Hématologie Niveau 1. Alexandra Briend-Marchal Patricia Crosse. Laboratoire Vebio

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1 Hématologie Niveau 1 Alexandra Briend-Marchal Patricia Crosse Laboratoire Vebio

2 Plan Pré-requis techniques La physiologie: hématopoïèse, rôle des hématies, rôle des leucocytes L examen d un frottis sanguin: morphologie des hématies et des leucocytes Application: quelques cas cliniques Questions à choix multiples

3 Les techniques: prise du sang, réalisation et lecture d un frottis sanguin

4 Les techniques: prise de sang

5 Les techniques: prise de sang Tube propre (ne pas contaminer le prélèvement) EDTA (bouchon violet) non périmé Agiter doucement par retournements successifs Réaliser un frottis sanguin

6 Impossible d afficher l image. Les techniques: réalisation d un frottis sanguin

7 Les techniques: réalisation d un frottis sanguin Impossible d afficher l image.

8 Impossible d afficher l image. Frottis sanguins inexploitables et exploitable inexploitables correct

9 Impossible d afficher l image. Frottis trop épais Superposition des hématies

10 Lecture d un frottis sanguin Zone de lecture d un frottis sanguin: 2 ème tiers vers la queue de frottis Si trop proche de la base: hématies superposées et formule leucocytaire modifiée (plus de lympho, moins de neutro) Si trop proche de la queue de frottis: sur-estimation de certains leucocytes (éosino et mono)

11 Impossible d afficher l image. Le microhematocrit centrifugé, HCT Micro centrifuger un tube capillaire à grande vitesse ( g) Le plasma est en haut La couche intermédiaire est constituée de leucocytes et de plaquettes Les hématies sont en bas Plasma ictérique Plasma lipémique Plasma hémolysé

12 Les techniques: automates à variation d impédance

13 Impossible d afficher l image. Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter) Comptage dans 2 cuves séparées: - 1 pour les hématies et les plaquettes - 1 pour les leucocytes Les cellules passent à travers une ouverture créant une différence de potentiel électrique entre deux électrodes La variation d impédance est fonction du volume de la particule, ce qui permet de classer chacune des cellules

14 Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter) Les numérations érythrocytaire, leucocytaire et plaquettaire sont réalisées Le VGM est mesuré Une formule leucocytaire approximative est déterminée (par classification des GB en fonction de leur taille) L hémoglobinémie est mesurée par spectrophotométrie après lyse des GR.

15 Compteurs de cellules par variation d'impédance (de type Coulter Counter) Valeurs mesurées: Valeurs calculées: Numération des GR VGM (volume globulaire moyen) Hémoglobinémie Numération des plaquettes VPM (volume plaquettaire moyen) Numération des GB et formule approximative Hématocrite: RBC X MCV TCMH (taux corpusculaire moyen en hémoglobine): Hgb / nbre de GR CCMH (concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine): Hgb / Hématocrite RDW (Indice de variation de la taille des GR)

16 Les techniques: automates de type QBC (Quantitative Buffy Coat)

17 Impossible d afficher l image. Compteurs de cellules par analyse du buffy coat Tube capillaire spécial contenant un cylindre de matière plastique (flotteur). Lors de la centrifugation, la couche leuco-plaquettaire s étend le long du flotteur. La fluorescence est utilisée pour différencier les couches de cellules. L'épaisseur de la couche de chaque type de cellule est corrélée avec sa concentration.

18 Compteurs de cellules par analyse du buffy coat Valeurs mesurées: Valeurs calculées: Hématocrite HGB CCMH (concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine): Hgb / Hématocrite Plaquettocrite Fibrinogène Buffy coat

19 Impossible d afficher l image. Numération des réticulocytes Coloration spéciale des ARN rémanent dans les réticulocytes colorés en bleu foncé par Bleu de Crésyl Brillant Comptage des cellules colorées (% des cellules non colorées au total) Interprétation de la numération absolue des réticulocytes seulement Réticulocytes

20 Physiopathologie: l hématopoïèse et le rôle des différentes populations cellulaires

21 Hématopoïèse L academie de Dijon

22 Hématopoïèse

23 Erythropoïèse L'hématopoïèse se déroule, après la naissance dans la moelle des os L érythropoïétine agit sur les CFU-E (colony forming unit - erythocyte) qui répond en se divisant ou en se différenciant en proérythroblastes L'érythropoïétine est produite par le rein, en réponse à une hypoxie

24 Erythropoïèse: Moelle Osseuse Erythroblaste polychromatophile Proérythroblaste Erythroblaste basophile Erythroblastes acidophile

