VIABILITE DES GREFFONS DE CELLULES SOUCHES NON CRYOPRESERVES A UNE TEMPERATURE DE 4 C

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1 VIABILITE DES GREFFONS DE CELLULES SOUCHES NON CRYOPRESERVES A UNE TEMPERATURE DE 4 C M. Brahimi, N. Yafour, S. Osmani, F. Attaf, A. Arabi, B. Enta-Soltan, M.A. Bekadja. Service d Hématologie et de Thérapie Cellulaire EHU 1er Novembre Oran

2 INTRODUCTION La plupart des protocoles de conditionnement pour autogreffe de cellules souches sont conçus pour délivrer des médicaments cytotoxiques sur plusieurs jours [par exemple 6 jours pour le BEAM],

3 INTRODUCTION La congélation des cellules souches est effectuée afin de maintenir la viabilité cellules souches jusqu'à leur réinjection. Malheureusement, la cryopréservation nécessite un équipement coûteux et une structure spéciale ce qui n est pas le cas de plusieurs centres d hématologies des pays en voie de développement.

4 Introduction Dans notre service la structure pour la cryopréservation des cellules souches n est pas encore fonctionnelle et pour cette raison nous conservons le greffon de cellules souches à une température de +4 C afin de maintenir sa viabilité jusqu à sa réinjection.

5 But de ce travail Etudier la viabilité des cellules souches à +4 C C. Vérifier la fonctionnalité de ces CSP non cryopréservés à réaliser une prise de greffe et une sortie d aplasie

6 MATERIEL ET METHODES Etude de la viabilité 10/34 poches de collecte de cellules l souches ont été collectés par cytaphérèse en utilisant t une Optia Spectra. Un échantillon d environ de 2ml est prélevé de la poche de collecte et est acheminé au laboratoire de cytométrie en flux et conservé à 4 C.

7 MATERIEL ET METHODES Etude de la viabilité The ISHAGE guidelines. J Hematother 5(3) : (1996). Une numération des cellules CD34+ est effectuée en utilisant une double plateforme Un cytomètre en flux à 4 couleurs EPICS XL-MCL Un compteur d hématologie Beckman Coulter AcT Diff bl éd ll l é l é â et une viabilité des cellules est évaluée grâce au 7 AAD (7amino-actinomycin D)

8 MATERIEL ET METHODES Etude de la viabilité The ISHAGE guidelines. J Hematother 5(3) : (1996). Numération des GB Dilution Procédure type: Lyse no Wash le CD45 FITC pour marquer tous les globules blancs, du CD34 PE et un marqueur de viabilité cellulaire, l le7-aad, pour exclure les cellules mortes.

9 Exclusion des cellules mortes

10 Exclusion des débris

11 Cellules CD45+/CD34+ viables

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13 Calcule du taux de cellules CD34+ viables/kg %(CD34+) X taux GB X vol de la poche Nbr CD34+/Kg= poids du malade Une viabilité des cellules est évaluée grâce au 7 AAD immédiatement après la fin de la cytaphérèse (H0) puis à (H24), (H48) et enfin à (H72).

14 Résultats H0 H24 H48 H72 Viabilité (médiane) 98% 97.6% 96% 95% Viabilité (Intervalle)

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16 y=-1-1,06x 06x ,3 R 2 = 0,9571 p=0.0505

17 Etude de la fonctionnalité et sortie d aplasie 22 Malades : 09 Myélomes Multiples Melphalan200mg/m 2 13 Lymphomes de Hodgkin CBV 34 poches de collectes But :> CD34+/kg Taux de CD34+/Kg injecté 3,11 [1, ] (x10 6 )

18 Durée de conservation à +4 C en jours 12 Myélomes Multiples (14) Maladie de Hodgkin (20) jour 2 jours 3 jours 4 jours 5 jours 6 jours

19 Sortie d aplasie PN>500/mm J10 J11 J12 J13 J14

20 Selon L. Wannesson et al. Les CSP peuvent être conserver à +4 C jusqu à 9 jours sans perte significative des progéniteurs hématopoïétiques.

21 Conclusions La conservation des greffons de cellules souches à une température de +4 C est parfaitement faisable afin de maintenir leur viabilité jusqu à leur réinjection. La cryopréservation présente plusieurs avantages: la possibilité d employer des protocoles de conditionnements plus long. Entamer des mobilisation a «froid». «Le timing» nécessité d une coordination plus flexible dans le temps.

22 Remerciements Pr. R. M. Hamladji Toute l équipe du CPMC d Alger