Analyse d échantillons alimentaires pour la présence d organismes génétiquement modifiés

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1 Analyse d échantillons alimentaires pour la présence d organismes génétiquement modifiés Module 3 Échantillons utilisés durant le cours M. Querci, N. Foti WORLD HEALTH ORGANIZATION REGIONAL OFFICE FOR EUROPE ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE BUREAU REGIONAL DE L'EUROPE WELTGESUNDHEITSORGANISATION REGIONALBÜRO FÜR EUROPA ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЕВРОПЕЙСКОЕ РЕГИОНАЛЬНОЕ БЮРО

2 Échantillons utilisés durant le cours 2 Table des matières Module 3 Échantillons utilisés durant le cours MATERIAUX DE REFERENCE CERTIFIES 3 COMPOSITION DES MATERIAUX BRUTS ET TRANSFORMES DISTRIBUES AUX PARTICIPANTS 4 LISTE DES ECHANTILLONS DISTRIBUES DURANT LE COURS 6 RESULTATS ESCOMPTES PAR PCR 6 REFERENCES 7

3 Échantillons utilisés durant le cours 3 Échantillons utilisés durant le cours Durant le cours, nous testerons différentes méthodes permettant de détecter la présence de maïs MON810 et de soja Roundup Ready dans divers matériels. Pour cela nous utiliserons des mélanges de maïs (MON810) et de graines de soja (soja Roundup Ready ) GM et non GM respectivement en différentes concentrations. Deux types de matériau seront utilisés : d une part, des matériels de référence certifiés et d autre part, différents matériels bruts et transformés qui seront distribués aux participants. Matériels de Référence Certifiés Les extraits de végétaux bruts qui seront utilisés durant le cours sont des Matériels de Référence Certifiés (CRM) IRMM-410S (soja Roundup Ready ) et IRMM-413 (maïs MON810). L IRMM-410S et l IRMM-413 se composent deux séries de CRM à base de poudre déshydratée de soja et de maïs respectivement avec différentes fractions de masse (0, 0,1, 0,5, 1, 2 et 5%) de poudre déshydratée préparée à partir de soja Roundup Ready et de maïs MON810 génétiquement modifiés. Les CRM ont été fabriqués par l Institut de Matériaux et de Mesures de Référence (IRMM - pour le compte de Fluka Chemie AG (Buchs, Suisse) dans le cadre d une collaboration avec l Institut de la Santé et de la Protection des Consommateurs (IHCP -http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/) du Centre Commun de Recherche de la Commission Européenne (Ispra, Italie) (Trapmann et al., 2002 et 2001). Ces matériels servent à valider les méthodes utilisées pour détecter les aliments génétiquement modifiés. Vu que la quantification de l ADN ou des protéines peut dépendre des variétés, il convient de faire preuve de prudence au moment de tirer des conclusions quantitatives à partir des mesures effectuées sur des échantillons inconnus. La poudre de soja déshydratée à base de Roundup Ready génétiquement modifié est produite à partir de graines entières d une lignée de soja non modifiée (Asgrow A1900) et de soja Roundup Ready issu de l événement génétiquement modifié (lignée Asgrow AG5602 RR). La poudre de maïs déshydratée à base de maïs GM MON810 a été obtenue à partir de grains entiers du cultivar DK512 non modifié et du cultivar MON810 DK513.

4 Échantillons utilisés durant le cours 4 Composition des matériels bruts et transformés distribués aux participants Nous testerons différents matériels : des biscuits, des petits gâteaux cuits, des encas écrasés et de la farine. Matériels bruts Farine mélangée : afin d obtenir 0,5% de chaque événement OGM (poids total sec), 1% de soja RR (IRMM-410S) a été ajouté à 1% de maïs MON810 (IRMM-413). 50 mg des deux farines ont été pesés et ajoutés directement dans des tubes de réaction prêts pour l extraction d ADN. La farine MON810 à 1% est un matériau de référence certifié IRMM-413 (1% de maïs MON810). En-cas écrasés Cet échantillon est tiré de tests d aptitude de détection d OGM (système GeMMA, Round 06, matériel de test GMO-06B). Le matériau a été préparé à partir d en-cas déshydraté à base de soja sans GM disponibles dans le commerce et d en-cas à base de soja GM. En-cas écrasé 1372 g d en-cas écrasé sans GM, 28 g d en-cas écrasé avec GM Avant d être malaxés, les deux matériels ont été moulus, puis tamisés afin d obtenir un mélange de mie homogène, puis mélangés pendant la nuit. Le mélange a enfin été malaxé pendant environ une heure dans un malaxeur rotatif. Les matériels ont été conservés à -20 C. Biscuits Le matériel a été produit par l Institut de la santé et de la protection des consommateurs du CCR et utilisé en vue de valider une méthode PCR pour le soja Roundup Ready et pour le maïs Maximizer (Bt-176) dans des fractions d aliment transformé (Lipp et al., 2001). Le soja déshydraté et la farine extraite du maïs ont été pesés et mélangés avec les autres ingrédients dans les proportions indiquées ci-dessous. Les ingrédients ont été soigneusement mélangés avec 600 ml d eau jusqu à obtention d'une masse homogène.

