Module transfusion cours IFSI. Dr SLIMANE Mohamed IH/distri EFS Dijon

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1 Module transfusion cours IFSI Dr SLIMANE Mohamed IH/distri EFS Dijon

2 Plan des cours 1 Collecte( à titre informatif) 2 groupe ABO, technique 3 Les différents PSL,alternative à la transfusion 4 Contrôle ultime,ed 5 Accident transfusionnel

3 1 Collecte et 2 groupe ABO, A Le don du sang technique B Le groupage sanguin C Les différentes techniques de groupages( à titre informatif)

4 A Le don du sang ( à titre informatif) Anonyme Volontaire Gratuit Avec entretien médicale avant don Suivi post don

5 L entretien médicale( à titre informatif) Une sécurité pour le donneur et le receveur Sélection du don Réalisation systématique de bilan et sérologie à chaque don Vérification d absence de pathologie CI au don (ATCD, voyage, infection, médication..)

6 Les différents dons de sang ( à titre informatif) «Matières Premières ou P.S.L. produits sanguins labils» : Au nombre de 3 Le SANG TOTAL (ST) Les CONCENTRES de PLAQUETTES d APHERESE (CPA) Le PLASMA d APHERESE

7 Du Donneur aux Patients ( à titre informatif) Prélèvement + PT PREPARATION QBD Patients Distribution PSL

8 L EFS Bourgogne / Franche- Comté (EFS B/FC) ( à titre informatif) 9 sites de prélèvements 9 sites de distribution 1 Plateau Technique de Qualification Biologique du Don ( à Metz Tessy) 1 Biothèque (à Dijon) 1 Plateau Technique de Préparation (à Besançon)

9 L ORGANISATION de l EFS B/FC ( à titre informatif) Auxerre Sens Besançon Belfort Nevers Chalon Macon Dijon Plateau Technique Préparation Besançon Tubes de qualification Plateau Technique QBD Metz Tessy Produits finis Prélèvements Matière première

10 Plateau Technique de Préparation( à titre informatif) BESANÇON traite les PSL prélevés sur les sites de prélèvement de la région Bourgogne Franche Comté soit plus de prélèvements / an Supervise la logistique du transport des PSL

11 Le plateau de qualification ( à titre informatif) Metz-Tessy Groupage sanguins ABO Dépistage des maladies transmissibles Sérologie virale + Paludisme Sérothèque (Biothèque)

12 Distribution ( à titre informatif) Des PSL par des personnes qualifiés (techniciens ou infirmières) Vérification de la conformité de la prescription Sélection des produits adaptés Délivrance selon le degré d urgence

13 B Les groupes sanguins Les groupes sanguins se répartissent en systèmes : ABO, Rh Chaque système est défini par: Un ensemble d antigènes de la membrane du globule rouge génétiquement induits par une unité génétique. Leur étude doit donc envisager les antigènes et les anticorps qui leur correspondent

14 Les antigènes de groupes sanguins Les antigènes de groupes sanguins sont portés par des glycolipides ou des glycoprotéines et sont exposés à l extérieur de la membrane.

15 Les antigènes de groupes sanguins Leur classification se fait selon deux niveaux : Premier niveau : les antigènes de groupes sanguins. plus de 650 actuellement (exemples : Ag A, B, D, Fya, M, Lea ) Deuxième niveau : ces antigènes sont regroupés en 23 systèmes de groupes sanguins. On appelle système de groupes sanguins l'ensemble des antigènes élaborés par les allèles d'une même unité génétique.

16 Les différents systèmes de groupes sanguins ( à titre informatif) SYSTEME ABO MNSs P Rh Lutheran Kell Lewis Duffy Kidd Diego Cartwright Xg Scianna Dombrock Colton LW Chido-Rodgers H SYMBOLE ABO MNS P1 RH LU KEL LE FY JK DI YT XG SC DO CO LW CH /RG H

17 Deux familles de groupe sanguin (Très important) ABO et associés Rh et collègues Tissulaires Pas propres à l'homme Possèdent des anticorps naturels Problèmes en transfusion et en transplantation ABO Hh et Sese Lewis Ii P Luthéran MN Propres aux GR Propres à l'homme Ne possèdent pas d anticorps naturels Problèmes en cours de grossesse et lors des transfusions Rh Kell Duffy Kidd Ss

