1 Quelques rappels 2 Prestations analytiques disponibles dans les LDA bourguignons pour chaque agent pathogène

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1 Diagnostic des Avortements d origine infectieuse. Du côté du laboratoire d analyses: que pouvez-vous faire? Présentation conjointe des quatre laboratoires départementaux bourguignons

2 Sommaire 1 Quelques rappels 2 Prestations analytiques disponibles dans les LDA bourguignons pour chaque agent pathogène Rappels sur critères inclusion, nature des prélèvements Description des analyses réalisables Notions de prévalence apparente en Bourgogne 3 Cas de la Leptospirose Page 2

3 Quelques rappels Page 3

4 Quelques rappels Notion d avortement infectieux + Définition actuelle Décret du 24 décembre 1964: «l avortement dans l espèce bovine est l expulsion du fœtus ou du veau mort né ou succombant dans les 48 heures suivant la naissance» + Projet de définition «est considéré comme avortement possiblement infectieux l expulsion d un fœtus ou d un animal mort-né ou succombant dans les 12 heures suivant la naissance sauf si la mort peut être rapportée de façon certaine à un accident ou à une intervention obstétricale de la mise bas» Tout avortement doit faire l objet d une déclaration dans le cadre de la Police sanitaire Brucellose, avec prélèvement systématique d une PS et d un écouvillon cervico-vaginal avant traitement antibiotique et envoi vers le laboratoire agréé par le Ministère de l Agriculture du département de l élevage concerné Page 4

5 Quelques rappels Notion d avortement infectieux + Notion d avortements rapprochés ou en série chez les bovins Est considérée comme série d avortements la survenue de deux avortements ou plus dans le mois ou trois avortements dans la période de mise bas pour des effectifs de moins de 100 vaches et plus de 4% de vaches ayant avorté dans l année pour des effectifs de plus de 100 vaches Possibilité de mettre en place des investigations complémentaires à la recherche de Brucellose en fonction du contexte loco-régional et épidémio-clinique du cheptel concerné: le résultat de l analyse aide à conforter ou infirmer les hypothèses diagnostiques du praticien Page 5

6 Quelques rappels Diagnostic individuel direct / Diagnostic cheptel indirect + Diagnostic direct au moment de l avortement Mise en évidence de l agent pathogène dans les prélèvements d avortement (écouvillon génital ou organes de fœtus) par culture ou amplification de son génome Notions de délai maximum entre l avortement et le prélèvement et de modalités de conservation pour préserver intégrité du pathogène (ou de son génome) et limiter le développement de la flore bactérienne saprophyte Attention à l interprétation des résultats faiblement Positif en PCR / portage sain ex Coxiella burnetii Page 6

7 Quelques rappels Diagnostic individuel direct / Diagnostic cheptel indirect + Diagnostic indirect sur femelles ayant avorté ou présentant des troubles de la reproduction généralement 2-3 semaines auparavant (primipares et multipares) Objectif = Mise en évidence d un taux de séroprévalence significatif avec séroconversion récente Délai minimum de séroconversion entre épisode abortif ou trouble de la reproduction et réalisation de la PS variable selon pathogène ex: 2-3 semaines pour Coxiella burnetii; dès 7 jours pour Leptospira Interférences entre tests sérologiques et anticorps vaccinaux Tests sérologiques ne permettent pas de distinguer séroconversion récente d un portage asymptomatique ex: séropositivité Ehrlichiose ou Leptospirose sans signes cliniques associés Page 7

8 Quelques rappels Un prélèvement adapté au pathogène recherché + Nature Ecouvillon cervico-vaginal à privilégier / placenta in utero / placenta expulsé - hygiène et sécurité du préleveur et du manipulateur au laboratoire - représentativité de la distribution du pathogène ex Coxiella burnetii avec distribution aléatoire selon cotylédons - absence d inter-contamination par flore saprophyte (ex Aspergillus) ou par pathogène présent en portage (ex Coxiella burnetii, Salmonella dans fèces) Organes de fœtus pour certains pathogènes ex Rate pour BVDV et BTV, Encéphale pour Neospora caninum + Conservation et envoi Ecouvillon cervico-vaginal 4 C Organes de fœtus congélation Page 8

9 Quelques rappels Un conditionnement respectant la réglementation UN 3373 Matières biologiques de Catégorie B + Règle du triple emballage - 2 emballages intérieurs étanches ex: étui écouvillon et sachet Biohazard - Récipients primaires fragiles (ex :PS) emballés séparément (ex: sachet bulle) - Absorbant placé entre le récipient primaire et secondaire, en quantité suffisante - Emballage extérieur suffisamment robuste et résistant - Marquage «UN 3373» «Matière biologique, catégorie B» sur emballage extérieur Page 9

