Cônes PureSpeed. Pureté et concentration optimisées Cônes pour purification de Protéines

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1 Cônes PureSpeed Cônes pour protéine PureSpeed Pureté et concentration optimales Rapide moins de 15 minutes Traitement simultané de plusieurs échantillons Pureté et concentration optimisées Cônes pour purification de Protéines

2 Cônes pour protéine PureSpeed Flux de travail amélioré et pratique Protéine fonctionnelle pure et concentrée Concentration et pureté supérieures par rapport aux méthodes conventionnelles Purification d'anticorps et de protéines recombinantes, en microlitres ou en millilitres Traitement parallèle de 1 à 12 échantillons de protéine avec la pipette électronique E4 XLS de Rainin Plus rapide que les méthodes classiques : des échantillons purs en 15 minutes Protéines préservées - activité supérieure des protéines Aucune étape de concentration supplémentaire requise Les cônes pour protéines PureSpeed de Rainin simplifient grandement la purification des anticorps et des protéines recombinantes. Cette approche innovante permet d'obtenir des concentrations optimales de protéine purifiée, et offre de nombreuses possibilités pour les essais fonctionnels en aval. À l'inverse des méthodes utilisant des colonnes par gravité ou par centrifugation, le processus unique des cônes pour protéine PureSpeed fait passer l'échantillon de façon répétée à travers une couche de résine compacte sur un faible volume mort. Ainsi, le temps de contact avec la résine est contrôlé et la cinétique de fixation est améliorée. L'étape de lavage permet de supprimer tous les contaminants pouvant générer des faux positifs et l'étape finale d'élution à faible volume produit une protéine fonctionnelle hautement concentrée. Grâce au protocole de purification disponible sur les pipettes électroniques E4 XLS Rainin, les cônes PureSpeed constituent une méthode pratique, peu onéreuse et rapide (15 minutes) de purification de protéines en micro-volumes. Les cônes PureSpeed sont fournis en double coques contenant 12 cônes chacune et peuvent contenir trois types de résine : ProA et ProG pour la purification des anticorps ; IMAC pour les protéines recombinantes. 2

3 Développez vos applications grâce aux cônes PureSpeed Grâce à leur mise en pratique rapide, au flux de travail amélioré et aux faibles exigences de réactif, les cônes pour protéine PureSpeed de Rainin sont avantageux dans de nombreuses applications protéomiques : Essais fonctionnels Détermination structurelle Analyse d'expression cible Interactions protéine-protéine Développement d'essais Développement de processus Essais d'immunoprécipitation Tests de purification Reconnaissance des biomarqueurs Validation des biomarqueurs Analyse et sélection de banques d'échantillons Caractérisation du plomb Optimisation du plomb Analyse structurelle Analyses de protéine Essais précliniques Immunogénicité Préparer simultanément plusieurs échantillons Grâce aux pipettes électroniques Rainin E4 XLS 8 ou 12 canaux, il est possible de purifier plusieurs échantillons simultanément. La figure ci-contre montre comment les échantillons 1 à 6 (contrôles positif et négatif) peuvent être hautement purifiés puis enrichis simplement et rapidement. Chaque ligne de microplaque correspond à une phase du processus de purification. La pipette électronique E4 XLS aspire et distribue les solutions automatiquement. De plus, elle guide l'utilisateur au cours du processus. 3

4 Cônes pour protéine PureSpeed Capturer, purifier et enrichir PureSpeed simplifie votre flux de travail Les cônes pour protéines PureSpeed assurent un processus de purification plus rapide, plus simple et plus fiable, et permettent d'obtenir des protéines fonctionnelles pures et hautement concentrées. Résultat : meilleure productivité, réduction du gaspillage et des risques. La conception unique brevetée de la couche de résine compacte retient la résine dans le cône PureSpeed. Avec le mode PureSpeed, la pipette Rainin E4 XLS guide les utilisateurs tout au long du protocole, à chaque étape de purification. L'élution de la protéine nécessite des volumes de tampon réduits. La protéine présente ainsi une concentration maximale. Capturer la protéine cible La conception unique brevetée de la couche de résine compacte retient la résine dans le cône pour protéine PureSpeed. L'échantillon est aspiré dans le cône, la protéine cible se fixe à la résine et les protéines sans affinité et les contaminants sont extraits. L'échantillon est aspiré dans la résine de façon répétée, pour atteindre l'équilibre de fixation. Purifier l'échantillon de protéine Semblables à l'étape de capture, les étapes de lavage répétées permettent d'extraire les protéines non fixées et non spécifiques ainsi que les contaminants du cône PureSpeed. La protéine cible concentrée reste fixée à la couche de résine. Elution de la protéine enrichie En aspirant de façon répétée le tampon d'élution à travers le cône PureSpeed, vous déplacez la protéine cible concentrée de la résine vers un puits vide. Pour cette phase, un volume minimum de tampon d'élution est requis pour libérer la protéine cible pure. Vous obtenez ainsi la plus forte concentration possible. 4

