LICENCE 2 ème ANNEE BIOLOGIE-BIOCHIMIE MODULE BONNES PRATIQUES DE LABORATOIRE
|
|
- Francis François
- il y a 8 ans
- Total affichages :
Transcription
1 Université des Sciences et Techniques de Nantes LICENCE 2 ème ANNEE BILGIE-BICIMIE MDULE BNNES PRATIQUES DE LABRATIRE Protocoles de travaux pratiques
2 Mardi 09 Septembre TP I : Informations hygiène et sécurité, notions primaires, exercices d application et expérimentations 1. Les objectifs pédagogiques de l UE 2. Informations ygiène et Sécurité 2.1. Etiquetage réglementaire et fiche de données de sécurité 2.2. Les différents dangers liés à la manipulation des produits chimiques et leur prévention 2.3. Informations diverses 3. Les notions primaires 4. Exercices d application 5. Expérimentations 5.1. bjectifs pédagogiques A partir des consignes et des objectifs de résultats : - savoir écrire un protocole en tenant compte des caractéristiques des produits à manipuler, du matériel de mesure (disponibilité, degré de précision ) et des consignes d hygiène et de sécurité. Ce protocole devra être rédigé sur le cahier de manipulation et présenté au responsable pédagogique avant d être exécuté, - Prendre conscience de l obligation de reproductibilité des manipulations liée à une bonne utilisation du matériel de mesure (pipettes, balance,.) et au respect du protocole, - maîtriser des calculs élémentaires de concentrations massiques, molaires, % - savoir présenter les résultats de manière synthétique Consignes à suivre avant de manipuler pour atteindre ces objectifs - bien comprendre la demande (objectif du protocole, consignes) - lister les produits à utiliser et prendre connaissance de leurs caractéristiques (caractéristiques physicochimiques, risques liés à leur utilisation, consignes de rejet en fin de manipulation ), - bien identifier le matériel de mesure à utiliser (pipette, pipetman automatique, éprouvette, fiole, balance,.) Rédaction d un protocole détaillé Ce protocole devra : - respecter l ordre chronologique des manipulations - être scindé en différentes parties (par objectifs : préparation de solutions mères, dilution, mesures ) - préciser les consignes de manipulation des produits à respecter, - en dernière partie : préciser les calculs intermédiaires si nécessaire 5.4. Consignes - Préparer 10 ml d une solution aqueuse de sulfate de cuivre à 2,5 % (= solution mère 5X), - Dans des cuves spectrophotométriques distinctes, préparer 5 fois 1 ml d une solution X, 1
3 - évaluer la reproductibilité de votre travail en mesurant l absorbance (λ = 625 nm ) des cuves spectrophotométriques (mesures effectuées sur le même spectrophotomètre). Quel témoin allez vous utiliser? - Recommencer la préparation des cuves spectrophotométriques si nécessaire. - Etiqueter correctement la solution mère. A conserver (utiliser pour le TP4) Calculs, présentation des résultats et exercice - Exprimer la concentration de la solution mère en g L -1 et en mmoles L -1. Présenter clairement votre raisonnement et vos calculs sur le cahier de manipulation. - Dans un tableau synthétique, indiquer pour chacune des solutions préparées leurs concentrations en g.l -1, en mm, ainsi que leur D respective. - Problème à résoudre Vous êtes responsables de la mise en place des TP. n vous demande de préparer une solution mère de sulfate de cuivre 100 mm pour l ensemble des étudiants (effectif : 220 étudiants), sachant que chaque binôme utilisera au plus 4 ml de cette solution diluée au dizième. Quel est le volume de la solution mère que vous allez préparer et en conséquence quelle masse de ce produit allez-vous peser? Prendre en compte le matériel de mesure disponible (volume des fioles, des éprouvettes ). 2
4 Mercredi 10 Septembre TP II : Préparation de solutions, dilutions, calculs de concentration, conversions d unités I - Introduction/But du TP Dans un laboratoire, on utilise un grand nombre de solutions de compositions diverses. Ces solutions peuvent être simples ou complexes. - Une solution simple est composée d un produit pur ou d un nombre limité de produits en solution dans un solvant ; le solvant le plus utilisé en biologie est l eau, mais on peut avoir à y ajouter des co-solvants ou des détergents pour faciliter la solubilisation de produits hydrophobes - Une solution complexe contient plusieurs composés et a un p défini, une force ionique et une osmolarité contrôlées etc. Parmi ces solutions, certaines sont utilisées de façon récurrente et parfois même quotidiennement. En conséquence, on est amené à préparer des «solutions stocks» de concentrations relativement élevées à partir desquelles on peut préparer les solutions de travail, par dilution et au fur et à mesure des besoins. D autres solutions peuvent être nécessaires de façon ponctuelle pour un nombre très limité d expériences. Les expériences en biologie nécessitent la préparation de solutions de concentrations parfois très faibles. Plusieurs problèmes se posent : - comment préparer une solution simple ou une solution complexe (voir TP VI)? - comment préparer une solution à partir d un produit liquide ou d un produit solide? - comment réaliser les dilutions? - comment préparer des solutions faibles concentrations? Les objectifs de cette séance de TP sont les suivants : - connaître les notions de solutions stocks et solutions de travail - étiqueter correctement les solutions préparées - savoir réaliser une solution simple à partir d un produit liquide ou d un produit solide - savoir réaliser une dilution ou une série de dilutions à partir d une solution mère - calculer les volumes finaux en fonction des besoins - convertir les unités de concentration (massique vers molaire et inversement) - adapter les ordres de grandeur des unités en fonction des concentrations II Préparation de solutions simples Les produits à diluer/solubiliser peuvent être liquides ou solides Ces produits peuvent être conservés à température ambiante, à 4 C, à 20 C ou à 80 C (voire pour certains produits biologiques dans l azote liquide à 180 C) 3
5 Les méthodes et précautions à prendre pour la préparation de ces solutions sont adaptées à ces différentes situations. 1 Etiquettes Dans tous les cas, les solutions doivent être parfaitement identifiées Les indications suivantes doivent apparaître clairement : - nom du produit - concentration (et le cas échéant 10x, 5x, 2x etc) - date de préparation - nom de la personne qui a préparé la solution - pictogramme tiré des FDS (Fiches de Données de Sécurité) Toxique T Très Toxique T+ Nocif Xn Irritant Xi Facilement inflammable F Extrêmement inflammable F+ Comburant Corrosif C Explosif E Dangereux pour l'environnement N 2 Solutions stocks et solutions de travail Les solutions utilisées fréquemment peuvent être préparées à des concentrations supérieures à «la concentration de travail» pour éviter au chercheur d avoir à en préparer trop souvent. n peut ainsi préparer des solutions 20x, 10x, 5x, 2x Exemples : Pour de nombreux tests en biologie cellulaire, on utilise un tampon phosphate salin concentré : 10X PBS (Phosphate Buffered Saline) : g dibasic sodium phosphate Na 2 P 4 ( g/mol) g monobasic potassium phosphate K 2 P 4, ( g/mol) - 2 g KCl (74.5 g/mol) - 80 g NaCl (58 g/mol) - QSP 1 L with high purity 2, p 7.4. Dilute to 1X with high purity d 2 Calculer la concentration finale en phosphates de la solution de travail 1x en mm. n utilise souvent un tampon Tris glycine-sds pour faire des électrophorèses de protéines sur polyacrylamide. (SDS-PAGE) 10X Tris-Glycine-SDS (TGS) Buffer, M Tris ( g/mol) M glycine (75.07 g/mol) - 1.0% SDS ( g/mol) - QSP 1 L with high purity 2, p 7.4. Dilute to 1X with high purity d 2. Calculer les masses de chacun des produits pour préparer 1 litre de cette solution stock 10x 4
