Premières observations sur le rôle de la pluie dans la pénétration des plaies de taille par Eutypa lata

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1 Rainfall (mm) Premières observations sur le rôle de la pluie dans la pénétration des plaies de taille par Eutypa lata L eutypiose est une maladie de la vigne qui provoque le dépérissement de la vigne à plus ou moins long terme. L agent causal est Eutypa lata. Ce champignon produit des stromas périthéciaux à la surface du bois des ceps malades. Le déclenchement de la sporée d E. lata se fait à partir d une pluie de 1 mm dans les deux ou trois heures après le commencement de la pluie. La durée de la sporée dépend des conditions climatiques. D une manière générale, elle s arrête 24 h, voire 36 h après la fin des précipitations, une fois les stromas secs. Les ascospores, une fois déposées sur les plaies de taille migrent à l intérieur des vaisseaux. La localisation des ascospores a été déterminée par différentes méthodes : études histologiques ou isolements. Les spores ont été appliquées soit par une suspension aqueuse à la surface de plaies fraîches, soit à l état sec par un système de soufflerie. Chez l abricotier, Carter a observé que la majorité des ascospores était localisée dans les vaisseaux situés dans le premier millimètre sous-jacent à la plaie de taille. Les spores pouvaient être observées jusqu à 4-5 mm. Chez l amandier, les spores étaient localisées dans les vaisseaux localisés à environ 1 mm de la plaie. Chez la vigne, Paillassa, en appliquant 3 µl d une suspension d ascospores a montré que la profondeur de pénétration était fonction du nombre d ascospores déposées et que leur localisation était préférentiellement située dans les 4 à 5 premiers millimètres de bois pour une plaie fraîche. L objectif de notre étude est de : - donner des informations sur la profondeur à laquelle les ascospores peuvent migrer dans les tissus sous-jacents à une plaie de taille dans les conditions naturelles, - déterminer le rôle de la pluie dans leur migration, - et de ces résultats, tirer des conclusions sur la pertinence des méthodes utilisées pour l évaluation de l efficacité de produits. En premier lieu, l étude a porté sur la localisation des ascospores dans les tissus ligneux sous-jacents à la plaie de taille dans les conditions naturelles, Puis, elle a été menée sur leur localisation dans les conditions artificielles après inoculation des plaies de taille sous différentes conditions (en période sèche et en période pluvieuse). Cette étude a été réalisée sur une vigne de Sauvignon/SO4. Cette parcelle située dans les Costières de Nîmes a été plantée en 1989 et conduite en cordon bilatéral. En conditions naturelles, nous avons disposé dix fragments de bois porteurs de périthèces d une surface d environ de 1 cm² avant une pluie à proximité des plaies de taille, réalisées sur les sarments de cinq ceps différents. Le graphique décrit les différentes étapes de l expérimentation : installation des morceaux de bois porteurs de périthèces, taille, pluie (histogramme) et le lendemain prélèvement des portions de bois et analyse immédiate au laboratoire Installation of wood pieces carrying perithecia and pruning Collected samples /5/26 1/6/26 UT Hours Page 1

2 % isolation En conditions artificielles, les conditions expérimentales sont similaires à celles précédemment décrites. Trente plaies de taille ont été inoculées soit deux heures après le début d une pluie soit en absence de pluie, avec 2 µl d une suspension aqueuse contenant 2, 25 ou 15 ascospores. Le jour suivant, les portions de bois ont été prélevées et examinées immédiatement au laboratoire. L expérimentation a été menée deux fois. Les résultats des deux expérimentations ont été poolés et traduits en pourcentage d isolement d Eutypa lata. La localisation des ascospores est déduite de manière indirecte à l aide d isolements. Chacune des portions de sarments est écorcée et désinfectée par flambage à l alcool. Elles sont ensuite débitées en rondelles de 1mm d épaisseur à l aide d une cisaille sur une longueur de 25 mm. Les 25 rondelles de bois obtenues sont déposées sur un milieu de culture malt-agar suivant l ordre de découpe à raison de cinq par boîte. La durée d incubation était de 21 jours. Couper en 25 sections d un 1 mm d épaisseur avec une guillotine Localisation des ascospores dans une plaie de taille soumise à une pluie en présence de périthèces La localisation des spores révélée par l isolement n apparaît pas homogène dans les tissus sous-jacents à la plaie. Elles semblent plutôt présentes dans les tissus ligneux situés entre le 6 ème et le 15 ème millimètre. A partir du 2 ème millimètre, peu de spores sont présentes. La profondeur maximale moyenne à laquelle les spores migrent dans les tissus est de 18,75 ± 3,95 mm Page 2

3 % isolation % isolation Localisation des ascospores dans une plaie de taille inoculée avec 2, 25 ou 15 ascospores en période sèche En conditions sèches, les ascospores sont localisées préférentiellement dans les cinq premiers millimètres. Leur répartition dans les tissus sous-jacents à la plaie de taille n est pas similaire à celle des spores qui ont été apportées en conditions naturelles via les bois porteurs de périthèces spores 3 25 spores 15 spores De plus, la profondeur maximale moyenne à laquelle les spores migrent dans les tissus est aussi différente de celle observée en conditions naturelles. Ces résultats sont différents de ceux obtenus dans les conditions naturelles, indiquant que l application de spores en conditions sèches ne reflète pas le processus de pollution des plaies en conditions naturelles. Période pluvieuse Période sèche Périthèces ± 3.95 mm ± 3.88 mm ± ± 4.33 mm ± 4.73 mm Localisation des ascospores dans une plaie de taille inoculée avec 2, 25 ou 15 ascospores en période pluvieuse En conditions pluvieuses, les spores sont distribuées plus profondément dans les tissus ligneux et de manière assez homogène sur les vingt premiers millimètres. La répartition des spores est similaire à celle des spores observée en conditions naturelles spores 25 spores 15 spores Page 3