18 Le système ABO ( à titre informatif) Le plus important des groupes sanguins système majeur de l'immunologie transfusionnelle rôle fondamental dans l'immunologie de greffe (peau, rein.) Découvert en 1900 par Karl Landsteiner La structure biochimique: des sucres A Gal Nac transférase N acétylgalactosamine AgA B Gal transférase Galactose Ag B O enzyme inactive substrat non converti Ag H

19 Le système ABO 4 groupes sanguins définis : Par les antigènes des globules rouges Par convention, les groupes ABO sont définis par les antigènes présents sur les GR. A B lorsque seul l'antigène A est présent lorsque seul l'antigène B est présent AB si les antigènes A et B sont présents O si ni l'ag A ni l'ag B ne sont présents

20 Les antigènes ABH( à titre informatif) Phénotypes A1 A2 A3 Ax Aend Am Ay Ael à à à < 200 < 200 Nombre de sites A A1 A2 A3 Ax Am

21 ABO et associés Substance de base Ag H Ag B Ag A Enzyme H Gène H Enzyme B Gène B Enzyme A Gène A

22 Les phénotypes ABO Phénotypes ABO et leur fréquence dans la population française Groupes sanguins antigènes globulaires anticorps sériques Fréquence en France A B AB O A B AB Aucun Anti-B Anti-A Aucun anti-a anti-b 45% 9% 3% 43%

23 Génétique du système ABO ( à titre informatif) Couples O x O O x A O x B O x AB A x A A x B A x AB B x B B x AB AB x AB Enfants possibles O O, A O, B A, B O, A O, A, B, AB A, B, AB O, B B, A, AB A, B, AB

24 Génétique du système ABO ( à titre informatif)

25 Génétique du système ABO ( à titre informatif)

26 Génétique du système ABO ( à titre informatif)

27 Génétique du système ABO ( à titre informatif)

28 Génétique du système ABO ( à titre informatif)

29 Les anticorps de groupes sanguins Ce sont des immunoglobulines : soit de nature IgM, soit de nature IgG. Ils sont synthétisés en réponse à l'introduction d'antigènes dont l'organisme est dépourvu, selon les règles de la réponse immunitaire humorale

30 La réponse immunitaire humorale Taux d Ig Période de latence de 7 à 21 jours Introduction de l antigène IgG Réintroduction de l antigène IgM IgG temps Réponse Primaire Réponse Secondaire

31 Les anticorps de groupes sanguins (Très important) La classification des anticorps en transfusion se fait selon deux critères : naturel ou immun régulier ou irrégulier. Ils sont ditsnaturels lorsqu'ils apparaissent de façon apparemment spontanée Ils sont ditsimmuns lorsqu'ils apparaissent après grossesse ou transfusion préalable

32 Les anticorps naturels ABO réguliers : Constants Thermolabiles - IgM Spontanément agglutinants Correspondent à une réponse primaire constante. Sont toujours présents Apparaissent entre 2 et 6 mois augmentent jusqu'à 10 ans, puis diminuent. irréguliers : inconstants dangereux si actifs à 37 C.

33 Les anticorps de groupes sanguins Les anticorps naturels sont réguliers, et parfois irréguliers Ce sont habituellement des IgM.. Ils doivent toujours être pris en compte sous peine de provoquer un accident transfusionnel gravissime. Les anticorps immuns sont irréguliers, l'anti-rh1 (D) du système Rh. Ce sont habituellement des Ig G.

34 Les anticorps de groupes sanguins Anti-A Anticorps naturel régulier IgM Anti-D Anticorps immun irrégulier IgG

35 Les problèmes transfusionnels (Très important) Il faut éviter la rencontre d un antigène avec son anticorps. En transfusion, 2 situations peuvent se rencontrer : introduction d antigènes (GR) chez un patient possédant l anticorps correspondant introduction d anticorps (plasma) chez un patient possédant l antigène correspondant

36 Les problèmes transfusionnels (Très important) Transfusion de globules rouges A A O O AB AB B B

37 Les problèmes transfusionnels (Très important) Transfusion de plasma A A AB AB O O B B

38 Les circonstances de l immunisation (Très important) La cause des immunisations est double : grossesse ou transfusion. Les conséquences sont aussi doubles : maladie hémolytique du nouveau-né et accident transfusionnel. Les anticorps naturels sont une exception à cette règle, et une exception apparente aux lois de l'immunologie.