10 Quelques rappels Page 10

11 Quelques rappels Un conditionnement respectant la réglementation UN 3373 Matières biologiques de Catégorie B Boîte «avortement» cartonnée fournie = respect de la réglementation + signal d alerte au Laboratoire / déconditionnement dans zone de confinement L3 + protections individuelles spécifiques Page 11

12 Quelques rappels Page 12

13 Quelques rappels Page 13

14 Quelques rappels Page 14

15 Quelques rappels Un conditionnement respectant la réglementation UN 3373 Matières biologiques de Catégorie B + Responsabilité de l expéditeur L expéditeur de prélèvements biologiques est responsable du colis jusqu à son arrivée au laboratoire et des dégâts ou des contaminations qu il peut causer tout au long de son transport et lors de son ouverture Page 15

16 Quelques rappels Une demande d analyse claire et adaptée au pathogène, à la nature des prélèvements réalisés et à la technique d analyse Page 16

17 Prestations analytiques disponibles dans les LDA bourguignons Page 17

18 Recherche systématique et obligatoire Page 18

19 Brucellose Contexte + Déclaration obligatoire de tout avortement chez bovins et petits ruminants, réalisation systématique des prélèvements et des analyses dans un laboratoire agréé fondamental dans le cadre du dispositif de surveillance réglementaire de la Brucellose / diminution des fréquences de contrôle en Prophylaxie et Introduction ex: cas récents en Belgique et Haute-Savoie Prélèvements + PS et écouvillon cervico-vaginal femelle avortée (à réaliser avant traitement antibiotiques) Analyses + Sérologie EAT chez Bovins, EAT + FC chez petits ruminants + Bactériologie uniquement si EAT et Fixation du complément POSITIVES Page 19

20 Analyses complémentaires de 1 ère intention Page 20

21 Fièvre Q Contexte + Avortements en fin de gestation, de caractère enzootique chez petits ruminants + Infection souvent inapparente chez bovins (parfois épisodes grippaux) + Métrites récidivantes apparaissant dès le part + Concerne le plus souvent les primipares ou femelles nouvellement introduites + Portage asymptomatique avec excrétion de Coxiella burnetii (lait, fèces, sphère génitale au moment de la mise-bas), présence Anticorps et risque de résultats faiblement positifs en PCR + Caractère zoonotique + Etude nationale sur 10 départements pilotes (dont Nièvre et Saône-et- Loire) sur trois campagnes pour déterminer avec PCR quantitative le nombre de bactéries présentes par écouvillon et affiner seuil au-delà duquel on considère que l avortement est imputable à la présence de Coxiella burnetii Page 21

22 Fièvre Q Prélèvements + Ecouvillon cervico-vaginal dans les 8 jours maximum qui suivent l avortement Écouvillonner pendant 30 secondes: bactérie intracellulaire Protéger écouvillon des souillures fécales: portage asymptomatique Possibilité de mélanger jusqu à 3 écouvillons chez petits ruminants Remarque LDA71: contrairement aux recommandations ne pas couper le bouchon de l écouvillon car difficulté pour le récupérer + risque d inter-contaminations NB: avant ouverture, procédure interne de décontamination à l extérieur du bouchon et de l étui (eau de Javel qui détruit bactéries et ADN contaminants) + PS sur 6 (BV) à 10 (petits Ru) femelles ayant avorté ou avec des troubles de la reproduction depuis 2-3 semaines Page 22

23 Fièvre Q Analyses et interprétation + Critères d inclusion dans Etude départements pilotes (Nièvre et Saône-et- Loire) 2 PCR temps réel quantitatives : nombre de bactéries par écouvillon (ou par mélange de 3) Interprétation par rapport à un seuil «à dire d experts» de 10 4 bactéries par écouvillon pour distinguer portage asymptomatique et implication effective dans l épisode abortif + Hors critères d inclusion pour Nièvre et Saône-et-Loire et en Côte d Or et dans l Yonne PCR temps réel «semi-quantitative»: présence en quantité supérieure ou inférieure au seuil de 10 4 bactéries par écouvillon + Sérologie par ELISA sur 6 (BV) à 10 femelles (petits Ru) Séroprévalence supérieure ou égale à 50% Page 23