6 Par ailleurs, on peut avoir à travailler avec des solutions de concentrations différentes d un même composé. n prépare dans ce cas une solution mère. Les solutions de travail sont préparées par dilutions de cette solution mère. 3 Préparation de solutions 3.1 Préparation de solutions à partir d un produit pur à l état liquide conservé à température ambiante Acide acétique 50 mm Vous aurez à travailler avec une solution pure d acide acétique 50 mm dans le TP V (tampons, p-métrie) - recherchez les caractéristiques de ce produit - proposer une méthode pour la préparation d une solution 50 mm d acide acétique pour le groupe de TP sachant qu il en faut environ 50 ml par binôme ; prenez en compte les questions de sécurité. - réalisez la solution 3.2 Préparation de solutions à partir d un produit pur à l état solide (poudre amorphe ou produit cristallisé) Les produits solides doivent être pesés et solubilisés dans un solvant adapté. Les produits biologiques sont le plus souvent hydrosolubles mais certains sont plus ou moins hydrophobes : - lipides (acides gras, triglycérides, stéroïdes etc) - acides aminés aromatiques et aliphatiques - vitamines liposolubles : vitamine A (Rétinol), vitamine D (Calciférol), vitamine E (Tocophérol), vitamines K1 et K2 (Phylloquinone et Ménaquinone) - certaines protéines - certains glucides (cellulose) Il faudra donc dans ces cas là ajouter des produits facilitant la solubilisation : o détergents (TRITN par exemple) o co-solvants miscibles à l eau (éthanol, méthanol, TF, DMF, DMS) Vous devez connaître les fonctions principalement présentes sur les molécules biologiques et qui leur confèrent leurs propriétés hydrophile, hydrophobe ou amphiphile. Notion de précision de pesée La précision de la pesée dépend essentiellement de deux éléments : - (1) précision de la balance : une balance est caractérisée : o par sa portée : masse maximale pouvant être déposée sur le plateau o par sa précision : masse minimale pouvant être pesée o exemples : balance de laboratoire : portée 210 g précision 10 mg 777 TTC portée 4200 g précision 10 mg TTC 5
7 balance de précision : portée 60g précision 0,1 mg TTC portée 320g précision 0,1 mg TTC - (2) ordre de grandeur de la masse à peser o Calculez le pourcentage d erreur que l on fait lorsque l imprécision de la pesée est de 0,1 mg dans les deux cas suivants : pesée de l ordre du mg : par exemple 2 mg désiré quand on pèse en réalité 2,1 mg pesée de l ordre de la dizaine de mg : par exemple 25 mg désiré quand on pèse en réalité 25,1 mg o Conclure Notez bien qu il est plus simple de prélever un volume juste que d arriver à peser précisément une petite masse de produit. Ainsi, lorsqu on doit préparer 10 ml d une solution à 250 µg/ml : - on pèse une masse proche de 2,5 mg (par exemple 2,3 mg) - on solubilise le produit dans un volume tel que la concentration finale soit bien de 250 µg/ml (ici 9,2 ml). Précautions particulières pour les produits conservés au froid Avant d ouvrir le flacon d un produit conservé au froid, il est impératif de laisser le produit se réchauffer à température du laboratoire. Expliquez pourquoi a) Préparation d une solution de 4-nitrophénol 5x pour le groupe de TP Données - concentration de travail = 50 µm - volume nécessaire = 1 ml de solution 5x / binôme - solvant = soude 10 mm - solution mère de soude = Na 100 mm Calculs - rechercher la structure moléculaire et les caractéristiques du produit - calculer la masse à peser - calculer le volume de Na 10 mm à préparer - ajuster la démarche en fonction des résultats de vos calculs b) Préparation d une solution étalon de protéines pour le groupe de TP (préparation du TP IV) Données - sérum albumine bovine (4 C) ; MM ; protéine la plus abondante du plasma (0,6 mm) - préparation d une solution 1x à 2,5 mg/ml - 5 ml de solution 5x / binôme Calculs - calculer la masse à peser - préparer la solution (solvant = eau distillée) - étiquetez le flacon 6
8 c) Préparation d un réactif de dosage des protéines pour le groupe de TP (préparation du TP IV) Données Na2C3 2g - Tartrate double de Na et K 0,02g Bien dissoudre dans 100mL de Na 0,1M (solution mère de soude à 1M) 4 Dilutions La manipulation de petits volumes, la préparation de solutions de concentrations définies, l ajustement de concentrations par dilutions sont autant de gestes techniques simples qui doivent être parfaitement maîtrisés. Vous allez préparer des dilutions d une solution de 4-nitrophénol et tester la précision de vos gestes. Réflexion : comment tester la validité des dilutions effectuées? - solution à diluer : solution de 4-nitrophénol 5x - proposer une méthode simple de contrôle de vos dilutions 4.1 Dilution ponctuelle Préparer (triplicate) 1 ml de solution 1x Vérifier la validité de vos dilutions Conclure 4.2 Dilutions en cascade Réunir les trois solutions 1x de 1 ml A partir de cette solution 1x, préparer (duplicate) une série de dilutions en cascade au ½ dans un volume final permettant de réaliser des mesures de D dans des cuves de 1,5 ml. Vérifier la validité de vos dilutions Conclure 7
9 Jeudi 11 Septembre TP III : Spectrophotométrie I Spectrophotométrie : spectre d'absorption d'une molécule 1 bjectifs A partir de notions vues en cours et TD de biologie-biochimie et chimie (loi de Beer Lambert etc), proposer un protocole expérimental pour déterminer les caractéristiques spectrales d'un produit pur. Il s'agit ici de se poser les bonnes questions, de faire preuve d'imagination, de veiller à ce que les résultats soient significatifs, d'imaginer un protocole expérimental puis de le mettre en œuvre. Savoir : - utiliser un spectrophotomètre (Précautions d'utilisation. Limites d'utilisation. Réglages) - appliquer la loi de Beer Lambert - associer une couleur à une longueur d'ondes 2 Matériels et méthodes Spectrophotomètre et cuves de 1 ml (l = 1 cm) - zéro électrique : selon l appareil utilisé, ce réglage est à effectuer au moment de sa mise en marche. - longueur d'onde : réglez la longueur d'onde avant de régler le zéro d'absorbance et d'effectuer vos mesures. - zéro de D : en mode absorbance avec le tube témoin en place dans le porte-cuve, appuyer sur le bouton "0 ABS" ou "Auto zéro". L'affichage doit alors se stabiliser sur la valeur D =. Une fois ces réglages réalisés, vous pouvez faire vos mesures. Attention : il faut régler le zéro de D à chaque changement de longueur d'onde! Conserver la cuve témoin ("blanc" ; ici eau distillée) tout au long de la séance pour pouvoir réaliser des réglages de D dans les mêmes conditions sur l'appareil. Rappel : loi de Beer Lambert Les mesures spectrophotométriques s'appuient sur la loi de Beer-Lambert qui indique que la densité optique (D) ou absorbance d'un produit en solution est proportionnelle à sa concentration molaire D = ε. c. l ε : coefficient d'extinction molaire du produit coloré unité: M -1. cm -1 c : concentration molaire du produit coloré unité: M (mol/l ; on dit "molaire") l : longueur du trajet optique (ici l =1cm) unité: cm Vortex (agitation des tubes pour homogénéisation des solutions diluées) : tenir fermement le tube! 8
10 Solutions Les produits à étudier sont en solution dans l eau. Caractéristiques des produits : voir tableau page suivante 3 Résultats Présentez vos résultats graphiquement (deux graphes) Donner directement sur les graphes les résultats recherchés (λmax et ε) Solutions Produits purs en solution dans l'eau distillée : Masse moléculaire Concentration de la solution mère α1 6 α1 3 Bleu Dextran Dextran : polymère de glucose de structure proche de celle de l amidon. La couleur est due à un pigment lié au dextran de façon covalente Molécule de dextran mg/ml Pigment bleu lié au Dextran colonie de Leuconostoc mesenteroides Cette bactérie produit du dextran Vitamine B12 (cyanocobalamine) La vitamine B12 est un coenzyme important du métabolisme ,5 mg/ml Rhodamine B Colorant fluorescent très utilisé en biologie (marquage de molécules) Utilisé aussi comme traceur pour cartographier les cours d eau N C C N ,1 mg/ml 9
11 II Spectrophotométrie : dosage spectrophotométrique/colorimétrique 1 bjectifs Les dosages colorimétriques sont très utilisés dans tous les laboratoires de biologie, biochimie, physiologie etc. Il s agit de déterminer la concentration d un produit en solution. Voici deux méthodes utilisées couramment pour déterminer la concentration d un produit en solution : Méthode 1 : n réalise une mesure de D de la solution inconnue (diluée le cas échéant) puis on applique la loi de Beer-Lambert. Cela suppose que la valeur du coefficient d'extinction molaire ε maximal du produit soit connue. La concentration est donc calculée très simplement Cette approche est appliquée à la détermination de la concentration d une solution de bétanine. La bétanine est le colorant rouge naturel de la betterave Il est utilisé dans l industrie agroalimentaire comme colorant : E162 Méthode 2 : n réalise une gamme d étalonnage (série de solutions de concentrations différentes du produit). Si le produit d intérêt n est disponible (non commercialisé par exemple), on utilise un produit similaire. n prépare des dilutions de la solution de concentration inconnue. Un réactif permettant de colorer spécifiquement le produit d intérêt est ajouté dans tous les tubes ; tous les tubes sont préparés de la même façon (même volume final, même quantité de colorant, même volume de solution à doser etc) n mesure la D de chaque tube et la concentration du produit d intérêt dans la solution inconnue est déterminée par référence à la gamme étalon (graphe D = f(quantité de produit)). 2 Matériels et méthodes Spectrophotomètre et cuves de 1 ml (l = 1 cm) Méthode 1 : dosage du colorant E162 Bétanine (Formule brute : C 24 N ) en solution dans l eau pure ε λ530nm = M -1.cm -1 Ecrivez un protocole expérimental pour déterminez la concentration en Bétanine de la solution inconnue en M et en g/l Méthode 2 : dosage du phosphore Réactif : 3 ml de molybdate d'ammonium à 10% ; 21 ml d' 2 0 ; 1,5 g de sulfate ferreux ; Attendre la dissolution complète et compléter à 30 ml avec 2 0. Nous utiliserons la méthode de Fiske et Subarow modifiée selon Tausky et Shorr selon le protocole établi ci-dessous : a - Préparation de la gamme étalon: Le dosage du phosphore est très sensible. La courbe d étalonnage est établie en utilisant une solution de phosphate (K 2 P 4 1, M ; MM phosphore = 31, Solution prête à l emploi). 10