39 Rh et collègues (Très important) Propres aux globules rouges Propres à l homme Pas d anticorps naturels Bien développés à la naissance Acs = immuns = IgG Responsables : D accidents transfusionnels De MHNN Le plus immunogène des systèmes de groupes sanguins : transfusions, grossesses.

40 Le système Rh (RH) ( à titre informatif) Histoire du système Rh Découverte de Levine en 1939 : allo anticorps Landsteiner et Wiener en 194O : hétéroanticorps Le nouvel antigène découvert est appelé D ou Rhésus. Actuellement le système Rhésus s'appelle Rh uniquement.

41 Le système Rh (RH) (Très important) Les antigènes Rh (RH) Les sujets qui : ont l'ag D sont dits D+ ou Rh+ ou RH:1 n ont pas l'ag D sont dits D- ou Rh ou RH:-1 L'Ag D (RH1) - en Europe : présent chez 85% absent chez 15 % - au Japon : présent chez 99,9% absent chez 0,1 %

42 Le système Rh (RH) ( à titre informatif) Les antigènes Rh (RH) Puis découverte de 4 autres Ags : C, c, E, e. C et E souvent associés à D c et e souvent associés à d L'Ag C présent chez 70 % E 30 % c 80 % e 98 % Les antigènes C et c, E et e sont antithétiques

43 Le système Rh (RH) ( à titre informatif) Le Phénotype Rh Les Ags D, C, E, c et e définissent le phénotype Rh d'un individu. 5 antigènes définissent 18 phénotypes différents : fréquents : 34,5% D+ C+ E- c+ e+ rares : < 0,001% D- C+ E+ c- e-

44 Ecriture du phénotype ( à titre informatif) D-C- E- c+ e+ RH:-1,-2,-3,4,5 dce/dce rr D- C+ E- c+ e+ RH:-1,2-,3,4,5 dce/dce r'r D- C- E+ c+ e+ RH:-1,-2,3,4,5 dce/dce r"r D- C+E- c- e+ RH:-1,2,-3,-4,5 dce/dce r r D- C- E+ c+ e- RH:-1,-2,3,4,-5 dce/dce r"r" D+ C+ E- c- e+ RH:1,2,-3,-4,5 DCe/DCe R 1 R 1 D+ C- E+ c+ e- RH:1,-2,3-,4,5 DcE/DcE R 2 R 2 D+ C+ E- c+ e+ RH:1,2,-3,4,5 DCe/dce R 1 r D+ C- E+ c+ e+ RH:1,-2,3,4,5 DcE/dce R 2 r D+ C+ E+ c- e- RH:1,2,3,-4,-5 DCE /DCE R Z R Z

45 Le système Rh (RH) ( à titre informatif) La densité antigénique est fonction du phénotype Phénotypes Nombre de sites RH1 Dccee DCcee DccEe DCCee DCcEe DccEE D+C-E-c+e+ D+C+E-c+e+ D+C-E+c+e+ D+C+E-c-e+ D+C+E+c+e+ D+C-E+c+e- RH:1,-2,-3,4,5 RH:1,2,-3,4,5 RH:1,-2,3,3,5 RH:1,2,-3,-4,5 RH:1,2,3,4,5 RH:1,-2,3,4, à à à à à à

46 Le système Rh (RH) Comment reconnaître un antigène : D faible? D Partiel?

47 Le système Rh (RH) Antigène D faible Tous les épitopes sont présents Déficit quantitatif en sites antigéniques (<10000) L agglutination des hématies «D faibles» est variable (- à 3+) en fonction des anticorps anti-d et des techniques utilisés Les sujets porteurs d un antigène RH1 faible ne s immunisent pas contre l antigène RH1

48 Le système Rh (RH) Antigène D Partiel Ag D normal Ag D faible Ag D Partiel Les sujets possédant un Antigène D partiel peuvent s'immuniser par transfusions ou grossesses contre le morceau qui leur manque.