5 Tout est plus facile avec la pipette Rainin E4 XLS Maîtrisez votre application de purification de protéine avec la pipette électronique Rainin E4 XLS. Que vous purifiiez un ou plusieurs échantillons, la pipette E4 XLS vous guide lors du protocole de purification. De plus, elle exécute automatiquement les étapes de capture, de purification et d'élution. Sélectionner le mode Une fois installé, PureSpeed devient le mode standard sur le carrousel d'options de la pipette E4 XLS. Personnaliser le protocole Qu'il s'agisse du volume d'échantillon, du débit ou du nombre de cycles, chaque paramètre du protocole de purification de protéine est facile à identifier et à optimiser en fonction des applications. Suivre le protocole Les protocoles PureSpeed sont grandement facilités par la boule de commande intuitive et simple d'utilisation, et par la structure de menus carrousel de la pipette E4. Les touches de la pipette E4 permettent à l'utilisateur de naviguer entre les différentes étapes du protocole. 5

6 Cônes pour protéine PureSpeed Purification IgG à l'aide de PureSpeed Hautes performances grâce à la pipette E4 XLS Les cônes pour protéine PureSpeed garantissent des concentrations maximales de protéines pures par rapport aux techniques standard de colonne par gravité ou par centrifugation. Lors de deux expériences parallèles, un pré-mélange d'échantillon a été préparé et purifié grâce aux technologies standard de colonne de centrifugation et de gravité en suivant les instructions du fabricant, et à l'aide des cônes pour protéine PureSpeed. Après comparaison des données finales de concentration et de pureté, les cônes PureSpeed affichaient des résultats bien supérieurs. Expérience Un lysat d'e.coli est enrichi avec higg (Sigma-Aldrich ) pour obtenir une concentration finale de 0,5 mg/ml. 100 μl ou 500 μl de lysat sont purifiés à l'aide des protocoles PureSpeed recommandés et d'une pipette Rainin E4 XLS. À titre de comparaison, des expériences de purification similaires ont été effectuées avec la même substance de départ et des colonnes de centrifugation standard, en suivant les protocoles recommandés par le fabricant pour une concentration et une pureté maximales. Une expérience similaire a été menée avec un lysat d'e.coli (concentration hlgg : 0,01 mg/ml) à l'aide de cônes PureSpeed et des colonnes par gravité standard. Résultats Les gels représentés dans les figures 1 et 2 sont des gels NuPAGE 4 12 % Bis-Tris pour électrophorèse avec tampon MES en cours. Après élution totale, un échantillon de 4 ou 10 µl a été chargé dans chaque gel. Le taux de récupération et le rendement ont été déterminés à l'aide de la méthode HPLC. 75 % de la masse lgg d'origine ont été récupérés à l'aide des cônes pour protéine PureSpeed. Les échantillons affichaient une pureté de 95 %, comme l'indiquent les gels. De plus, la concentration finale de la protéine après élution via les cônes PureSpeed était 2 à 3 fois plus élevée que celle de l'échantillon initial. Point de discussion Les colonnes par gravité et de centrifugation nécessitent des volumes de résine bien plus importants que le protocole PureSpeed. Les concentrations sont donc plus faibles et le produit est moins pur. Grâce aux cônes pour protéine PureSpeed, les échantillons normalement réservés aux colonnes par gravité peuvent être traités plus rapidement et de façon groupée, jusqu'à 12 en parallèle. De plus, les chercheurs obtiennent des rendements et des concentrations élevés, avec des quantités de résine moindres par rapport aux colonnes par gravité. Ils réalisent ainsi des économies significatives. La quantification de protéines a été effectuée sur 10 µl d'éluant à l'aide de la méthode HPLC. La masse totale et la concentration finale de la protéine purifiée ont été évaluées (voir tableaux). 6

