Intérêt de la cytogénétique conventionnelle et moléculaire dans les hémopathies malignes. Dr C. Lefebvre Laboratoire de Génétique Onco-Hématologique

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1 Intérêt de la cytogénétique conventionnelle et moléculaire dans les hémopathies malignes Dr C. Lefebvre Laboratoire de Génétique Onco-Hématologique EC Génétique _ janvier 2011

2 Généralités Rappel des techniques utilisées : Caryotype et FISH Impact des données cytogénétiques dans les hémopathies : - diagnostique, - pronostique, - thérapeutique Modèles : - la leucémie aiguë promyélocytaire, - la leucémie myéloïde chronique, - le lymphome à cellules du manteau, - la LLC

3 L Hématopoïèse normale Autorenouvellement Colonies, Progéniteurs Divisions, puis Différenciation / Maturation

4 Origine cellulaire des hémopathies malignes Transformation maligne -> lymphoma Transformation maligne ->leucémie

5 Cytologie Histologie Phénotypage 2% Diagnostic pluridisciplinaire d une hémopathie Immunohistochimie Caryotype FISH Biologie moléculaire

6 Objectifs Technique complémentaire Intérêt dans les hémopathies Cytologie Aspect détaillés des cellules tumorales Cytochimie : lignée (enzyme), fer Diagnostic+++, Suivi++ Histologie Aspect tissulaire, environnt, et cellulaires Immunohistochimie : lignée, index de prolifération, classification Diagnostic+++ Phénotypage (suspension) Marqueurs de surface ou intracytopl. Marquage multicouleur, IF sur lame, Diagnostic+++, Suivi++ (maladie résiduelle ou MRD), Cytogénétique Caryotype Génome tumoral Anomalies Iaires et IIaires FISH : précisions ou détection d anomalies cryptiques Diagnostic+++, Suivi+, pronostic+++ Biologie moléculaire Recherche et quantification de transcrit pathologiques, clonalité T/B, mutations acquises oncogéniques PCR nichée, Séquençage Diagnostic, Suivi+++ (MRD) Pronostic++,

7 Hémopathies malignes : diagnostic biologique - Cytologie : aspect des cellules / coloration Giemsa : diagnostic, suivi - Histologie : aspects tissulaire et cellulaire, environnement, extension, marquages complémentaires par immunohistochimie : diagnostic - Phénotypage : en cytométrie de flux (suspension) : Marqueurs /Ag de surface, intracytoplasmique, intensité d expression : identification d un clone, lignée d origine, suivi de la maladie résiduelle (MRD) - Cytogénétique conventionnelle : caryotype : anomalies qui corroborent le diagnostic -> cytogénétique moléculaire : FISH pour explorations complémentaires, dictées par le type d hémopathie, l intérêt diagnostique ou pronostique ou thérapeutique Biologie Moléculaire : identification d un transcrit anormal : RT-PCR, clonalité (lymphocytes B/T), quantification du taux d expression d un gène (non remanié ou hybride): RT-Q-PCR, Diagnostic pluridisciplinaire

8 Caryotype Définition et objectifs Indications Matériel Étapes Apports et limites Exemples Intérêt

9 Caryotype Objectif technique Obtention et interprétation des chromosomes en métaphase Analyse morphologique Diagnostic des anomalies chromosomiques Cytogénétique conventionnelle

10 Le cycle cellulaire

11 Indications Anomalies constitutionnelles vs acquises Caryotype constitutionnel pré-natal (signes,atcd ) liquide amniotique (16è-19è SA), villosités choriales (10è SA) Caryotype constitutionnel post-natal (phénotype d un enfant, retard mental, anomalies cardiaques ) lymphocytes du sang périphérique, fibroblastes Caryotype de cellules/tissus tumoraux : leucémie, lymphomes = recherche d anomalies chromosomiques acquises et présentes uniquement ds le(s) tissu(s) tumoral(aux) : sang : si cellules leucémiques > 20% moelle osseuse ganglions/rate et tumeurs solides: fragment tissulaire

12 Matériel Prélèvements - tube hépariné identifié! sang (7 ml) moelle osseuse (1 ml) fragment tissulaire - ou tube sec stérile ( pour liquide pleural, d ascite ) - renseignements cliniques et pathologie suspectée ++++ Stérilité +++, acheminement rapide à t ambiante

