Contrôle des résidus de médicaments vétérinaires dans les denrées alimentaires

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1 Contrôle des résidus de médicaments vétérinaires dans les denrées alimentaires Dr Patrick Edder Chimiste cantonal Journée de formation TVL - AVSA 4 avril 2 Lucerne Page Crises alimentaires et demain? Vache folle (ESB) PCB dans les poissons Dioxines dans les produits belges s dans les miels s dans les veaux Dioxines dans les œufs Accident de Fukushima Huile espagnole Vacherins Mont-d'or et Listéria Accident de Tchernobyl Veaux aux hormones Pesticides dans les salades Mercure dans les poissons Aflatoxines Vins frelatés s dans les produits asiatiques Pesticides dans les poivrons ITX dans le lait Grippe aviaire H5 PCB-dl dans les poissons Campylobactérioses Tommes à la Listéria Mélamine dans le lait Page 2

2 De l'étable à la table Traitement sur avis d un vétérinaire Substances homologuées Journal des traitements et délais d'attente Interdiction des promoteurs de croissance et des hormones Contrôle de la santé des animaux bligation d annoncer Contrôle des carcasses et des organes Contrôle des importations Vétérinaires de frontières Les autorités de contrôle : VF FSP Vétérinaires cantonaux Chimistes cantonaux Contrôle de la traçabilité Contrôle des limites maximales de résidus (LMR) Page 3 Contrôles effectués sur la base d'analyses en laboratoire Plan national de contrôle Plan national contrôles frontières Actions nationales décidées par l'accs Plans régionaux de contrôle Actions cantonales 5-6 échantillons analysés chaque année ~ échantillons analysés chaque année (87 en 2, 3 prévu 2) Pas d'actions nationales ACCS sur cette thématique en par année, en Romandie 2 streptomycine dans le miel, résidus dans les œufs, résidus dans les salmonidés -3 par année, à Ge en 2 résidus dans les foies (volailles, lapins, veau, ) Page 4 2

3 Analytes inconnus Résidus de médicaments vétérinaires? Page 5 Principes actifs utilisés en médecine vétérinaire sulfadimidine, sulfadoxine, sulfadimethoxine, sulfapyridin, sulfathiazole, sulfameter, sulfadiazine, sulfmerazine, sulfanilamide, sulfapyridazin, sulfamethoxazole, sulfamidés phénothiazines sulfamethizole, sulfaquinoxaline, sulfacétamide, sulfaguanidine, amoxycilline, ampicilline, pénicillines cloxacilline, dicloxacilline, nafcilline, triphénylméthanes pénicilline G, oxacilline, érythromycine, macrolides desmycosine, josamycine, benzimidazoles oléandomycine, lincomycine, roxithromycine, spiramicyne, tilmicosine, tylosine, ceftiofur, cefoperazone, céphalosporines avermectines cefalonium, cefquinom, cefacetrile, cefazolin, cephapirine, cefalexin, cefamandol, cefotaxil, tétracyclines ceftriazone, cefaclor, cefuroxime, anticoccidiens cefsulodine, tétracycline, oxytétracycline, quinolones chlortétracycline, doxycycline, β-agonistes demeclocycline, acide oxolinique, acide nalidixique, ofloxacine, norfloxacine, cinoxacine, ciprofloxacine, amphénicoles corticostéroïdes danofloxacine, difloxacine, enrofloxacine, enoxacine flumequine, lomefloxacine, levofloxacine, aminoglycosides marbrofloxacine, sarafloxacine, chloramphénicol, thiamphénicol, florphénicol, nitrofuranes dihydrostreptomycine, gentamicine, kanamycine neomycine, spectinomycine, streptomycine, furazolidone, Soit plusieurs nitrofurantoin, centaines nitrofurazone, nitroimidazoles furaltaldone, nifursol, bacitracin, tiamuline, virgyniamycine, valnemuline, vert de malachite, olaquindox, carbadox, de principes actifs! Et leurs métabolites Page 6 3

4 Challenge des laboratoires d'analyse Analyse de résidus efficace Comment analyser plus d'analytes dans plus d'échantillons avec une meilleure sensibilité en moins de temps? Tests de dépistage et/ou méthodes rapides Page 7 Dépistage par test biologiques Test 4 plaques L'échantillon est mis en présence de bactéries dans un milieu nutritif sélectionné. En présence d'antibiotiques, les bactéries ne se multiplieront pas et une zone d'inhibition apparaîtra. En jouant sur différents micro-organismes, on peut plus ou moins identifier telle ou telle famille d'antibiotiques. Souvent trop peu sensibles et lectures difficiles avec des échantillons complexes (organes) Page 8 4

