Composés perfluorés PFCs Méthode d analyse dans les biotes
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- Albert Primeau
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1 Composés perfluorés PFCs Méthode d analyse dans les biotes Références de la méthode La méthode qui suit est dérivée de la publication suivante Fernandez-Sanjuan M., Meyer J., Damasio J., Faria M., Barata C., Lacorte S., : «Screening of perfluorinated chemicals (PFCs) in various aquatic organisms» Anal. Bioanal. Chem. 398 (2010) Norme dont est tirée la méthode Niveau de validation selon Norman Niveau 1. Code SANDRE de la méthode (suivant niveau de validation) Généralités Nom de la famille de substances Nom des substances individuelles Code(s) SANDRE des substances individuelles Matrice analysée Acronyme Principe de la méthode Domaine d application Paramètres à déterminer en parallèle à l analyse Composés perfluorés (Chaîne linéaire en C8). Acide perfluorooctanoïque (PFOA). Perfluorooctane sulfonate (PFOS). PFOA : 5347 PFOS : 6561 Biote : poisson LSE/HPLC/MS-MS. Extraction solide-liquide des composés perfluorés par du méthanol, purification du surnageant par extraction dispersive sur phase solide et analyse en HPLC/MS-MS par ionisation avec électronébulisation (ionisation par électrospray, ESI) en mode négatif. 5 à 200 ng/g poids sec. Pourcentage d humidité (déterminé par gravimétrie) Pourcentage de lipides Date de mise à jour : 06/08/ / 6
2 Précautions particulières à respecter lors de la mise en œuvre de la méthode Tous les réactifs doivent être de qualité «pour analyse de résidu». Proscrire tous les flaconnages en polymères fluorés qui peuvent contenir des traces de PFOA et/ou PFOS, y compris lors de la centrifugation. La méthode chromatographique se compose d une partie isocratique lors de laquelle les composés d intérêt sont élués et d une partie gradient qui permet d éliminer les composés constituants la matrice. Cette méthode permet donc de s affranchir des relargages de substances perfluorées. Aucune précaution particulière n est nécessaire au niveau des tubulures de la partie chromatographique. AVERTISSEMENT : Il convient que l'utilisateur de cette méthode connaisse bien les pratiques courantes de laboratoire. Cette méthode n'a pas pour but de traiter tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l'utilisateur d'établir des pratiques appropriées en matière d'hygiène et de sécurité et de s'assurer de la conformité à la réglementation nationale en vigueur. Certains des solvants utilisés dans le mode opératoire sont toxiques et dangereux. Les manipuler avec précaution. Il est absolument essentiel que les essais conduits conformément à cette méthode soient exécutés par du personnel ayant reçu une formation adéquate. Protocole analytique Prétraitement Fraction analysée : Muscle (poisson), échantillon lyophilisé Conditionnement et conservation des échantillons - Protocole : - Nature du contenant de stockage : - Lavage du contenant : - Résultats de l étude de stabilité : Filtration : Pré-traitement des échantillons liquide ou solide Conservation sous forme congelée à 20 C en attente de lyophilisation, conservation sous forme lyophilisée à l abri de la lumière et à +4 C, dans des flacons en verre ambré. Poissons : disséquer, broyer/homogénéiser, lyophiliser, broyer/homogénéiser. Flacon de 100 ml en verre ambré ou protégé de la lumière, avec bouchon à visser ; opercule en aluminium entre le col du flacon et le bouchon. Flacons et opercules calcinés 8 heures à 500 C. Pas d analyse de stabilité effectuée Sans objet Dissection, broyage, lyophilisation, broyage/homogéneisation Analyse Volume ou masse de la prise d essai (ml ou mg selon la phase analysée Dérivation Biote : Poisson (le poids sec doit être déterminé juste avant analyse sur une quantité aliquote pour calculer la reprise d humidité pouvant se produire entre la lyophilisation et l analyse). Prise d essai de 1g de muscle lyophilisé. Sans objet. Date de mise à jour : 06/08/ / 6
