Collecte et transport des prélèvements pour la recherche d'une infection vésiculeuse virale

Transcription

1 Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 1987, 6 (1), Collecte et transport des prélèvements pour la recherche d'une infection vésiculeuse virale R.P. KITCHING et A.I. DONALDSON* Résumé : Les auteurs décrivent les méthodes recommandées pour l'expédition de prélèvements au Laboratoire mondial de Référence de Pirbright en vue de la recherche d'une infection vésiculeuse virale. L'isolement d'un virus peut être réalisé sur des échantillons d'épithélium, de liquide vésiculeux, de sang total additionné d'anticoagulant, de sperme ou sur des prélèvements par curette pharyngienne (probang). Des prélèvements de sérum peuvent être expédiés pour l'évaluation des titres d'anticorps vis-à-vis d'un virus agent de maladie vésiculeuse. L'accent est mis sur la sécurité de l'emballage des prélèvements et les conditions dans lesquelles ils doivent être conservés de manière à garantir l'obtention d'un résultat satisfaisant. MOTS-CLÉS : Aphthovirus - Instituts de recherche - Maladies virales - Manipulation des prélèvements - Standardisation - Techniques de diagnostic - Virus de la maladie vésiculeuse du porc - Virus de la stomatite vésiculeuse. INTRODUCTION En 1958, à la suite de négociations entre le Gouvernement du Royaume-Uni et l'organisation des Nations Unies pour l'alimentation et l'agriculture (FAO), l'institut de recherches sur les Maladies animales virales de Pirbright, dont le nom a été changé en 1963 en celui d'institut de recherches sur les Virus animaux, a été désigné comme le Laboratoire mondial de Référence pour la Fièvre aphteuse. Par la suite, en 1960, l'office International des Epizooties l'a également reconnu comme Laboratoire mondial de Référence pour la Fièvre aphteuse. Le Laboratoire mondial de Référence a pour tâche primordiale l'analyse des prélèvements recueillis dans des foyers de maladies vésiculeuses pour déterminer si leur agent est le virus aphteux ou un virus responsable d'une des autres maladies vésiculeuses (maladie vésiculeuse du porc, stomatite vésiculeuse). De ce fait, le Laboratoire possède et entretient actuellement la collection la plus complète de virus responsables d'infections vésiculeuses, et notamment de souches du virus aphteux, en provenance du monde entier. Des antisérums de référence vis-à-vis d'un grand nombre de ces souches virales sont disponibles et peuvent être fournis à d'autres laboratoires pour leur permettre d'identifier les souches virales isolées dans leur pays. Depuis sa création en 1958, le Laboratoire mondial de Référence a reçu plus de prélèvements envoyés pour diagnostic par plus de 98 pays. Ce service de diagnostic des maladies vésiculeuses des animaux est assuré gratuitement pour les Pays Membres de la FAO. Les résultats des examens leur sont noti- * Laboratoire mondial de Référence pour la Fièvre aphteuse, Institut de recherches sur les maladies animales. Laboratoire de Pirbright, Ash Road, Pirbirght, Woking, Surrey GU24 ONF, Royaume-Uni.