24 Fièvre Q Prévalence apparente en Bourgogne: Données IDEA: 5 ans analyses systématiques 1284 PCR 3.2% PCR Positives Données LDA71: année analyses ciblées Bovins Ovins Caprins 193 PCR 21 PCR 27 PCR 18.1% PCR Positives mais écouvillon et lait; pas de quantification 19% PCR Positives 22.2% de PCR Positives Page 24

25 BVDV Contexte + Avortements précoces ou tardifs + Veaux malformés ou présentant des troubles neurologiques + Contexte épidémio-clinique de circulation virale: digestif, respiratoire Prélèvements - Analyses + Rate du fœtus Envoi congelée sous 24h (virus à ARN) pour RT-PCR temps réel mais faible VPN + PS sur 6 femelles avortées ou à problème de reproduction Cheptel connu non séropositif pour ELISA individuelles Page 25

26 BVDV Prévalence apparente en Bourgogne: Données IDEA: 5 ans analyses systématiques 1344 RT-PCR 3.2% RT-PCR Positives Données LDA71: année analyses ciblées 40 RT-PCR 10% RT-PCR Positives Page 26

27 Chlamydophila abortus Contexte + Avortements enzootique + Foyers de nécrose présents sur placenta, foie + Rétention placentaire et métrites fréquentes chez chèvres + Portage asymptomatique avec excrétion au niveau de la sphère génitale, présence Anticorps et risque de résultats faiblement positifs en PCR + Zoonose Prélèvements + Ecouvillon cervico-vaginal dans les 8 jours maximum qui suivent l avortement Analyse + PCR Chlamydophila abortus (associée à C.burnetii) Page 27

28 Chlamydophila abortus Prévalence apparente en Bourgogne: Données IDEA: 5 ans analyses systématiques Toutes espèces 1286 PCR 0.5% PCR Positives Données LDA71: année analyses ciblées Ovins 21 PCR 4.8 % PCR Positives Caprins 27 PCR 11.1% PCR Positives NB: arrêt recherche C.abortus chez Bovins au LDA71: 1 seule recherche «fortement» Positive depuis 2005 au LDA71, typée par ANSES Maisons- Alfort dans le cadre du projet EpiChlamCox = C.psittaci de mammifères. Page 28

29 Neospora caninum Contexte + Avortements entre 3 ème et 7 ème mois de gestation + Troubles neurologiques chez nouveaux nés + Transmission verticale progéniture si infestation durant gestation avec infection chronique et portage permanent Prélèvement + Encéphale de l avorton si fœtus >6mois; cœur, poumons également possibles si fœtus <6mois + Ecouvillon vaginal en dernier recours Analyse + PCR NB: faible VPP des analyses sérologiques vis-à-vis de l infection (83%) et de l avortement (50%) Joly, JBN, 2007 Page 29

30 Neospora caninum Prévalence apparente en Bourgogne: Données IDEA: 5 ans - analyses systématiques 1176 PCR sur placenta 5.5% PCR positives Données LDA71: années analyses systématiques ou ciblées 159 PCR systématiques sur Ecouvillon ou Placenta 5 % PCR Positives 25 PCR ciblées sur encéphale de l avorton 24% PCR Positives Page 30

31 Toxoplasma gondii Contexte + Mortalité embryonnaire ou avortements tardifs + Morts nés momifiés ou nouveaux nés faibles Prélèvements - Analyses + Ecouvillon cervical pour PCR + 10 PS sur femelles avortées depuis 2-3 semaines pour ELISA Page 31

32 Toxoplasma gondii Prévalence apparente en Bourgogne: Données IDEA: 5 ans analyses systématiques Toutes espèces 1179 PCR 0.3% PCR Positives Données LDA71: années analyses ciblées 15 PCR sur ovins 6.7 % PCR Positives 2 PCR sur caprins 0 % PCR Positives Page 32

33 Analyses complémentaires de 2 nde intention en fonction du contexte de l élevage Page 33

34 Anaplasma phagocytophilum Contexte + Avortements plutôt dernier tiers de gestation, d été, sporadiques ou enzootiques, biotopes favorables à Ixodes ricinus + Syndrome grippal estival avec phase aigüe 5-10 jours (hyperthermie>40 C) puis atteinte respiratoire (toux d été), œdème parties distales des membres dans 10% des cas Prélèvement Analyse + PCR sur sang total (tube EDTA) pour femelle avortée dans les 5 jours précédents ou sur organes avorton (rate, foie, caillot cardiaque) + IFI pour recherche des anticorps anti-a.phagocytophilum sur sérum (tube sec) sur lot de femelles ayant avorté ou avec troubles de la reproduction depuis 3 semaines et moins de 4 mois Page 34