5 Échantillons utilisés durant le cours 5 Biscuits n g de maïs (0% d OGM), 250 g de soja (0% d OGM), 300 g de farine de froment, 200 g de sucre, 100 g de beurre, 10 g de sel, 16 g de poudre fermentante à la vanille, 2 œufs Celle-ci a ensuite été étalée uniformément sur une plaque de cuisson, puis cuite pendant 10 minutes dans un four à chaleur tournante préchauffé à 180 C. La masse a été retirée du four, couverte en vue d éviter toute contamination et mis à refroidir jusqu à température ambiante. La conservation s est faite à -20 C. Poudre de lait de soja Cet échantillon provient du test d aptitude de détection d OGM Round 05 GeMMA g de poudre de lait de soja d origine américaine ont été mélangés pendant toute la nuit avec 300 g d isolat de protéine de soja Roundup Ready. Des souséchantillons individuels (10 g) ont été dispersés dans des récipients en plastique fermés par un bouchon à visse, puis stockés à température ambiante avant la distribution. Biscuits MON810 Ce matériel est issu de la fabrication de l unité Biotechnologie et OGM du CCR. De la farine extraite de maïs déshydraté a été pesée et mélangée aux autres ingrédients dans les proportions indiquées ci-dessous. Biscuits MON g de farine de froment, 100 g de farine de maïs* (2 * % OGM), 150 g de sucre, 100 g de beurre, 1 œuf * La farine de maïs MON810 à 2% a été obtenue en ajoutant de la farine de maïs conventionnel à de la farine 100% MON810 et en malaxant le tout pendant 30 minutes. Les ingrédients ont été soigneusement mélangés, puis étalés uniformément sur une plaque et cuits pendant 10 minutes dans un four à chaleur tournante préchauffé à 180 C. Le matériel a ensuite été retiré du four, puis couvert pour éviter la contamination et mis à refroidir jusqu à température ambiante. La conservation s est faite à 4 C aussi longtemps que nécessaire.

6 Échantillons utilisés durant le cours 6 Liste des échantillons distribués durant le cours Échantillon Caractéristiques % d OGM (ingrédient spécifique) Soja RR Maïs MON810 Biscuits #1 0% 0% Farine mélangée 1% 1% Farine MON810-1% En-cas écrasé 2,2% - Poudre de lait de soja 8,9% - Biscuits MON810-2% Résultats escomptés par la PCR Échantillon zéine lectine 35S nos E35S/hsp70(b) CTP/EPSPS IRMM- 410S-0 (0%) IRMM- 410S-1 (0,1%) IRMM- 410S-2 (0,5%) IRMM- 410S-3 (1%) IRMM- 410S-4 (2%) IRMM (0%) IRMM (0,1%) IRMM (0,5%) IRMM (1%) IRMM (2%) Biscuits # Farine mélangée Farine MON En-cas écrasé Poudre de lait de soja Biscuits MON

7 Échantillons utilisés durant le cours 7 Références Lipp, M., Bluth, A., Eyquem, F., Kruse, L., Schimmel, H., Van den Eede, G. and Anklam, E. (2001). Validation of a method based on polymerase chain reaction for the detection of genetically modified organisms in various processed foodstuffs. European Food Research Technology 212, Lipp, M., Brodmann, P., Pietsch, K., Pauwels, J. and Anklam, E. (1999). IUPAC collaborative trial study of a method to detect genetically modified soy beans and maize in dried powder. Journal of AOAC International 82, Trapmann. S., Catalani, P., Conneely, P., Corbisier, P., Gancberg, D., Hannes, E., Le Guern, L., Kramer, G. N., Prokisch, J., Robouch, P., Schimmel, H., Zeleny, R., Pauwels, J., Van den Eede, G., Weighardt, F., Mazzara, M. and Anklam, E. (2002). The certification of reference materials of dry-mixed soja powder with different mass fractions of Roundup Ready soja. Certified Reference Materials IRMM-410S. (https://irmm.jrc.ec.europa.eu/html/reference_materials_catalogue/catalogue/atta chements/erm-bf410_report.pdf). (Dernière connection Janvier 2010) Trapmann, S., Le Guern, L., Prokisch, J., Robouch, P., Kramer, G. N., Schimmel, H., Pauwels, J., Querci, M., Van den Eede, G. and Anklam, E. (2001). The certification of reference materials of dry-mixed maize powder with different mass fractions of MON810 maize. Certified Reference Materials IRMM-413. (https://irmm.jrc.ec.europa.eu/html/reference_materials_catalogue/catalogue/atta chements/erm-bf413_report.pdf). (Dernière connection Janvier 2010) GeMMA Scheme-GMO analysis Round 06. GMO Proficiency Testing, (October 2001). Report N. GMO 06. GeMMA Scheme-GMO analysis Round 05. GMO Proficiency Testing, (October 2001). Report N. GMO 05.

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