2 252 fiés rapidement, en général par télex. La FAO en est également informée de façon régulière. Ces informations sont aussi transmises à l'oie qui les diffuse à ses Pays Membres. Les souches de virus aphteux rassemblées au Laboratoire mondial de Référence représentent une collection précieuse des différentes souches, passées et présentes, de ce virus, permettant d'identifier rapidement les souches vaccinales appropriées pour combattre les foyers de la maladie. Le Laboratoire fournit aussi des données épidémiologiques sur le risque de diffusion de la maladie dans une région et peut avertir les pays qui vaccinent contre la fièvre aphteuse de l'émergence à leur voisinage de souches nouvelles contre lesquelles leurs programmes de vaccinations systématiques ne procurent pas une protection adéquate. Il peut aussi avertir les pays qui ne pratiquent pas normalement la vaccination de toute menace visant directement leur cheptel. En outre, le Laboratoire mondial de Référence peut rechercher dans les sérums la présence d'anticorps vis-à-vis de la fièvre aphteuse, de la maladie vésiculeuse du porc et de la stomatite vésiculeuse, pour déterminer si des animaux destinés aux échanges internationaux sont ou non indemnes d'une de ces infections. Des prélèvements par curette pharyngienne (probang) ainsi que des prélèvements de semence peuvent être analysés pour la recherche du virus aphteux. Toutefois, l'analyse des sérums, de la semence et des prélèvements par probang se fait à titre payant. Cet article a pour objet d'actualiser les procédures antérieurement décrites par Brooksby, Davie et Hedger (1) pour l'envoi de prélèvements soupçonnés de contenir le virus d'une infection vésiculeuse et de prélèvements de sérum au Laboratoire mondial de Référence, ainsi que d'apporter une réponse aux nombreuses personnes qui ont demandé au Laboratoire une description détaillée de la meilleure façon d'expédier les prélèvements, à la fois pour garantir un résultat satisfaisant et pour minimiser les risques associés au transport de matériel infectieux. CONDITIONS REQUISES ESSENTIELLES POUR TOUS LES PRÉLÈVEMENTS L'envoi de produits pathologiques et de produits biologiques au Laboratoire mondial de Référence, qu'il soit fait en provenance du Royaume-Uni ou d'un autre pays, doit respecter les règles spéciales de conditionnement stipulées pour les matières biologiques périssables par la Convention Postale Universelle établie par l'union Postale Universelle (Article Mesures concernant le transport international des produits pathologiques et des produits biologiques). Les compagnies aériennes qui transportent des produits pathologiques et des produits biologiques peuvent avoir elles aussi leurs propres exigences qui doivent être consultées avant l'expédition. Ces réglementations sont destinées à prévenir les fuites de produits ainsi expédiés et la contamination qui pourrait en résulter, mais elles ne sont pas moins importantes pour aider à faire en sorte que les prélèvements arrivent dans un état satisfaisant au laboratoire qui doit les analyser. Un prélèvement mal conditionné ou identifié n'est pas seulement contraire à la loi ; il peut aussi entraîner des désagréments et une perte de temps considérables à la fois pour les personnes chargées de leur collecte et expédition, et pour le personnel du Laboratoire mondial de Référence.

3 Les principes de base sont les suivants : un prélèvement doit être frais, placé dans un récipient approprié (contenant un milieu de transport, si nécessaire) et enfermé de façon sûre dans un emballage résistant comportant au moins deux récipients étanches superposés. Le récipient intérieur doit porter une étiquette décrivant le prélèvement et indiquant son origine (Fig. 1). L'emballage extérieur doit porter l'adresse du Laboratoire mondial de Référence, indiquer que le paquet contient des produits pathologiques, qu'il est fragile, et comporter des instructions sur la température à laquelle il doit être maintenu. 253 INSTRUCTIONS POUR LA COLLECTE ET LE CONDITIONNEMENT DES PRÉLÈVEMENTS Les prélèvements appropriés pour l'isolement du virus sont l'épithélium et le liquide provenant des vésicules rupturées ou non (par exemple, un minimum de 2 cm 2 de tissu frais d'un animal provenant de zones récemment atteintes), le sang total avec anticoagulant, la semence et les prélèvements recueillis par probang. Les sérums ne devraient être expédiés que pour l'évaluation des taux d'anticorps vis-àvis de ces virus. Des tissus tels que les muscles et les ganglions lymphatiques d'animaux infectés peuvent contenir du virus, mais le pouvoir infectant de celui-ci peut être insuffisant pour isoler le virus et identifier l'antigène par les méthodes in vitro et, les résultats négatifs pouvant être trompeurs, ces prélèvements ne sont pas acceptés pour l'analyse. Collecte ÉPITHÉLIUM OU LIQUIDE VÉSICULEUX Les prélèvements doivent être mis en suspension dans un mélange à parties égales de glycérine et de tampon phosphate 0,04 M de ph 7,2-7,6 (Annexe 1), de préférence avec addition d'antibiotiques (Annexe 2). Il peut y avoir une perte considérable de pouvoir infectant si les prélèvements sont expédiés dans un tampon dont le ph n'est pas compris dans ces limites. Conditionnement (Fig. 1) En commençant par le récipient intérieur, la procédure recommandée pour conditionner les prélèvements est décrite ci-dessous. D'autres méthodes d'emballage sont acceptables si elles procurent une sécurité égale contre le bris et/ou les fuites. 1. Il faut utiliser un récipient en verre solide avec un couvercle en métal à vis, muni d'une rondelle ou d'un bouchon robuste en caoutchouc. Le meilleur récipient de ce type est le flacon Universal de 20 ml. Il faut entourer le couvercle de ruban adhésif pour prévenir les fuites de liquide. 2. Des indications suffisantes pour l'identification du produit doivent être portées sur un adhésif imperméable à l'eau, fixé sur le flacon. L'extérieur de celui-ci doit ensuite être désinfecté avant de poursuivre les opérations. 3. Le flacon doit être enveloppé dans une matière absorbante, coton hydrophile, flanelle de coton ou papier gaufré, disposée de façon à en protéger le haut, le bas et les côtés. L'empaquetage du flacon dans les différents récipients doit être réalisé dans un environnement propre.

