Contrôle des résidus de médicaments vétérinaires dans les denrées alimentaires
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- Camille Lessard
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1 Contrôle des résidus de médicaments vétérinaires dans les denrées alimentaires Dr Patrick Edder Chimiste cantonal Journée de formation TVL - AVSA 14 avril 2011 Lucerne Page 1
2 Crises alimentaires et demain? Vache folle (ESB) PCB dans les poissons Dioxines dans les produits belges Antibiotiques dans les miels Antibiotiques dans les veaux Dioxines dans les œufs Accident de Fukushima Huile espagnole Vacherins Mont-d'or et Listéria Accident de Tchernobyl Veaux aux hormones Pesticides dans les salades Mercure dans les poissons Aflatoxines Vins frelatés Antibiotiques dans les produits asiatiques Pesticides dans les poivrons ITX dans le lait Grippe aviaire H5N1 PCB-dl dans les poissons Campylobactérioses Tommes à la Listéria Mélamine dans le lait Page 2
3 De l'étable à la table Traitement sur avis d un vétérinaire Substances homologuées Journal des traitements et délais d'attente Interdiction des promoteurs de croissance et des hormones Contrôle de la santé des animaux Obligation d annoncer Contrôle des carcasses et des organes Contrôle de la traçabilité Contrôle des limites maximales de résidus (LMR) Contrôle des importations Vétérinaires de frontières Les autorités de contrôle : OVF OFSP Vétérinaires cantonaux Chimistes cantonaux Page 3
4 Contrôles effectués sur la base d'analyses en laboratoire Plan national de contrôle Plan national contrôles frontières Actions nationales décidées par l'accs Plans régionaux de contrôle Actions cantonales échantillons analysés chaque année ~100 échantillons analysés chaque année (87 en 2010, 130 prévu 2011) Pas d'actions nationales ACCS sur cette thématique en par année, en Romandie 2010 streptomycine dans le miel, résidus dans les œufs, résidus dans les salmonidés 1-3 par année, à Ge 1 en 2010 résidus dans les foies (volailles, lapins, veau, ) Page 4
5 Analytes inconnus Résidus de médicaments vétérinaires? Page 5
6 Principes actifs utilisés en médecine vétérinaire sulfadimidine, sulfadoxine, sulfadimethoxine, sulfapyridin, sulfathiazole, sulfameter, sulfadiazine, sulfmerazine, sulfanilamide, sulfapyridazin, sulfamethoxazole, sulfamethizole, sulfamidés sulfaquinoxaline, sulfacétamide, phénothiazines sulfaguanidine, amoxycilline, ampicilline, pénicillines cloxacilline, dicloxacilline, nafcilline, triphénylméthanes pénicilline G, oxacilline, érythromycine, macrolides desmycosine, josamycine, benzimidazoles oléandomycine, lincomycine, roxithromycine, spiramicyne, tilmicosine, tylosine, ceftiofur, cefoperazone, céphalosporines avermectines cefalonium, cefquinom, cefacetrile, cefazolin, cephapirine, cefalexin, cefamandol, cefotaxil, tétracyclines ceftriazone, cefaclor, cefuroxime, anticoccidiens cefsulodine, tétracycline, oxytétracycline, quinolones chlortétracycline, doxycycline, β-agonistes demeclocycline, acide oxolinique, acide nalidixique, ofloxacine, norfloxacine, cinoxacine, ciprofloxacine, amphénicoles corticostéroïdes danofloxacine, difloxacine, enrofloxacine, enoxacine flumequine, lomefloxacine, levofloxacine, aminoglycosides marbrofloxacine, sarafloxacine, chloramphénicol, thiamphénicol, florphénicol, nitrofuranes dihydrostreptomycine, gentamicine, kanamycine neomycine, spectinomycine, streptomycine, furazolidone, Soit plusieurs nitrofurantoin, centaines nitrofurazone, nitroimidazoles furaltaldone, nifursol, bacitracin, tiamuline, virgyniamycine, valnemuline, vert de malachite, olaquindox, carbadox, de principes actifs! Et leurs métabolites Page 6