12 Etablir une gamme de 8 tubes de 0 à 21 µg de phosphore /tube. Compléter à 5 ml avec de l eau distillée. Ajouter 2 ml du réactif. omogénéiser. Attendre 10 min et lire à 660 nm chaque tube au spectrophotomètre. b - Dosage du phosphore dans le foie Le dosage du phosphore sera réalisé sur un surnageant cellulaire. Pour cela, prélever 5 ml de surnageant. Ajouter 2 ml de réactif. Agiter. Attendre 10 min et lire la D à 660 nm. Préparer un témoin pour faire le zéro de D. 4 Résultats Méthode 1 : Déterminer la concentration massique et molaire de la solution de Bétanine ; adaptez l unité à la grandeur de la concentration. Méthode 2 : Présenter les résultats sous la forme d'un graphe (droite d'étalonnage du dosage). Calculer la valeur de la concentration en phosphore de la solution inconnue en µg/ml et en µmol de phosphate/ml. 11
13 Vendredi 12 Septembre TP IV : Dosage spectrophotométrique des protéines I Précipitation des protéines sans dénaturation par les sels neutres But et principe : à température ambiante, de faibles concentrations en sels neutres facilite la solubilisation des protéines. Ce phénomène est lié à l association des fonctions ionisées des protéines avec les contre-ions apportés par les sels. A l inverse, des concentrations plus fortes en sels neutres peuvent provoquer la précipitation des protéines sans les dénaturer: c'est le relargage des protéines. Les sels les plus utilisés sont le sulfate de magnésium, de potassium ou d'ammonium. La précipitation dépend de la nature et de la concentration du sel, de la nature de la protéine (notamment de sa richesse en résidus ionisables acides et basiques et en résidus hydrophiles de surface) et du p de la solution. Ce phénomène est lié essentiellement à une compétition entre les protéines et les ions ajoutés à la solution pour leur solvatation. Plus la concentration en sels (ions) augmente et plus la proportion de molécules d eau établissant avec ces ions des liaisons faibles est grande. Ces interactions se font au détriment de celles entre l eau et les protéines. Les protéines se désolvatent (d autant plus facilement si elles sont peu hydrophiles) et finissent par s aggrèger et précipiter. n précipite donc d abord les protéines les plus hydrophobes puis les protéines plus hydrophiles au fur et à mesure que l on ajoute des sels. Manipulation: Séparation des albumines et globulines sériques par le sulfate d'ammonium. A 3 ml de sérum, ajouter 3 ml d'une solution saturée de sulfate d'ammonium (N4 + )2S4 2-. bserver un floculat de globulines. Après une centrifugation de 10 minutes à tours/min, un précipité (P1) est récupéré et resuspendu dans 1 ml de tampon. - le dosage protéique de P1 ainsi que du sérum sera réalisé selon le protocole ci-dessus. II Dosage colorimétrique des protéines par la méthode de Folin-Lowry But et principe : La méthode de Folin-Lowry est une des méthodes les plus utilisées pour le dosage colorimétrique des protéines. Elle est basée sur la formation d'un complexe de coloration bleue obtenu par réduction du réactif phosphotungstomolybdique de Folin et Ciocalteu par les protéines en présence d'ions cuivriques. Ce sont les résidus Y, W, C et dans une moindre mesure qui sont responsables de l'apparition de cette coloration bleue. Le mécanisme réactionnel complexe reste assez mal connu. n utilise le plus souvent la sérum albumine bovine (SAB) pour réaliser une gamme étalon qui sert de référence pour doser des protéines diverses dans des solutions de concentration inconnue. 12
14 Manipulation Préparation des réactifs Solution A: Na2C3 2g - Tartrate double de Na et K 0,02g Bien dissoudre dans 100mL de Na 0,1M Solution B: CuS4 0,5g Bien dissoudre dans 100mL d'eau Solution C: Mélanger extemporanément 2mL de B et 100mL de A dans un becher. Réactif de Folin: Faire une dilution (10mL) au quart de la solution commerciale avec de l'eau distillée. Dosage 1. Préparation de la gamme étalon A partir d'une solution aqueuse de sérum albumine bovine (SAB) de concentration connue (2,5 mg/ml), préparer une gamme étalon (en double) de 6 tubes contenant de 0 à 0,5 mg de SAB. Compléter chaque tube à un volume final de 0,2 ml avec de l'eau distillée. 2. Préparation des échantillons a. Lait Deux tubes contenant 200 µl d'une dilution (dans l'eau distillée) respectivement au 1/5 ème et au 1/10 ème de lait seront préparés dans les mêmes conditions. Le protocole est ensuite le même pour tous les tubes: Ajouter 1 ml de solution C dans chaque tube. Vortexer tous les tubes puis attendre 10 minutes. Ajouter 100 µl de réactif de Folin dilué dans chaque tube Incuber 15 minutes à l'obscurité à température ambiante. Lire l'absorbance à 650nm de longueur d'onde en prenant le tube 0 comme témoin. b. P1 et sérum Ecrire un protocole expérimental pour déterminer la concentration en protéines du précipité P1 et du sérum en g/l. 13
15 Mardi 16 Septembre TP V : Solutions tampons 1 bjectifs et principe De la théorie à la pratique : réalisation de solutions tamponnées et contrôle de leur pouvoir tampon. utilisation de l équation de enderson-asselbach. Préparer un tampon est un geste quotidien dans les laboratoires de biologie. Les erreurs peuvent être fatales pour les manipulations envisagées avec des protéines ou des cellules vivantes par exemple!! Expliquer pourquoi. Cette préparation doit être bien comprise et bien maîtrisée et nécessite de savoir utiliser les masses molaires, les concentrations massiques et molaires, les pkas, les dilutions etc Vous disposez en salle de TP de différents sels et solutions acides et basiques que vous utiliserez de façon rationnelle pour réaliser une solution tampon. 2 Matériel : p-mètre Agitateurs magnétiques Balance de précision Fiole jaugée100ml Béchers 100mL, 50 ml Flacons 30 ml Produits et solutions Produits disponibles K 2 P 4 cristallisé K 2 P 4 cristallisé Acétate de sodium Acide acétique Na 100 mm Cl dilué (100 mm) Masses molaires (g/mol) 174,18 136,09 82,03 60,05 40,00 36,16 commentaires pkas Acide phosphorique : pka s Ac à déterminer P 3 C ACIDE PSPRIQUE ACIDE ACETIQUE 3 Manipulations a- Détermination du pka du couple acide acétique/acétate par une méthode empirique Solutions disponibles : acétate de sodium : (82,03 g/mol) solution de concentration 4,101 g/l acide acétique glacial ultra pur : (d = 1,05g/mL ; MM : 60,05 g/mol) 14
16 Etapes de la manipulation 1- Calculs préliminaires - déterminer le volume d Cl fumant nécessaire pour préparer 100 ml d Cl à 100 mm. Pour information : on utilise de l Cl fumant : pureté 37% ; d=1,19. - calculer la concentration de la solution d'acétate de sodium en M 2- Un peu de réflexion - proposez une méthode simple pour déterminer le pka de l'acide acétique - proposez une méthode simple pour tester le pouvoir tampon de votre tampon acétate 3- Mise en œuvre - après avoir proposé votre méthode à l'enseignant, préparez 50 ml d'une solution tampon acétate de concentration 25mM qui vous permettra de déterminer expérimentalement le pka de l acide acétique - Testez son pouvoir tampon, quel protocole allez vous utiliser? b- Préparation d un tampon phosphate Utilisez l'équation de enderson-asselbach pour préparer 100mL d un tampon phosphate 10mM, p (défini en cours de séance) à partir des sels de phosphate cristallisés K 2 P 4 et K 2 P 4 Préparez vos calculs et faites les vérifier par l enseignant avant de faire la manipulation 15