25 Myélopoïèse La myélopoïèse se déroule principalement après la naissance dans la moelle osseuse La myélopoïèse est régulée par les cytokines (exemple CSF)

26 Myélopoïèse Prolifération Maturation Circulation Moelle osseuse Sang

27 Le rôle des hématies: apporter l oxygène aux tissus

28 Le rôle des hématies La fonction principale des hématies et à apporter l oxygène aux tissus Toute l'énergie générée par le métabolisme de l hématie est consacrée au maintien de la forme des cellules, à la structure de la membrane, aux fonctions enzymatiques, au maintien du fer réduit, le but final étant le fait d'optimiser l'apport d'oxygène aux tissus

29 Le rôle des leucocytes: défendre l organisme contre les agressions

30 Le rôle des neutrophiles Rôle dans l'immunité innée La fonction principale des neutrophiles est (associée à l inflammation aiguë) de lutter contre la pénétration et le développement de l ensemble des éléments infectieux (bactéries, virus, champignons) et non-infectieux (cellules nécrotiques, corps étrangers) Arrivée aux contacts des éléments étrangers, libération de substances actives, phagocytose Rôle dans l immunité adaptive: immunorégulation

31 Migration des polynucléaires neutrophiles 1. Margination, adhérence à l'endothélium 2. Migration à travers l'endothélium 3. Migration dans les tissus interstitiels 4. Lutter contre l infection

32 Le polynucléaire neutrophile 3 Pools: - Circulant - Marginé - Tissulaire Un stress induit une démarginalisation et une augmentation du nombre de neutrophiles circulants.

33 Le rôle des lymphocytes: Rôle dans l'immunité innée (cellules NK) Rôle dans l immunité adaptive: Humorale: production des anticorps Cellulaire: cytotoxicité ou hypersensibilité retardée Recrutement des monocytes

34 Les lymphocytes Production médullaire et périphérique (ganglions lymphatiques, rate et thymus). Pools circulant et marginé

35 Le rôle des monocytes: Rôle dans l'immunité innée La fonction principale des macrophages est de lutter contre la pénétration et le développement de l ensemble des éléments infectieux (bactéries, virus, champignons) et non-infectieux (cellules nécrotiques, corps étrangers) Arrivée aux contacts des éléments étrangers, libération de substances actives, phagocytose Rôle dans l immunité adaptive: immunorégulation Rôle dans la réparation tissulaire

36 Les monocytes Taille d un monocyte: microns Appartient au (système des phagocytes mononucléés): cellules avec de nombreuses fonctions Monocytes circulent dans le sang, puis entrent tissus pour devenir des macrophages. Monocytose: Inflammation Glucocorticoïdes Néoplasie Monocyte PNN

37 Les polynucléaires éosinophiles Taille: microns Production dans la moelle osseuse est stimulée par les cytokines (IL5 surtout) Pools circulant et marginé Ils circulent pendant quelques heures max puis entrent dans les tissus, où ils peuvent vivre pendant des semaines. PNN PNE

38 Eosinophilie Causes: - parasitose - phénomène allergique - syndrome éosinophilique - syndrome paranéoplasique (mastocytome, autre)

39 Le rôle des plaquettes: assurer l hémostase

40 Rôle des plaquettes La première fonction des plaquettes est de contribuer à réparer des brèches vasculaires et à prévenir une hémorragie, en participant à la formation des bouchons hémostatiques. Les plaquettes sont consommées dans ce processus. L'énergie pour les fonctions plaquettaires est dérivé de l'atp (généré par la glycolyse aérobie et la phosphorylation oxydative) Les plaquettes jouent également un rôle importante dans l inflammation

41 Morphologie des cellules sanguines

42 Les hématies

43 Examen des hématies Cellule anucléée chez mammifères (nucléée chez oiseaux, reptiles, batraciens, poissons) Produite par lignée érythroïde médullaire Volume variable en fonction espèce Examen de la taille, de la forme, de la couleur Uniformité générale

44 Examen des hématies: chien Disques biconcaves Volume: fl Cas particuliers: Macrocytose Caniche (VGM=80 fl) Microcytose Akita et Shiba Inu (VGM= 60 fl) Contours réguliers Légère pâleur centrale

45 Examen des hématies: chat Disque biconcave Volume: fl Légère anisocytose physiologique Pâleur centrale peu visible

46 Les leucocytes

47 Le polynucléaire neutrophile Diamètre: microns (GR= 7 microns) Noyau polylobé (2 à 5 lobes) Cytoplasme abondant clair sans granulation

