UTILISATION DE TESTS RAPIDES POUR LE DEPISTAGE PRECOCE DE L INFECTION A VIH CHEZ LES ENFANTS NES DE MERES INFECTEES PAR LE VIH
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- Andrée Clément
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1 , pp EDUCI AFFI-ABOLI R, DEMBELE B, KABRAN M, KACOU F, INWOLEY KA* UTILISATION DE TESTS RAPIDES POUR LE DEPISTAGE PRECOCE DE L INFECTION A VIH CHEZ LES ENFANTS NES DE MERES INFECTEES PAR LE VIH L infection à VIH a un impact considérable sur la mortalité des jeunes de moins de 5 ans. En Afrique Subsaharienne, environ 50 % des enfants contaminés meurent avant leur deuxième année et 80 % avant l âge de 5 ans. Cette situation dramatique s explique par le fait que, les techniques de biologie moléculaire, utilisées pour le dépistage précoce de l infection à VIH ne sont pas accessibles à tous les laboratoires des pays en développement. Il nous est apparu nécessaire de réaliser l évaluation des performances de quatre tests rapides : Determine TM HIV-1/ 2, Genie II HIV-1/ HIV-2, SD Bioline HIV-1/2 3.0 et JN-QC- Spot HIV 1/2 pour le dépistage précoce de l infection à VIH chez les enfants de 6 mois et de 12 mois nés de mères infectées par le VIH. L étude s est déroulée de Septembre 2006 à Février 2007 au CeDReS -CHU de Treichville, avec un panel de 979 sérums. Pour le calcul de la sensibilité et de la spécificité, les tests de référence étaient des tests de biologie moléculaire et deux tests RESUME ELISA : Murex HIV de ABBOTT et Vironostika HIV Uni-form II plus O de BIOMERIEUX. Il ressort de notre étude que les tests Determine et Genie II ont présenté des spécificités de 3,91% et 10,39% respectivement sur les prélèvements d enfants de 6 mois. Sur le panel de 12 mois, le test JN-QC-Spot a présenté les meilleures performances avec une spécificité de 98,59%. Les tests SD Bioline et Genie II ont donné des spécificités de 95,77% et 97,18% respectivement. Ces résultats montrent que le dépistage sérologique de l infection à VIH à l aide de tests rapides n est pas indiqué chez l enfant de 6 mois. Par contre, chez l enfant de 12 mois né de mère infectée par le VIH, l utilisation de tests rapides dans un algorithme est possible. Mots-clé : VIH, PTME, Dépistage précoce, Evaluation, Tests rapides 1- Département d Hématologie-Immunologie-Biologie Générale, UFR sciences pharmaceutiques et biologiques, Université Félix Houphouët Boigny Abidjan 2- Correspondance à adresser à INWOLEY André, 22 BP 551 Abidjan 22 Adresse électronique : inwoley@aviso.ci
2 6 HIV infection has a significant impact on the mortality of children under 5 years. In Sub-Saharan Africa, about 50% of infected children die before their second year and 80% before 5 years. This dramatic situation is explained by the fact that the molecular techniques, used for early detection of HIV infection are not available to all laboratories in developing countries. It became necessary to evaluate the performance of four rapid tests: Determine TM HIV-1/2, Genie II HIV-1/HIV-2, SD Bioline HIV-1/2 3.0 and JN-QC-SPOT HIV 1/2 for the early detection of HIV infection in 6 months and 12 months children aged born to HIV-infected mothers. The study was conducted from September 2006 to February 2007 at CeDReS-CHU Treichville, with a panel of 979 sera. To calculate sensitivity and specificity, the reference ABSTRACT tests were molecular biology tests and two ELISA: Murex HIV of ABBOTT and Vironostika HIV Uni-form II plus O of BioMérieux. Determine and Genie II presented a specificity of 3.91% and 10.39% respectively on samples from 6 months old children. On the panel of 12 months, the JN-QC-SPOT test has shown the best performance with a specificity of 98.59%. SD Bioline and Genie II tests gave specificities of 95.77% and 97.18% respectively. These results show that rapid tests are not indicated for the serological screening of 6 months old children. By cons, in 12 months