Plaque de numération des levures et des moisissures PetrifilmMC

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1 3 Plaque de numération des levures et des moisissures MC Guide d interprétation Ce guide vise à vous familiariser avec les résultats des plaques de numération des levures et des moisissures MC 3M MC. Pour obtenir de plus amples renseignements, veuillez communiquer avec le représentant des produits de microbiologie 3M le plus près de chez vous. La plaque de numération des levures et des moisissures MC est un support de culture prêt à l emploi qui contient un agent gélifiant hydrosoluble à froid, des nutriments et un colorant indicateur pour faciliter la différenciation et la numération. Numération totale = 20 Numération des levures = 16 Numération des moisissures = 4 Cette plaque de numération des levures et des moisissures contient des colonies de levures et des colonies de moisissures. 1

2 Plaque de numération des levures et des moisissures 3M MC MC 2 3 Numération des levures et des moisissures = 0 La figure 2 montre une plaque de numération sans levures ni moisissures. Numération totale estimée ~ 500 Numération estimée des levures ~ 480 Numération des moisissures = 21 Estimer la numération lorsque le nombre de colonies dépasse 150. Déterminer le nombre moyen de colonies dans un carré (1 cm 2 ) et le multiplier par 30 pour obtenir la numération totale par plaque. La dimension du milieu inoculé est d environ 30 cm 2. La couleur des colonies de levures peut aller de havane (dans cet exemple) à rose et à bleu vert. Numération estimée des levures ~ Trop nombreuses pour être dénombrées (numération réelle >10 4 ) La plaque de numération de la figure 4 contient un nombre de colonies de levures trop élevé pour être calculé. Même si elles sont moins visibles, les petites colonies bleues apparaissant sur le bord de la plaque (mises en évidence dans l encadré) se retrouvent sur toute la plaque. 4 Numération estimée des moisissures ~ 64 Les colonies de moisissures de la figure 5 commencent à s entasser et à se chevaucher sur la plaque. Compter chaque bordure de colonies ou milieu. La plaque peut être divisée en sections pour faciliter la numération. Dans cet exemple, environ 1/4 de la plaque a été dénombrée, le résultat de la numération de colonies a donc été multiplié par 4 pour obtenir une numération estimée. La section illustrée contient 16 moisissures. 5

3 6a Numération des moisissures ~ Trop nombreuses pour être dénombrées Réaction à la phosphatase 6b Numération des moisissures = 64 Les plaques des figures 6a et 6b proviennent du même échantillon. La figure 6a présente une dilution 1:10 et des colonies petites, faibles et nombreuses, ce qui les rend difficiles à compter. La figure 6b présente une dilution 1:100 et montre comment un produit de dilution destiné à obtenir une numération de colonies inférieure à 150 facilite la numération. Comme avec la plupart des milieux de croissance, dans un milieu très compétitif (comme celui de la figure 6a), la croissance typique des colonies sera inhibée. Dans le cas des échantillons très contaminés comme ceux-là, il est recommandé d utiliser un facteur de dilution plus élevé pour obtenir une numération plus précise et une croissance des colonies plus typique (comme dans la figure 6b). 7 8 Numération des levures et des moisissures = 0 Numération des levures et des moisissures = 0 Les plaques de numération des levures et des moisissures font appel à un colorant indicateur de la phosphatase. Les produits alimentaires contenant de la phosphatase peuvent donc faire virer la couleur au bleu sur la plaque de numération des levures et des moisissures. Deux types de changements de couleur sont parfois observés : un fond bleu uniforme ou vif, et des taches bleues. La figure 7 présente un fond bleu uniforme et la figure 8, des taches bleu vif apparaissent souvent avec les épices ou les produits granulés. La figure 8 présente également des particules d aliment qui produisent la phosphatase. Pour réduire la réaction à la phosphatase, suivre une ou plusieurs de ces techniques : 1. Diluer l échantillon : Une dilution plus élevée de l échantillon aura pour effet de minimiser le fond bleu ou de réduire le nombre de taches bleu vif. 2. Préparer l échantillon : Mélanger l échantillon et le laisser reposer de 3 à 5 minutes avant la mise en culture. Prélever un échantillon du centre du contenant de l échantillon ou utiliser un sac d homogénéisation avec filtre pour éviter que de grosses particules se retrouvent dans la mise en culture. 3. Vérifier et noter : Observer les plaques après 24 à 36 heures d incubation et noter tout changement de couleur afin de faciliter l interprétation finale.