48 Polynucléaire éosinophile: Chien Diamètre: 12 microns Noyau bi ou trilobé Chien: granulations rondes, oranges, en nombre et de taille variables

49 Polynucléaire éosinophile: Chat Diamètre: 12 microns Bilobé le plus souvent Chat: granulations très nombreuses, en batonnets, oranges

50 Polynucléaire éosinophile: chien et chat PNE de Chat PNE de Chien

51 Les polynucléaires basophiles Très rarement observés (très faible nombre circulants) Plus fréquent chez le chat que chez le chien Production dans la moelle osseuse est stimulée par les cytokines

52 Le lymphocyte Diamètre: 7 à 10 microns Noyau rond parfois encoché, cytoplasme clair très réduit Rôle dans l immunité à médiation humorale

53 Le monocyte Diamètre: microns Noyau massif grossièrement en U, cytoplasme abondant grisâtre et parfois vacuolisé Rôle dans l immunité à médiation cellulaire monocyte

54 Les plaquettes

55 Les plaquettes Plaquettes = fragments de cytoplasme de mégacaryocytes médullaires Rôle: hémostase primaire (formation du thrombus blanc) Chat: plaquettes volumineuses + amas fréquents Plaquettes (thrombocytose sévère ici)

56 Les plaquettes Plaquettes Amas de plaquettes

57 Macroplaquettes: Cavalier King Charles

58 Amas de plaquettes Très fréquent chez le chat physiologiquement Peut être le signe d un état d hyperagrégabilité plaquettaire

59 Modifications des hématies

60 Modification de taille et de coleur Différence de taille entre les GR = anisocytose Différence de couleur entre les GR = polychromatophilie

61 Anisocytose + polychromatophilie Réticulocytes Réticulocytes = plus gros et plus bleus que les GR Régénération des GR: Perte de sang Anémie hémolytique

62 Réticulocytose: bleu de Crésyl Réticulocytes possèdent résidus ARN colorés en bleu foncé par Bleu de Crésyl Brillant Classification de l anémie (régénérative ou pas) Réticulocytes

63 Hypochromie Parmi des hématies normales: - hématies pâles - hématies petites - cellules cibles Anémie ferriprive Annulocytes

64 Corps de Howell-Joly Résidu nucléaire, rond, très basophile Fréquent et physio chez chat en petit nombre Augmenté chez animal splénectomisé Corps Howell-Joly

65 Erythroblastes circulants

66 Acanthocytes Hématies dont le membrane est déformée, comme «ondulée» Altération du ratio entre différents lipides membranaires (hépatopathie, défaut d absorption intestinale des lipides) Acanthocyte

67 Schizocytes Morceaux d hématies de formes aléatoires Fragmentation mécanique (glomérulopathie, endocardite, néovascularisation tumorale ) Schizocytes

68 Corps de Heinz Oxydation de l hémoglobine qui précipite sous forme d un corpuscule rejeté à un pole de l hématie puis à l extérieur CT >> CN Hématies définitivement non fonctionnelle Traitement oxydant (paracématol..), additifs alimentaires, oignons

69 Corps de Heinz Corps de Heinz

70 Corps de Heinz:bleu de Crésyl Réticulocyte Corps de Heinz

71 Eccentrocytes Eccentrocytes

72 Sphérocytes Sphérocytes

73 Parasitoses décelables sur le frottis sanguin CN: babesiose (dans GR), dirofilariose, hépatozoonose (dans monocytes), anaplasmose (dans les plaquettes) CT: mycoplasmose (dans GR) (haemofelis, haemominutum) Babesia sp

74 Babesiose (Babesia canis)

75 Dirofilariose (dirofilaria immitis ou repens)

76 Anaplasma platys Anaplasmose (anaplasma platys)

77 Mycoplasma Mycoplasmose (Mycoplasma haemofelis ou haemominutum)

78 Modifications des leucocytes

79 Jeunes Polynucléaires Neutrophiles toxiques Formes immatures peu lobées Parfois cytoplasme spumeux ou corps de Doëhle Infection, surtout bactérienne Jeunes polynucléaires neutrophiles toxiques

80 Corps de Doëhle Jeunes PNN

81 Corps de Doëhle Corpuscules cytoplasmiques ronds, bleutés, taille variable Résidus de reticulum endoplasmique lors de défaut maturation granuleux Observés dans infections suppurées Corps de Doëhle

82 Corps de Doëhle

83 Neutrophilie Physiologique (réaction de fuite, de défense) Associé à une augmentation des glucocorticoides circulants (origine médicamenteuse ou hypercorticisme spontané) Inflammatoire Tumorale