old children born to HIV- infected mothers, the use of rapid tests in an algorithm is possible. Key words: HIV - PMTCT - Early Detection - Evaluation - Quick Tests La prise en charge pédiatrique de l infection à VIH constitue une préoccupation majeure de santé publique notamment dans les pays en voie de développement. En Côte d Ivoire, selon les estimations de l ONUSIDA, environ nouveaux enfants sont infectés chaque année et seulement 5190 enfants sur 63000, soit environ 8,2% étaient sous traitement antirétroviral (TARV) à la fin de l année 2010 (ONUSIDA, Décembre 2010). La mise sous traitement nécessite un diagnostic précoce du VIH. Cependant les pays en développement doivent faire face à la difficulté du diagnostic de l infection à VIH chez l enfant de moins de 18 mois en raison des problèmes d interprétation dus à la présence des anticorps maternels et conformément aux recommandations de l organisation mondiale de la santé (OMS) qui recommande le test de détection des INTRODUCTION anticorps anti-vih chez l enfant né de mère infectée par le VIH qu à partir du 15ème mois (référence). Ce test apparaît trop tardif quand on sait que la moitié des enfants infectés meurent avant l âge de 1 an (Vaz et al., 2003). La biologie moléculaire (PCR) reste la méthode de dépistage précoce indiquée dans ce cas (OMS-AFRO, 2001). Au cours de l année 2011, femmes enceintes ont été testées positives pour le VIH alors que seulement 4% (844) enfants (4%) nés de mères séropositives ont subi le test virologique au cours de leurs deux premiers mois de vie. (CONSEIL NATIONAL DE LUTTE CONTRE LE SIDA Côte d Ivoire, 2012). Du fait des difficultés liées à la mise en place du plateau technique de biologie moléculaire, seuls deux laboratoires nationaux sont dédiés au diagnostic moléculaire (PCR) et au suivi virologique des personnes vivant avec
3 7 le VIH. Ces laboratoires sont tous situés à Abidjan, et ceci a pour conséquence de retarder la prise en charge pédiatrique de l infection à VIH. Les prélèvements sont faits sur les sites et convoyés à Abidjan. Depuis plus de 5 ans, certains auteurs proposent l utilisation des tests sérologiques notamment les tests rapides de dépistage, chez l enfant de moins de 15 mois. Ce qui constituerait une alternative de choix pour le dépistage précoce de l infection à VIH chez l enfant car ces tests sont faciles à mettre en œuvre, de coûts relativement faibles et réalisables dans les laboratoires périphériques. Aussi, dans le souci de promouvoir l utilisation de ces tests rapides chez les enfants de moins de 18 mois nés de mères infectées par le VIH, nous avons envisagé l évaluation de quatre tests rapides (Determine HIV-1/ 2, Genie II HIV-1/ HIV-2, SD Bioline HIV-1/ et JN-QC-Spot HIV1/ 2) chez les enfants de 6 et 12 mois. Le but était de proposer un algorithme utilisant des tests rapides pour le dépistage précoce de l infection à VIH chez l enfant de moins de 18 mois né de mère infectée par le VIH. SPÉCIMENS D ÉTUDE Nous avons conduit une étude d évaluation de tests de dépistage rapide sur un panel de 979 échantillons de sérum sélectionnés dans la sérothèque du Centre de Diagnostic et de Recherche sur le Sida et les infections opportunistes (CeDReS) sis au CHU de Treichville à Abidjan, Côte d Ivoire, de Septembre 2006 à février Il s agissait d échantillons de sérum d enfants nés de mères infectées par le VIH et appartenant au projet DITRAME PLUS. L objectif du projet DITRAME PLUS était d évaluer l efficacité d une combinaison thérapeutique de Zidovudine (AZT), de Lamivudine (3TC) et de Névirapine (NVP) administrée en peri-partum à la femme enceinte et au nouveau-né dans la réduction de la transmission mère-enfant du VIH-1 estimée à l âge de six semaines, par rapport à un régime court d AZT en monothérapie. (Dabis et al., 2005) CRITÈRES DE SÉLECTION Ont été inclus dans notre étude les échantillons de sérum issus de prélèvements