7 Challenge des laboratoires d'analyse Analyse de résidus efficace Comment analyser plus d'analytes dans plus d'échantillons avec une meilleure sensibilité en moins de temps? Tests de dépistage et/ou méthodes rapides Page 7
8 Dépistage par test biologiques Test 4 plaques L'échantillon est mis en présence de bactéries dans un milieu nutritif sélectionné. En présence d'antibiotiques, les bactéries ne se multiplieront pas et une zone d'inhibition apparaîtra. En jouant sur différents micro-organismes, on peut plus ou moins identifier telle ou telle famille d'antibiotiques. Souvent trop peu sensibles et lectures difficiles avec des échantillons complexes (organes) Page 8
9 Dépistage par test biologiques Test commerciaux De nombreux tests existent sur le marché, mais sont surtout consacrés aux analyses du lait. Très performants vis-à-vis des pénicillines, des sulfamidés et des tétracyclines, mais sont insuffisamment sensibles pour les autres familles Page 9
10 Tests de compétition ELISA, RIA, Charm Test, etc Souvent très sensibles Généralement très (voire trop) sélectifs Nécessitent souvent une préparation d'échantillon spécifique et des étapes de purification (SPE) Développement long, coûteux et commercialisation seulement si un marché est existant Mise en œuvre longue, fastidieuse et coûteuse s'il faut effectuer 6 à 7 tests ELISA par échantillon! Page 10
11 Dépistage par chromatographie couplée à la spectrométrie de masse Préparation d'échantillon réduite au minimum Méthodes séparatives rapides Séparation de substances en moins de 10 min. Détection rapide, sensible et sélective par spectrométrie de masse Ex : MS/MS, TOF, Q-TOF, etc Page 11
12 V Analyses ciblées ou de dépistage? LC-MS/MS LC-TOF Téléobjectif ou grand angle? Page 12
13 Page 1
14 Page 1
15 Analyses ciblées (LC-MS/MS) 5 ul PL on Acquity C18 Shield 2.1 x 100 mm test09 2: MRM of 2 Channels ES > e3 Area % test09 1: MRM of 5 Channels ES > e4 Area % test09 1: MRM of 5 Channels ES > e5 Area % Extrait de viande (5 g) dopé par 100 µg/l 5 µg/l 50 µg/l test09 1: MRM of 5 Channels ES > e6 Area % % % 0 50 µg/l test09 1: MRM of 5 Channels ES > e5 Area 10 µg/l test09 1: MRM of 5 Channels ES > e5 Area 50 µg/l Time O 2 N H 3 C Cl HO OH H 3 C H N O OH Cl H 3 C Cl O OH OH H 3 C OH O N OH OH OH O OH O O N H H 3 C O NH 2 N H 2 N N F N O O O HO O O S N H OMe O OH O N H 3 C N OMe N N COOH OMe Chloramphénicol MRL : 1 µg/kg Erythromycine MRL : 400 µg/kg Chlortétracycline MRL : 100 µg/kg Enrofloxacine MRL : 100 µg/kg Leuco-Vert de malachite MRL : 10 µg/kg Sulfadimethoxine MRL : 100 µg/kg Page 15
16 Limitations des analyses ciblées Besoin de connaître ce que l'on recherche Avoir la substance de référence à disposition On ne trouve que ce que l'on cherche Réflexion préalable à l'analyse Pas de place pour l'imprévu Le nombre des substances recherchées n'est pas illimité Page 16
17 Analyses de dépistage (LC-TOF) MS haute résolution En cas de mise en évidence d'une substance inconnue, la mesure de la masse exacte donne des informations structurales F N O N COOH N Analyse de composés non ciblés Les données peuvent être retraitées à n'importe quel moment Enrofloxacine MM Page 17