13 Étapes Culture cellulaire Capacité proliférative des cellules in vitro : selon l hémopathie! Milieux synthétiques de culture: éléments nutritifs+ maintien des constantes physico-chimiques Reproduction la plus fidèle des conditions in vivo Dilacération des tissus (peau, villosités, tumeurs): scalpel -> suspension cellulaire, Concentration cellulaire de culture variable 1 à 2x10 6 cellules / ml: sang, moelle, fibroblastes 1 à 4x10 6 cellules / ml: ggl, rate, tumeur

14 Étapes Culture cellulaire Constitutionnel Post-natal Sang : Agent mitogène PHA (Phytohémagglutinine) 72h : lymphocytes T Peau : cellules adhérentes, fibroblastes cultures + longues, surveillance +++ microscope Hématologie : Culture de durée variable - courte (24h) sans agents mitogènes pour les hémopathies myéloïdes (aiguës, chroniques), Sd myéloprolifératifs, - longue (72h) avec mitogènes pour les leucémies lymphoïdes chroniques, les lymphomes à petites cellules : issus de cellules plus «matures» avec capacité naturelle de division limitée (Oligo-CpG et Interleukine-2) Mise en culture à l étuve à 37 C

15 Étapes Blocage des mitoses - Colchicine: bloque la cellule au stade de métaphase Interrompt la formation des fibres du fuseau Libère les chromosomes de la plaque équatoriale Mais induit une contraction des chromosomes Concentration et temps d exposition +++ Exposition Colchicine : Variable : 30 min à 17 H, avec concentration adaptée

16 Étapes Choc hypotonique Solution pauvre en sels KCl M : pénétration par osmose Gonflement de la cellule, étirement de la membrane cytoplasmique Lyse des hématies 37 C (10 ml) sur vortex, 20 min 37 Fixation Préserve la morphologie de la cellule Stoppe les fonctions cellulaires Perte d une partie des protéines +++ Fixateur Méthanol / Acide acétique 3:1 (4 C) sur vortex x3 Culot cellulaire fixé conservé qqs jours à 4 C

17 Étapes Étalement Qualité de l étalement +++ t et degré d humidité évaporation du fixateur Contrôle au microscope : mitoses, densité, amas Dénaturation Marquage en bandes Bandes chromosomiques non visible dans l ADN isolé replis résultants de l interaction entre ADN et protéines Marquages en bandes G, R, C, NORs: G: digestion enzymatique /protéolytique, coloration au Giemsa R: trt thermique en milieu salin puis coloration par Giemsa

18 Caryotype Étapes Dénaturation Technique de marquage en bandes R (Dutrillaux et Lejeune, 1971) Solution saline Earle (tampon phosphaté, ph4,2) 87 C, BM pdt 12 à 17 min, ajustement nécessaire Coloration Giemsa 4% Alternance bandes sombres «riches en gènes» G-C: 3H A-T: 2H Lecture au microscope optique Acquisition et classement Interprétation Culot cellulaire conservé à 20 C

19 Caryotype en bande R 46,XY

20 Caryotype en bande G 46,XY R

21 Anomalies du caryotype Anomalies de nombre Anomalies de structure gain d un chromosome -> trisomie perte d un chromosome -> monosomie équilibrées déséquilibrées Anomalie de la ploidie (normal = diploïde à 46 chrs) hypodiploidie : hyperdiploidie : triploidie : # 69 tétraploidie : # 92 haploidie : # 23 / (lot de 23)

22 Anomalies de structure équilibrées déséquilibrées inversion délétion duplication E translocation réciproque isochromosome

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24 Effets oncogéniques des translocations Ex : effets pathologiques induits par la protéine de fusion BCR/ABL Ex : effets pathologiques induits par la dérégulation du gène c- Myc par la t(8;14) IGH/cMyc

25 Les mécanismes «oncogéniques» sont beaucoup moins clairs et moins précisés concernant les anomalies de nombre (gains, pertes)

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27 Apports et limites Apports Approche pangénomique : visualisation du génome ds sa totalité Limites détection des anomalies numériques & structurales détection de clone(s) apparentés ou non détections de cassures «figures» ex: Fanconi Echecs de culture: peu ou pas de mitoses, Qualité du prélèvement et de la préparation, Caryotype normal: nature des cellules en mitose? Sélection d un clone possible (culture), Pouvoir de résolution de détection des anomalies : 5-10 Mb (1 bande = 10 7 pb)