répondant aux critères suivants:(i) les prélèvements étaient réalisés à l âge de 6 mois (M6) ou à l âge MATERIEL ET METHODES de 12 mois (M12) chez les enfants nés de mères incluses dans le projet DITRAME PLUS (ii) les prélèvements disponibles dans la sérothèque du CeDReS, (iii) les prélèvements d enfants pour lesquels il y avait un résultat de certitude (résultat de sérologie à l âge de 18 mois (M18) et/ou résultats de charges virales positifs avant l âge de 12 mois). A ces critères sur les prélèvements a été rajouté un critère lié à la quantité de tests rapides de dépistage disponibles pour la présente évaluation. Au total, notre panel était constitué de 477 prélèvements à M6 et 502 prélèvements à M12. TESTS DE RÉFÉRENCE Tous les échantillons de notre panel avaient des résultats de certitude pour l infection à VIH connus car les échantillons avaient été analysés au préalable avec les techniques de biologie moléculaire et/ou avec l algorithme de dépistage sérologique du CeDReS. Les techniques de biologie moléculaire utilisées étaient la technique de PCR en temps réel ou la technique branched DNA (bdna). Le statut sérologique VIH (M18)
4 8 a été déterminé avec les tests ELISA de 3 ème génération référence du CeDReS. Il s agissait de Vironostika HIV Uni-form II plus O (BIOMERIEUX, France) et de Murex (ABBOTT, Philippines). La répartition du nombre d enfants dépistés en fonction de la période et de l analyse biologique effectuée a été résumée dans le tableau I. Tableau I : Répartition du nombre d enfants dépistés en fonction de la période et de l analyse biologique effectuée. BIOLOGIE MOLECULAIRE TESTS SEROLOGIQUES NOMBRE D ENFANTS TIMING J2, S4, S6 M6 M12 M18 POS DEPISTES NEG TOTAL EVALUATION DES TESTS Les échantillons ont été décongelés puis homogénéisés avant la réalisation des tests. Les tests ont été réalisés selon les recommandations des fabricants. Le nombre d échantillons utilisé à chaque point (M6 et M12) pour chaque test dépendait de la quantité de tests disponibles. Les tests évalués étaient pour le panel M12 : Determine TM HIV-1/2 (ABBOT, France) Génie II HIV-1/HIV-2 (Bio-Rad Laboratories Inc. France), SD Bioline HIV 1/2 3.0 (STANDARD DIAGNOSTICS, Republic of Korea) et JN-QC-Spot TM HIV 1/2 (JN-International Medical Corporation, USA), et pour le panel M6 : Determine TM HIV-1/2. et Genie II HIV-1/HIV-2. ANALYSE STATISTIQUE Les résultats de biologie moléculaire et des tests sérologiques réalisés au CeDReS ont été utilisés comme les résultats de référence pour le calcul de la sensibilité, la spécificité et le pourcentage de discordants. Les performances des tests évalués étaient déjà connues sur les échantillons de sujets âgés de plus de 18 mois. Vue, le faible nombre d échantillons positifs contenu dans notre panel, nous avons privilégié l étude de la spécificité qui pour l évaluation en cours est le critère technique le plus important. RESULTATS Sur les prélèvements d enfants de 6 mois, les tests Determine et Genie II ont présenté des spécificités de 3,91% et 10,39% respectivement. Le pourcentage de discordants était de 92,66%, soit 442 faux positifs avec le test Determine HIV-1/2. Avec le test Genie II HIV-1/HIV- 2, nous avons obtenu 69 faux positifs, soit un taux de discordants de 88,46 %. (Tableau II)
5 9 Tableau II : Performances techniques des tests évalués à M6 TESTS RAPIDES Tests de référence Positifs Négatifs Total Sensibilité Spécificité Taux de Discordance (%) (%) (%) Determine Genie II Positifs Négatifs Total Positifs Négatifs Total ,91 92, ,39 88,46 Les spécificités obtenus sur le panel M12 ont été de 85,54 % ; 95,77% ; 97,18% et 98,59% respectivement pour les tests Determine, SD Bioline, Genie II et JN-QC-Spot. Le test Determine a donné le taux de discordants le plus élevé soit 14,14 % dont 71 faux positifs. Les autres tests ont donné des taux de discordants de 3,65% ; 2,44% et 1,21% respectivement pour les tests SD Bioline, Genie II et JN- QC-Spot. (Tableau III) Tableau III : Performances techniques des tests évalués à M12 TESTS RAPIDES Determine Genie II Tests de référence Positifs Négatifs Total Positifs Négatifs Total Positifs Négatifs Total Positifs Sensibilité (%) Spécificité (%) Taux de Discordance (%) ,54 14, ,18 2,44 SD Bioline JN-QC-Spot Négatifs Total Positifs Négatifs Total ,77 3, ,59 1,21