17 Mercredi 17 Septembre TP VI : Préparation d'une solution physiologique complexe I Introduction/But du TP Une solution physiologique est un liquide isotonique au sang, c'est à dire présentant la même osmolarité que les principaux fluides corporels, en particulier le sang, soit environ 300 milliosmoles par litre (mosm/l). Cette solution est nommée liquide physiologique. Définition de la pression osmotique : La pression osmotique se définit comme la pression minimum qu'il faut exercer pour empêcher le passage d'un solvant d'une solution moins concentrée vers une solution plus concentrée au travers d'une membrane semi-perméable. La pression osmotique est proportionnelle aux concentrations de solutés de part et d'autre de la membrane et de la température. Lorsqu'il y a plusieurs solutés, il faut prendre en compte la totalité des solutés. La solution la plus concentrée en soluté est dite hypertonique par rapport à l'autre. La solution la moins concentrée en soluté (la plus diluée) est dite hypotonique par rapport à l'autre.si les 2 solutions ont la même concentration, on les dit isotoniques l'une par rapport à l'autre. L'osmolarité est une mesure de la concentration qui s'exprime en nombre de particules dissoutes par unité de volume (sm ou msm/l). L'osmolarité est calculée par la formule : sm = C[1+α(n-1)] C = concentration molaire (mol/l) α = coefficient de dissociation du soluté qui varie de 0 (pas de dissolution) à 1 (dissolution totale) n = nombre de particules obtenues par la dissociation du soluté. Pour le glucose =1 pour le NaCl = 2 La solution physiologique basique est composée d'eau stérile et de chlorure de sodium (NaCl) dilué à 9 pour Elle est improprement appelée sérum physiologique bien qu'il ne s'agisse pas d'un sérum. Pour l'étude de certains organes ou préparations cellulaires, le liquide physiologique doit être beaucoup plus complexe et reproduire au mieux la composition du milieu extracellulaire naturel. En plus du chlorure de sodium, le liquide physiologique pourra contenir des chlorures de potassium, de magnésium et de calcium, du glucose, des sels tampon (phosphates, Tris, EPES). L'origine de ce liquide physiologique complexe revient à Sydney Ringer, premier scientifique à avoir utilisé une telle solution pour l'étude des mécanismes physiologiques reliant le nerf au muscle squelettique de grenouille. Utilisations : La solution physiologique est utilisée en médecine et en science pour : - nettoyer le nez, les yeux, les plaies - y plonger provisoirement certains organes isolés du corps pour les maintenir en vie ou en bon état à des fins d'observations, d'analyses physiologiques, de réimplantation. - maintenir des cellules isolées en conditions de vie et/ou d'activité optimales à des fins d'observations, d'analyses et de réimplantation. 16
18 - composer des solutions de réhydratation injectées en perfusions intraveineuses suite à une déshydratation, une hémorragie, une baisse de pression artérielle ou pour des patients ne pouvant pas boire ou s'alimenter. - remplir certaines prothèses (par exemple mammaires), afin qu'en cas de perforation, le liquide de remplissage soit sans danger pour le corps. II Préparation de la solution physiologique complexe Composition de la solution physiologique complexe : NaCl KCl MgCl 2 Glucose EPES CaCl 2 0,26 M 11,2 mm 2 mm 24 mm 16 mm 4 mm Ajuster le p à 7,4 avec du Na 5M. Cette solution est considérée comme étant 2X. 1) Définir cette appellation de "2X". 2) Rechercher les masses moléculaires de tous les composants. 3) Estimer quel volume de solution vous devez préparer selon les besoins de la manipulation. Faites valider ce résultat par l'enseignant avant de poursuivre. 4) Calculer le poids à peser de chacun des composants selon la concentration finale voulue et le volume précédemment défini. Faites valider tous vos calculs par l'enseignant avant de poursuivre. 5) Déterminer l osmolarité de cette solution 5) Définissez le protocole de réalisation de cette solution : récipients/instruments de mesure à utiliser, ordre de pesée des composants, ajustement du p, volume d'eau à ajouter etc Faites valider cette démarche par l'enseignant avant de poursuivre. 6) Réalisez cette solution. III Test de la solution physiologique réalisée 1 bjectifs Les objectifs de cette étape sont multiples : 1) Tester la validité de votre solution, 2) Etudier le principe d'osmolarité d'une solution sur une cellule vivante (globule rouge), 3) Améliorer votre aisance à réaliser des dilutions de solution, 4) Utiliser un microscope optique, 5) Faire des mesures de diamètre de cellules à l'aide d'une échelle de graduations micrométriques, 6) Présenter les différentes mesures sous la forme d'un tableau, répertoriant les moyennes de n mesures et les écartypes associés. 7) Appréhender ainsi les notions de reproductibilité des mesures et de recherche des problèmes expérimentaux potentiels. 17
19 Le test que vous allez réaliser permet d'étudier le comportement des hématies en présence de la solution physiologique complexe utilisée à différentes dilutions, donc à différentes concentrations, donc à différentes osmolarités. 2 Matériels et Méthodes Modèle cellulaire : Globules rouges ou hématies ou érythrocytes de sang de bœuf frais additionné d'un anticoagulant (héparine) récupéré dans un abattoir. Matériels : Tubes à essai de 5 ml Portoir Lame de microscope et lamelle Microscope optique avec un objectif x100 Lentille oculaire/ou oculaire gravé(e) avec une échelle à graduations micrométriques Solution physiologique complexe 2X, préparée précédemment Méthode : Préparer des dilutions de la solution physiologique complexe à 1X, 0,5X, 0,1X 1) Définir le volume final de solution nécessaire pour l'expérimentation. Faites valider ce volume par l'enseignant avant de poursuivre 2) Faire les calculs de dilution nécessaire pour la réalisation de chaque solution. Faites valider ce volume par l'enseignant avant de poursuivre 3) Réaliser ces solutions. 4) Préparer des tubes à essai avec 5 ml des solutions suivantes : 2X ; 1X ; 0,5X ; 0,1X ; Une solution inconnue fournie par l'enseignant Noter la concentration des solutions sur chaque tube. 6) Mettre 2 gouttes de suspension d'hématie dans chaque tube, homogénéiser doucement. 3 bservations et résultats 1) bservations macroscopiques Comparer immédiatement l'aspect des 5 tubes et noter les différences éventuelles : coloration, limpidité, suspension, présence de phase etc Faire un tableau récapitulatif des caractéristiques observées. Ensuite, prendre soin de ne plus remuer les tubes et observer l'évolution de la préparation avec le temps. 2) observations microscopiques Prendre un petit volume (50 µl-100 µl) de suspension cellulaire dans chacun des tubes. Déposer ce volume sur une lame de microscope et recouvrir la préparation d'une lamelle. bserver les hématies au microscope, avec l'objectif x100, sans mettre d'huile à immersion. L'utilisation de l'objectif X100 sans huile à immersion ne correspond pas à une utilisation correcte du microscope. L'objectif 100 s'utilise toujours avec de l'huile à immersion. Exceptionnellement pour cette observation, afin éviter d'avoir à fixer de façon étanche la lamelle sur la lame et afin d'éviter un mélange eau/huile, vous utiliserez 18
20 cet objectif sans huile. Veiller à faire une mise au point progressive, à l'objectif x20, puis x60 et enfin x100. Suivez rigoureusement les conseils d'utilisation donnés par l'enseignant. L'observation microscopique est basée sur évaluation de : 1) la forme des hématies : rondes, biconcaves = normale crénelées ou flétries = plasmolyse gonflées = turgescence éclatées = hémolyse milieu ypertonique : Plasmolyse, GR crénelés milieu isotonique milieu ypotonique : gonflement et hémolyse 2) la taille : mesurer le diamètre de 10 à 15 hématies (même 20 si possible). Calculer le diamètre moyenne des hématies et l'écart type correspondant pour chaque solution, grâce à l'échelle à graduation micrométrique positionnée dans un des oculaire. 3) Expression des résultats : 1) Récapituler sous la forme d'un tableau, les observations macroscopiques et microscopiques ainsi que le diamètre cellulaire moyen pour chaque condition. 2) Calculer l'osmolarité des solutions physiologiques utilisées. 3) Comparer les résultats obtenus. 4) Expliquer les résultats obtenus et conclure sur l'importance du processus d'osmolarité sur la survie et le fonctionnement des cellules. 19
Exemple de cahier de laboratoire : cas du sujet 2014
Exemple de cahier de laboratoire : cas du sujet 2014 Commentaires pour l'évaluation Contenu du cahier de laboratoire Problématique : Le glucose est un nutriment particulièrement important pour le sportif.