4 Plaque de numération des levures et des moisissures 3M MC MC Rappels Pour obtenir les mises en garde, l exonération de garanties / limitation de recours, la limite de responsabilité de 3M, les renseignements relatifs à l entreposage et à la mise au rebut ainsi que le mode d emploi, consulter le feuillet d information dans l emballage. Entreposage Entreposer les pochettes de plaques Pour refermer une pochette ouverte, non ouvertes à 8 C ( 46 F). rabattre le bord et apposer un ruban. Les utiliser avant la date de péremption indiquée sur la pochette. Juste avant d utiliser les plaques congelées, attendre qu elles soient à la température de la pièce pour les ouvrir. Pour obtenir de plus amples renseignements, consulter le feuillet d information dans l emballage. Préparation de l échantillon Pour éviter l exposition à l humidité, ne pas réfrigérer les pochettes ouvertes. Ranger les pochettes dans un endroit frais et sec pendant un mois maximum. Éviter d exposer les plaques à une température supérieure à 25 C (>77 F) et/ou à une humidité relative de plus de 50 %. Ajouter la quantité appropriée d un des diluants stériles suivants : solution tampon Préparer la dilution du produit alimentaire. Peser ou déposer le produit alimentaire dans un contenant stérile comme un sac d homogénéisation ou une fiole de dilution. Inoculation phosphate de Butterfield, (tampon phosphate IDF, 0,0425 g/l de KH 2 PO 4, ajuster le ph à 7,2), eau peptonée à 0,1 %, diluant salin peptoné (méthode ISO ), solution saline (0,85 à 0,90 %), bouillon de culture «Letheen» sans bisulfite ou eau distillée. Ne pas utiliser de solution tampon contenant du citrate, du bisulfite ou du thiosulfate, car ils peuvent inhiber la croissance bactérienne. Si une solution tampon contenant du citrate est recommandée dans la méthode standard, la remplacer par une des solutions tampons énumérées ci-dessus, réchauffée à C. Mélanger ou homogénéiser l échantillon selon la méthode en vigueur. Il n est pas nécessaire d ajuster le ph d un échantillon, mais il est possible d utiliser un échantillon dont le ph a été ajusté Placer la plaque sur une surface de niveau. Soulever la pellicule supérieure. Placer le pipetteur électronique 3M MC ou l équivalent perpendiculairement à la plaque, déposer 1 ml d échantillon ou d échantillon dilué au centre de la pellicule inférieure. Laisser retomber la pellicule supérieure sur l échantillon. Suite à la page suivante

5 Placer l étaleur de levures et moisissures au centre de la plaque Soulever l étaleur et attendre une Répartir l échantillon en exerçant une légère pression au centre de l étaleur. minute pour permettre au gel de se de numération. L étaleur ne doit pas être tourné ou glissé. solidifier. Incubation Interprétation <70 F Incuber les plaques, la pellicule transparente vers le haut, en piles de 20, à 20 C - 25 C pendant 3 à 5 jours. (Puisque certaines moisissures peuvent croître rapidement, il peut être utile de lire et de dénombrer les plaques après 3 jours, car les plus petites colonies peuvent être masqués par la prolifération des moisissures après 5 jours. Advenant que cela se produise, on peut utiliser le résultat de la numération après 3 jours. Il faut cependant le consigner comme une numération estimée.) Les plaques peuvent être dénombrées en utilisant la méthode standard de numération des colonies ou une loupe éclairée. Liste des méthodes : États-Unis * Numération des levures et des moisissures dans les aliments : Méthode officielle de l AOAC Canada * Échantillonnage environnemental : Plaques de numération des levures et des moisissures méthode MFLP-41A * Produits et ingrédients alimentaires : Plaques de numération des levures et des moisissures méthode MFHPB-32 Renseignements supplémentaires Questions? Au Canada, composez le Pour commander des plaques au Canada, composez le , poste 6549 Les Produits de microbiologie de 3M offre une gamme complète de produits qui répondront à bon nombre de vos besoins en matière d'analyse microbienne. Pour obtenir de plus amples renseignements sur les plaques, visitez notre site à l'adresse

6 Différenciation macroscopique Si vous devez distinguer les colonies de levures des colonies de moisissures sur les plaques de numération, recherchez une ou plusieurs des caractéristiques énumérées ci-dessous. Numération des levures = 43 La figure 9 montre des colonies de levures typiques. Voici des caractéristiques propres aux colonies de levures : Elles sont petites. Elles ont des arêtes définies. Leur couleur peut aller de havane à bleu vert. Elles peuvent paraître soulevées. Leur couleur est généralement uniforme. Aucun milieu au centre (centre foncé). Différenciation microscopique 9 10 Numération des moisissures = 29 La figure 10 montre des colonies de moisissures typiques. Voici des caractéristiques propres aux moisissures : Elles grossissent. Elles ont des arêtes diffuses. Leur couleur peut varier car les moisissures produisent divers pigments (c.-à-d. brun, beige, orange, bleu vert). Elles semblent aplaties. La colonie présente généralement un milieu au centre (c.-à-d. un centre de couleur plus foncée ou différente). Les levures et les moisissures étant étroitement liées, il n est pas facile de les distinguer sans un examen microscopique. Figure 11 Figure 12 Figure 13 Figure 14 Figure 15 Pour isoler les colonies afin de permettre une identification plus poussée, soulever la pellicule supérieure. À l aide d une anse ou d un instrument similaire, prélever la colonie dans le gel. Transférer la colonie sur une goutte d eau stérile que l on dépose sur une lame de microscope. La recouvrir d une lamelle et examiner au microscope. Les levures sont généralement de forme ovale et ont l air de bourgeonner. Les moisissures apparaissent généralement sous forme de ramifications ou de filaments (mycélium). La plaque ci-dessus représente des moisissures à diverses étapes de germination. 3 Produits de microbiolgie 3M Canada Case postale 5757 London (Ontario) N6A 4T1 Canada Imprimé au Canada 3M MS F