Gamme Cytométrie Navios

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1 Gamme Cytométrie Navios Test d évaluation Cytométrie Support Pédagogique remis à : NOM : PRENOM : DATE : / / Partie I : Partie II : Partie III : Partie IV : Partie V : Partie VI : BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 1/7

2 PARTIE I : PRINCIPES DE CYTOMETRIE EN FLUX Associez les mots à leur définition : a - Focalisation hydrodynamique b - Conditionnement (gating) c - Discriminant d - De l analogique au digital 1- Alignement des évènements au centre d une gaine liquide. 2 - Conversion d un signal électrique en valeurs numériques (0 à 1023). 3 - Seuil minimum défini sur un paramètre et permettant l élimination de débris et du bruit de fond électronique. 4- Sélection d évènements répondant à un ensemble de critères afin de les visualiser sur un graphe. Quel serait l effet d une baisse de la pression du liquide de gaine sur l alignement des évènements dans le centre du jet (espace réservé aux évènements) au sein de la cellule d analyse (Flow Cell)? Il n y aurait aucun effet : la pression de l échantillon commande l alignement. Le centre du jet s élargirait et l alignement ne serait pas optimal. Les CV et le nombre d évènements par unité de temps augmenteraient. Quel serait l effet d une augmentation de la pression exercée sur la suspension à analyser pour faire passer l échantillon plus vite? La sensibilité de l instrument augmenterait. La taille du spot laser augmenterait. La vitesse de passage des éléments devant le faisceau laser augmenterait. La résolution de l analyse (capacité à distinguer 2 intensités de fluorescences proches) diminuerait. Associez les mots à leur définition (une définition n a pas de correspondance) : 1 - Taille relative de l évènement. 2 - Quantité de fluorochrome associée à l évènement. a - Side Scatter b - Forward Scatter (FS) c - Fluorescence 3 - Granularité interne associée à l évènement. 4- Pourcentage de transmission du fluorochrome. BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 2/7

3 Quel est l intérêt des fluorochromes TANDEM? maintenir un bon rendement quantique en couplant 2 fluorochromes modifier la longueur d onde de fluorescence du fluorochrome obtenir une émission de fluorescence de longueur d onde différente avec le même fluorochrome de base et sans changer de laser effectuer un transfert d énergie Quel est le rôle du discriminant ou seuil de discrimination? éliminer de l analyse les éléments non fluorescents éliminer les débris de l analyse des histogrammes éliminer les débris de l acquisition des données prendre en compte, lors de l acquisition, uniquement des évènements dont l amplitude du signal est supérieure ou égale à une valeur donnée Qu est-ce que le conditionnement ou «gating» d un histogramme? sélection d une population définie définition d une région en gate restriction de l affichage des évènements sur un ou plusieurs histogrammes à une région définie en gate acquisition d évènement uniquement à l intérieur d une gate L amplification d un signal linéaire sur les photodétecteurs peut être ajustée par : le voltage du détecteur seulement le gain du détecteur seulement le voltage du détecteur et le gain derrière le détecteur. aucune de ces propositions. Définissez l ordre des différentes étapes présentées ci-dessous et effectuées lors de l acquisition d un tube au cytomètre : a- Focalisation hydrodynamique b- Gain c- conditionnement d- conversion analogique / digitale e- Filtres f- Discriminant g- Formation du rayon laser h- PMT i- analyse BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 3/7

4 Départ Fin PARTIE II : LES FILTRES Une particule d énergie lumineuse est appelée : Photon. Transmittance. Longueur d onde. Aucune de ces propositions. Les filtres optiques utilisés sur le cytomètre permettent : d orienter le signal lumineux vers les détecteurs. d enlever la contamination lumineuse due au chevauchement des spectres de bloquer les signaux lumineux. Aucune de ces propositions. Placez les couleurs ci-dessous dans l'ordre des longueurs d onde croissante : a- Jaune b- Bleu c- Orange d- Rouge e- Vert 488 nm Laser bleu 770 nm BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 4/7