Plus en détail(aq) sont colorées et donnent à la solution cette teinte violette, assimilable au magenta.»
Chapitre 5 / TP 1 : Contrôle qualité de l'eau de Dakin par dosage par étalonnage à l'aide d'un spectrophotomètre Objectif : Vous devez vérifier la concentration massique d'un désinfectant, l'eau de Dakin.
Plus en détailChapitre 7 Les solutions colorées
Chapitre 7 Les solutions colorées Manuel pages 114 à 127 Choix pédagogiques. Ce chapitre a pour objectif d illustrer les points suivants du programme : - dosage de solutions colorées par étalonnage ; -
Plus en détailPerrothon Sandrine UV Visible. Spectrophotométrie d'absorption moléculaire Étude et dosage de la vitamine B 6
Spectrophotométrie d'absorption moléculaire Étude et dosage de la vitamine B 6 1 1.But et théorie: Le but de cette expérience est de comprendre l'intérêt de la spectrophotométrie d'absorption moléculaire
Plus en détailAGREGATION DE BIOCHIMIE GENIE BIOLOGIQUE
AGREGATION DE BIOCHIMIE GENIE BIOLOGIQUE CONCOURS EXTERNE Session 2005 TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE PHYSIOLOGIE ALCOOL ET FOIE L éthanol, psychotrope puissant, est absorbé passivement dans l intestin
Plus en détailTECHNIQUES: Principes de la chromatographie
TECHNIQUES: Principes de la chromatographie 1 Définition La chromatographie est une méthode physique de séparation basée sur les différentes affinités d un ou plusieurs composés à l égard de deux phases
Plus en détailFICHE 1 Fiche à destination des enseignants
FICHE 1 Fiche à destination des enseignants 1S 8 (b) Un entretien d embauche autour de l eau de Dakin Type d'activité Activité expérimentale avec démarche d investigation Dans cette version, l élève est
Plus en détailpka D UN INDICATEUR COLORE
TP SPETROPHOTOMETRIE Lycée F.BUISSON PTSI pka D UN INDIATEUR OLORE ) Principes de la spectrophotométrie La spectrophotométrie est une technique d analyse qualitative et quantitative, de substances absorbant
Plus en détailTRAVAUX PRATIQUESDE BIOCHIMIE L1
TRAVAUX PRATIQUESDE BICHIMIE L1 PRINTEMPS 2011 Les acides aminés : chromatographie sur couche mince courbe de titrage Etude d une enzyme : la phosphatase alcaline QUELQUES RECMMANDATINS IMPRTANTES Le port
Plus en détailBleu comme un Schtroumpf Démarche d investigation
TP Bleu comme un Schtroumpf Démarche d investigation Règles de sécurité Blouse, lunettes de protection, pas de lentilles de contact, cheveux longs attachés. Toutes les solutions aqueuses seront jetées
Plus en détailLes solutions. Chapitre 2 - Modèle. 1 Définitions sur les solutions. 2 Concentration massique d une solution. 3 Dilution d une solution
Chapitre 2 - Modèle Les solutions 1 Définitions sur les solutions 1.1 Définition d une solution : Une solution est le mélange homogène et liquide d au moins deux espèces chimiques : Le soluté : c est une
Plus en détailSynthèse et propriétés des savons.
Synthèse et propriétés des savons. Objectifs: Réaliser la synthèse d'un savon mise en évidence de quelques propriétés des savons. I Introduction: 1. Présentation des savons: a) Composition des savons.
Plus en détailSP. 3. Concentration molaire exercices. Savoir son cours. Concentrations : Classement. Concentration encore. Dilution :
SP. 3 Concentration molaire exercices Savoir son cours Concentrations : Calculer les concentrations molaires en soluté apporté des solutions désinfectantes suivantes : a) Une solution de 2,0 L contenant
Plus en détailβ-galactosidase A.2.1) à 37 C, en tampon phosphate de sodium 0,1 mol/l ph 7 plus 2-mercaptoéthanol 1 mmol/l et MgCl 2 1 mmol/l (tampon P)
bioch/enzymo/tp-betagal-initiation-michaelis.odt JF Perrin maj sept 2008-sept 2012 page 1/6 Etude de la β-galactosidase de E. Coli : mise en évidence d'un comportement Michaélien lors de l'hydrolyse du
Plus en détailA chaque couleur dans l'air correspond une longueur d'onde.
CC4 LA SPECTROPHOTOMÉTRIE I) POURQUOI UNE SUBSTANCE EST -ELLE COLORÉE? 1 ) La lumière blanche 2 ) Solutions colorées II)LE SPECTROPHOTOMÈTRE 1 ) Le spectrophotomètre 2 ) Facteurs dont dépend l'absorbance
Plus en détailAGRÉGATION DE SCIENCES DE LA VIE - SCIENCES DE LA TERRE ET DE L UNIVERS
AGRÉGATION DE SCIENCES DE LA VIE - SCIENCES DE LA TERRE ET DE L UNIVERS CONCOURS EXTERNE ÉPREUVES D ADMISSION session 2010 TRAVAUX PRATIQUES DE CONTRE-OPTION DU SECTEUR A CANDIDATS DES SECTEURS B ET C
Plus en détailCHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE
CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE I - PRINCIPE La chromatographie est une méthode physique de séparation de mélanges en leurs constituants; elle est basée sur les différences d affinité des substances à
Plus en détailCODEX ŒNOLOGIQUE INTERNATIONAL. SUCRE DE RAISIN (MOUTS DE RAISIN CONCENTRES RECTIFIES) (Oeno 47/2000, Oeno 419A-2011, Oeno 419B-2012)
SUCRE DE RAISIN (MOUTS DE RAISIN CONCENTRES RECTIFIES) (Oeno 47/2000, Oeno 419A-2011, Oeno 419B-2012) 1. OBJET, ORIGINE ET DOMAINE D APPLICATION Le sucre de raisin est obtenu exclusivement à partir du
Plus en détailTP : Suivi d'une réaction par spectrophotométrie
Nom : Prénom: n groupe: TP : Suivi d'une réaction par spectrophotométrie Consignes de sécurité de base: Porter une blouse en coton, pas de nu-pieds Porter des lunettes, des gants (en fonction des espèces
Plus en détail101 Adoptée : 12 mai 1981
LIGNE DIRECTRICE DE L OCDE POUR LES ESSAIS DE PRODUITS CHIMIQUES 101 Adoptée : 12 mai 1981 «Spectres d'absorption UV-VIS» (Méthode spectrophotométrique) 1. I N T R O D U C T I O N I n f o r m a t i o n
Plus en détailTP n 1: Initiation au laboratoire
Centre Universitaire d El-Tarf Institut des Sciences Agronomiques 3 ème année Contrôle de Qualité en Agroalimentaire TP n 1: Initiation au laboratoire Introduction L analyse de la matière vivante au laboratoire
Plus en détailSUIVI CINETIQUE PAR SPECTROPHOTOMETRIE (CORRECTION)
Terminale S CHIMIE TP n 2b (correction) 1 SUIVI CINETIQUE PAR SPECTROPHOTOMETRIE (CORRECTION) Objectifs : Déterminer l évolution de la vitesse de réaction par une méthode physique. Relier l absorbance
Plus en détailLABORATOIRES DE CHIMIE Techniques de dosage
LABORATOIRES DE CHIMIE Techniques de dosage Un dosage (ou titrage) a pour but de déterminer la concentration molaire d une espèce (molécule ou ion) en solution (généralement aqueuse). Un réactif de concentration
Plus en détailSpectrophotométrie - Dilution 1 Dilution et facteur de dilution. 1.1 Mode opératoire :
Spectrophotométrie - Dilution 1 Dilution et facteur de dilution. 1.1 Mode opératoire : 1. Prélever ml de la solution mère à la pipette jaugée. Est-ce que je sais : Mettre une propipette sur une pipette
Plus en détailTPG 12 - Spectrophotométrie
TPG 12 - Spectrophotométrie Travail par binôme Objectif : découvrir les conditions de validité et les utilisations possibles de la loi de Beer-Lambert I- Tracé de la rosace des couleurs Choisir un des
Plus en détailDETERMINATION DE LA CONCENTRATION D UNE SOLUTION COLOREE
P1S2 Chimie ACTIVITE n 5 DETERMINATION DE LA CONCENTRATION D UNE SOLUTION COLOREE Le colorant «bleu brillant FCF», ou E133, est un colorant artificiel (de formule C 37 H 34 N 2 Na 2 O 9 S 3 ) qui a longtemps
Plus en détailPhysique Chimie. Réaliser les tests de reconnaissance des ions Cl -,
Document du professeur 1/5 Niveau 3 ème Physique Chimie Programme A - La chimie, science de la transformation de la matière Connaissances Capacités Exemples d'activités Comment reconnaître la présence
Plus en détailEXERCICE II. SYNTHÈSE D UN ANESTHÉSIQUE : LA BENZOCAÏNE (9 points)
Bac S 2015 Antilles Guyane http://labolycee.org EXERCICE II. SYNTHÈSE D UN ANESTHÉSIQUE : LA BENZOCAÏNE (9 points) La benzocaïne (4-aminobenzoate d éthyle) est utilisée en médecine comme anesthésique local
Plus en détailSVE 222 & PCL-442. Fascicule de Travaux Pratiques
SVE 222 & PCL-442 Fascicule de Travaux Pratiques 2014-2015 Institut Supérieur de l Education et de la Formation Continue Bassem Jamoussi & Radhouane Chakroun 1 Sommaire PCL 442/SVE222 - TP N 1 : Etude
Plus en détailComment suivre l évolution d une transformation chimique? + S 2 O 8 = I 2 + 2 SO 4
Afin d optimiser leurs procédés, les industries chimiques doivent contrôler le bon déroulement de la réaction de synthèse menant aux espèces voulues. Comment suivre l évolution d une transformation chimique?