4 254 FIG. 1 Récipients dont l'emploi est recommandé pour le conditionnement des prélèvements d'épithélium, de liquide vésiculeux, de sang total ou de sérum 4. Le flacon ainsi enveloppé doit être placé dans un récipient en métal dont il occupera toute la capacité. Si la collecte est faite loin du lieu d'expédition par air, le prélèvement doit être maintenu réfrigéré. Ce récipient doit lui aussi être étiqueté. 5. Le récipient en métal doit être étanche et muni, de préférence, d'un couvercle à vis et d'une rondelle de caoutchouc. Si on ne dispose pas d'un tel récipient, on doit utiliser une boîte en fer-blanc avec un couvercle très ajusté pouvant être soudé. 6. Le récipient en métal doit être placé dans un emballage extérieur solide pour éviter les déformations. Un tube en carton fort fermé par un couvercle en métal à chaque extrémité est préférable, mais une boîte en bois avec un couvercle en métal est également satisfaisante. 7. Le papier d'emballage doit être robuste, maintenu par un ruban adhésif ou ficelé et les étiquettes doivent être claires et conformes aux Réglementations des Transports Internationaux. 8. Renseignements à porter sur l'étiquette : PRODUITS PATHOLOGIQUES SANS VALEUR COMMERCIALE World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease, Institute for Animal Disease Research, Pirbright Laboratory, Ash Road, Pirbright, Woking, Surrey GU24 ONF GRANDE-BRETAGNE. PÉRISSABLE FRAGILE DOIT ÊTRE RÉCEPTIONNÉ A L'AÉROPORT PAR LE DESTINATAIRE CONSERVER A 4 C