18 Sélectivité 10LOQ- J1- MixI 10 LOQ- J1 - Mix I : TOFMSES TIC TOF ESI+ Enrofloxacine Sm(Mn, 1x2) 10ppb Mass window1: TOF MS ES Da e5 m/z e Da Da Da % 0.02 Da 0.01 Da Da 95 % Da -5 Time -5 Time Page 18
19 Résidus de médicaments dans le lait Milk 1. Précipitation MeCN 2. Agitation 3. Centrifugation 4. Ultrafiltration 3kD 5. Reprise filtrat 6. Mise en vial Page 19
20 Résidus médicaments dans le lait Méthode validée pour 150 substances Tétracyclines Pénicillines Quinolones Sulfamides Nitroimidazoles Benzimidazoles Macrolides Avermectines Cephalosporines Smooth(Mn,1x2) QC Céphalosporine 1 µg/kg II 100 % % Ceftiofur (M116) µg/kg Ceftiofur 1 µg/l 5.93 F1:TOF MS,ES e Smooth(Mn,1x2) QC sulfamides 10 µg/kg I 1,13 Sulfamethoxazole (M043) 2,83 11,161 5,956 µg/kg 1,89 Sulfamethoxazole 5 µg/l 4,98 5,22 6,05 6,17 min 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00 6,50 7,00 min F1:TOF MS,ES ,536e+002 6, Page 20
21 Recherche de substances connues En cas de Nouvelle problématique Crise alimentaire Recherche de métabolites % 100 AN-10/ TOF ESI+ TIC 6.41e5 Ethoxyquin H N min TOF ESI Da 2.50e3 O C14H19NO MH %? min Page 21
22 Recherche de substances inconnues TOF ESI Da 2.50e3 % min C28H37N2O2 H 3 C O Da TOF ESI+ 0.02Da 3.41e4 N H N % H 3 C O Da Da min Page 22
23 Ethoxyquin et métabolite dans les Salmonidés d'élevage µg/kg Dimère Ethoxyquin Ethoxyquin % d'échantillon positif Valeur mediane 121 µg/kg La présence d'un métabolite est majoritaire Echantillons Pas de normes dans les poissons! Denrées alimentaires obtenues à partir d'animaux terrestres : valeur max. = 50 µg/kg Manque de données toxicologiques Page 23
24 Principes actifs utilisés en médecine vétérinaire et recherchés au SCAV GE sulfadimidine, sulfadoxine, sulfadimethoxine, sulfapyridin, sulfathiazole, sulfameter, sulfadiazine, sulfamidés sulfmerazine, (26) sulfanilamide, phénothiazines sulfapyridazin, (3) sulfamethoxazole, sulfamethizole, pénicillines sulfaquinoxaline, (9) sulfacétamide, triphénylméthanes sulfaguanidine, (3) amoxycilline, ampicilline, cloxacilline, dicloxacilline, nafcilline, pénicilline G, oxacilline, érythromycine, macrolides desmycosine, (13) josamycine, benzimidazoles oléandomycine, (20) lincomycine, roxithromycine, céphalosporines spiramicyne, (19) tilmicosine, avermectines tylosine, ceftiofur, (5) cefoperazone, cefalonium, tétracyclines cefquinom, cefacetrile, (6) cefazolin, anticoccidiens cephapirine, cefalexin, (8) cefamandol, cefotaxil, ceftriazone, cefaclor, cefuroxime, cefsulodine, tétracycline, oxytétracycline, quinolones chlortétracycline, (18) doxycycline, β-agonistes demeclocycline, (6) acide oxolinique, acide amphénicoles nalidixique, ofloxacine, (3) norfloxacine, corticostéroïdes cinoxacine, (23) ciprofloxacine, danofloxacine, aminoglycosides difloxacine, enrofloxacine, (6) enoxacine flumequine, lomefloxacine, levofloxacine, marbrofloxacine, sarafloxacine, chloramphénicol, thiamphénicol, florphénicol, nitrofuranes dihydrostreptomycine, (4) gentamicine, kanamycine neomycine, spectinomycine, nitroimidazoles streptomycine, (8) furazolidone, nitrofurantoin, nitrofurazone, furaltaldone, nifursol, bacitracin, tiamuline, virgyniamycine, valnemuline, vert de malachite, olaquindox, carbadox, Page 24