49 Le système Rh (RH) Les anticorps anti Rh Résultent tous d'une allo immunisation: anticorps immuns par transfusion par grossesse Il existe des auto anticorps : auto anti-e

50 Le système Rh (RH) Les anticorps anti Rh Les Acs anti-rh sont des IgG qui traversent le placenta Ils sont responsables: d'accident hémolytique post transfusionnel de MHNN sévères

51 Le système Rh (RH) (Très important) Immunogénicité des Ags Rh : RH1 D +++ RH4 c +++ RH3 E + RH5 e + RH2 C + Les spécificités : anti-d le plus fréquent: anti-c et anti-e moins fréquents anti-e et anti-c rares isolés, fréquents en association

52 Le système Kell (KEL) (Très important) Pouvoir immunogène de l'antigène K(KEL1) Fréquence ++ des allo immunisations par transfusions ou par grossesse. Les antigènes du système Kell 2 Ags principaux antithétiques K (K1 ou Kell) k (K2 ou cellano)

53 Le système Kell (KEL) ( à titre informatif) Nombre de sites KEL1 (K) par GR: 2 à sites pour les hétérozygotes KEL:1,2 (Kk) 4 à sites pour les homozygotes KEL:1,-2 (KK)

54 Le système Kell (KEL) ( à titre informatif) Génétique du système Kell (KEL) 2 allèles principaux : K (KEL1) et k (KEL2) Génotype Allèle 1 Allèle 2 Phénotype Fréquence en France k (KEL2) k (KEL2) K- k+ KEL:-1,2 91 % K (KEL1) k (KEL2) K+ k+ KEL:1,2 8,8 % K (KEL1) K (KEL1) K+ k- KEL:1,-2 0,2 %

55 Le système Kell (KEL) ( à titre informatif) Les anticorps du système Kell (KEL) anticorps immuns, le plus souvent de nature IgG, fixent le complément, dépistés par le test indirect à l antiglobuline.

56 Immunogénicité des antigènes (Très important) L'immunogénicité d'un antigène est la probabilité avec laquelle il induit la synthèse de l'anticorps correspondant lorsqu'il est introduit dans un organisme qui en est dépourvu. Certains antigènes sont fortement immunogènes, d'autres moins. D > [c-k] > [C-E-e] > aux autres Mais ce n'est pas parce qu'un antigène est faiblement immunogène qu'il n'est pas dangereux

57 C Examens biologiques Généralité ( à titre informatif) Groupage sanguins TDA RAI (Très important)

58 L agglutination L agglutination est un phénomène qui conduit à la réunion en amas de cellules telles que des globules rouges, des bactéries et des virus.

59 + Agglutination immunologique

60 Agglutination immunologique En fonction des conditions Hématies «sensibilisées» (mais non agglutinées) Hématies Agglutinées

61 Les différentes techniques Les différentes techniques de groupage ABO ( à titre informatif)

62 Le goupage ABO La détermination d un groupe sanguin ABO comporte obligatoirement : La détermination des Ags globulaires = épreuve globulaire ou de Beth Vincent la détermination des Acs sériques = épreuve sérique ou de Simonin. Acs Ags groupe

63 Le groupage ABO Prélèvement sur anticoagulant centrifugé Le plasma contient les anticorps Les hématies portent les antigènes

64 Les techniques de groupage Microplaque Plaque jetable Tube Microfiltation

65 Les réactifs de groupage Les hématies - tests : A1 et B pour l épreuve plasmatique A2 en cas de difficultés à l épreuve plasmatique O des panels de dépistage et d identification Les sérums tests : monoclonaux végétaux humains polyclonaux

66 Groupage ABO en microplaque Sérums tests + hématies à grouper Hématies tests + plasma à grouper

67 Groupage ABO en microplaque A AB B O A B AB A1 B

68 Groupage ABO sur microplaque précoatée Hématies à grouper Plasma à grouper + hématies tests A1 et B A B AB A1 B

69 Groupage ABO sur plaque (Très important) Hématies à grouper Plasma à grouper anti-a anti-b anti-ab GR A1 GRB

70 Groupage ABO sur plaque Très important) Hématies à grouper Plasma à grouper anti-a anti-b anti-ab GR A1 GR B

71 Groupage ABO en tube Hématies à grouper Plasma à grouper antti-a anti-b anti-ab GR A1 GR B

72 Groupage ABO en tube Après centrifugation anti-a anti-b anti-ab GR A1 GR B α-a α-b α-ab A1 B

73 Groupage ABO en tube Intensités d agglutination

74 Groupage en microfiltration

75 Groupage ABO par microfiltration Hématies à grouper Plasma à grouper + hématies tests A1 B A1 B - 3+

76 Sensibilité des différentes techniques Techniques Épreuves globulaire plasmatique Plaque jetable + + Tube Microplaque Microfiltration