84 Les lymphocytes Lymphocytose Physiologique Inflammation chronique Néoplasie Hypocorticisme Lymphopénie Glucocorticoïdes Inflammation aïgue Perte de lymphocytes (épanchement chyleux) Hypoplasie lymphoïde (immunosuppression)

85 Lymphocytes activés Plus grands, cytoplasme plus abondant et plus basophile Parfois quelques grains cytoplasmiques rougeâtres Lymphocyte activé

86 Cas cliniques

87 Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans

88 Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans HCT: 10% HGB: 4 g/dl VGM: 55 fl Réticulocytes: /µL Plaquettes: /µL Neutrophiles: /µL Coombs: Positif

89 Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans LIGNÉE ROUGE : Anisocytose et polychromatophilie ++. LIGNEE PLAQUETTAIRE : Pas d'anomalies morphologiques notées. LIGNEE BLANCHE : Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.

90 Cas 1: Chat Sacré de Birmanie 1 ans Conclusion: anémie périphéique et Coombs + - Evoque une anémie à médiation immune - Un éventuel foyer de saignement ne peut pas être exlu

91 Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans

92 Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans HCT: 28% HGB: 9 g/dl VGM: 65 fl Réticulocytes: /µL Plaquettes: /µL Leucocytes: 4 820/µL Neutrophiles: 3 520/µL

93 Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans LIGNÉE ROUGE: Pas d'anisocytose ni de polychromatophilie. LIGNEE PLAQUETTAIRE: Macroplaquettes LIGNEE BLANCHE: Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.

94 Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans Conclusion: Anémie non régénérative modérée compatible avec: -une inflammation chronique -une hypoplasie médullaire -une insuffisance rénale chronique -une perte de sang chronique (parasitisme interne ou externe sévère? ulcère digestif?...)

95 Cas 2: Chien épagneul breton 14 ans Prochaine étapes: 1. Cherchez un foyer inflammatoire chronique 2. Myélogramme

96 Cas 3: Chien cocker 12 ans

97 Cas 3: Chien cocker 12 ans HCT: 25% HGB: 8,5 g/l VGM: 73 fl Réticulocytes: /µL Plaquettes: /µL Neutrophiles: 9 000/µL

98 Cas 3: Chien cocker 12 ans LIGNÉE ROUGE : Anisocytose et polychromatophilie ++ Sphérocytes + LIGNEE PLAQUETTAIRE : Pas d'anomalies morphologiques notées. LIGNEE BLANCHE : Absence d'anomalie morphologique sur les différentes populations leucocytaires observées.

99 Cas 3: Chien cocker 12 ans Conclusion: Anémie périphérique compatible avec: - une anémie à médiation immune - un éventuel foyer de saignement

100 Cas 3: Chien cocker 12 ans Prochaines étapes: Un test de Coombs Une biochimie Historique d intoxication médicamenteuse ou de transfusion?

101 Expertise, Disponibilité, Indépendance, Qualité Alexandra Briend-Marchal Docteur Vétérinaire Diplômée du Collège Européen de Pathologie Clinique Vétérinaire D.U. Cyto-Hématologie Humaine C.E.S. Hémato-Biochimie Vétérinaire Stéphanie Lafarge-Beurlet Docteur Vétérinaire D.U. Cyto-Hématologie Humaine Master de Cancérologie Doctorat de Science Patricia Crosse Docteur Vétérinaire Diplômée du Collège Américain de Pathologie Vétériniaire, option Biologie Clinique Ancienne consultante au Royal College de Londres ACTIVITÉS Biologie vétérinaire Recherche et développement cliniques, en interne et en partenariats (publics et privés) Formation continue vétérinaire (articles, conférences, cours, stages...) SERVICES Résultats disponibles sur internet (espace personnalisé et sécurisé) Transport simple et rapide à un coût minimal Fourniture de matériel de prélèvement et de kits d envoi aux normes P650 Organisation de cessions de formation continue en biologie clinique (ouvrant droit à des points de formation) Laboratoire Vebio Biologie Vétérinaire 41bis avenue Aristide Briand Arcueil cedex Tel : +33 (0) Fax : +33 (0) vebio@vebio.fr ENGAGEMENTS Affilié à un contrôle qualité externe international Matériel de pointe et méthodes validées pour la biologie vétérinaire Expertise, disponibilité et indépendance des biologistes vétérinaires Agrément par le Collège Européen de Biologie Clinique pour la formation de résidents