7 Données HPLC indiquant la concentration finale de protéine et le rendement total des cônes PureSpeed et des technologies concurrentes. Figure 1 Gel NuPAGE contenant un lysat d'e. coli avec une concentration de hlgg de 0,5 mg/ml purifié à l'aide des cônes PureSpeed et d'une colonne de centrifugation. Voie 1 : Protein Ladder Voie 2 : Lysat d'e.coli avec faible concentration de hlgg Voie 3 : Gravité Voie 4 : 100 µl de lysat purifié dans la colonne de centrifugation avec 200 µl de résine ProA Voie 5 : 100 µl de lysat purifié dans des cônes PureSpeed avec 5 µl de résine ProA Voie 6 : 500 µl de lysat purifié dans la colonne de centrifugation avec 200 µl de résine ProA Voie 7 : 500 µl de lysat purifié dans des cônes PureSpeed avec 20 µl de résine ProA L Type de colonne/volume de résine/ Volume d'échantillon initial Volume d'élution (µl) Concentration (mg/ml) Rendement total (µg) Colonne de centrifugation 200 µl 100 µl 434,1 0,08 35 Colonne de centrifugation 200 µl 100 µl 440,4 0,07 30 Colonne de centrifugation 200 µl 100 µl 441,1 0,06 26 PureSpeed 200 µl Cône pour protéine 5 µl 100 µl 15,4 1,45 22 PureSpeed 200 µl Cône pour protéine 5 µl 100 µl 16,6 1,35 22 PureSpeed 200 µl Cône pour protéine 5 µl 100 µl 17,3 1,45 25 Colonne de centrifugation 200 µl 500 µl 414,3 0, Colonne de centrifugation 200 µl 500 µl 423,0 0, Colonne de centrifugation 200 µl 500 µl 425,1 0, PureSpeed µl Cône pour protéine 20 µl 500 µl 70,1 1, PureSpeed µl Cône pour protéine 20 µl 500 µl 70,6 1, PureSpeed µl Cône pour protéine 20 µl 500 µl 79,4 1, Figure 2 Gel NuPAGE contenant un lysat d'e. coli avec une concentration de hlgg de 0,01 mg/ml purifié à l'aide des cônes PureSpeed et d'une colonne par gravité. Voie 1 : Protein Ladder Voie 2 : Lysat d'e.coli avec faible concentration de hlgg Voie 3 : Gravité Voie 4 : 5 ml de lysat purifié dans la colonne par gravité avec 1 ml de résine ProA Voie 5 : 5 ml de lysat purifié dans des cônes PureSpeed avec 80 µl de résine ProA L Type de colonne/volume de résine/ Volume d'échantillon initial Volume d'élution (µl) Concentration (mg/ml) Rendement total (µg) Colonne par gravité 1 ml 5 ml ,002 2,1 Colonne par gravité 1 ml 5 ml ,002 2,2 Cône µl pour protéine PureSpeed 80 µl 5 ml 294 0,11 32,3 7

8 Des millilitres aux microlitres... Purification de protéine radicalement simplifiée Le kit de démarrage Rainin inclut tous les éléments nécessaires pour commencer. Il inclut une pipette électronique E4 XLS configurée avec le protocole de purification automatisé, un manuel d'instructions et tous les accessoires requis pour effectuer des purifications de protéine. Modèle Référence MT Description Cônes et accessoires PureSpeed PT-2-A Résine ProA 5 µl, cônes 200 µl, lot de 12 PT-2-A Résine ProA 20 µl, cônes 200 µl, lot de 12 PT-2-G Résine ProG 5 µl, cônes 200 µl, lot de 12 PT-2-G Résine ProG 20 µl, cônes 200 µl, lot de 12 PT-2-N Résine IMAC 5 µl, cônes 200 µl, lot de 12 PT-2-N Résine IMAC 20 µl, cônes 200 µl, lot de 12 PT-10-A Résine ProA 20 µl, cônes µl, lot de 12 PT-10-A Résine ProA 80 µl, cônes µl, lot de 12 PT-10-G Résine ProG 20 µl, cônes µl, lot de 12 PT-10-G Résine ProG 80 µl, cônes µl, lot de 12 PT-10-N Résine IMAC 20 µl, cônes µl, lot de 12 PT-10-N Résine IMAC 80 µl, cônes µl, lot de 12 PT-ACC Accessoires PureSpeed LR-P2-96P Bloc de 96 puits 2,2 µl Kits de démarrage PureSpeed PT-S2-A Kit de démarrage PureSpeed avec E4-200XLS + ProA PT-S2-G Kit de démarrage PureSpeed avec E4-200XLS + ProG PT-S2-N Kit de démarrage PureSpeed avec E4-200XLS + IMAC PT-S10-A Kit de démarrage PureSpeed avec E4-1000XLS + ProA PT-S10-G Kit de démarrage PureSpeed avec E4-1000XLS + ProG PT-S10-N Kit de démarrage PureSpeed avec E4-1000XLS + IMAC Cônes Rainin PureSpeed compatibles avec les pipettes E4 XLS LTS uniquement. Rainin, Pipetting 360 et LTS sont des marques déposées et E4, XLS et PureSpeed sont des marques de Rainin Instrument, LLC. NuPAGE est une marque déposée d'invitrogen, Inc. Sigma-Aldrich est une marque déposée de Sigma-Aldrich Company, LLC. Pour plus d informations Rainin Instrument, LLC 7500 Edgewater Drive, Oakland, CA T: a METTLER TOLEDO Company Sous réserve de modifications techniques. 04/2013 Rainin Instrument, LLC Imprimé sur demande du contenu en ligne. H