25 Evolution de ces 10 dernières années Avant 1995 : de grosses difficultés d'analyses et assez peu de contrôles une réglementation plus permissive Dès 1995 des campagnes de contrôle montrant de nombreux échantillons contenant des résidus (10-80 % selon les denrées et origines) et de forts dépassements des normes en vigueur. de nombreuses crises 1998 Streptomycine dans le miel 1999 Vert de malachite dans les poissons 2000 Sulfamidés et tétracyclines dans le miel 2001 Chloramphénicol dans les crevettes, poissons et volailles 2002 Nitrofuranes dans les crevettes, poissons et volailles 2005 Lasalocid dans les œufs Demain?????? Page 25
26 Activité 2010 du SCAV GE Analyses de type multi-résidus comprenant la recherche de principes actifs de médicaments vétérinaires DENRÉES CARNÉES Échantillons analysés Échantillons conformes sans résidus Échantillons conformes avec résidus Échantillons non conformes Viande (muscles, foies, ) (1 %) Volaille (muscles, foies, ) (0 %) Poisson (0 %) Lait (4 %) Œufs (0 %) Sang (0 %) Total global 1' (1.4 %) Page 26
27 Résultats 2010 pour l'analyse des foies Principes actifs Famille médicamenteuse Action Nb de fois détectés Teneurs [µg/kg] Valeur limite [µg/kg] Chlorotétracycline Tétracycline Antibiotique Sulfamethazine Sulfonamide Antibactérien Doxycycline Tétracycline Antibiotique Oxytétracycline Tétracycline Antibiotique Abamectine Avermectine Antibiotique Danofloxacin Quinolone Antibiotique Eprinomectine Avermectine Antiparasitaire Fenbendazole Benzimidazole Antiparasitaire Flubendazoleamine Benzimidazole Antiparasitaire Levamisole Autre Antiparasitaire Meloxicam Autre Anti-inflammatoire non stéroïdien (AINS) Tétracycline Tétracycline Antibiotique Triclabendazole Benzimidazole Antiparasitaire Page 27
28 Résultats 2010 pour l'analyse des sangs Principes actifs Famille médicamenteuse Action Nb de fois détectés Teneurs* [µg/kg] Xylazine α2-agoniste Tranquillisant Procaïne Amino-ester Anesthésique 2 < 5 et 30 Triclabendazole-sulfone Benzimidazole Antiparasitaire 1 5 Triclabendazole-sulfoxide Benzimidazole Antiparasitaire Cefquinom Céphalosporine Antibiotique 1 35 Hydrocortisone (cortisol) Corticostéroïde Hormone 6 < Ketoprofen Dérivé de l'acide propionique Anti-inflammatoire non stéroïdien (AINS) 1 57 Danofloxacin Fluoroquinolone Antibiotique 1 28 Enrofloxacin Fluoroquinolone Antibiotique 1 9 Cloxacillin Pénicilline Antibiotique 1 54 Pénicilline G Pénicilline Antibiotique Sulfadiazine Sulfonamide Antibiotique Sulfadoxine Sulfonamide Antibiotique 1 95 Sulfamethazine Sulfonamide Antibactérien 1 65 Oxytetracycline Tétracycline Antibiotique 2 7 et 164 Chlortétracycline Tétracycline Antibiotique 1 15 Flunixin - AINS 2 10 Tolfenamic acide - AINS Trimethoprim - Antibiotique Service de la consommation 2et des affaires 19 bactériostatique vétérinaires et 32 (SCAV) Page 28
29 Perspectives du SCAV GE Amélioration des échanges et connexions avec les services vétérinaires cantonaux Méthode pour le sang Etude relative aux bactéries multirésistantes en relation avec la volaille et les traitements aux antibiotiques Page 29
30 Merci pour votre attention! Page 30
31 Plan national de contrôle analyses GE Types d'échantillon s Foies Types d'animal Nb de prélèvements Échantillons conformes sans résidus Échantillons conformes avec résidu Échantillons nonconformes Bovins Ovins Porcins Volailles Total (89 %) 33 (10 %) 3 (1 %) Laits Vache (98 %) 3 (1.5 %) 1 (0.5 %) Sangs de veau Sangs de génisse Sangs Sangs de vache Sangs de taureau Total (72 %) 19 (28 %) 0 Total (91 %) 55 (8.5 %) 4 (0.5 %) Page 31
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