5 255 SANG TOTAL Collecte Les prélèvements de sang doivent être recueillis de façon stérile et mélangés dès que possible à l'anticoagulant héparine, à raison de 0,1-0,2 mg par ml de sang total. On peut aussi utiliser comme anticoagulant le Séquestrène EDTA, à raison de 30 mg de Séquestrène EDTA dans 1 ml d'une solution aqueuse de chlorure de sodium à 0,7 %, par 20 ml de sang total. Le prélèvement doit être conservé à 4 C jusqu'à son expédition au Laboratoire mondial de Référence. Conditionnement Mêmes opérations que celles décrites pour les prélèvements d'épithélium ou de liquide vésiculeux. Collecte PRÉLÈVEMENTS RECUEILLIS PAR PROBANG Avant le prélèvement, 2 ml de tampon phosphate 0,08 M* contenant 0,01% d'albumine sérique bovine, 0,002% de rouge de phénol et des antibiotiques ajustés à un ph de 7,2 (Annexe 3) doivent être versés dans un flacon «bijou» ou un récipient similaire pour chacun des animaux devant faire l'objet du prélèvement. Chaque flacon «bijou» doit être identifié par une étiquette imperméable à l'eau. Une fois recueilli, le prélèvement doit être versé directement de la cupule «probang» dans un flacon à large goulot, par exemple un flacon Universal de 20 ml, et examiné à l'œil nu pour juger de sa qualité. Deux ml, qui doivent contenir un certain nombre de cellules visibles, seront alors versés dans le flacon «bijou» préparé à l'avance et contenant un volume égal de tampon, auquel ils seront soigneusement mélangés en les agitant doucement. Le ph final d'un prélèvement normal ainsi traité doit être de ± ph 7,6. Les prélèvements recueillis sur certains animaux peuvent être fortement contaminés par le contenu du rumen. Ces prélèvements doivent être rejetés et la bouche de l'animal rincée avec de l'eau ou du sérum physiologique avant de procéder à un nouveau prélèvement. Les prélèvements recueillis sur les moutons ont tendance à être peu abondants, mucoïdes, et difficiles à détacher de la curette. La méthode la plus simple consiste à placer directement la cupule «probang» dans un flacon Universal jetable de 20 ml ou un récipient similaire dans lequel on aura versé trois ml de la solution tampon. On agite alors la curette dans la solution tampon pour détacher le prélèvement de la cupule, après quoi on versera le prélèvement et le tampon dans un flacon «bijou» étiqueté à l'avance en vue du transport. Entre les prélèvements sur chaque animal, les curettes doivent être désinfectées dans un seau contenant une solution de Na2 CO3 à 4% ou d'acide citrique à 0,2%. * A la place du tampon phosphate, un milieu pour culture de tissu (par exemple le MEM de Eagle ou le LYH de Earle) contenant 0,04 M de tampon HEPES, a été également reconnu satisfaisant.

6 256 Après la désinfection, la curette doit être soigneusement rincée sous un robinet d'eau courante ou par passages successifs dans au moins trois seaux d'eau propre. Conditionnement Il est important d'éviter, à tous les stades, d'avoir à décongeler puis recongeler ; le conditionnement doit donc se faire rapidement et les paquets terminés doivent être conservés à - 70 C ou une température inférieure. 1. L'extérieur du flacon «bijou» contenant le prélèvement doit être désinfecté par immersion dans une solution de NA 2 C0 3 à 4% ou d'acide citrique à 0,2%, séché, étiqueté, puis congelé immédiatement avec de la neige carbonique dans une boîte isolante ou dans un congélateur à - 70 C. 2. Pour l'expédition, les flacons «bijou» doivent être placés dans un récipient en métal, lui-même placé dans une boîte isolante d'environ 1 pied cube (0,3 m 3 ), remplie de neige carbonique. Le récipient doit être placé au milieu de la neige carbonique. Celle-ci doit être en quantité suffisante pour se conserver pendant tout le trajet jusqu'à l'institut de recherches sur les maladies animales (IADR). La boîte isolante doit être enveloppée, scellée et correctement étiquetée. Elle doit permettre à une certaine quantité de gaz de s'échapper pour éviter les risques d'explosion. (Voir le conditionnement des prélèvements d'épithélium, paragraphe 8.) 3. Si l'on a utilisé trop peu de neige carbonique, et qu'il n'en reste plus au moment de l'ouverture des paquets de prélèvements à l'iadr, de nouveaux prélèvements seront demandés. Collecte et conditionnement PRÉLÈVEMENTS DE SEMENCE La semence doit être prélevée de façon stérile, congelée dès que possible à -70 C ou une température inférieure, et conditionnée selon la méthode indiquée pour les prélèvements par probang. Collecte PRÉLÈVEMENTS DE SÉRUM Il est préférable d'expédier pour analyse du sérum plutôt que du sang total. Quatre ml sont la quantité minimale indispensable. L'envoi de quantités plus faibles risque d'entraîner une demande de nouveaux prélèvements, avec les retards qui en résulteraient. Les récipients utilisés doivent impérativement être stériles. Si les sérums ont été recueillis de façon stérile, ils peuvent être transportés normalement de façon satisfaisante sans être réfrigérés. Les expéditeurs de sérums doivent absolument se rendre compte qu'il faut trois semaines entre le moment de leur arrivée à l'iadr et celui où les résultats seront disponibles : ce laps de temps a été estimé nécessaire pour tenir compte de l'éventualité de nouvelles analyses ou de nouveaux envois de prélèvements. Un préavis d'au moins dix jours ouvrables est exigé pour annoncer l'envoi de sérums à analyser. Conditionnement Si les prélèvements sont stériles, ils peuvent être envoyés sans être réfrigérés, mais la réfrigération ou la congélation sont des garanties supplémentaires contre