28 Intérêt du caryotype Hémopathies diagnostic : Lymphomes, leucémies concordance avec anapath, cytologie, immunophénotypage - pronostic : LAM : t(8;21)(q22;q22), t(15;17)(q22;q21), inv(16)(p13q22) LAM à caryotype complexe LAL: hyperdiploïdie, t(9;22) MDS: -5/5q, -7/7q, complexité -suivi cytogénétique: LMC sous traitement et suivi du contingent avec t(9;22) Greffe de moelle osseuse allogénique : sexe, clone Tumeurs solides - diagnostic: Sarcome d Ewing t(11;22)

29 FISH: Hybridation Fluorescente in situ Définition et objectifs Principe Matériel Apports et limites Indications Exemples

30 FISH Définition Détection in situ de séquences d acides nucléiques sur métaphases noyaux interphasiques Ré-association moléculaire spécifique ADN-ADN : cible = ADN chromosomique sonde = ADN complémentaire Hybridation moléculaire Cytogénétique moléculaire

31 FISH Principe Sonde Préparation chromosomes cellules marquage dénaturation dénaturation HYBRIDATION détection indirecte détection directe

32 Matériel Sondes: types de sonde Séquences répétitives : centromère (séq alphoïde) dénombrement des chrs Séquences uniques -> vecteur sondes spécifiques / locus translocation, gène de fusion délétion, amplification ADN de tout ou partie d un chromosome microdissection -> banques peinture chromosomique Plasmide 0-10 Kb Phage Kb Cosmide Kb PAC Kb BAC Kb YAC Kb

33 Matériel Cible Préparations cytogénétiques noyaux : interphase métaphases Préparations cytologiques (pas de culture) frottis, cytospins appositions Préparations histologiques coupes congelées coupes en paraffine +/- extraction des noyaux

34 FISH Apports et limites Apports Etude in situ rapide, sensible, spécifique (locus) Faible quantité de matériel biologique Pouvoir de résolution // taille de sonde Détection directe, sondes double-couleur Détection des réarrangements géniques, délétion, amplification, aneuploïdies en interphase si échec du caryotype, Nombre de fluorochromes (5) Limites Travail à l échelle du gène -> informations partielles Interprétation des résultats -> caryotype!

35 FISH Indications Cytogénétique Constitutionnelle Anomalie de nombre (couples de sondes): aneuploïdie Syndromes microdélétionnels Cytogénétique oncohématologique Diagnostic: - anomalie cryptique -> 11q23 / MLL; CBFB / inv(16) caryotype) - précision du point de cassure: LMC / t(9;22) - détection d une anomalie récurrente essentielle au diagnostic (échec Pronostic: - inv(16) / CBFB; 11q22 / ATM; 11q23 / MLL Suivi: maladie résiduelle, allogreffe de moelle (sexe)

36 Caryotype et FISH - Leucémies aiguës: Doit corroborer avec les données cytologiques et phénotypiques, Peut entraîner la modification du diagnostic cytologique de myélodysplasie en leucémie aiguë (ex t(8;21)), - Lymphomes : - profil cytogénétique ou signature cytogénétique ou anomalies «spécifiques» pour chaque grand sous-type de lymphome, donc - aide à la précision du sous-type histologique - LLC (leucémie lymphoïde chronique) : impact thérapeutique : - délétion 17p13/TP53 : Résistance à la Fludarabine - délétion 11q22 / ATM : intérêt d une immunochimiothérapie

37 Caryotype : FISH : exemples de l intérêt dans le cadre du diagnostic et du traitement des leucémies aiguës myéloïdes

38 L hématopoïèse normale myéloblaste promyélocyte métamyélocyte

39 Définition Les leucémies aiguës (LA) sont des proliférations clonales malignes de progéniteurs ou précurseurs médullaires des cellules sanguines associées à un blocage de maturation à un stade immature : - de la lignée myéloïde : LAM - de la lignée lymphoïde : LAL - rarement : M et L : biphénotypique Il en résulte une accumulation de ces cellules immatures (bloquées à un stade donné), ou blastes, dans la moelle osseuse, +/- le sang, et parfois dans d'autres organes. La prolifération des blastes engendre une insuffisance médullaire avec déficit de production des cellules sanguines matures.