3 Extraction Purification Conservation de l extrait Minéralisation Volume ou masse finale avant analyse : Méthode analytique utilisée 1. Ajouter les 2 étalons internes en 13 C puis ajouter 10 ml de méthanol à 1 g de biote 2. Agitation mécanique 30 min 3. Centrifugation 20 min à 3000 tr/min. 4. Prélèvement d une aliquote de 7,5 ml de surnageant et transfert en flacon de 10 ml. 5. Concentration jusqu à 1 ml de méthanol par évaporation à l azote 1. Ajout de 50 mg de carbone activé (Envicarb ) et 50 µl d acide acétique glacial 2. Agitation manuelle pendant 1 min 3. Centrifugation 10 mn à 3000 tr/min 4. Prélèvement du surnageant et transfert dans un flacon d injection Non testée. Sans objet. Nature du solvant d injection : méthanol Afin de surveiller la contamination du cône du détecteur et ainsi une baisse du signal spectrométrique, un étalon d injection, le 13 C 2 -PFDA peut être ajouté. Dans ce cas, 25 µl de solution à 5 ng/ml de 13 C 2 -PFDA sont ajoutés à 800 µl de la solution ou de l extrait final. Conditions chromatographiques : 1. Colonne : XBridge C18 (50 mm x 2,1 mm-2,5 µm ; Waters ), thermostatée à 50 C. 2. Phase mobile : mélange binaire, H 2 O avec 20 mm d acétate d ammonium (solvant A) et MeOH avec 20 mm d acétate d ammonium (solvant B). 3. Méthode isocratique avec rinçage: Temps (minutes) Solvant A (%) Solvant B (%) Étape 0 40 Élution des 6 40 composés d intérêt Rinçage de la colonne de chromatographie Débit : 0,3 ml/min. 5. Volume d injection : 5 µl. Date de mise à jour : 06/08/ / 6
4 Méthode analytique utilisée Conditions spectrométriques (sur le matériel utilisé pour cette étude, voir ci-dessous) : 1. Mode d ionisation : ESI(-), 2. Tension du capillaire : 3 kv, 3. Température de la source : 150 C, 4. Température du gaz de désolvatation (N 2 ) : 400 C, 5. Débit en gaz de désolvatation (N 2 ) : 800 L/h, 6. Débit en gaz rideau (N 2 ) : 50 L/h, 7. Mode d acquisition : MRM (Multiple Reaction Monitoring), 8. Débit en gaz de collision (Argon) : 0,17 ml/min. Transitions D.t. c Composés (m/z) (s) 412,9 368,9 a 0,10 PFOA 368,9 169,0 b 0, ,9 371,9 a 0,10 C 4 -PFOA 371,9 172,0 b 0,10 498,9 98,9 a 0,10 PFOS 498,9 79,9 b 0, ,9 98,9 a 0,10 C 4 -PFOS 502,9 79,9 b 0, ,9 470,0 a 0,10 C 2 -PFDA 514,9 219,5 b 0,10 a Transition de quantification, b Transition de confirmation, c Dwell time, d Tension de cône, e Energie de collision. T.C. d (V) E.C. e (ev) Equipement 1 (modèles utilisés) : Type d étalonnage Modèle utilisé Etalons / Traceurs utilisés Domaine de concentration Méthode de calcul des résultats Chromatographe : Alliance 2795 (WATERS ). Spectromètre de masse : Triple quadripôle, ACQUITY TQD (WATERS ). Interne. Linéaire pondéré 13 C 4 -PFOA : Acide perfluoro-n-[1,2,3,4-13 C 4 ]octanoïque. 13 C 4 -PFOS : Perfluoro-n-[1,2,3,4-13 C 4 ]octane sulfonate. 13 C 2 -PFDA : Acide Perfluoro n-[1,2-13 C2]décanoïque. Étalonnage : De 5 à 200 µg/l en solution dans le méthanol. Calcul des résultats par étalonnage interne en mode linéaire pondéré par rapport à leur homologue marqué au 13 C utilisés comme traceur. 1 Les matériels cités ici constituent des exemples d application satisfaisante. Ces mentions ne constituent pas une recommandation exclusive, ni un engagement quelconque de la part du rédacteur ou d AQUAREF Date de mise à jour : 06/08/ / 6
5 Paramètres de validation de la méthode Norme utilisée Modèle utilisé Domaine de validation Matériaux de référence certifiés utilisés Blancs analytiques (concentration ou résultat maximum acceptable) Rendement - par molécule (si moyenne préciser le nombre de répétitions et l écart-type) NF T (2009). Linéaire pondéré. De 5 à 200 ng/g poids sec (en dopants ajoutés). Pas de matériau de référence disponible. Blancs méthodes et échantillons analysés inférieurs à la limite de quantification. Matrice testée: muscle de truite Détermination suivant NF T (2009) réalisée par ajout d une quantité connue de chacun des 2 composés dans les biotes Nombre d essais : 2 répétitions/jour sur 5 jours successifs. PFOA Rendement Écart type PFOS 5 (LQ) 104% 5% % 2% % 6% % 7% % 6% Rendement Écart type 5 (LQ) 111% 13% 43 98% 5% % 1% % 2% % 1% Limite de détection (LD) Limite de quantification (LQ) - LQ : Détermination suivant NF T (2009) réalisée par ajout d une quantité connue de chacun des 2 composés dans les biotes. - Nombre d essais : 2 répétitions/jour sur 5 jours successifs. Composés LQ (ng/g poids sec exprimée PFOS 5 PFOA 5 Date de mise à jour : 06/08/ / 6
6 Spécificité de la méthode (préciser la matrice) Incertitudes (%) sur les résultats - par molécule (reproductibilité avec méthode de détermination) Matrice testée : muscle de truite. Interférents identifiés : néant Les valeurs des incertitudes sont calculées selon la norme NF ISO Il s'agit d'incertitudes élargies pour un niveau de confiance de 95 % (k=2) Nombre d essais : 2 répétitions/jour sur 5 jours successifs. PFOA Incertitudes élargies pour un niveau de confiance de 95 % (k=2) PFOS 5 (LQ) 10% 44 10% % % % Incertitudes élargies pour un niveau de confiance de 95 % (k=2) 5 (LQ) 25% 43 5% 129 5% 173 5% 216 5% Contacts Auteurs Institut Adresses mail Claudine Chatellier ; François Lestremau INERIS claudine.chatellier@ineris.fr francois.lestremau@ineris.fr Date de mise à jour : 06/08/ / 6
4. Conditionnement et conservation de l échantillon
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