5 Dépistage par test biologiques Test commerciaux De nombreux tests existent sur le marché, mais sont surtout consacrés aux analyses du lait. Très performants vis-à-vis des pénicillines, des sulfamidés et des tétracyclines, mais sont insuffisamment sensibles pour les autres familles Page 9 Tests de compétition ELISA, RIA, Charm Test, etc Souvent très sensibles Généralement très (voire trop) sélectifs écessitent souvent une préparation d'échantillon spécifique et des étapes de purification (SPE) Développement long, coûteux et commercialisation seulement si un marché est existant Mise en œuvre longue, fastidieuse et coûteuse s'il faut effectuer 6 à 7 tests ELISA par échantillon! Page 5

6 V Dépistage par chromatographie couplée à la spectrométrie de masse Préparation d'échantillon réduite au minimum Méthodes séparatives rapides Séparation de -2 substances en moins de min. Détection rapide, sensible et sélective par spectrométrie de masse Ex : MS/MS, TF, Q-TF, etc Page Analyses ciblées ou de dépistage? LC-MS/MS LC-TF Téléobjectif ou grand angle? Page 2 6

7 Page Page 7

8 Analyses ciblées (LC-MS/MS) 5 ul PL on Acquity C8 Shield 2. x mm 2687 test9 2: MRM of 2 Channels ES > e3 Area test9 : MRM of 5 Channels ES > e4 Area test9 : MRM of 5 Channels ES > e5 Area test9 : MRM of 5 Channels ES > e6 Area test9 : MRM of 5 Channels ES > e5 Area test9 : MRM of 5 Channels ES > e5 Area Extrait de viande (5 g) dopé par µg/l 5 µg/l 5 µg/l µg/l 5 µg/l 5 µg/l Time Cl H H H H Cl Cl H H H H H H H H H 2 H 2 F S H H Me H Me CH Me Chloramphénicol MRL : µg/kg Erythromycine MRL : 4 µg/kg Chlortétracycline MRL : µg/kg Enrofloxacine MRL : µg/kg Leuco-Vert de malachite MRL : µg/kg Sulfadimethoxine MRL : µg/kg Page 5 Limitations des analyses ciblées Besoin de connaître ce que l'on recherche Avoir la substance de référence à disposition n ne trouve que ce que l'on cherche Réflexion préalable à l'analyse Pas de place pour l'imprévu Le nombre des substances recherchées n'est pas illimité Page 6 8

9 Analyses de dépistage (LC-TF) MS haute résolution En cas de mise en évidence d'une substance inconnue, la mesure de la masse exacte donne des informations structurales F CH Analyse de composés non ciblés Les données peuvent être retraitées à n'importe quel moment Enrofloxacine MM Page 7 Sélectivité LQ- J- MixI LQ- J - Mix I 35-2 : TFMSES Sm(Mn, x2) TIC TF ESI+ Mass window: TF MS ES Da e5.32e3 95 Enrofloxacine ppb m/z Da Da Da.2 Da. Da.5 Da 95. Da Time Time Page 8 9

10 Résidus de médicaments dans le lait Milk. Précipitation MeC 2. Agitation 3. Centrifugation 4. Ultrafiltration 3kD 5. Reprise filtrat 6. Mise en vial Page 9 Résidus médicaments dans le lait Méthode validée pour 5 substances Tétracyclines Pénicillines Quinolones Sulfamides itroimidazoles Benzimidazoles Macrolides Avermectines Cephalosporines Smooth(Mn,x2) QC Céphalosporine µg/kg II Smooth(Mn,x2) QC sulfam ides µg/kg I , Sulfamethoxazole (M43) 2,83,6 5,956 µg/kg,89 Ceftiofur (M6) µg/kg Ceftiofur µg/l Sulfamethoxazole 5 µg/l 4,98 5,22 F:TF MS,ES ,536e+2 min,,5 2, 2,5 3, 3,5 4, 4,5 5, 5,5 6, 6,5 7, ,5 6,7 F:TF MS,ES e ,88 min Page 2

11 Recherche de substances connues En cas de ouvelle problématique Crise alimentaire Recherche de métabolites Ethoxyquin H A-/ TF ESI+ TIC 6.4e5 min TF ESI Da 2.5e3 C4H MH ? min Page 2 Recherche de substances inconnues 3.84 TF ESI Da 2.5e min C28H3722 TF ESI+.2Da e Da H CH Da Da min Page 22