5 Un graphe représentant l intensité relative de fluorescence émise après absorption en fonction des longueurs d onde de lumière est appelé : courbe d émission courbe de pourcentage de transmission de lumière courbe d excitation du fluorochrome aucune de ces propositions Placez les longueurs d onde face à la couleur correspondante : a nm d nm h nm e nm f nm j nm i nm b nm g nm c nm PC5.5 PB AA700 FITC ECD AA750 APC PC7 KO PE Un filtre placé avec un angle de 45 qui permet de séparer la lumière selon deux bandes de couleur est de type : Long Pass. Dichroïque. Band pass. Interference. Faites correspondre les courbes aux types de filtres : a- b- c- d- BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 5/7

6 1- Type Short Pass. 2- Type Band Block. 3- Type Band pass. 4- Type Long Pass. PARTIE III : SELECTION DES FILTRES Lors de la séparation des différents signaux de fluorescence émis à l aide des filtres, pourquoi faut-il récupérer la fluorescence émise par le fluorochrome de plus faible rendement quantique le plus tôt possible? pour que le PMT n 1 soit le plus sensible. pour que la lumière traverse le moins de filtres possibles et minimiser ainsi les pertes de signal pour minimiser les interférences aucune de ces propositions Pourquoi est-il important de réduire le nombre de couleurs entrant dans le PMT? car chaque PMT est sensible uniquement à certaines couleurs pour que la lumière traverse le moins de filtres possibles afin de minimiser les pertes pour réduire au minimum les interférences aucune de ces propositions PARTIE IV : LES PMT Un PMT convertit de la lumière en impulsion électrique : Vrai Faux Quel est l effet d une augmentation de la haute tension au niveau du PMT de la FL1 qui mesure l émission de fluorescence verte (FITC)? augmenter la sensibilité de ce PMT augmenter l amplitude du signal délivré par ce PMT déplacer la population FITC positive vers les valeurs croissantes de l axe FL1 du ou des histogramme(s) concerné(s) déplacer la population FITC positive vers les valeurs décroissantes de l axe FL1 du ou des histogramme(s) concerné(s) PARTIE V : LA COMPENSATION Quand est-il nécessaire de mettre en place une matrice de compensation? chaque fois que l on change la spécificité de l anticorps (CD3, CD19, CD56 ) chaque fois que l opérateur change chaque fois que la superposition des spectres d émission du fluorochrome ne peut pas être enlevée par le filtre BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 6/7

7 Cocher les facteurs qui peuvent affecter la matrice de compensation : le conditionnement le Photomultiplicateur le fluorochrome le Voltage. la spécificité de l anticorps (CD3, CD19 ) les Filtres le type d histogramme choisi Quelle(s) est (sont) la (les) action(s) à effectuer lorsque vous obtenez les résultats ci-dessous : Vous ajustez : la population B1 vers le haut en augmentant le voltage la population B1 vers le bas en diminuant le voltage la population B1 vers la gauche en augmentant la compensation la population B1 vers la droite en diminuant la compensation la population B4 vers la gauche diminuant le voltage la population B4 vers la droite en augmentant le voltage la population B4 vers le haut diminuant la compensation la population B4 vers le bas en augmentant la compensation rien, le réglage est parfait. Quelle(s) est (sont) la (les) action(s) à effectuer lorsque vous obtenez les résultats ci-dessous : Vous ajustez : la population B1 vers le haut en augmentant le voltage la population B1 vers le bas en diminuant le voltage la population B1 vers la gauche en augmentant la compensation la population B1 vers la droite en diminuant la compensation la population B4 vers la gauche en diminuant le voltage la population B4 vers la droite en augmentant le voltage la population B4 vers le haut en diminuant la compensation la population B4 vers le bas en augmentant la compensation rien, le réglage est parfait. BECKMAN COULTER FRANCE CENTRE DE FORMATION AGREE ( ) 7/7