Plus en détailTP N 3 La composition chimique du vivant
Thème 1 : La Terre dans l'univers, la vie et l'évolution du vivant : une planète habitée Chapitre II : La nature du vivant TP N 3 La composition chimique du vivant Les conditions qui règnent sur terre
Plus en détailTP 3 diffusion à travers une membrane
TP 3 diffusion à travers une membrane CONSIGNES DE SÉCURITÉ Ce TP nécessite la manipulation de liquides pouvant tacher les vêtements. Le port de la blouse est fortement conseillé. Les essuie tout en papier
Plus en détailMeine Flüssigkeit ist gefärbt*, comme disaient August Beer (1825-1863) et Johann Heinrich Lambert (1728-1777)
1ère S Meine Flüssigkeit ist gefärbt*, comme disaient August Beer (1825-1863) et Johann Heinrich Lambert (1728-1777) Objectif : pratiquer une démarche expérimentale pour déterminer la concentration d une
Plus en détailDÉTERMINATION DU POURCENTAGE EN ACIDE D UN VINAIGRE. Sommaire
BACCALAURÉAT SÉRIE S Épreuve de PHYSIQUE CHIMIE Évaluation des compétences expérimentales Sommaire I. DESCRIPTIF DU SUJET DESTINÉ AUX PROFESSEURS... 2 II. LISTE DE MATÉRIEL DESTINÉE AUX PROFESSEURS ET
Plus en détailIndicateur d'unité Voyant Marche/Arrêt
Notice MESURACOLOR Colorimètre à DEL Réf. 22020 Indicateur d'unité Voyant Marche/Arrêt Indicateur Etalonnage Bouton Marche/Arrêt Indicateur de sélection de la longueur d'onde Indicateur de mode chronomètre
Plus en détail1) Teneur en amidon/glucose. a) (Z F) 0,9, b) (Z G) 0,9, où:
L 248/8 Journal officiel de l Union européenne 17.9.2008 RÈGLEMENT (CE) N o 900/2008 DE LA COMMISSION du 16 septembre 2008 définissant les méthodes d analyse et autres dispositions de caractère technique
Plus en détailLiquides oraux : et suspensions. Préparations liquides pour usage oral. Solutions
Préparations pharmaceutique Cours de en 2ème petites Année quantités de Master en Pharmacie Liquides oraux : solutions, Préparation sirops pharmaceutique et suspensions en petites quantités Section des
Plus en détailUne nouvelle technique d'analyse : La spectrophotométrie
Une nouvelle technique d'analyse : La spectrophotométrie Par spectrophotométrie on peut : - déterminer la concentration d'une espèce chimique colorée en solution à partir de l'absorbance. - suivre la cinétique
Plus en détailBACCALAURÉAT TECHNOLOGIQUE
BACCALAURÉAT TECHNOLOGIQUE Série : Sciences et Technologies de Laboratoire Spécialité : Biotechnologies SESSION 2015 Sous-épreuve écrite de Biotechnologies Coefficient de la sous-épreuve : 4 Ce sujet est
Plus en détailPHYSIQUE-CHIMIE DANS LA CUISINE Chapitre 3 : Chimie et lavage
PHYSIQUE-CHIMIE DANS LA CUISINE Chapitre 3 : Chimie et lavage I) Qu'est-ce qu'un savon et comment le fabrique-t-on? D'après épreuve BAC Liban 2005 Physique-Chimie dans la cuisine Chapitre 3 1/6 1- En vous
Plus en détail4. Conditionnement et conservation de l échantillon
1. Objet S-II-3V1 DOSAGE DU MERCURE DANS LES EXTRAITS D EAU RÉGALE Description du dosage du mercure par spectrométrie d absorption atomique de vapeur froide ou par spectrométrie de fluorescence atomique
Plus en détailTHEME 2. LE SPORT CHAP 1. MESURER LA MATIERE: LA MOLE
THEME 2. LE SPORT CHAP 1. MESURER LA MATIERE: LA MOLE 1. RAPPEL: L ATOME CONSTITUANT DE LA MATIERE Toute la matière de l univers, toute substance, vivante ou inerte, est constituée à partir de particules
Plus en détailBiochimie I. Extraction et quantification de l hexokinase dans Saccharomyces cerevisiae 1. Assistants : Tatjana Schwabe Marcy Taylor Gisèle Dewhurst
Biochimie I Extraction et quantification de l hexokinase dans Saccharomyces cerevisiae 1 Daniel Abegg Sarah Bayat Alexandra Belfanti Assistants : Tatjana Schwabe Marcy Taylor Gisèle Dewhurst Laboratoire
Plus en détailLa spectrophotométrie
Chapitre 2 Document de cours La spectrophotométrie 1 Comment interpréter la couleur d une solution? 1.1 Décomposition de la lumière blanche En 1666, Isaac Newton réalise une expérience cruciale sur la
Plus en détailBREVET DE TECHNICIEN SUPÉRIEUR QUALITÉ DANS LES INDUSTRIES ALIMENTAIRES ET LES BIO-INDUSTRIES
~--------------~~-----~- ----~-- Session 2009 BREVET DE TECNICIEN SUPÉRIEUR QUALITÉ DANS LES INDUSTRIES ALIMENTAIRES ET LES BIO-INDUSTRIES U22 - SCIENCES PYSIQUES Durée: 2 heures Coefficient : 3 Les calculatrices
Plus en détailACIDES BASES. Chap.5 SPIESS
ACIDES BASES «Je ne crois pas que l on me conteste que l acide n ait des pointes Il ne faut que le goûter pour tomber dans ce sentiment car il fait des picotements sur la langue.» Notion d activité et
Plus en détailSite : http://www.isnab.com mail : mennier@isnab.fr SUJET ES - session 2003 Page 1 68-(7(6VHVVLRQ
Site : http://www.isnab.com mail : mennier@isnab.fr SUJET ES - session 003 Page 1 68-(7(6VHVVLRQ LE JUS E FRUIT 35(0,Ê5(3$57,(%LRFKLPLHSRLQWV L'analyse d'un jus de fruit révèle la présence d'un composé
Plus en détailMesures calorimétriques
TP N 11 Mesures calorimétriques - page 51 - - T.P. N 11 - Ce document rassemble plusieurs mesures qui vont faire l'objet de quatre séances de travaux pratiques. La quasi totalité de ces manipulations utilisent
Plus en détailSujet. calculatrice: autorisée durée: 4 heures
DS SCIENCES PHYSIQUES MATHSPÉ calculatrice: autorisée durée: 4 heures Sujet Spectrophotomètre à réseau...2 I.Loi de Beer et Lambert... 2 II.Diffraction par une, puis par deux fentes rectangulaires... 3
Plus en détailCORRECTION EVALUATION FORMATIVE TEST DE NIVEAU Date : PROMOTION :
CORRECTION EVALUATION FORMATIVE TEST DE NIVEAU Date : PROMOTION : OJECTIFS : 1/ Evaluer le degré des connaissances acquises nécessaires à l administration des médicaments à diluer. 2/ Evaluer les capacités
Plus en détailSuivi d une réaction lente par chromatographie
TS Activité Chapitre 8 Cinétique chimique Suivi d une réaction lente par chromatographie Objectifs : Analyser un protocole expérimental de synthèse chimique Analyser un chromatogramme pour mettre en évidence
Plus en détailANALYSE SPECTRALE. monochromateur
ht ANALYSE SPECTRALE Une espèce chimique est susceptible d interagir avec un rayonnement électromagnétique. L étude de l intensité du rayonnement (absorbé ou réémis) en fonction des longueurs d ode s appelle
Plus en détail33-Dosage des composés phénoliques