40 LAM avec t(15;17) : obligatoirement LAM3 = promyélocytaire 5 à 8% des LAM, CIVD ++++ cytologie caractéristique / formes variantes de très bon pronostic pas d allogreffe! si échec caryotype ou mitoses normales : FISH PML/RARA double couleur ; RARA dc car insertions cryptiques, autres t 17q22 : t(5;17)(q35;q21) : NPM ; t(11;17)(q13;q21) : PLZF anomalie isolée (si autres anomalies : tjs bon pronostic) traitement spécifique

41 Corps d Auer en fagots

42 46,XY,t(15;17)(q22;q21) PML/RARA

43 46,XY,t(15;17)(q22;q21) PML/RARA

44 Peu de modèles de cancer génétiquement simples Leucémie aiguë : promyélocytaire : Translocation t(15;17) gène de fusion protéine de fusion PML/RARA : blocage de la cellule à un stade précoce (promyélocyte) Chimiothérapie classique (trop) efficace : libération de facteurs activant la coagulation +++ Traitement ciblé : ATRA : levée du blocage de la cellule 80% de guérison

45 Facteurs pronostiques des LAM de novo Age (>60 ans) (+état général & comorbidités) Caryotype et/ou biologie moléculaire (<60ans) Leucocytose initiale Réponse au traitement (immédiat et/ou MRD : minimal residual disease)

46 Altérations génétiques sans anomalies CG mutations ponctuelles Microdélétions Amplification activation d oncogènes inactivation FT essentiel différenciation Mutations de gènes Transduction du signal : FLT3, c-kit (rec TK), RAS Facteurs de transcription : AML1, CEBPα, EVI1, Suppresseur de tumeur : p53 NPM1 ++++

47 Facteurs pronostiques des LAM de novo Caryotype / biologie moléculaire = facteur prédictif le plus fort de la réponse initiale au traitement (rémission complète 1 : RC1) et du risque de rechute. Les anomalies cytogénétiques et moléculaires sont classées en 3 catégories.

48 Impact pronostique des anomalies chromosomiques Consensus international du risque pronostic selon le caryotype : 1) Groupe favorable : - t(15;17) des APL, - t(8;21) AML1/ETO et inv(16) des LAM CBF, - Caryotypes normaux/intermédiaires avec profil moléculaire FLT3wt, NPM1wt, CEBPa muté, 2) Groupe intermédiaire : redéfini selon le statut mutationnel de 3 gènes (NPM1, FLT3 +/- CEBPa) Normal (50% des cas) - NPM1 wt, FLT3 wt, CEBPa wt t(9;11) +8 Autres (2 anomalies) - NPM1 muté, FLT3 wt 3) Groupe défavorable : - Caryotypes du groupe 2 avec FLT3 muté type ITD - caryotypes complexes (> 3 anomalies), - anomalies 5/7, - anomalies 3q, - anomalies 11q23/MLL sauf t(9;11), - t(6;9) DEK/NUP214

49 CALGB % 61% 22% Byrd et al, Blood 2002

50 Anomalies moléculaires des LAM N-Ras K-Ras H-Ras FLT3 C-Kit NPM CEBP MLL EVI1

51 Exemples LAM4 - Leucémie aiguë myélomonocytaire

52 Exemples FISH MLL der(11) 11 der(19) -> 46,XX,t(11;19)(q23;p13)

53 Cytogénétique conventionnelle : Intérêt diagnostique et pour le suivi : Modèle de la LMC

54 LMC : Introduction syndrome myéloprolifératif chronique prolifération prédominante de la lignée granuleuse évolution clinique en 3 phases: - chronique - accélération - acutisation présence d une anomalie chromosomique typique: chromosome Philadelphie (Ph) par t(9;22)

55 L Hématopoïèse normale

56 LMC : Historique 1960 : découverte d un marqueur spécifique de la LMC : le chromosome Philadelphie : 22q : translocation réciproque t(9;22)(q34;q11), présent chez 95% des patients échange de matériel génétique entre les bras longs des chrs 9 et : équivalent moléculaire BCR-ABL transcrit BCR-ABL protéine de fusion BCR-ABL

57 Épidémiologie incidence : 10 cas /an / habitants âge moyen : ans ; prédominance masculine facteurs favorisants : radiations ionisantes, benzène Clinique Signes d appels : asthénie, pesanteur abdominale Signes cliniques : splénomégalie +++ Découverte fortuite (40 à 50% des cas) Complications inaugurales : rares crise de goutte, thrombose, infarctus splénique

58 Diagnostic : arguments cytologiques sang Moelle +++ Phase : chronique, transformation, ou accélération

59 Diagnostic formel : caryotype Moelle Banding R ou G Présence d un Ph dans 95% des cas t(9;22)(q34;q11) «classique» dans 95% des cas Translocation variante : t(?;9;22) peu fréquente 9q+ Ph 22

