Principes d'étalonnage d'un
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- Marie-Noëlle Bonneau
- il y a 7 ans
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1 Principes d'étalonnage d'un multi analyseur avec module de chimie hétérogène. siemens.ca/answers
2 Aujourd'hui je parlerai de: L étalonnage linéaire, pourquoi utiliser 3 étalons, de quelle façon une courbe de calibration linéaire est calculée, les paramètres en place pour accepter la courbe d étalonnage. L étalonnage d une courbe non-linéaire, les différents modèles mathématiques utilisés, l impact des différents coefficients dans le model mathématique, de quelle façon l instrument calcule les coefficients, les paramètres pour accepter un étalonnage non-linéaire. L étalonnage pour une méthode immunologique, comment obtenir la sensibilité dans les basses valeurs et aussi pouvoir doser de hautes concentrations. Hémoglobine A1c, l étalonnage, le calcule % HbA1c et la normalisation. Page 2
3 L Instrument en question Les concepts présentés s appliqueront à l instrument Dimension ExL LM. L instrument peut effectuer des analyses de chimie générale, de protéines plasmatique, de médicaments et aussi des tests immunologiques. Pour contenir les réactifs l instrument utilise des FLEX, toutes les composantes requises pour faire une méthode sont contenue dans un même FLEX. L hydratation est faite par l instrument, et la stabilité du réactif est gérée par l instrument. Page 3
4 Pourquoi effectuer un étalonnage Lors d un dun nouveau lot, lors de la mise en place d une nouvelle méthode, pour établir une courbe d étalonnage. Pour actualiser les conditions actuelles de l instrument et du réactif. Pour l instrument en discussion, les réactif en FLEX ont une stabilité prédéterminée, l étalonnage n est donc pas nécessaire habituellement pour corriger la dégradation quotidienne du réactif, (stabilité est habituellement de 90 jours). Page 4
5 L Étalonnage d une courbe linéaire La plupart des méthodes biochimie générale. L étalonnage pour ces méthodes utilise 3 étalons qui sont mesurés en triplicata. L équation pour une courbe linéaire est : Concentration = C1 x mau + C0. C1 est la pente et C0 est l intercepte. C1 et C0 sont calculés lé en utilisant t une simple régression linéaire. En exemple une courbe d étalonnage pour le Glucose. Etalonnage Glucose Page 5
6 Validation d un étalonnage linéaire Bonne précision des étalons mesurés en triplicata. L'instrument calcul une régression linéaire entre la concentration des étalons de la bouteille et la concentration obtenue, pente (m) et intercepte (b). Critères acceptables pour l étalonnages d une méthode linéaire Pente (m) Intercepte (b) 0,00 ou cliniquement négligeable Coefficient de corrélation (r) Les résultats des contrôles de qualité, doivent entrer dans les limites. L operateur accepte la calibration si les critères sont atteints. Etalonnage Glucose Page 6
7 Auto-Validation d un étalonnage Linéaire Il est possible de programmer l instrument pour une Auto- Validation. Si les critères de validation entrent t dans les spécifications prédéfinies dans l instrument, il va automatiquement accepter l étalonnage sans l intervention de l opérateur opérateur. Si la régression linéaire montre que la pente (m), l intercepte (b) et le coefficient de corrélation (r), mesurés, sont dans les critères prédéterminés. Si les contrôles de qualité, obligatoires i suivant la calibration, sont dans les limites acceptables. Et aussi: Que la déviation Standard de la concentration des étalons (n=3) rencontre une limite prèétablie par la compagnie. Que le biais entre la concentration sur la bouteille de l étalon et la valeur obtenue rencontre la limite établis par la compagnie. Etalonnage Glucose Page 7
8 Étalonnage (Vérification) pour les Enzymes Utilise aussi une courbe linéaire, concentration = C1 x mau + C1. Utilise aussi 3 étalons mesurés en triplicata. Mais c est une vérification, les étalons sont des vérificateurs. Les C0 et C1 sont toujours identiques et définis par le fabricant, même avec un changement de numéro de lot de réactif. Refaire, la vérification a aucun impact sur les résultats des contrôles de qualité. Page 8
9 Validation de la Vérification pour une Enzyme Bonne précision des étalons mesurés en triplicata. L'instrument calcule une régression linéaire et compare la concentration des étalons sur la bouteille et la concentration obtenue, pente (m) et intercepte (b). Critères acceptables pour la vérification des enzymes Pente (m) Intercepte (b) 0,0 ou cliniquement négligeable Coefficient de corrélation (r) Sil es résultats des contrôles de qualité, faits durant l étalonnage, entrent dans les limites. L operateur accepte la vérification si les critères sont atteints. L Auto validation est aussi disponibleibl Verification ALT.xls Page 9
10 Nouvelle tendance Étalonnage des Enzymes La tendance pour les méthodes d Enzymes révisé est de faire l étalonnage linéaire. ALP, ALT, LD et CK, l étalonnage est maintenant fait, une nouvelle courbe d étalonnage fait avec chaque nouveau lot. Faire l étalonnage d une enzyme prend en considération les condition actuel de l instrument. Quand une enzyme est vérifier et ne fonctionne pas bien, il est nécessaire de faire des ajustement sur l instrument, t elle que la température des cuvettes de réaction. Page 10