33-Dosage des composés phénoliques Attention : cette manip a été utilisée et mise au point pour un diplôme (Kayumba A., 2001) et n a plus été utilisée depuis au sein du labo. I. Principes Les composés
Plus en détailPRISE EN MAIN DU SPECTROPHOTOMETRE UV-VISIBLE SHIMADZU U.V. 240
I.N.S.. DE ROUEN Laboratoire de Chimie nalytique U.V. N PRISE EN MIN DU SPECTROPHOTOMETRE UV-VISIBLE SHIMDZU U.V. 240. OBJECTIFS - Choix des paramètres nécessaires pour un tracé de spectre. - Utilisation
Plus en détailTD DOSAGE DE PROTEINES ET ELECTROPHORESE : PARTIE THÉORIQUE BST1 SVT
TD DOSAGE DE PROTEINES ET ELECTROPHORESE : PARTIE THÉORIQUE BST1 SVT Daniela LENER IBMC Texte conseillé pour consultation : Biochimie, Voet & Voet, ed. De Boeck. Dosage des protéines Pendant une purification
Plus en détailMesures et incertitudes
En physique et en chimie, toute grandeur, mesurée ou calculée, est entachée d erreur, ce qui ne l empêche pas d être exploitée pour prendre des décisions. Aujourd hui, la notion d erreur a son vocabulaire
Plus en détailBiologie Appliquée. Dosages Immunologiques TD9 Mai 2015. Stéphanie Sigaut INSERM U1141 stephanie.sigaut@inserm.fr
Biologie Appliquée Dosages Immunologiques TD9 Mai 2015 Stéphanie Sigaut INSERM U1141 stephanie.sigaut@inserm.fr 1 ELISA 2 3 4 [Ac] 5 6 7 8 9 Correction : Faire la moyenne D0-1 et D0-2 pour toute les valeurs
Plus en détailCapteur à CO2 en solution
Capteur à CO2 en solution Référence PS-2147CI Boîtier adaptateur Sonde ph Sonde température Sonde CO2 Page 1 sur 9 Introduction Cette sonde est conçue pour mesurer la concentration de CO 2 dans les solutions
Plus en détailClasse : 1 ère STL Enseignement : Mesure et Instrumentation. d une mesure. Titre : mesure de concentration par spectrophotométrie
Classe : 1 ère STL Enseignement : Mesure et Instrumentation THEME du programme : mesures et incertitudes de mesures Sous-thème : métrologie, incertitudes Extrait du BOEN NOTIONS ET CONTENUS Mesures et
Plus en détailExercices sur le thème II : Les savons
Fiche d'exercices Elève pour la classe de Terminale SMS page 1 Exercices sur le thème : Les savons EXERCICE 1. 1. L oléine, composé le plus important de l huile d olive, est le triglycéride de l acide
Plus en détailCapteur optique à dioxygène
Capteur optique à dioxygène Référence PS- 2196 Connectique de la sonde mini DIN Tête de la sonde Embout de protection et stockage Port mini DIN du capteur Eléments inclus 1. Capteur à dioxygène optique
Plus en détail10. Instruments optiques et Microscopes Photomètre/Cuve
0. Instruments s et Microscopes GENERAL CATALOGUE 00/ Cuve à usage unique pour spectrophotomètre Cuve jetable, moulée en et en pour UV. Avec parois traitées Kartell ment pour une transparence optimale
Plus en détailMatériel de laboratoire
Matériel de laboratoire MATERIAUX UTILISE... 1 L'APPAREILLAGE DE LABORATOIRE... 1 a) Les récipients à réaction... 2 b) La verrerie Graduée... 2 MATERIEL DE FILTRATION... 6 FILTRATION SOUS VIDE AVEC UN
Plus en détailFiche 19 La couleur des haricots verts et cuisson
Fiche 19 La couleur des haricots verts et cuisson Objectif : Valider ou réfuter des «précisions culinaires»* permettant de "conserver une belle couleur verte" lors la cuisson des haricots verts frais (gousses
Plus en détailDosage des sucres par CLHP dans les vins (Oeno 23/2003)
Méthode OIV-MA-AS311-03 Méthode Type II Dosage des sucres par CLHP dans les vins (Oeno 23/2003) 1. DOMAINE D'APPLICATION Cette recommandation spécifie une méthode de dosage du fructose, du glucose et du
Plus en détailTECHNIQUES DE BASE EN CHIMIE ORGANIQUE
TECHNIQUES DE BASE EN CHIMIE ORGANIQUE La synthèse organique suit en général le schéma suivant : Synthèse Séparation des produits Caractérisation du produit Pur? Oui Fin. Evaluation du rendement Non Purification
Plus en détailIsolement automatisé d ADN génomique à partir de culots de cellules sanguines à l aide de l appareil Tecan Freedom EVO -HSM Workstation
PROTOCOLE AUTOMATISÉ Isolement automatisé d ADN génomique à partir de culots de cellules sanguines à l aide de l appareil Tecan Freedom EVO -HSM Workstation Mode d emploi des produits A1751 et A2751 Réservé
Plus en détailPeroxyacide pour l'hygiène dans les industries agroalimentaires
P3-oxonia active Description Peroxyacide pour l'hygiène dans les industries agroalimentaires Qualités Le P3-oxonia active est efficace à froid. Il n'est ni rémanent ni polluant. Il ne contient pas d'acide
Plus en détailSérodiagnostic de la polyarthrite rhumatoïde
1 ETSL Sérodiagnostic de la polyarthrite rhumatoïde TP 1 GABIN-GAUTHIER 13/11/2009 I. LA MALADIE... 2 II. TECHNIQUES QUALITATIVES... 2 1. PRINCIPE... 2 2. MODE OPERATOIRE... 3 2.1. WRST ou Waaler Rose
Plus en détailA B C Eau Eau savonneuse Eau + détergent
1L : Physique et chimie dans la cuisine Chapitre.3 : Chimie et lavage I. Les savons et les détergents synthétiques 1. Propriétés détergentes des savons Le savon est un détergent naturel, les détergents
Plus en détailLE SPECTRE D ABSORPTION DES PIGMENTS CHLOROPHYLLIENS
Fiche sujet-élève Les végétaux chlorophylliens collectent l énergie lumineuse grâce à différents pigments foliaires que l on peut classer en deux catégories : - les chlorophylles a et b d une part, - les
Plus en détailSCIENCES PHYSIQUES. Durée : 3 heures. L usage d une calculatrice est interdit pour cette épreuve. CHIMIE
Banque «Agro-Véto» Technologie et Biologie AT - 0310 SCIECES PYSIQUES Durée : 3 heures L usage d une calculatrice est interdit pour cette épreuve. Si, au cours de l épreuve, un candidat repère ce qui lui
Plus en détailFiche professeur. Rôle de la polarité du solvant : Dissolution de tâches sur un tissu
Fiche professeur TEME du programme : Comprendre ous-thème : Cohésion et transformations de la matière Rôle de la polarité du solvant : Dissolution de tâches sur un tissu Type d activité : Activité expérimentale
Plus en détailBurette TITRONIC Titrateurs TitroLine
Burette TITRONIC Titrateurs TitroLine 22 rue de l'hermite 33520 BRUGES Tél. 05 56 16 20 16 - Fax 05 56 57 68 07 info-devis@atlanticlabo-ics.fr - www.atlanticlabo-ics.fr Un pas en avant pour la titration
Plus en détailCalcaire ou eau agressive en AEP : comment y remédier?