4 % efficiency La profondeur maximale moyenne à laquelle les spores migrent dans les tissus est également similaire à celle observée en conditions naturelles. Ce travail montre que les spores peuvent être localisées profondément dans les vaisseaux conducteurs, juste après la taille, cela étant directement lié à leur migration sous l effet de l eau. Période pluvieuse Période sèche Périthèces ± 3.95 mm ± 6.15 mm 6.43 ± 3.88 mm ± 5.18 mm 6.37 ± ± 4.33 mm ± 5.33 mm 8.33 ± 4.73 mm Conséquences sur la pertinence de la méthode à utiliser pour l évaluation de produits en protection des plaies de taille Ces observations permettent de reconsidérer les méthodologies jusqu à maintenant utilisées pour évaluer l efficacité de produits en protection des plaies de taille. Il faut constater qu aucune publication ou méthode comme celle utilisée en France (méthode CEB n 155) ne fait allusion à cette période pluvieuse lors de la réalisation des tests. Les méthodes sont le plus souvent basées sur des inoculations réalisées avec une quantité d eau faible sur les plaies de taille en période sèche. Ainsi, les bonnes efficacités observées devraient très probablement être revues à la baisse si les tests étaient effectués dans les conditions plus naturelles, c est-à-dire pluvieuses. Afin d illustrer ces différences, la figure présentée compare l efficacité d un produit X appliqué sur une plaie inoculée en période sèche, à celle du même produit appliqué sur une plaie inoculée en présence d une pluie. Les efficacités sont calculées théoriquement à partir des résultats obtenus lors de cette étude. Par exemple dans le cas de l application de 2 spores par plaie, en considérant que le produit X est efficace à 1 % sur les six premiers millimètres et qu une plaie est jugée contaminée lorsque le champignon est trouvé une seule fois parmi les 25 rondelles de bois lors de l analyse microbiologique, on constate qu en période sèche, le produit X a une efficacité de 66,7 % alors que dans les conditions pluvieuses, il n a qu une efficacité de 4,9 %. Pour avoir une efficacité de même ordre, il faudrait que le produit ait une efficacité de 1 % jusqu au 18 ème millimètre ,6 13,5 9,6 5,8 4, ,1 19,2 52,4 26,9 36,5 71,4 46,2 76,2 53,8 81, 59,6 65, ,8 1,9 6,5 2,2 73,1 17,1 78,8 22, 1, 1, 97,6 95,2 96,2 92,3 93,5 88,5 87,8 84,6 84, ,8 34,1 58,5 41, ,9 52,2 73,2 78, 65,2 78,3 2 spores (dry period) 25 spores (dry period) 15 spores (dry period) 2 spores (rainy period) 25 spores (rainy period) 15 spores (rainy period) Page 4

5 Plaies de taille Plaies de taille 8 % d efficacité % d efficacité Pour une meilleure compréhension, la figure ci-dessus montre également les différences observées dans l efficacité du produit appliqué sous différentes conditions (pluie ou non). Pour une plaie inoculée en période sèche (2 µl), les spores restent localisées surtout dans les premiers millimètres situés sous la plaie. Les spores à ces niveaux sont tuées ou leur germination inhibée par le produit. Seules quelques spores peuvent migrer au-delà de cette zone et vont germer et produire du mycélium car la concentration du produit n est pas assez suffisante pour empêcher le développement d Eutypa lata. Par conséquent, un grand nombre de plaies ne présentera pas de champignon car il ne sera pas développé du fait qu il soit tué. Le pourcentage d efficacité du produit sera élevé. Pour les plaies inoculées sous la pluie, les spores migrent au-delà de la zone du produit. Toutes les spores germent et développent du mycélium. Dans ce cas là, le produit sera inefficace. Conclusion Cette étude indique qu en dehors de son rôle décisif et connu dans le déclenchement de la sporée d E. lata, l eau a en outre une fonction prépondérante dans la migration des spores dans les tissus sousjacents à une plaie. La méthode CEB N 155 concernant l évaluation de l efficacité de produits en protection des plaies de taille à l égard d Eutypa lata devra désormais prendre en considération cet important facteur, la pluie. Ainsi, la protection des plaies de taille par pulvérisation d un produit au vu de ces résultats devient illusoire. Contrairement au badigeonnage, la pulvérisation d un produit n apportera jamais assez de produits sur une plaie de taille pour empêcher le développement d Eutypa lata, d autant plus que le produit sera dilué avec la pluie au moment de contamination. Ce travail a été réalisé grâce à la participation financière du CASDAR et de France AGRIMER. CARTER M.V., 196. Further studies on Eutypa armeniacae Hansf. & Carter. Australian J. of Experimental Agric. Research 16, Page 5

6 MOLLER W.J., CARTER M.V.,1965. Production and dispersal of ascospores in Eutypa armeniacae. Australian Journal of Biological Sciences 53, PEARSON R.C., 198. Discharge of ascospores of Eutypa armeniacae in New York. Plant disease 64, DUBOS B Mise au point sur les maladies de dépérissement dans le vignoble français. Progrès agricole et viticole. 14, 6, PAILLASSA, E L'Eutyiose de la vigne (Eutypa lata (Pers. : Tul.) : aspects épidémiologiques. Application à la mise au point d évaluation des fongicides in vitro. Thèse de 3 ème cycle, Bordeaux II, 165 pp. Page 6