poisson), muqueuses : colonies de Klebsiella (parfois Enterobacter probable) - Colonies violet pâle avec un centre et un reflet métallique peu marqué : colonies de Citrobacter probables - Petites colonies grises : autres bacilles à Gram - - Très petites colonies transparentes : Bactéries à Gram + Ces conclusions sont que des présomptions, il faut les confirmer.

2 Milieu sélectif des Gram Peptone Lactose Eosine BBT Désoxycholate et cristal violet GELOSE DRIGALSKI Colonies vertes Le BBT n a pas viré. Il n y a pas d acidification du milieu. La bactérie ne dégrade pas le lactose. Lactose Colonies jaunes Le BBT a viré. Le milieu a été acidifié. Le lactose a été dégradé. Présomption de bactérie Gram, ne dégradant pas le lactose. Présomption de bactérie Gram, dégradant le lactose. Lactose +

3 GELOSE MAC CONKEY Milieu d isolement sélectif et de différentiation destiné à la recherche des entérobactéries. Peptones Chlorure de sodium Lactose Cristal violet Sels biliaires Rouge neutre Colonies roses ou Acidification du La bactérie fermente rouges milieu le lactose Colonies incolores Il n y a pas acidification du milieu Lactose + La bactérie ne fermente pas le lactose Lactose

4 GELOSE SS (SALMONELLA-SHIGELLA) Milieu inhibiteur des Gram + commensaux Extrait de viande de bœuf Bio-polytone Lactose Sels biliaires Citrate de sodium Thiosulfate de sodium Citrate ferrique Vert brillant Rouge neutre Agar Pas d acidification due à Lactose l absence de dégradation H 2 S + ou du lactose Colonie incolore avec ou sans centre noir Colonie rose/rouge avec ou sans centre noir Acidification due à la de dégradation du lactose Lactose H 2 S + ou REMARQUE : Les colonies suspectent de Salmonella sont incolore avec ou sans centre noir. Les colonies suspectent de Shigella sont incolore sans centre noir.

5 GELOSE HEKTOEN Milieu d isolement sélectif des entérobactéries Extrait de levure Bio-thione Lactose Saccharose Salicine Chlorure de sodium Sels biliaires Citrate de fer ammoniacal Hyposulfite de sodium BBT Fuschine acide Agar Colonie jaune saumon Acidification du milieu Dégradation d au moins un des trois glucides Colonie verte ou bleue ph inchangé ou alcalin Dégradation d aucuns glucides ou dégradation des peptones Centre noir Présence de sulfure de fer Production d H 2 S REMARQUE : Salmonella -> Colonies vertes ou bleues à centre noir. Shigella -> Colonies vertes ou bleues sans centre noir. Proteus mirabilis -> Colonies vertes ou bleues à centre noir.

6 MILIEU UREE TRYPTOPHANE REACTIFS : TDA : Perchlorure de fer Indole : Kovacs (James) Urée Tryptophane Ethanol Rouge de phénol Chlorure de sodium PENSEZ A SEPARER LE MILIEU DANS DEUX TUBES Uréase Milieu orange Milieu rose fushia Pas d alcalinisation du milieu -> absence de carbonate d ammonium dans le milieu Alcalinisation du milieu due à la présence de carbonate d ammonium dans le milieu La bactérie ne possède pas d uréase -> Uréase La bactérie possède une uréase -> Uréase +

7 TDA Coloration marron foncé Présence d acide indole pyruvique dans le milieu. La bactérie a désaminé le tryptophane La bactérie possède une tryptophane désaminase. TDA+ Absence de coloration marron foncé Absence d acide indole pyruvique dans le milieu. La bactérie n a pas désaminé le tryptophane. La bactérie ne possède pas de tryptophane désaminase. TDA Indole Anneau rouge après addition de réactif de Kovacs Anneau jaune après addition de réactif de Kovacs Présence d indole dans le milieu. La bactérie a hydrolysé le tryptophane. Absence d indole dans le milieu. La bactérie n a pas hydrolysé le tryptophane. La bactérie possède une tryptophanase. Indole + La bactérie ne possède pas de tryptophanase. Indole

8 KLIGLER-HAJNA Gélose nutritive Rouge de phénol Glucose Lactose Peptones Thiosulfate de sodium Citrate ferrique Culot jaune Glucose+ Pente rouge Lactose Décollement de la gélose Absence de précipité noir Culot jaune Pente jaune Absence de décollement de la gélose Précipité noir Fermentation du glucose Absence de dégradation du lactose Production de gaz Absence de sulfure de fer Fermentation du glucose Dégradation du lactose Absence de production de gaz Présence de sulfure de fer Gaz+ H2S Glucose+ Lactose+ Gaz H 2 S+

9 TEST ONPG PROTOCOLE : -Réaliser une suspension bactérienne dense dans 0,5mL d eau stérile. Les bactéries doivent provenir d une culture sur un milieu lactose (KH). -Introduire aseptiquement un disque de papier imprégné du substrat ONPG. -Mettre à 37 C, observer toutes les 15 min pendant 1h. Coloration jaune stable Présence d ONP dans le milieu résultant de l hydrolyse de l ONPG La bactérie possède l ONPG hydrolase β-galactosidase + Pas de coloration jaune Pas d ONP dans le milieu ; l ONPG n a pas été hydrolysé La bactérie ne possède pas l ONPG hydrolase β-galactosidase PRECAUTION : Suspension assez dense En absence de coloration jaune, la lecture est à poursuivre 24h