6 10 A M6, les spécificités obtenus avec les tests Determine HIV-1/2 et Genie II HIV- 1/HIV-2 sont largement en dessous du seuil exigé par les Directives nationales à savoir la spécificité d un test doit être supérieure à 98%. Ces spécificités obtenues n étaient pas satisfaisantes et n ont montré aucun intérêt à poursuivre l évaluation des deux autres tests SD Bioline et JN-QC-Spot sur ce panel. Les pourcentages de discordances des tests Determine HIV-1/2 et Genie II HIV-1/HIV-2 sont très élevés vu les pourcentages de discordants obtenus dans des travaux similaires. En effet, MOUGNIGA (Mougniga, 2001) [Mougnina, 2001] lors de l évaluation du test ELISA Vidas HIV duo de BIOMERIEUX a obtenu 2,88 % de discordants et OTCHOUMOU (Otchoumou, 2004) lors de l évaluation du test Enzygnost HIV intégral de Dade Berhing a rapporté 2,70 % de discordants. Ce phénomène peut être dû à la population d étude sur laquelle les évaluations ont été effectuées. En effet, notre population d étude étant constituée de nouveaux-nés de 6 mois nés de mères infectées par le VIH, les anticorps anti- VIH détectés à ce stade avec les tests Determine HIV-1/2 et Genie II HIV-1/ HIV-2 pourraient être ceux de la mère. A M12, le test Determine HIV-1/2 a donné une faible spécificité qui peut être due au nombre élevé de discordants positifs au Determine HIV-1/2 et négatifs à la biologie moléculaire et / ou au couple Murex HIV / Vironostika uniform II Ag/Ac. En effet, la majorité des résultats positifs au Determine HIV-1/2 et négatifs aux tests de référence, apparaissait au moment de la lecture, sous forme de bandes très peu colorées (traces) qui devaient être considérées comme résultats positifs selon les recommandations du fabricant. Le résultat obtenu dans notre étude montre que le test Determine ne peut être utilisé seul à cause de sa faible spécificité. La spécificité du test Genie II HIV- 1/HIV-2 a été meilleure à celle du SD Bioline HIV-1/2 3.0 [97,18% (69/82) DISCUSSION contre 95,77% (68/82)], mais le JN-QC- Spot HIV1/2 a été le meilleur des trois avec une spécificité de 98,59% (70/ 71). A l exception du JN-QC-Spot, les deux autres tests ont obtenu des spécificités en dessous du seuil exigé par les Directives nationales. Cependant, nous tenons à les interpréter avec précaution car il est important de noter que ces tests ont déjà été évalués chez les adultes et ont donné des résultats satisfaisants. Ainsi, ROUET et al (Rouet et al., 2004) ont obtenu une spécificité de 100% avec le test Genie II HIV-1/ HIV-2 et VIJAYAKUMAR et al (Vijayakumar et al., 2005) ont obtenu une spécificité de 99,4% avec le test SD Bioline HIV-1/ Pour le test JNQC Spot HIV-1/2, BAGOE (Bagoé, 2007) a obtenu une spécificité de 100%. Ces faibles spécificités peuvent être dues à la population d étude sur laquelle nous avons travaillé. En effet, notre population d étude était constituée d enfants de 12 mois nés de mères infectées par le VIH. Sur les 3 échantillons faux positifs obtenus avec le test SD Bioline, deux l ont été aussi avec le test Genie II et 1 avec le test JN-QC-Spot HIV 1/ 2. Les résultats obtenus avec le test Determine sur les prélèvements à M18 correspondant aux 3 échantillons discordants de notre panel M12, sont superposables à ceux obtenus avec le test de référence. Ces résultats nous montrent par ailleurs, la nécessité de refaire le test de détection des anticorps anti-vih à l âge de 18 mois chez tous les enfants dont la sérologie à M12 a été positive. De plus, ce test de contrôle pourrait être réalisé aussi bien par des tests ELISA que par les tests rapides utilisés pour notre étude. La proposition d algorithme de tests rapides pour le dépistage précoce de l infection à VIH chez l enfant de 12 mois sera basée sur le degré de spécificité des tests évalués. L algorithme emploiera en première intention le test Determine et pour la