60 LMC : cytogénétique t(9;22)(q34.1;q11.2) : translocation réciproque 22 Ph (22q-) BCR/ABL Gène de fusion Protéine de fusion

61 Caryotype 46,XY,t(9;22)(q34;q11)

62 Caryotype 47,XY,t(6;9;22)(p24;q34;q11),+21

63 FISH bi-couleur sondes spécifiques bcr et abl visualisation directe de la fusion bcr-abl dans les cellules interphasiques bcr abl

64 FISH Précision du point de cassure, outil diagnostique : m-bcr M-bcr µ-bcr P190, P210 ou P230 LAL Ph+ Pronostic : non LMC LCN Elucidation des translocations complexes

65 FISH - sonde BCR-ABL normal m-bcr M-bcr M-bcr 22 Ph 9 9q+ m-bcr Ph q+

66 FISH - métaphase Cassure M-bcr 1F 1V 2R

67 FISH - métaphase Cassure m-bcr

68 LMC, maladie de «la» cellule souche Ph+ Ph+ Ph+ Ph+ Ph+ Ph+ Ph+

69 LMC : P210 BCR/ABL, protéine hybride

70 BCR-ABL 3 points de cassure LAL Ph+, LMC P190 P210 LMC P230 Leucémie neutrophile chronique

71 Sujet normal : c-abl : protéine nucléaire, expression ubiquitaire / régulation fine = tyrosine kinase (régulation +++), bloque le cycle cellulaire LMC: BCR-ABL : tyrosine kinase constitutivement active, de localisation cytoplasmique, avec propriétés «transformantes» (modèles animaux BCR/ABL+ LMC) Sujets sains BCR/ABL+ (sang)

72 Propriétés «oncogéniques» de la protéine P210 BCR/ABL Augmente la prolifération Réduit l adhérence Inhibe l apoptose Instabilité génétique +++

73 La LMC, un modèle pour l évaluation de la maladie résiduelle Baccarani, Blood, 2006

74 Evolution naturelle de la LMC 10 ans +Ph, +8, iso(17)(q10) +19, +21

75 Caryotype 45,XY,-2,+8, t(9;22)(q34;q11),i(17)(q10),-21

76 LMC acutisée Précédée parfois d une phase d accélération Apparition d anomalies additionnelles dans 75 à 85% des cas parfois avant toute manifestation cytologique ou clinique Phase chronique +8 i(17)q +Ph +19 p16 p53 crise blastique La phase acutisée de la LMC est marquée par une anomalie moléculaire (90% cas) qui concerne le gène Ikaros/7p12 : - délétion Ikaros (cryptique ou non, -7), totale ou partielle - mutation Ikaros protéine Ikaros aberrante qui serait rfesponsable du blocage de la cellule à un stade précoce de maturation (progéniteurs) d où leucémie aiguë Mullighan et al. Nature Genetics, 2008

77 Rôle clé de régulateurs/facteurs de transcription dans la lymphopoièse B Fuxa & Skok, Curr Opin Immunol, 2007

78 La délétion de IKZF1 (Ikaros) constitue un évènement fréquent dans le processus de transformation des LMC en LAL 15 LMC acutisées (3 LAL, 12 LAM) 4 del IKZF1 CML-7 : mutation non-sens exon 7 Chrs 7 Mullighan et al., Nature, 2008

79 Caryotype 48,XY,del(7)(p12p1?5),+8,t(9;22)(q34;q11),+15

80 Traitement / Suivi Imitanib (GLIVEC*): inhibiteur de tyrosine kinase en 1 ère intention (400 mg/j) ITK de 2è génération (Dasatinib: Sprycel* ; Nilotinb : Tasigna*) ou Intérêt du suivi du caryotype +++ jusqu à l obtention de la réponse cytogénétique complète (RCyC) Réponse % de cellules médullaires Cytogénétique Ph+ Complète 0 Partielle 1 à 34% Mineure 35 à 95% Absence 100% En parallèle suivi quantitatif par RT-Q-PCR

81 Autre modèle : le lymphome à cellules du manteau

82 Ontogénie B et Lymphomes 1 sous-type de lymphome = corolaire pathologique d un compartiment physiologique ganglion Moelle osseuse, sang Moelle osseuse

83 Ontogénie B

84 LMNH et Translocations Chromosomiques t(3;14) IGH/BCL6 t(1;14) IGH/BCL10 t(14;18) IGH/BCL2 t(8;14) IGH/cMYC t(3;14) IGH/BCL6 t(11;14) IGH/CCND1 D après (Küppers 2005).