35 Anaplasma phagocytophilum Prévalence apparente Données LDA58 année PCR 18% Positives 37 PCR sur sang 13.5% Positives 19 PCR sur placenta ou avorton 26.3% Positives + IFI 21 lors d avortements 57% Positives 156 hors contexte avortement 58% Positives donc faible VPP de l IFI en absence de symptômes Page 35

36 Salmonella Contexte + Avortements sporadiques dernier tiers de gestation + Atteintes cliniques (entérites hémorragiques) chez jeunes Prélèvements Analyses + Ecouvillon cervico-vaginal pour culture sur milieux spécifiques Prévalence apparente: Données IDEA 5 ans analyses systématiques 2 % de cultures positives S. Schwarzengrund, S.Montevideo, S.Broughton, S.Newport, S.Diarizonae, Salmonella spp Données LDA71 année 2011 analyses ciblées 11 cultures, 1 positive (9.1%) S.Typhimurium Page 36

37 Listeria Contexte + Avortements sporadiques seconde moitié de gestation + Troubles nerveux + Ensilage contaminé Prélèvements Analyses + Ecouvillon cervico-vaginal pour culture sur milieux spécifiques Prévalence apparente: Données IDEA- 5 ans- analyses systématiques 5,7 % de cultures positives L. monocytogenes, L.innocua, L.grayi, L.welshimeri, Listeria spp Données LDA analyses ciblées 14 cultures, 1 positive (7.1%) autre que L.monocytogenes ou L.innocua Page 37

38 Aspergillus Contexte + Aliments moisis, environnement humide, mal ventilé, hiver doux, pluvieux + Avortements 2 nd tiers de gestation + Multiplication A.fumigatus au niveau placentaire: aspect rugueux placenta + lésions fœtus Prélèvement Analyse + Ecouvillon cervico-vaginal pour culture sur milieu spécifique Prévalence apparente Données LDA71 année 2011 analyses ciblées 6 recherches 1 Positive Page 38

39 BoHV- 4 Contexte + Tropisme du virus pour endomètre et fœtus + Infection bactérienne de l utérus réactive multiplication virale avec exacerbation consécutive de l inflammation + Rôle dans avortements reste encore à déterminer Prélèvements Analyses + PCR sur écouvillon vaginal + ELISA sur lot de femelles contact Page 39

40 BoHV-1 Contexte + Vulvovaginite infectieuse pustuleuse: nécrose focale muqueuse génitale, forte inflammation, hyperthermie, surinfection bactérienne, foyers nécrotiques sur foie de l avorton Prélèvements Analyses + Ecouvillon vaginal pour PCR ou isolement sur culture cellulaire, éventuellement foie, poumons du fœtus + PS sur lot de femelles contact pour ELISA Page 40

41 Pathogènes émergeants Page 41

42 BTV Contexte + Orbivirus transmis par Culicoïdes + BTV- 8 par Nord de la France en BTV-1 par Sud-Ouest de la France en 2008 Prélèvements Analyses dans le cadre des suspicions cliniques + Rate avorton pour RT-PCR + ELISA si femelle non vaccinée Page 42

43 SBV Contexte + Orthobunyavirus transmis par Culicoïdes, diffusion virale par le Nord de la France en été-automne Virémie fugace (8 jours) avec diarrhées fébriles aigües + saison : avortements et/ou nouveau-né avec syndrome AHS: arthrogrypose et hydranencéphalie Prélèvements- Analyses NB: surveillance clinique du virus par DGAl du 04 janvier au 10 octobre RT-PCR sur «encéphale» avorton jusqu en avril puis ELISA sur femelle avortée Page 43

44 Besnoitiose Contexte + Besnoitia besnoiti transmis par piqûres taons, stomoxes de juin à septembre, remontée des cas par le Sud + Animaux porteurs et contagieux > symptomatiques surtout 2-4 ans et plus affection sévère chez mâles + Incubation 1 semaine puis trois phases successives: Phase fébrile 3-10 jours C - épiphora Phase œdèmes 1-2 semaines, plus visibles tête, extrémités membres avec possibilité d avortements Phase sclérodermie, dépilation, kystes à bradyzoïtes sclère oculaire chez porteurs latents Prélèvements Analyses + PCR sur écouvillon vaginal + Sérologie individuelle femelle avortée + animaux suspects ELISA et confirmation des résultats «douteux» par Western-Blot - ENVT Page 44

45 Merci pour votre attention