11 Si les Contrôles de Qualité n entrent pas dans les limites. Certains matériaux de contrôle de qualité commerciale contiennent des enzymes non-humains et une matrice nonhumaine, ce qui peut les amener à se comporter différemment des enzymes humains sériques. Les changements des CQ devraient être étudiés de manière appropriée. La matrice de contrôle de la qualité peut être responsable lorsque la performance des contrôle de qualité n'est pas compatible avec les performances d'un vérificateur de lot de réactif particulier. Lorsqu'un problème de matrice CQ est suspecté, les échantillons de patients peuvent être utilisés entre les lots afin de déterminer si les différences de réactifs affectent t aussi les résultats t des patients. Le biais de matrice est presque certainement responsable de la divergence des CQ si les échantillons humains montrent des performances comparables entre les deux lots. Cependant, si les échantillons de patients montrent aussi des divergences cliniquement significatives entre les réactifs, les vérificateurs et ou des réactifs doivent être étudiés Page 11
12 Étalonnage Méthode Logit Dans le cas des méthodes qui utilisent une courbe d étalonnage non linéaire, par exemple les médicaments et les méthodes immunologique. Cette courbe à une forme logarithmique utilisant une équation spécifique avec plusieurs coefficient i pour générés sa forme. Le centre de la courbe a plus de pente et donne une meilleure précision à cette concentration. Souvent les résultats les plus cliniquement significatif se trouvent dans cette région. Il faut un étalon de plus que le nombre de coefficient de l équation non linéaire. Si nous avons 4 coefficients dans l équation la méthode aura 5 étalons. La sélection de la concentration des étalons présente une concentration progressive croissante avec le double de sons précédant, 0, 28, 56, 111, 222. Page 12
13 Équation pour étalonnage non linéaire (Logit) Il y a différentes équations, chaque instrument / fabricant utilise l équation la mieux adaptée pour son instrument / réactif. Exemple de différente équation : Log-Logit 4 paramètres: R= R0 + K[1 + exp(-(a + blnc))]^-1 La méthode 4PL exige que la courbe soit symétrique autour de son point médian. Log logit 5 paramètres: R= R0 + K[1 + exp(-(a + blnc + cc))]^-1 Parfois, os, le 4PL donne un mauvais as ajustement e aux données, en particulier autour des asymptotes. 5 paramètres exponentiel: R= R0 + Kexp[a(lnC + b(lnc)^2 + c(lnc)^3] Cette équation est utilisée quand le centre de la courbe dois êtres plus bas Page 13
14 Équation pour courbe non-linéaire utilisée sur Dimension RxL (Logit) Le dimension RxL utilise sa propre équation à 5 paramètres. Toutes les méthodes non-linéaire utilisent la même équation. Il utilise 5 étalons en duplicatas, sauf les méthode immunologiques (details suivront) Le paramètres C4 est toujours le même a 0.5. Les paramètres C0, C1, C2 et C3 ont une interaction entre eux pour générer la courbe d étalonnage. Entre deux courbes d étalonnage, il pourrait y avoir beaucoup de différence entre les coefficients mais pas beaucoup de différence dans la forme générale de la courbe. Transferrine.xls Page 14
15 Coefficients pour l équation Logit Pour chaque nouvel étalonnage l instrument utilise toujours les derniers coefficients i déterminés. é Quand les contrôles ne fonctionnent pas, il est possible que l operateur soit obligé d entrer les coefficients originaux pour la méthode afin d établir un nouveau point de départ. Page 15
16 Validation Courbe d étalonnage non-linéaire (Logit) Bonne précision des 5 étalons en duplicatas. Pour logit aussi, l'instrument calcule une régression linéaire entre la concentration des étalons sur la bouteille et la concentration obtenue, pente (m) et intercepte (b). Critères acceptables pour la vérification des enzymes Pente (m) Intercepte (b) 0,0 ou cliniquement négligeable Coefficient de corrélation (r) Les résultats des contrôles de qualité, obligatoires suite à l étalonnage, doivent entrer dans les limites. L opérateur accepte l étalonnage si les critères sont acceptables. L Auto validation est aussi disponible Si la déviation Standard (écart type) de la concentration des étalons (n=2) rencontre une limite préétablis par la compagnie. Que le biais entre la concentration sur la bouteille de l étalon et la valeur obtenue rencontre la limite établie par la compagnie. Verification TRNF.xls Page 16
17 Étalonnage méthode Immunologique Exemple de méthodes Immunologique, CTNI, TSH, FT4, HCG, elles utilisent le module hétérogène de l appareil. Défie, avoir une bonne précision dans les très basses valeurs et aussi pourvoir quantifier de hautes concentrations. Pour réaliser ceci : Certains étalons qui ont une concentration critique sont mesurés à plusieurs reprise, par exemple l étalon 0 pour la CTNI est fait 4 fois. Dans le calcul des coefficients ces étalons ont plus de poids (weight) dans le modèle mathématique. L instrument produit deux courbes d étalonnage, une avec un temps de lecture très long pour avoir une bonne sensibilité dans les basses valeurs et une courbe d étalonnage avec des temps de lecture plus courts pour pouvoir déterminer des concentrations élevés sans dépasser les limites de lecture du photomètre. CTNI Page 17
18 Hémoglobine A1c Pour avoir un résultats % HbA1c il y a plusieurs étape fait par l instrument. L Étalonnage de HbA1C en g/dl, utilisant 5 niveau, un courbe d étalonnage non-linéaire. L Étalonnage de l Hémoglobine en g/dl, utilisant 2 niveau, une courbe linéaire. Le Calcule du % HbA1C = (HbA1C/HB) x 100 La normalisation du %HbA1C utilisant les scalers % HbA1c normalisée = (B x (% HbA1c) 2 ) + (C x % HbA1c) + D HBA1C Etalonnage.xlsx Page 18
19 Avez-vous des questions? Page 19
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