7 11 confirmation des résultats positifs au Determine, le JN-QC-Spot. Cet algorithme devrait être testé au cours d évaluation de phase II avant son utilisation en routine dans les laboratoires périphériques en Côte d Ivoire. CONCLUSION Sur le panel de sérums d enfants âgés de 6 mois (M6), les résultats nous ont montré que le dépistage de l infection à VIH à l aide de tests rapides n est pas indiqué chez l enfant de 6 mois car les anticorps maternels sont encore présents. Sur le panel de sérums d enfants âgés de 12 mois (M12), le JN-QC-Spot a présenté les meilleures performances. Il pourrait donc être associé au test Determine dans un algorithme en série de tests rapides comme celui en vigueur en Côte d Ivoire. Ces résultats montrent par ailleurs, que le dépistage de l infection à VIH, chez l enfant de 12 mois né de mère infectée par le VIH semble être possible avec les tests rapides. Ceci pourrait constituer une opportunité pour les acteurs de la santé car, le nombre d enfants pris en charge pourrait accroître considérablement ; ce serait également un soulagement pour les mères infectées par le VIH qui, verraient désormais le délai d attente des résultats de sérologie de leurs enfants réduit. REMERCIEMENTS Nous remercions toute l équipe de DITRAME et DITRAME Plus et particulièrement Dr MSELLATI Philippe et Dr EKOUEVI Didier pour avoir autorisé l utilisation de la sérothèque de leur projet de recherche. Bagoé, L. (2007). Evaluation du test rapide JN- QC-Spot HIV1/2 pour le dépistage précoce de l infection à VIH : étude réalisée au CeDReS, CHU de Treichville. In thèse Pharmacie (Abidjan.). CONSEIL NATIONAL DE LUTTE CONTRE LE SIDA Côte d Ivoire (2012). Rapport National GARP. Dabis, F., Bequet, L., Ekouevi, D.K., Viho, I., Rouet, F., Horo, A., Sakarovitch, C., Becquet, R., Fassinou, P., Dequae-Merchadou, L., et al. (2005). Field efficacy of zidovudine, lamivudine and singledose nevirapine to prevent peripartum HIV transmission. AIDS (London, England) 19, Mougniga, A. (2001). Evaluation de l activité sérologique du VIH et mise en place d un algorithme pour le diagnostic sérologique de l infection à VIH au CeDReS, CHU de Treichville. In Thèse Pharm (Abidjan ). OMS-AFRO (2001). Atelier pour le renforcement des capacités de laboratoire dans le cadre de la réduction de la transmission mère - enfant du VIH. (Dakar, organisation mondiale de la santé). ONUSIDA (Décembre 2010). Rapport sur l épidémie mondiale de sida.. (Genève, ONUSIDA). REFERENCES Otchoumou, R. (2004). Evaluation d un test ELISA et d un test rapide dans le dépistage de l infection à VIH.. In Thèse Pharm ( Abidjan). Rouet, F., Ekouevi, D.K., Inwoley, A., Chaix, M.L., Burgard, M., Bequet, L., Viho, I., Leroy, V., Simon, F., Dabis, F., and Rouzioux, C. (2004). Field evaluation of a rapid human immunodeficiency virus (HIV) serial serologic testing algorithm for diagnosis and differentiation of HIV type 1 (HIV- 1), HIV-2, and dual HIV-1-HIV-2 infections in West African pregnant women. Journal of clinical microbiology 42, Vaz, P., Elenga, N., Fassinou, P., Msellati, P., Nicolas, J., and Blanche, S. (2003). [HIV-1 infection in children in African countries]. Med Trop (Mars) 63, Vijayakumar, T.S., David, S., Selvaraj, K., Viswanathan, T., Kannangai, R., and Sridharan, G. (2005). Performance of a rapid immunochromatographic screening test for detection of antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and HIV-2: experience at a tertiary care hospital in South India. Journal of clinical microbiology 43,
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