7 une détérioration. Les opérations de conditionnement sont les mêmes que celles décrites pour les prélèvements d'épithélium. 257 PROCÉDURE POUR L'ENVOI DES PRÉLÈVEMENTS AU LABORATOIRE MONDIAL DE RÉFÉRENCE 1. Les expéditions à partir d'un pays autre que le Royaume-Uni se font obligatoirement par fret aérien. Le Laboratoire mondial de Référence s'organise pour réceptionner les produits sur les aéroports de Londres (Heathrow et Gatwick) et possède les permis d'importer nécessaires pour faciliter leur dédouanement. Dans toute la mesure du possible, les colis doivent être transportés par la compagnie British Airways, de manière à réduire au minimum les frais de dédouanement à l'aéroport pour le Laboratoire mondial de Référence. 2. Le numéro du vol, la date et l'heure d'arrivée et le numéro du billet de transport aérien doivent être notifiés à l'avance par télex au Laboratoire mondial de Référence (N de télex : AVRIG). 3. Les prélèvements doivent être accompagnés d'une lettre fournissant un maximum de renseignements sur les commémoratifs et les données épidémiologiques. En outre, des formulaires conformes aux modèles présentés aux Annexes 4 et 5, respectivement pour l'isolement du virus ou la recherche d'anticorps, doivent être envoyés avec les prélèvements. 4. Les renseignements joints doivent comporter le nom, l'adresse et le numéro de télex de l'expéditeur, ainsi que les instructions pour la communication des résultats. 5. Nous tenons à souligner que la réussite future de ce service dépend pour beaucoup de la participation active de tous les pays, garantie de la mise à jour permanente de la banque de données du Laboratoire, ce qui lui permet de fournir les informations les plus récentes et les plus exactes sur des situations particulières de la fièvre aphteuse sur le terrain. REMERCIEMENTS Les auteurs tiennent à remercier pour leurs conseils précieux les membres du personnel du Laboratoire mondial de Référence et notamment Monsieur I.T.R. Barnett et Monsieur N. P. Ferris. * * * BIBLIOGRAPHIE 1. BROOKSBY J.B., DAVIE J. & HEDGER R.S. (1964). Transmission of virus samples. Bull, Off. int. Epiz., 81 (11-12), * *

8 258 Annexe 1 MILIEU DE COLLECTE POUR LES PRÉLÈVEMENTS D'ÉPITHÉLIUM Tampon phosphate 0,04 M Ajouter 3,05 g de Na 2 HP0 4. 2H 2 0 et 0,39 g de KH 2 P0 4 à 500 ml d'eau distillée stérile. Ajouter 1 ml de rouge de phénol à 1%. Ajouter les antibiotiques (voir Annexe 2). Ajuster le ph à 7,2-7,6 avec HCl. Annexe 2 Reconstitution Flacon de pénicilline ANTIBIOTIQUES de unités ajouté à 2,5 ml d'eau distillée stérile Flacon de mycostatine de unités ajouté à 10 ml d'eau distillée stérile Flacon de néomycine de unités ajouté à 10 ml d'eau distillée stérile Flacon de polymyxine de unités ajouté à Prélèvements par probang et épithelium 7 ml d'eau distillée stérile Pour 500 ml de tampon phosphate 0,08 M ou 0,04 M, ajouter les quantités suivantes d'antibiotiques reconstitués : Pénicilline : 2,5 ml (concentration finale 1000 unités/ml) Mycostatine: 1,0 ml (concentration finale 100 unités/ml) Néomycine : 1,0 ml (concentration finale 100 unités/ml) Polymyxine : 0,5 ml (concentration finale 50 unités/ml) Annexe 3 MILIEU DE COLLECTE DES PRÉLÈVEMENTS PAR PROBANG Tampon phosphate 0,08 M Ajouter 6,11 g de Na 2 HP0 4.2H 2 0 et 0,78 g de KH 2 P0 4 à 500 ml d'eau distillée stérile. Ajouter 1 ml de rouge de phénol à 1%. Ajouter les antibiotiques (voir Annexe 2). Ajuster le ph à 7,2-7,4 avec HCl.