85 Lymphome à cellules du manteau Particularités cliniques : - formes disséminées (>90% st III ou IV) - fréquentes atteintes muqueuses (intestin, ORL), - lymphome à petites cellules «agressif» Hétérogénéité clinique, morphologique, Phénotype immunologique IgS (ML), CD19+, CD5+, CD10-, CD23- t(11;14)(q13;q32) : anomalie cytogénétique caractéristique caryo/fish (# 100%) PCR (50-60%) Conséquences : Hyperexpression cycline D1 (CCND1)

86 Probabilité de survie LM du Manteau : pronostic péjoratif Folliculaire Lymphocytique Manteau Zone marginale (SLVL) Survie en mois Facteurs pronostiques : Ki67

87 Forme classique Lymphomes à cellules du manteau 7% des lymphomes Architecture diffuse Petites cellules Forme blastoïde : cellules plus grandes, Forme pleiomorphe, Immunophénotype IgM++, CD19+, CD5+, CD10-, CD23-, CCND1+

88 la t(11;14)(q13;q32)

89 La t(11;14)(q13;q32) Gène IGH cen tel IGH : Points de cassure entre les segments D et J Major Translocation Cluster Cassures 11q13 éparpillées dans région de #1Mb en 5 et 3 de CCND1, un hot spot : MTC, 120 kb en 5 de CCND1 der(14) Hyperexpression de la cycline D1 Dérégulation de la transcription d un seul gène (non tronqué) sous l effet d un activateur hétérologue

90 The translocation t(11;14)(q13;q32) in MCL. (A) Schematic representation of the germline immunoglobulin heavy chain (IgH) locus on chromosome 14q32 displaying the genomic organization of the variable (V), diversity (D), joining (J) and the constant region (only the Cl gene is shown). The breakpoint in IGH seems to occur between the diversity and joining regions during the early steps of the V(D)J recombination. (B) Genomic organization of the BCL-1 (B-cell lymphoma/leukaemia 1) locus on chromosome 11q13. The majority of breakpoints (30 50%) happen at the major translocation cluster (MTC), however there is some variability and 10 20% of the breaks occurs outside the MTC closer to CCND1. (C) The translocation leads to a 5-5 fusion of the bcl-1 locus with sequences from the IGH@ locus and brought under the control of the IgH enhancer, CCND1.

91 Rate - Immunohistochimie cyclined1

92 La t(11;14)(q13;q32) détection par FISH CCND1 IGH 11 11q q+

93 FISH Sonde LSI IGH / CCND1 dual color Vysis

94 Le caryotype d un lymphome du manteau est souvent complexe G HU G g1314 Caryotype : mitoses anormales 4/15 FISH 87 % noyaux avec t(11;14)

95 Cytogénétique conventionnelle et FISH dans les LLC Impact pronostic et thérapeutique

96 Cytogénétique des LLC : impact thérapeutique

97 Cytogénétique des LLC

98 Cytogénétique des LLC FISH p53/cep17 S CEP17

99 Cytogénétique des LLC Délétion 17p S ,X,-Y,+12,-16,add(17)(p11)

100 Impact pronostique péjoratif de la délétion p53 Stilgenbauer ASH, 2004

101 Délétion 17p des LLC : Impact clinique thérapeutique Losanski et al., Blood, 2004

102 CONCLUSIONS Intérêt de l étude cytogénétique des hémopathies malignes 1. Impact clinique : 4 : diagnostic, pronostic, suivi, thérapeutique 2. Signification de ces anomalies pour la compréhension des mécanismes de leucémogénèse, 3. Et de ce fait mieux orienter la recherche sur le versant thérapeutique : thérapie ciblée, 4. Avancée sur le plan fondamental : mécanismes intracellulaires, ou lien avec l environnement tumoral

103 CONCLUSIONS Identification des gènes concernés Conséquences des anomalies de structure: Translocations, inversions, délétions: DÉRÉGULATIONTRANSCRIPTIONNELLE, GENES de FUSION (quelle fusion?) Troncation génique Délétions: gènes suppresseurs de tumeurs haplo-insuffisance Isodisomie parentale acquise (puce) Amplifications: dmin, HSR contenu des amplicons, expression des gènes amplifiés