Biotechnologies de la Reproduction chez les oiseaux domestiques. E. Blesbois et J.P. Brillard

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1 Biotechnologies de la Reproduction chez les oiseaux domestiques. E. Blesbois et J.P. Brillard

2 Biotechnologies de la Reproduction: Méthodes technologiques permettant d améliorer les capacités de Reproduction et le transfert de tout ou partie du génôme d une génération à une autre. => Intervention technique humaine Ce sont des outils - d évaluation des paramètres impliqués dans la Reproduction, - de management des reproducteurs (élevage optimisé par sexe), - de gestion des ressources génétiques (gènes d intérêt, biodiversité) Méthodes chez les oiseaux : depuis l insémination artificielle jusqu au transfert de gènes

3 I Insémination artificielle Largement utilisée depuis longtemps pour optimiser le management des deux sexes chez le dindon, la pintade, le canard mûlard. Outil généralisé de tri employé par les sélectionneurs et Généticiens. Permet aussi des transferts géographiques de matériel génétique.

4 II Conservation de la semence a) Conservation courte ( 48h) = conservation au dessus de 0 C. Inhérente à l utilisation d Insémination Artificielle. Equilibre toujours à réévaluer entre la qualité de la semence, La composition des dilueurs, la température de conservation et Les conditions d insémination.

5 II b) Conservation à long terme de la semence = Congélation ou Cryopréservation. Buts : - Conservation et valorisation de gênes d intérêt - Gestion de la biodiversité (Gestion ex situ) - Outil possible, mesure du progrès génétique Méthodes : vraiment au point chez Gallus gallus. Points critiques : qualité de la semence, vitesses de refroidissement et réchauffement, agent cryoprotecteur

6 II Exemples de taux de fertilité obtenus avec du sperme congelé chez les oiseaux domestiques Coqs Dindon Jars Fertilité moyenne (F/I) (min-max) 60 [10-90] 30 [5-65] 60 [30-70] Nombre moyen de poussin attendu par éjaculat F/I: pourcentage d oeufs fertiles/incubés (Blesbois et Labbé, 2003)

7 III Conservation et transfert de cellules embryonnaires Ni transfert ni conservation d embryons totaux (œuf thélolecithe) => transfert de cellules embryonnaires

8 Production de chimères germinales chez le poulet Collecte de cell blastodermales (kino et al 1997) CGPs Circulantes (Naïto et al 1994) CGPs Gonadiques (Tajima et al 2001) congélation (DMSO) Réchauffement, centrifugation Introduction embryon recipient Chimères Somatiques+ germinales Chimères germinales Chimères germinales

9 Collecte de CPGs ou cellules Blastodermales Cryopreservation De CGPs ou cellules blastodermales Transfert dans embryon récepteur lignée génétique d interêt Chimères germinales Cryopreservation De spermatozoïdes Récupération de la Lignée

10 IV Biotechnologies tournées vers le transfert de gènes à des fins industrielles et thérapeutiques 1) - Transfert d ADN via l ovocyte ou les spermatozoïdes à l aide de constructions retro ou adenoretrovirales 2) - Via des embryons cultivés in vitro après FIV 3) - Via des cellules ES transformées suivies de transfert nucléaire dans un ovocyte récipient 4) - Via des spermatogonies souches Actuellement : peu de succès, peu répétable, très honéreux

11 . V Inversion de sexe Objectif : transformer le sexe non utilisé chez pondeuses, mûlard œufs femelles (ZW) (4.5 jours d incubation) Traité ( J4 ) Inhibiteur d Aromatase Neo-Males (Vaillant et al, 2003)

12 Conclusions Les biotechnologies de la Reproduction regroupent des technologies très variées qui servent de moyen d étude de la physiologie animale et présentent aussi de nombreuses applications, depuis la gestion des ressources génétiques jusqu au systèmes d élevage. Enjeux généraux de gestion de la biodiversité Enjeux d élevage : conduite des reproducteurs Enjeux particuliers de production de protéines recombinantes

13 Choix thématiques du laboratoire SRA : - Qualité de la semence et aptitude à la conservation in vitro - Spermatogonies souches comme outils de transgénèse -Différenciation sexuelle et inversion de sexe