10 MANNITOL MOBILITE NITRATE (MMN) Hydrolysat trypsique de caséine Nitrate de potassium Mannitol Rouge de phénol Agar Milieu rouge Pas d acidification du milieu La bactérie ne dégrade pas le mannitol Mannitol Milieu jaune Acidification du milieu La bactérie dégrade le mannitol Mannitol+ Milieu trouble Trouble du à la diffusion des bactéries mobiles à partir de la piqûre d ensemencement La bactérie est mobile Mobilité + TEST : Recherche de la Nitrate Reductase avec le réactif de Griess (+ éventuellement du zinc)

11 MILIEU CITRATE DE SIMMONS Phosphate Chlorure de sodium Citrate de sodium Sulfate de magnésium BBT Agar ATTENTION : Ne JAMAIS se servir d une culture en bouillon nutritif ou en EPO qui apporterait des éléments nutritifs (faussant les résultats ) Milieu vert Sans culture Le ph du milieu n a pas changé. La bactérie n est pas capable d utiliser le citrate comme seule Citrate Milieu bleu Culture source de carbone Alcalinisation du milieu suite à l utilisation du citrate comme seule source de carbone Citrate +

12 MILIEU CLARK ET LUBS REACTIFS : RM : Rouge de méthyle VP : Solution d alpha-naphtol + KOH Peptone trypsique Glucose Phosphate bipotassique PENSEZ A SEPARER LE MILIEU DANS DEUX TUBES RM Milieu rouge Milieu jaune Fermentation du glucose par la voie des acides mixtes Absence de fermentation du glucose RM + RM

13 VP Coloration rouge cerise ou rose vif Coloration jaune ou verdâtre ou rose très pâle Présence d acétoïne Fermentation du glucose par la voie du butane diol Absence d acétoïne Absence de fermentation du glucose par la voie du butane diol VP+ VP

14 GELOSE A LA GELATINE REACTIFS : Solution de chlorure de mercure II : réactif précipitant les protéines Absence de précipité autour de la strie centrale Absence de gélatine qui a été hydrolysée La bactérie possède la gélatinase Gélatinase + Présence d un précipité autour de la strie centrale Présence de gélatine qui n a pas été hydrolysée La bactérie ne possède pas la gélatinase Gélatinase

15 GELOSE AU VERT BRILLANT = GELOSE DE KRISTENSEN-KAUFFMAN Milieu sélectif de Salmonella Extrait de levure Extrait de viande Peptones Lactose Saccharose Rouge de phénol Vert brillant Colonie jaune Dégradation Dégradation d au moins au des deux glucides Colonie rouge Dégradation d aucun des glucides

16 Extrait de levure Thiosulfate de sodium Peptones de gélatine Lysine Glucose Bromocrésol pourpre Citrate de fer Agar MILIEU LYSINE-FER LDA Pente rouge Présence d acide cétonique provenant de la désamination de la lysine LDA+ Pente non rouge Absence d acide cétonique La bactérie possède une lysine désaminase. La bactérie ne possède pas de lysine désaminase. LDA

17 LDA Culot violet Si la bactérie fermente le glucose, le milieu a été réalcalinisation suite à la décarboxylation de la lysine Culot jaune Acidification du milieu par fermentation du glucose La bactérie possède une lysine décarboxylase. LDC+ La bactérie ne possède pas de lysine décarboxylase. LDC

18 MILIEU DE FALKOW Extrait de levure L-acide aminé Ethanol Chlorure de sodium Glucose Bromocrésol pourpre Tube témoin jaune Tube essai jaune Tube témoin jaune Tube essai violet Acidification du milieu dans les deux tubes sans réalcalinisation Acidification des milieux et réalcalinisation de l essai Glucose fermenté, acide aminé non décarboxylé LDC ou ODC ou ADH Glucose fermenté, acide aminé décarboxylé LDC ou ODC ou ADH+

19 GELOSE CIN Milieu d isolement riche sélectif de Yersinia Extrait de levure Peptones Mannitol Pyruvate de sodium Rouge neutre Sels biliaires Irgasan Cefsulodine Agar Colonie rouge Acidification du milieu Le mannitol est dégradé Mannitol+ Colonie incolore Absence d acidification du milieu Le mannitol n est pas dégradé Mannitol

20 GELOSE A L ESCULINE Esculine Peptones Citrate de fer ammoniacal Agar Absence d esculétine, donc l esculine n a pas été dégradée Absence de coloration noire Coloration noire Présence d esculétine, donc l esculine a été dégradée La bactérie ne possède pas d esculinase, donc elle ne dégrade pas l esculine Esculine La bactérie possède une esculinase, donc elle dégrade l esculine Esculine

21 GELOSE RAMBACH AGAR Propylène glycol Peptone Extrait de levure Désoxycholate de sodium Rouge neutre X-Gal Agar Souche Couleur des colonies Propylène glycol β- Galactosidase Salmonella Rouge + Enteritidis Escherichia coli Bleues violacées + Proteus Incolores

22 Bacilles, Gram, Mobile, AAF, Oxydase, Fermentatif du glucose Klebsiella Proteus Salmonella Citrobacter Escherichia Shigella Enterobacter Morganella Yersinia Serratia Providencia TDA VP Lact Uré Man + H 2 S + Cit + TDA VP Uré Cit H 2 S ONPG + Ind + TDA VP + Man + H 2 S Cit + ONPG + Ind + TDA + VP Lact ONPG LDC Uré Man + Ind + TDA VP Lact ONPG + Ind H 2 S Man +

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