Milieux et tests courants

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Marie Lussier
il y a 7 ans
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2 COMPOSITION : (pour 1L) Base Viande-Foie 30,0g Glucose 2,0g Agar 2,0g USAGE : GELOSE VIANDE-FOIE (VF) Milieu conditionné en tubes longs et fins, régénéré avant utilisation : il se crée un gradient de concentration en oxygène entre la surface et le fond du tube Détermination du TYPE RESPIRATOIRE des micro-organismes. Observation Interprétation Conclusion Culture dans la zone aérobie Culture seulement en présence d O 2 Aérobie strict (AS) Culture dans la zone anaérobie Culture en absence d O 2 Anaérobie Strict (AnS) Culture dans les zones aérobie et anaérobie Culture en présence et en absence d O 2 Aérobieanaérobie facultatif (AAF) Culture dans la zone microaérophile Culture en présence d une pression en O 2 réduite Microaérophile Culture dans les zones aérobie et anaérobie et production de gaz Culture en présence et en absence d O 2 et production de gaz Aérobieanaérobie facultatif avec production de gaz

3 GELOSE VIANDE-FOIE NITRATEE (VFN) Observation Interprétation Conclusion VF VFN La souche testée est aérobie stricte et cultive en anaérobiose en présence de nitrates. On observe un dégagement d azote. Nitrate réductase + Stade azote VF VFN La souche testée est aérobie stricte et ne cultive pas en anaérobiose en présence de nitrates. Nitrate réductase -

4 EAU PEPTONEE ORDINAIRE (EPO) Ce milieu est un milieu liquide qui permet la croissance des germes ne présentant pas d exigences nutritives particulières. Il peut être utilisé pour la recherche de la production d indole. COMPOSITION : (pour 1L) Peptones (exemptes d indole) 10,0g Chlorure de sodium 5,0g Après ajout du réactif de Kovacs Observation Interprétation Conclusion Anneau rouge Présence d indole dans le milieu Absence d indole dans le milieu Anneau jaune Indole + Indole -

5 EAU PEPTONEE AU ROUGE DE PHENOL (EPO.RP) COMPOSITION : (pour 1L) Peptones (exemptes d indole) 10,0g Chlorure de sodium 5,0g Rouge de phénol 1 ml Observation Interprétation Conclusion Tube rouge sans gaz sous la cloche La bactérie n a pas fermentée le glucide Absence de production de gaz Glucide Gaz Tube jaune sans gaz sous la cloche Tube jaune avec gaz sous la cloche La bactérie a fermentée le glucide Absence de production de gaz La bactérie a fermentée le glucide Production de gaz Glucide + Gaz Glucide + Gaz +

6 GELOSE COLUMBIA AU SANG DE MOUTON COMPOSITION : (pour 1L) Peptones 23,0g Chlorure de sodium 5,0g Amidon 1,0g Agar 10,0g Observation Interprétation Conclusion Colonie entourée d un halo d éclaircissement total à bord net La bactérie à dégradée, entièrement, de l hémoglobine Hémolyse β Colonie entourée d un halo d éclaircissement partiel verdâtre à bord flou La bactérie à dégradée, partiellement, de l hémoglobine Hémolyse α Couleur rouge inchangé autour des colonies La bactérie n a pas dégradée de l hémoglobine Hémolyse γ

7 RECHERCHE DE LA NITRATE REDUCTASE REACTIFS : Réactif de Griess : Nit 1 : Solution d acide sulfanilique Nit 2 : Solution d alphanaphtylamine Poudre de zinc Mode opératoire Observation Interprétation Conclusion Etape 1 : Ajout du réactif de Griess Coloration rouge Coloration jaune Présence de nitrites Absence de nitrites NR+ Stade NO 2 - Procéder à l étape 2 Etape 2 : Ajout de poudre de zinc Coloration rouge Coloration jaune NO 3 - réduit en NO 2 - NO 3 - réduit en NO 2 - puis N 2 NR NR+ Stade N 2

8 TEST IMVIC I : Indole M : rouge de Méthyle V : Vosges-Proskauer (VP) «I : Inositol» C : Citrate Escherichia coli Citrobacter freudii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Indole RM VP Citrate

9 GELOSE LACTOSEE AU BROMOCRESOL POURPRE (BCP) COMPOSITION : (pour 1L) Peptones 5,0g Extrait de viande 5,0g Lactose 10,0g Bromocrésol pourpre 0,025g Agar 11,0g Réalisation d une lecture macroscopique Milieu jaune (Lact +) Milieu violet (Lact )

10 HUGH ET LEIFSON ROLE : Détermination du type respiratoire Etude du mode de dégradation du glucose COMPOSITION : Peptones Extrait de viande Chlorure de sodium Glucose 1% Bleu de bromothymol (BBT) Observation Interprétation Conclusion Milieu jaune dans la zone aérobie seulement Le glucose est dégradé en présence d O 2 avec une faible production d acide Glucose dégradé par voie oxydative Milieu jaune dans les zones aérobie et anaérobie Le glucose est dégradé en présence ou en absence d O 2 avec une forte production d acide Glucose dégradé par fermentation Milieu resté vert ou devenu bleu dans la zone aérobie La bactérie cultive sans dégrader le glucose ou la bactérie cultive en dégradant les peptones en présence d O 2 avec alcalinisation du milieu Glucose non dégradé

11 CTA ROLE : Etude de la voie d attaque des glucides Eventuellement, étude du type respiratoire et de la mobilité COMPOSITION : Tryptone L-Cystine Rouge de phénol Chlorure de sodium Sulfite de sodium Agar Observation Interprétation Conclusion Milieu jaune dans la zone aérobie seulement Acidification seulement en surface Oxydation du glucide Respiration probablement AS Milieu jaune dans les zones aérobie et anaérobie Acidification dans tout le tube Fermentation du glucide Respiration AAF Milieu jaune dans la zone anaérobie Milieu neutre en surface et acide en profondeur Fermentation du glucide Respiration AnS Milieu entièrement rouge Alcalinisation en surface Inerte vis-à-vis du glucide mais utilisation des peptones

12 TEST OXYDASE ROLE : Orientation des bactéries Gram PRECAUTIONS : Ne pas prélever les colonies avec une oese métallique : risque de faux positif Ne pas prélever de colonie fortement colorée en bleu Prélever de préférence les colonies sur GN Observation Interprétation Conclusion Le dépôt se colore en bleu-violet Le dépôt reste incolore Le réactif a été oxydé Le réactif n est pas oxydé La bactérie possède une oxydase : Oxydase + La bactérie ne possède pas d oxydase : Oxydase

13 TEST CATALASE ROLE : Orientation des bactéries Gram + PRECAUTIONS : Utiliser un ustensile de prélèvement neutre avec l eau oxygénée pour éviter un faux positif Ne jamais prélever une colonie sur un milieu contenant du sang car l hémoglobine a une activité peroxydasique Observation Interprétation Conclusion Dégagement gazeux H 2 O 2 est décomposé La bactérie possède une catalase : Catalase + Absence de dégagement gazeux H 2 O 2 n est pas décomposé La bactérie ne possède pas de catalase : Catalase

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