12 Ethoxyquin et métabolite dans les Salmonidés d'élevage µg/kg 9 8 Dimère Ethoxyquin Ethoxyquin d'échantillon positif Valeur mediane 2 µg/kg La présence d'un métabolite est majoritaire Echantillons Pas de normes dans les poissons! Denrées alimentaires obtenues à partir d'animaux terrestres : valeur max. = 5 µg/kg Manque de données toxicologiques Page 23 Principes actifs utilisés en médecine vétérinaire et recherchés au SCAV GE sulfadimidine, sulfadoxine, sulfadimethoxine, sulfapyridin, sulfathiazole, sulfameter, sulfadiazine, sulfamidés sulfmerazine, (26) sulfanilamide, phénothiazines sulfapyridazin, (3) sulfamethoxazole, sulfamethizole, pénicillines sulfaquinoxaline, (9) sulfacétamide, triphénylméthanes sulfaguanidine, (3) amoxycilline, ampicilline, cloxacilline, dicloxacilline, nafcilline, pénicilline G, oxacilline, érythromycine, macrolides desmycosine, (3) josamycine, benzimidazoles oléandomycine, (2) lincomycine, roxithromycine, céphalosporines spiramicyne, (9) tilmicosine, avermectines tylosine, ceftiofur, (5) cefoperazone, cefalonium, tétracyclines cefquinom, cefacetrile, (6) cefazolin, anticoccidiens cephapirine, cefalexin, (8) cefamandol, cefotaxil, ceftriazone, cefaclor, cefuroxime, cefsulodine, tétracycline, oxytétracycline, quinolones chlortétracycline, (8) doxycycline, β-agonistes demeclocycline, (6) acide oxolinique, acide amphénicoles nalidixique, ofloxacine, (3) norfloxacine, corticostéroïdes cinoxacine, (23) ciprofloxacine, danofloxacine, aminoglycosides difloxacine, enrofloxacine, (6) enoxacine flumequine, lomefloxacine, levofloxacine, marbrofloxacine, sarafloxacine, chloramphénicol, thiamphénicol, florphénicol, nitrofuranes dihydrostreptomycine, (4) gentamicine, kanamycine neomycine, spectinomycine, nitroimidazoles streptomycine, (8) furazolidone, nitrofurantoin, nitrofurazone, furaltaldone, nifursol, bacitracin, tiamuline, virgyniamycine, valnemuline, vert de malachite, olaquindox, carbadox, Page 24 2

13 Evolution de ces dernières années Avant 995 : de grosses difficultés d'analyses et assez peu de contrôles une réglementation plus permissive Dès 995 des campagnes de contrôle montrant de nombreux échantillons contenant des résidus (-8 selon les denrées et origines) et de forts dépassements des normes en vigueur. de nombreuses crises 998 Streptomycine dans le miel 999 Vert de malachite dans les poissons 2 Sulfamidés et tétracyclines dans le miel 2 Chloramphénicol dans les crevettes, poissons et volailles 22 itrofuranes dans les crevettes, poissons et volailles 25 Lasalocid dans les œufs Demain?????? Page 25 Activité 2 du SCAV GE Analyses de type multi-résidus comprenant la recherche de 5-22 principes actifs de médicaments vétérinaires DERÉES CARÉES Échantillons analysés Échantillons conformes sans résidus Échantillons conformes avec résidus Échantillons non conformes Viande (muscles, foies, ) ( ) Volaille (muscles, foies, ) 7 69 ( ) Poisson ( ) Lait (4 ) Œufs 96 5 ( ) Sang ( ) Total global ' (.4 ) Page 26 3

14 Résultats 2 pour l'analyse des foies Principes actifs Famille médicamenteuse Action b de fois détectés Teneurs [µg/kg] Valeur limite [µg/kg] Chlorotétracycline Tétracycline Sulfamethazine Sulfonamide Antibactérien Doxycycline Tétracycline xytétracycline Tétracycline Abamectine Avermectine 4 2 Danofloxacin Quinolone 28 4 Eprinomectine Avermectine Antiparasitaire Fenbendazole Benzimidazole Antiparasitaire 24 Flubendazoleamine Benzimidazole Antiparasitaire Levamisole Autre Antiparasitaire 769 Meloxicam Autre Anti-inflammatoire non stéroïdien (AIS) 2 65 Tétracycline Tétracycline 39 3 Triclabendazole Benzimidazole Antiparasitaire Page 27 Résultats 2 pour l'analyse des sangs Principes actifs Xylazine Procaïne Triclabendazole-sulfone Triclabendazole-sulfoxide Cefquinom Hydrocortisone (cortisol) Ketoprofen Danofloxacin Enrofloxacin Cloxacillin Pénicilline G Sulfadiazine Sulfadoxine Sulfamethazine xytetracycline Chlortétracycline Flunixin Tolfenamic acide Trimethoprim Famille médicamenteuse α2-agoniste Amino-ester Benzimidazole Benzimidazole Céphalosporine Corticostéroïde Dérivé de l'acide propionique Fluoroquinolone Fluoroquinolone Pénicilline Pénicilline Sulfonamide Sulfonamide Sulfonamide Tétracycline Tétracycline Action Tranquillisant Anesthésique Antiparasitaire Antiparasitaire Hormone Anti-inflammatoire non stéroïdien (AIS) Antibactérien AIS b de fois détectés Teneurs* [µg/kg] 5-62 < 5 et 3 < et 64 AIS 235 Service de la consommation 2et des affaires 9 vétérinaires et 32 bactériostatique (SCAV) Page 28 4

15 Perspectives du SCAV GE Amélioration des échanges et connexions avec les services vétérinaires cantonaux Méthode pour le sang Etude relative aux bactéries multirésistantes en relation avec la volaille et les traitements aux antibiotiques Page 29 Merci pour votre attention! Page 3 5