77 Les tests à l antiglobuline ou tests de Coombs direct TDA ( à retenir) Le test direct à l AGH (TDA) = test globulaire met en évidence les Acs fixés sur les GR in vivo sensibilisation des GR du nné dans les MHNN MHNN ABO et MHNN de type RH sensibilisation des GR par des auto acs dans les AHA sensibilisation des GR par des acs anti médicament dans les AHIA sensibilisation des GR du donneur par les Acs du receveur dans les accidents transfusionnels

78 Passage trans placentaire des anticorps maternels IgG anti-a IgM anti-a Enfant A Mère O

79 Répartition des antigènes A et B à la surface des GR selon l âge naissance 3-6 mois 2 ans

80 Incompatibilité ABO : naissance GR fœtaux A IgG anti-a maternelles

81 Incompatibilité ABO : 2-3 mois

82 Diagnostic d une MHNN TDA + = Elution

83 Principe de l élution GR sensibilisés lavés Éluat + Acs GR détruits Identification de l anticorps élué

84 Les tests à l antiglobuline ou tests de Coombs Le test indirect à l AGH (TIA) = test sérique met en évidence la présence d anticorps dans un sérum en mettant celui ci en contact in vitro avec des GR RAI épreuves directes de compatibilités la détermination de certains antigènes

85 LA RECHERCHE D ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES RAI (à retenir)

86 LA RECHERCHE D ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES Analyse essentielle pour assurer la sécurité immuno hématologiquedes transfusions et des grossesses Doit être réalisée conformément à la législation Dans le cadre de la prévention des accidents hémolytiques transfusionnels En contexte de greffe ou de transplantation En contexte préou périnatal

87 LA RECHERCHE D ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES Doit être réalisée avec des hématies tests d origine humaine sur du sérum ou du plasma Comporte 2 étapes Une étape de dépistage Une étape d identification en cas de dépistage positif Permet d identifier des anticorps dirigés contre les antigènes érythrocytaires autres que A et B

88 La RAI : permet la mise en évidence d Acs naturels irréguliers : préexistants à toute transfusion dangereux si actifs à 37 C anti-lea, Leb, M, N, P1, Lua... d Acs naturels réguliers : anti- H des sujets Bombay anti -P, P1, Pkdes sujets pp

89 La RAI : permet la mise en évidence d Acs d'allo - immunisation anti -D, C, E, c, e, Kell anti-fya, Fyb, Jka, Jkb, S, s anti- Lan, Vel qui apparaissent après transfusions ou grossesses

90 Une RAI négative ne signifie pas "absence d'allo immunisation" Les anticorps apparaissent et disparaissent : leur concentration varie avec le temps selon le rythme des stimulations Il faut toujours tenir compte d'un allo-ac, même si on ne retrouve plus l Ac «UN ANTICORPS UN JOUR UN ANTICORPS TOUJOURS»

91 Une RAI négative ne signifie pas "absence d'allo immunisation" Taux d Hb Titre d Ac Transfusion 5 10 jours Importance +++ de la RAI entre le 5 ème et 15 ème jour après la transfusion

92 L'épreuve directe de compatibilité au laboratoire : EDC ANSM : indications : SI RAI + Obligatoirechez tout patient ayant une RAI +du jour ou dans ses antécédants Obligatoirechez le Nnéen présence d Acs d origine maternel -Faite au laboratoire : Test in vitro = sérum patient + échantillon de la poche à transfuser

93 L'épreuve directe de compatibilité au laboratoire : EDC -Durée de validité: 3 jours -les poches de sang compatibilisées pour un patient sont étiquetées : Nom, prénom, date de naissance du patient date de l'examen date et heure de fin de validité.