9 259 Annexe 4 Modèle de Formulaire de demande d'analyse devant accompagner les prélèvements envoyés au Laboratoire mondial de Référence en vue du diagnostic d'une maladie vésiculeuse PRELEVEMENT DE FIEVRE APHTEUSE POUR TYPAGE En provenance de : (territoire) A L'USAGE DU LABORATOIRE UNIQUEMENT Description du prélèvement Référence du dossier ELISA Passage sur culture cellulaire WORLD REFERENCE LABORATORY Institute for Animal Disease Research, Pirbright Laboratory, PIRBRIGHT, WOKING, SURREY GU24 ONF, GRANDE-BRETAGNE Observations :

10 260 A COMPLÉTER PAR LE FONCTIONNAIRE DE TERRAIN Votre référence : NOM ET ADRESSE DU PROPRIÉTAIRE: LAT. et LONG.: NOMBRE, ESPÈCE ET RACE DES ANIMAUX DE L'EXPLOITATION : TYPE D'ÉLEVAGE : MATÉRIEL ENVOYÉ DATE DU PRÉLÈVEMENT DATE DE L'ENVOI DÉTAILS, Y COMPRIS ÂGE, CONCERNANT LE BÉTAIL ATTEINT : ÉTENDUE, GRAVITÉ ET DURÉE DU FOYER : ORIGINE POSSIBLE : COMMÉMORATIFS DE L'INFECTION, OU DE LA VACCINATION, Y COMPRIS LES TYPES S'ILS SONT CONNUS : OBSERVATIONS : CONTACTS AVEC DES ANIMAUX SAUVAGES, ETC. : SIGNATURE: TITRE

11 261 Annexe 5 Formulaire de demande d'analyse au Laboratoire mondial de Référence qui doit accompagner les prélèvements recueillis sur des animaux destinés au commerce international (exportation d'animaux) PAYS DATE DE LA LETTRE EXPORTATION D'ANIMAUX PROPRIÉTAIRE DES ANIMAUX : ADRESSE : RÉFÉRENCES DU LABORATOIRE : RÉFÉRENCES DE L'EXPÉDITEUR : DATE DE RÉCEPTION : VÉTÉRINAIRE : ADRESSE : SOCIETE COMMERCIALE ADRESSE : ESPECE ANIMALE NOMBRE D'ANIMAUX PAYS D'ORIGINE DESTINATION DATE DE MISE EN QUARANTAINE DATE PRÉVUE POUR L'EXPORTATION N DE TÉLÉPHONE N DE TÉLEX ADRESSE TÉLÉGRAPHIQUE : TYPE DE PRÉLÈVEMENTS : SÉRUM SEMENCE PROBANG AUTRE (PRÉCISER) DATE DE LA COLLECTE EXAMEN DEMANDÉ : ANALYSE SÉROLOGIQUE : FIÈVRE APHTEUSE (SPÉCIFIER LE TYPE) MALADIE VÉSICULEUSE DU PORC STOMATITE VÉSICULEUSE ISOLEMENT DU VIRUS : FIÈVRE APHTEUSE MALADIE VÉSICULEUSE DU PORC AUTRES (PRÉCISER) TYPE D'ÉPREUVE DEMANDÉE : SÉRO-NEUTRALISATION CONTRE-IMMUNO-ÉLECTROPHORÈSE IMMUNODIFFUSION DOUBLE ELISA NOM DU VÉTÉRINAIRE DEMANDANT L'EXAMEN DES PRÉLÈVEMENTS : N DE L'ANIMAL TUBE/ÉCHANTILLON N RACE SEXE ÂGE N DU LABORATOIRE