Calcaire ou eau agressive en AEP : comment y remédier? Les solutions techniques Principes et critères de choix Par Sébastien LIBOZ - Hydrogéologue Calcaire ou eau agressive en AEP : comment y remédier?
Plus en détailNORME CODEX POUR LES SUCRES 1 CODEX STAN 212-1999
CODEX STAN 212-1999 Page 1 de 5 NORME CODEX POUR LES SUCRES 1 CODEX STAN 212-1999 1. CHAMP D'APPLICATION ET DESCRIPTION La présente norme vise les sucres énumérés ci-après destinés à la consommation humaine
Plus en détailTITRONIC et TitroLine. Les nouveaux titrateurs et burettes
TITRONIC et TitroLine Les nouveaux titrateurs et burettes Un pas en avant pour la titration Si vous cherchez l innovation: SI Analytics vous propose ses nouveaux TitroLine 6000 et 7000 et ses nouvelles
Plus en détailKIT ELISA dosage immunologique anti-bsa REF : ELISA A RECEPTION DU COLIS : Vérifier la composition du colis indiquée ci-dessous en pages 1 et 2
KIT ELISA dosage immunologique anti-bsa REF : ELISA : 0033 (0)169922672 : 0033 (0)169922674 : www.sordalab.com @ : sordalab@wanadoo.fr A RECEPTION DU COLIS : Vérifier la composition du colis indiquée ci-dessous
Plus en détailRAPID Salmonella/Gélose 356-3961 356-3963 356-4705
356-3961 356-3963 356-4705 DOMAINE D APPLICATION La gélose RAPID Salmonella est un milieu chromogénique utilisé pour la recherche des Salmonella spp. lors de l'analyse des produits d alimentation humaine
Plus en détailK W = [H 3 O + ] [OH - ] = 10-14 = K a K b à 25 C. [H 3 O + ] = [OH - ] = 10-7 M Solution neutre. [H 3 O + ] > [OH - ] Solution acide
La constante d autoprotolyse de l eau, K W, est égale au produit de K a par K b pour un couple acide/base donné : En passant en échelle logarithmique, on voit donc que la somme du pk a et du pk b d un
Plus en détailMise en pratique : Etude de spectres
Mise en pratique : Etude de spectres Introduction La nouvelle génération de spectromètre à détecteur CCD permet de réaliser n importe quel spectre en temps réel sur toute la gamme de longueur d onde. La
Plus en détailEXERCICE 2 : SUIVI CINETIQUE D UNE TRANSFORMATION PAR SPECTROPHOTOMETRIE (6 points)
BAC S 2011 LIBAN http://labolycee.org EXERCICE 2 : SUIVI CINETIQUE D UNE TRANSFORMATION PAR SPECTROPHOTOMETRIE (6 points) Les parties A et B sont indépendantes. A : Étude du fonctionnement d un spectrophotomètre
Plus en détailMesure de Salinité Réalisation d'un conductimètre
Kourou Novembre 2010. MANGOTECHNO Mesure de Salinité Réalisation d'un conductimètre Frédéric BOUCHAR (TENUM Toulouse) Version 1.0 Table des matières 1.Introduction...3 2.Qu'est-ce que la salinité?...3
Plus en détailBTS BAT 1 Notions élémentaires de chimie 1
BTS BAT 1 Notions élémentaires de chimie 1 I. L ATOME NOTIONS EÉLEÉMENTAIRES DE CIMIE Les atomes sont des «petits grains de matière» qui constituent la matière. L atome est un système complexe que l on
Plus en détailANTICORPS POLYCLONAUX ANTI IMMUNOGLOBULINES
L OUTIL IDEAL POUR TOUTES LES DETECTIONS IMMUNOCHIMIQUES pour toutes les techniques immunodosages (EIA/ELISA) dot/ westernblot immunohistochimie immunocytochimie cytométrie en flux quel que soit le système
Plus en détailC2 - DOSAGE ACIDE FAIBLE - BASE FORTE
Fiche professeur himie 2 - DOSAGE AIDE FAIBLE - BASE FORTE Mots-clés : dosage, ph-métrie, acide faible, base forte, neutralisation, concentration. 1. Type d activité ette expérience permet aux élèves de
Plus en détail259 VOLUMETRIE ET TITRATION DOSAGE DU NaOH DANS LE DESTOP
259 VOLUMETRIE ET TITRATION DOSAGE DU NaOH DANS LE DESTOP A d a p t a t i o n : A. - M. F o u r n i e r ( C o p a d ), M. C a s a n o v a & H. J e n n y ( C d C ) 2 0 0 1 C o n c e p t i o n D. M a r g
Plus en détailEXERCICE A PROPOS DE LA CULTURE DE CELLULES ANIMALES
EXERCICE A PROPOS DE LA CULTURE DE CELLULES ANIMALES Auteur : Marc Lesquir, lycée de la Plaine de l'ain, rue Léon Blum, 01500 AMBERIEU EN BUGEY Exercice établi à partir d'un sujet de concours général de
Plus en détailBAC BLANC SCIENCES PHYSIQUES. Durée : 3 heures 30
Terminales S1, S2, S3 2010 Vendredi 29 janvier BAC BLANC SCIENCES PHYSIQUES Durée : 3 heures 30 Toutes les réponses doivent être correctement rédigées et justifiées. Chaque exercice sera traité sur une
Plus en détail1.3 Recherche de contaminants au cours de la production de Saccharomyces boulardii
Série STL Biochimie génie biologique EPREUVE PRATIQUE 1. CONTROLE MICROBIOLOGIQUE DE PROBIOTIQUES Les préparations de probiotiques sont utilisées préventivement comme additifs dans l alimentation humaine
Plus en détailAcides et bases. Acides et bases Page 1 sur 6
Acides et bases Acides et bases Page 1 sur 6 Introduction Sont réputés acides et bases au sens des règles de sécurité en vigueur en Suisse, les solides ou liquides qui ont une réaction acide ou alcaline
Plus en détailBanque BCPST Inter-ENS/ENPC - Session 2015. Rapport de l'épreuve de travaux pratiques de biologie et de chimie
Banque BCPST Inter-ENS/ENPC - Session 2015 Rapport de l'épreuve de travaux pratiques de biologie et de chimie Écoles : ENS de Cachan, ENS de Lyon, ENS de Paris, ENPC Coefficients (en % du total concours)
Plus en détailTitre alcalimétrique et titre alcalimétrique complet
Titre alcalimétrique et titre alcalimétrique complet A Introduction : ) Définitions : Titre Alcalimétrique (T.A.) : F m / L T.A. T.A.C. Définition : C'est le volume d'acide (exprimé en ml) à 0,0 mol.l
Plus en détailUn spectromètre à fibre plus précis, plus résistant, plus pratique Concept et logiciel innovants
& INNOVATION 2014 NO DRIVER! Logiciel embarqué Un spectromètre à fibre plus précis, plus résistant, plus pratique Concept et logiciel innovants contact@ovio-optics.com www.ovio-optics.com Spectromètre
Plus en détailPHYSIQUE-CHIMIE. Partie I - Spectrophotomètre à réseau
PHYSIQUE-CHIMIE L absorption des radiations lumineuses par la matière dans le domaine s étendant du proche ultraviolet au très proche infrarouge a beaucoup d applications en analyse chimique quantitative
Plus en détailChapitre 02. La lumière des étoiles. Exercices :
Chapitre 02 La lumière des étoiles. I- Lumière monochromatique et lumière polychromatique. )- Expérience de Newton (642 727). 2)- Expérience avec la lumière émise par un Laser. 3)- Radiation et longueur
Plus en détailTest d immunofluorescence (IF)
Test d immunofluorescence (IF) 1.1 Prélèvement du cerveau et échantillonnage Avant toute manipulation, il est fondamental de s assurer que tout le personnel en contact avec un échantillon suspect soit
Plus en détail------- SESSION 2013 ÉPREUVE À OPTION. (durée : 4 heures coefficient : 6 note éliminatoire 4 sur 20) CHIMIE
CNCURS SUR ÉPREUVES UVERT AUX CANDIDATS TITULAIRES D UN DIPLÔME U TITRE CNFÉRANT LE GRADE DE MASTER U D'UN DIPLÔME U TITRE HMLGUÉ U ENREGISTRÉ AU RÉPERTIRE NATINAL DES CERTIFICATINS PRFESSINNELLES AU NIVEAU
Plus en détailPlanches pour le Diagnostic microscopique du paludisme
République Démocratique du Congo Ministère de la Santé Programme National de Lutte Contre le Paludisme Planches pour le Diagnostic microscopique du paludisme Ces planches visent à améliorer le diagnostic
Plus en détail